專利名稱：一種五加茸血口服液的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥的質(zhì)量控制方法，特別涉及五加茸血口服液的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
五加茸血口服液處方由刺五加、鹿茸血、鹿茸、維生素Bl與幾種輔料組成。具有健腦增髓，補血壯腰，安眠強胃，補腎強身，提神回春之功。用于體虛貧血，陽痿腎寒，神經(jīng)衰弱等癥。主要原料刺五加刺五加為五加科植物刺五加Acanthopanax Senticosus (Puper. etMaxim)Harms的干燥根及根莖，主要分布在我國的黑龍江、吉林、河北、山西、寧夏、陜西及四川等地，朝鮮、俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)及日本北海道等地亦有分布和種植。刺五加具有益氣健脾、補腎安神之功效，主要用于脾腎陽虛、體虛乏力、食欲不振、腰膝酸痛、失眠多夢等病癥。 此外，國內(nèi)外對刺五加的藥理作用研究還表明，刺五加可增強機(jī)體非特異性防御能力，除具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗衰老、抗輻射損傷及抗疲勞等作用外，還可治療心腦血管疾病、糖尿病、神經(jīng)衰弱等癥。刺五加的根和莖部分含有多種活性化學(xué)成分，到目前為止，含有多種皂甙類，生物堿類化合物，分離出的重要成分為苷類化合物。紫丁香苷為谷留醇葡萄糖苷，是一種較為典型的苷類化合物。主要成分之一是異嗪皮啶，其在藥材中含量亦相對較易測定。本發(fā)明以五加茸血中的異嗪皮啶為指標(biāo)，采用高效液相色譜法，測定口服液中的含量，同時增加對紫丁香苷的含量測定，該質(zhì)量控制方法簡便、準(zhǔn)確、精密度高、重現(xiàn)性好，為控制五加茸血口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了可靠的依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的公開五加茸血口服液的質(zhì)量控制方法，包括對異嗪皮啶和/或紫丁香苷的含量測定方法。異嗪皮啶的含量測定方法如下對照品溶液的制備精密稱取異嗪皮啶對照品適量，加甲醇制成每Iml中含 5-10 μ g的溶液，即得；供試品溶液的制備精密量取口服液10ml，加水10-30ml，超聲處理 10-30分鐘，加氯仿萃取1-4次，每次加氯仿10-20ml，合并氯仿提取液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，既得；分別精密吸取對照品和供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，即得。紫丁香苷的含量測定方法如下對照品溶液的制備取紫丁香苷對照品適量加水制成每Iml含10-20 μ g的溶液， 既得；供試品溶液的制備精密量取口服液10ml，加水10-30ml，超聲處理10-30分鐘，加氯仿萃取1-4次，每次加氯仿10-20ml，取水層濾過，取續(xù)濾液，既得；分別精密量取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液，注入液相色譜儀，測定，即得。本發(fā)明優(yōu)選技術(shù)方案如下異嗪皮啶的含量測定方法
對照品溶液的制備精密稱取異嗪皮啶對照品適量，加甲醇制成每Iml中含10 μ g 的溶液，即得；供試品溶液的制備精密量取口服液10ml，加水10-30ml，超聲處理10-30 分鐘，加氯仿萃取1-4次，每次加氯仿10-20ml，合并氯仿提取液，蒸干，殘渣加甲醇溶解， 并轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜0，45 μ m濾過，既得；色譜柱C18 柱，流動相乙腈0. 的磷酸溶液，體積比為20-30 70-80，流速:1.0ml min，檢測波長 344nm ；柱溫室溫；分別精密吸取對照品和供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定， 即得。紫丁香苷的含量測定方法對照品溶液的制備取紫丁香苷對照品適量加水制成每Iml含20μ g的溶液，既得；供試品溶液的制備精密量取口服液10ml，加水10ml，超聲處理10分鐘，加氯仿萃取 1-4次，每次加氯仿10-20ml，取水層濾過，取續(xù)濾液，既得；色譜柱C18柱，流動相乙腈 水，體積比為5-10 90-95，流速1.0ml min，檢測波長265η m ；柱溫30-40°C ；理論板數(shù)按紫丁香苷峰計算應(yīng)不低于4000 ；分別精密量取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。本發(fā)明對嗪皮啶和/或紫丁香苷的含量測定方法，不僅能夠測定五加茸血口服液劑型，同時能夠應(yīng)用在五加茸血品種的其它劑型，例如片劑、顆粒劑、膠囊劑、注射劑等臨床應(yīng)用的劑型。本發(fā)明的異嗪皮啶含量測定方法學(xué)考察，利用UV-2401PC型紫外分光光度儀，對異嗪皮啶對照品，在200 400nm波長下進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果在342nm波長處有最大吸收， 因此選擇342nm為檢測波長。用4種流動相進(jìn)行試驗，結(jié)果表明流動相為乙腈-0. 1 %磷酸溶液(75 25)時，效果最佳，柱壓低，峰型尖銳，陰性無干擾。精密吸取樣品(061201)供試液10 μ 1，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定其峰面積，異嗪皮啶峰面積值的RSD = 0. 99%,試驗結(jié)果表明，精密度良好。穩(wěn)定性試驗結(jié)果表明，異嗪皮啶含量測定的樣品供試液在內(nèi)穩(wěn)定性良好。對同一批樣品(061201)制備樣品供試液，測得峰面積值并計算含量，其異嗪皮啶峰面積值的RSD = 0. 84% ；異嗪皮啶含量的RSD = 0. 85%，試驗結(jié)果表明含量測定方法重現(xiàn)性良好?？瞻自囼灲Y(jié)果表明在被測成分異秦皮啶的保留時間處無干擾。本發(fā)明的紫丁香苷含量測定方法學(xué)考察，利用UV-2401PC型紫外分光光度儀，對紫丁香苷對照品，在200 400nm波長下進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果在波長處有最大吸收， 因此選擇342nm為檢測波長。用4種流動相進(jìn)行試驗，結(jié)果表明流動相為乙腈-水(9 91) 時，效果最佳，柱壓低，峰型尖銳，陰性無干擾。精密吸取樣品供試液10 μ 1，重復(fù)進(jìn)樣5次， 測定其峰面積，紫丁香苷峰面積值的RSD = 0. 96%，試驗結(jié)果表明，精密度良好。穩(wěn)定性試驗結(jié)果表明，紫丁香苷含量測定的樣品供試液在他內(nèi)穩(wěn)定性良好。對同一批樣品制備樣品供試液，測得峰面積值并計算含量，其紫丁香苷峰面積值的RSD = 0. 80% ；紫丁香苷含量的 RSD = 0. 77%，試驗結(jié)果表明含量測定方法重現(xiàn)性良好?？瞻自囼灲Y(jié)果表明在被測成分紫丁香苷的保留時間處無干擾。實驗例1 異嗪皮啶的線性范圍的考察儀器與試劑日本島津LC-lOAvp系列高效液相色譜儀，SPD-lOAvp紫外檢測儀； CLASS-VP數(shù)據(jù)處理機(jī)；對照品異嗪皮啶(批號0837-200203 ；供含量測定用，由中國藥品生物制品檢定所提供)。甲醇、乙腈為色譜純，水為注射用水，基聳試劑均為分析純。五加茸血口服液由吉林長春新安藥業(yè)有限公司提供色譜條件色譜柱KromasilC18柱(150mmx4. 6mmID，5 μ m)；流動相乙腈-0. 1% 磷酸溶液(20 80)；檢測波長:342nm ；柱溫:30°C ；流速1. 0ml. min ；靈敏度0. 08AUFS。精密稱取異嗪皮啶對照品適量約10mg，置IOOml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋制刻度，搖勻，再精密吸取Iml置IOml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，配成每Iml含 IOyg的溶液，精密吸取異嗪皮啶(9. 376 μ g. ml)對照品溶液2、4、8、12、16、20 μ 1注樣。記錄色譜圖，測定其峰面積，結(jié)果見表1。并以峰面積值(A)對進(jìn)樣量(C)進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。以峰面積值(A)對進(jìn)樣量(C)作圖，得一直線，A = 3. 31071e-007C, r = 0. 9997。 結(jié)果表明，在18. 752 187. 52X 10_3 μ g范圍內(nèi)，異嗪皮啶峰面積值與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。實驗例2 異嗪皮啶的回收率試驗精密量取已知含量的樣品(061203) 25ml，分別加入異嗪皮啶52 μ g. ml)對照品溶液0. 85ml, 1. 03ml, 1. 20ml按上述樣品制備方法和色譜條件，制備加樣回收供試品溶液并注入高效液相色譜儀，計算回收率，試驗結(jié)果表明，回收率在95% 100%之間，加樣回收良好。具體實施例如下實施例1異嗪皮啶含量測定對照品溶液的制備精密稱取異嗪皮啶對照品適量，加甲醇制成每Iml中含10 μ g 的溶液，即得。供試品溶液的制備精密量取供試品10ml，加水10ml，超聲處理10-30分鐘， 加氯仿萃取1-4次，每次加氯仿10-20ml，合并氯仿提取液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜0，45 μ m濾過，既得；色譜柱C18柱，流動相乙腈0. 的磷酸溶液，體積比為20-30 70-80，流速:1. Oml min，檢測波長344nm ； 柱溫室溫；分別精密吸取對照品和供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。測定法分別精密吸取異嗪皮啶(9. 376 μ g. ml)對照品溶液與10批樣品供試液各 10 μ 1，按上述色譜條件測定。實施例2 異嗪皮啶的含量測定對照品溶液的制備精密稱取異嗪皮啶對照品適量，加甲醇制成每Iml中含10 μ g 的溶液，即得；供試品溶液的制備精密量取口服液10ml，加水10ml，超聲處理10分鐘， 加氯仿萃取1-4次，每次加氯仿10-20ml，合并氯仿提取液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜0，45 μ m濾過，既得；色譜柱C18柱
6謹(jǐn)，5μπι)，流動相乙腈0. 的磷酸溶液，體積比為25 75，流速1.0ml min，檢測波長344nm ；柱溫室溫；分別精密吸取對照品和供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。實施例3 紫丁香苷的含量測定對照品溶液的制備取紫丁香苷對照品適量加水制成每Iml含20μ g的溶液，既得；供試品溶液的制備精密量取口服液10ml，加水10ml，超聲處理10分鐘，加氯仿萃取 1-4次，每次加氯仿10_20ml，取水層濾過，取續(xù)濾液，既得；色譜柱C18柱Q50mmX4. 6mm, 5μπι)，流動相乙腈水，體積比為9 91，流速1.Oml min，檢測波長265nm ；柱溫 400C ；理論板數(shù)按紫丁香苷峰計算應(yīng)不低于4000 ；分別精密量取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
權(quán)利要求
1.一種五加茸血口服液的質(zhì)量控制方法，包括對異嗪皮啶和/或紫丁香苷的含量測定方法，其中異嗪皮啶的含量測定方法如下對照品溶液的制備精密稱取異嗪皮啶對照品適量，加甲醇制成每Iml中含5-10 μ g 的溶液，即得；供試品溶液的制備精密量取口服液10ml，加水10-30ml，超聲處理10-30分鐘，加氯仿萃取1-4次，每次加氯仿10-20ml，合并氯仿提取液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，既得；分別精密吸取對照品和供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，即得。
2.如權(quán)利要求1所述的質(zhì)量控制方法，其中紫丁香苷的含量測定方法如下對照品溶液的制備取紫丁香苷對照品適量加水制成每Iml含10-20 μ g的溶液，既得； 供試品溶液的制備精密量取口服液IOml，加水10-30ml，超聲處理10-30分鐘，加氯仿萃取 1-4次，每次加氯仿10-20ml，取水層濾過，取續(xù)濾液，既得；分別精密量取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液，注入液相色譜儀，測定，即得。
3.如權(quán)利要求1所述的質(zhì)量控制方法，其中異嗪皮啶的含量測定方法如下對照品溶液的制備精密稱取異嗪皮啶對照品適最，加甲醇制成每Iml中含IOyg的溶液，即得；供試品溶液的制備精密量取口服液10ml，加水10-30ml，超聲處理10-30分鐘， 加氯仿萃取1-4次，每次加氯仿10-20ml，合并氯仿提取液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜0，45 μ m濾過，既得；色譜柱C18柱，流動相乙腈0. 的磷酸溶液，體積比為20-30 70-80，流速1. Oml min，檢測波長344nm ； 柱溫室溫；分別精密吸取對照品和供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
4.如權(quán)利要求2所述的質(zhì)量控制方法，其中紫丁香苷的含量測定方法如下對照品溶液的制備取紫丁香苷對照品適量加水制成每Iml含20 μ g的溶液，既得；供試品溶液的制備精密量取口服液10ml，加水10ml，超聲處理10分鐘，加氯仿萃取1_4次， 每次加氯仿10-20ml，取水層濾過，取續(xù)濾液，既得；色譜柱C18柱，流動相乙腈水，體積比為5-10 90-95，流速1. Oml min，檢測波長265nm ；柱溫30-40°C ；理論板數(shù)按紫丁香苷峰計算應(yīng)不低于4000 ；分別精密量取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各 10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
全文摘要
本發(fā)明公開五加茸血口服液的質(zhì)量控制方法，包括對異嗪皮啶和/或紫丁香苷的含量測定方法。五加茸血口服液處方由刺五加、鹿茸血、鹿茸、維生素B1與幾種輔料組成。主要原料刺五加的根和莖部分含有多種活性化學(xué)成分，到目前為止，含有多種皂甙類，生物堿類化合物，分離出的重要成分為苷類化合物。主要成分紫丁香苷為β-谷甾醇葡萄糖苷，是一種較為典型的苷類化合物，另一主要成分是異嗪皮啶，其在藥材中含量亦相對較易測定。本發(fā)明以五加茸血中的異嗪皮啶為含量測定指標(biāo)之一，采用高效液相色譜法，測定口服液中的含量，同時增加對紫丁香苷的含量測定，該質(zhì)量控制方法簡便、準(zhǔn)確、精密度高、重現(xiàn)性好，為控制五加茸血口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了可靠的依據(jù)。
文檔編號A61P13/12GK102451206SQ201010592938
公開日2012年5月16日 申請日期2010年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月17日
發(fā)明者叢亞芹, 何萍, 李濱生, 李長江, 楊明 申請人:長春新安藥業(yè)有限公司