專(zhuān)利名稱(chēng)：包含表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯與喜樹(shù)堿的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥及基因工程領(lǐng)域，涉及抑制腫瘤細(xì)胞增殖的組合物，尤其涉及由表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)與Camptothecin (喜樹(shù)堿)制成的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的組合物。
背景技術(shù)：
喜樹(shù)堿，英文名Camptothecin。CPT?；瘜W(xué)名4_乙基-4，12- 二氧_4_羥-IH-吡喃(3~，4~，6，7)吡吲哚(1，2-6)喹啉-3，14-二酮，IH-Pyrano [34:6, 7] indolizino [1，2-6]ρ uinoline-3, 14(4H, 12H-)-dione, 4-ethyl-4-hydroxy-(s)-。分子式C20H16N204 ；分子量；348.；34 ；來(lái)源珙桐科植物喜樹(shù)Camptotheca acuminata Decne的果實(shí)、葉。喜樹(shù)堿為淺黃色針狀結(jié)晶(甲醇-乙腈)，分解點(diǎn)264°C ^7°C，[a]25D +31.3。(氯仿-甲醇)。在紫外光下表現(xiàn)強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光，和酸不能生成穩(wěn)定的鹽。喜樹(shù)堿是一種植物抗癌藥物，從中國(guó)中南、西南分布的喜樹(shù)中提取得到。1976年中國(guó)化學(xué)家高怡生等合成消旋喜樹(shù)堿成功。臨床應(yīng)用于惡性腫瘤，銀屑病，治疣，急慢性白血病以及血吸蟲(chóng)病引起的肝脾腫大等。喜樹(shù)堿對(duì)腸胃道和頭頸部癌等有較好的近期療效，但對(duì)少數(shù)病人有尿血的副作用。10-羥基喜樹(shù)堿的抗癌活性超過(guò)喜樹(shù)堿，對(duì)肝癌和頭頸部癌也有明顯療效，而且副作用較少。劑量較大時(shí)，可引起食欲不振、惡心、嘔吐、胃腸炎；可抑制骨髓，還可引起出血性膀胱炎，出現(xiàn)尿頻，尿痛及血尿；可引起口腔粘膜感染和脫發(fā)。茶葉(tea ,camellia sinensis)是深受人們喜愛(ài)的飲品之一。全世界每年生產(chǎn)大約250萬(wàn)噸，其中20%為綠茶、78%為紅茶、洲為烏龍茶。茶葉的種類(lèi)雖然很多，但以綠茶為人矚目。大量的體外研究及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明綠茶提取物有多種生物活性和藥理效應(yīng)，如防癌抗癌、抗血管生成、抗突變、抗氧化、抗衰老、抗菌、抗炎、降血脂、抗血小板聚集等等，其中與癌癥的關(guān)系是研究最為廣泛、也是最復(fù)雜的有意義的重要課題。綠茶中的主要成分為茶多酚，占茶葉干重的30%左右，茶多酚中大部分為兒茶素， 表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯〔(-)epigallocatechin gallate ( EGCG)〕含量最高，占兒茶素的80%左右。EGCG分子式為C22H18O11,分子量為458. 4。它是一種高效廣譜無(wú)毒副作用的生物抗氧化劑，俗稱(chēng)沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯。沒(méi)食子酸酯能有效清除引發(fā)多種疾病和衰老的體內(nèi)自由基和過(guò)氧化物，提高人體免疫力，延緩衰老，具有優(yōu)異的抗病毒、降血脂、 保鮮、美容等效能，在醫(yī)藥、保健、食品、日化等行業(yè)有廣泛的用途。到目前為止，尚未見(jiàn)有關(guān)EGCG與Camptothecin聯(lián)合使用的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種抑制腫瘤細(xì)胞增殖的組合物，尤其涉及由表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)與Camptothecin (喜樹(shù)堿)制成的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的組合物。本發(fā)明實(shí)驗(yàn)證實(shí)，表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)與Camptothecin (喜樹(shù)堿) 制成的組合物，或在給予Camptothecin (喜樹(shù)堿)時(shí)聯(lián)合使用表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯Beilstein Registry Number: 631069 MDL number: MFCD00081076。本發(fā)明中，將制成的含有EGCG和Camptothecin的組合物用于腫瘤細(xì)胞(例如，肝癌細(xì)胞株SK-H印1)，結(jié)果顯示，與僅使用Camptothecin相比，抑制腫瘤細(xì)胞增殖的效果明顯增強(qiáng)。所述組合物的使用能明顯降低Camptothecin的單獨(dú)使用量，其降低效果隨著EGCG 用量的增加而更加明顯。本發(fā)明中，將EGCG和Camptothecin的組合物用于裸鼠移植瘤模型，結(jié)果顯示，與僅使用Camptothecin相比，本發(fā)明的組合物對(duì)裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的抑制效果顯著增強(qiáng)，并且效果優(yōu)于雷帕霉素與Camptothecin組合物。同時(shí)，檢測(cè)以體重變化為指標(biāo)的給藥后藥物的毒性效應(yīng)顯示，EGCG和Camptothecin聯(lián)合使用時(shí)對(duì)裸鼠體重沒(méi)有明顯影響，并且所述的組合物對(duì)裸鼠的肝臟和腎臟基本沒(méi)有毒性。本發(fā)明中，采用所述的組合物與單獨(dú)使用EGCG或者Camptothecin進(jìn)行了比較試驗(yàn)，結(jié)果顯示，所述的組合物在抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)方面具有明顯的增效作用，而且增效作用具有EGCG和Camptothecin濃度梯度效應(yīng)。本發(fā)明的實(shí)施例中列舉了 EGCG和Camptothecin 含量摩爾比分別為3:4，1:1，8:1，2 :1，5 :1，4 :1，1 :1，3 :5，等等，實(shí)驗(yàn)表明，在兩者含量為 8:1-0.5:1的范圍都是有效果的。本發(fā)明中還提供了一種殺傷腫瘤細(xì)胞的方法，其包括步驟在腫瘤細(xì)胞中加入 EGCG 和 Camptothecin 組合物，EGCG 和 Camptothecin 的摩爾比為 8 :1-0. 5:1。所述的腫瘤細(xì)胞可以是SMMC7721、H印G2、QGY、SK-H印l、Huh7、L02、Focus 或者 YYl
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可顯著提高Camptothecin抑制腫瘤細(xì)胞增殖的治療效果。本發(fā)明所述的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的組合物，包括活性成分和藥劑學(xué)上必要的輔料，其特征在于，所述的活性成分是以下物質(zhì)1)表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯，2) Camptothecin ；所述的表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯和Camptothecin的摩爾比為8 :1_0. 5 1。本發(fā)明中，所述的表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯其分子式為C22H18O11,分子量為 458. 4，可以通過(guò)市場(chǎng)銷(xiāo)售途徑獲得。例如，本發(fā)明的EGCG購(gòu)自Sigma公司，貨號(hào)5(^99，英文全禾爾( )-cis-2- (3, 4, 5-Trihydroxyphenyl) -3, 4-dihydro-l (2H) -benzopyran-3, 5, 7 -triol 3-gallate, ( )-cis-3, 3' , 4' ,5,5' , 7-Hexahydroxy-flavane-3-gallate, EGCG ；CAS 號(hào)989-51-5。MDL 號(hào)MFCD00075940。本發(fā)明中，所述的Camptothecin通用名為喜樹(shù)堿；Camptothecin是拓?fù)洚悩?gòu)酶I 的抑制劑，源自Sigma公司，貨號(hào)C9911 (5)-(+)-Camptothecin。其相關(guān)信息和結(jié)構(gòu)式如下
CAS Number: 7689-03-4
Empirical Formula (Hill Notation) : C20H16N2O4 Molecularffeight:348. 35細(xì)胞。本發(fā)明所使用的細(xì)胞均購(gòu)自ATCC。本發(fā)明的組合物，當(dāng)在治療上進(jìn)行施用(給藥)時(shí)，可提供不同的效果。通常，可將這些物質(zhì)配制于無(wú)毒的、惰性的和藥學(xué)上可接受的水性載體介質(zhì)中，其中PH通常約為7-8， 盡管PH值可隨被配制物質(zhì)的性質(zhì)以及待治療的病癥而有所變化。配制好的藥物組合物可以通過(guò)常規(guī)途徑進(jìn)行給藥，其中包括(但并不限于)肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、或局部給藥。以本發(fā)明的EGCG與Camptothecin的組合物為例，可以將其與合適的藥學(xué)上可接受的載體聯(lián)用。這類(lèi)藥物組合物含有治療有效量的蛋白質(zhì)和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。這類(lèi)載體包括(但并不限于)鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其組合。藥物制劑應(yīng)與給藥方式相匹配。本發(fā)明的EGCG和Camptothecin可以被制成針劑形式，例如用生理鹽水或含有葡萄糖和其他輔劑的水溶液通過(guò)常規(guī)方法進(jìn)行制備。諸如片劑和膠囊之類(lèi)的藥物組合物，可通過(guò)常規(guī)方法進(jìn)行制備。藥物組合物如針劑、溶液、片劑和膠囊宜在無(wú)菌條件下制造。此外，本發(fā)明的EGCG與Camptothecin的組合物還可與其他治療劑一起使用。本發(fā)明中，EGCG與Camptothecin的組合物可以是針劑或者片劑。當(dāng)本發(fā)明的EGCG與Camptothecin的組合物被用作藥物時(shí)，可將治療有效劑量的該藥物施用于哺乳動(dòng)物，其中該治療有效劑量中通常至少約50毫克EGCG/千克體重。喜樹(shù)堿常規(guī)臨床用量為靜脈注射10mg以生理鹽水20ml溶解后緩慢注入，每日1次；或15 20mg,隔日1次；總量140 200mg為1療程；靜脈滴注劑量同靜脈注射，以生理鹽水250ml 稀釋后靜脈滴注，總量同上；肌肉注射每日5 10mg，140 200mg為1療程；動(dòng)脈插管 頭頸部癌或肝癌治療時(shí)，可將本品IOOmg溶于20ml生理鹽水內(nèi)由動(dòng)脈插管緩慢注入，每日或隔日1次；胸腹腔注射盡量抽出積液后，將其20 30mg用20ml生理鹽水溶解后注入， 可每周注射1次；膀胱內(nèi)灌注每次20mg，加生理鹽水20ml，每日1次，連用3日為1周期， 或每次30 40mg，加生理鹽水50ml，每周2次，4周為1周期；瘤內(nèi)注射可將本品5 IOmg直接注入腫瘤結(jié)節(jié)內(nèi)，每日1次或隔日1次；口服每次5mg，每日2次，用于維持治療。 當(dāng)然，具體劑量還應(yīng)考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi)的。本發(fā)明具有下述優(yōu)越性本發(fā)明提供了一種新的含EGCG和Camptothecin的組合物。該組合物可用于制備抗腫瘤藥物。能明顯增強(qiáng)Camptothecin的抗腫瘤效果，同時(shí)相對(duì)減少了 Camptothecin的用量及藥物成本。
由于本發(fā)明組合物中的EGCG是天然的茶葉提取物，而茶葉又是全世界三分之二的人口經(jīng)常飲用的飲料。不僅資源豐富，價(jià)格低廉，經(jīng)過(guò)了千年以上的飲用，幾乎沒(méi)有毒副作用。 在提高腫瘤的抑制率的同時(shí)，降低了腫瘤患者的治療成本。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 EGCG與Camptothecin的協(xié)同效果
EGCG與十種抗肝癌藥物聯(lián)合使用均具有協(xié)同效應(yīng)，其中在SK-H印1細(xì)胞中與 Camptothecin的協(xié)同效果十分顯著。本實(shí)施例進(jìn)一步驗(yàn)證了 EGCG與Camptothecin的聯(lián)用效果，結(jié)果證明在一定的濃度范圍內(nèi)CI值均小于1，兩種藥物有協(xié)同作用。結(jié)果表明EGCG 與Camptothecin聯(lián)合使用可以提高Camptothecin的抗腫瘤效果。
表 權(quán)利要求
1.一種抑制腫瘤細(xì)胞增殖的組合物，包括活性成分和藥劑學(xué)上必要的輔料，其特征在于，所述的活性成分是以下物質(zhì)1)表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯，2)喜樹(shù)堿；所述的表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯和喜樹(shù)堿的摩爾比為8 :1 0. 5 :1。
2.如權(quán)利要求1所述的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的組合物，其特征在于，表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯和喜樹(shù)堿的摩爾比為5:1 1:1。
3.如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯和喜樹(shù)堿的摩爾比為4:1 2:1。
4.權(quán)利要求1所述的組合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征是，所述的腫瘤是肝癌。
6.一種抑制腫瘤細(xì)胞增長(zhǎng)的方法，其特征在于，在腫瘤細(xì)胞中加入權(quán)利要求1所述組合物。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述的腫瘤細(xì)胞是SMMC7721、HepG2,QGY、 SK-Hepl、Huh7、L02、Focus 或者 YYl 細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥和基因工程領(lǐng)域，提供了一種抑制腫瘤細(xì)胞增殖的組合物。所述的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的組合物，包括活性成分表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯和喜樹(shù)堿以及藥劑學(xué)上必要的輔料，所述的表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯和喜樹(shù)堿的摩爾比為81-0.51。本發(fā)明實(shí)驗(yàn)證實(shí)，所述的表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯與Camptothecin制成的組合物，或在給予Camptothecin時(shí)聯(lián)合使用表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯可顯著提高Camptothecin抑制腫瘤細(xì)胞增殖的治療效果。對(duì)裸鼠肝臟和腎臟基本沒(méi)有毒性，且活性成分中的表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯資源豐富，價(jià)格低廉，在提高腫瘤的抑制率的同時(shí)，降低了腫瘤患者的治療成本。
文檔編號(hào)A61K31/4745GK102552265SQ20101060250
公開(kāi)日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2010年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月23日
發(fā)明者余龍, 劉祖龍, 張明君, 朱恒銳 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)