專利名稱：貓爪草抗結(jié)核的有效部位及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中醫(yī)藥，尤其涉及一種貓爪草抗結(jié)核的有效部位及其制備方法和用 途。
背景技術(shù)：
結(jié)核病(TB)是當(dāng)今全球范圍對人類最具威脅性的感染性疾病之一，近年來，由于 耐藥、耐多藥(multidrugresistanttuberculosis, MDR — TO) 結(jié)核分枝桿菌的產(chǎn)生和傳 播及結(jié)核合并HIV感染，使得曾經(jīng)控制在很低水平的結(jié)核病疫情死灰復(fù)燃。較其它疾病的 治療更易產(chǎn)生耐藥性、治療周期長，是結(jié)核病治療難度大的主要原因。目前，國際公眾推崇 的綜合運(yùn)用二聯(lián)復(fù)方制劑(如Rif inah，衛(wèi)肺寧)和三聯(lián)復(fù)方制劑(如Rifater，衛(wèi)肺特)，采用 2+4的治療方案，依然至少需要6個月的治療時間，而且需要聯(lián)合用藥，更增加了抗結(jié)核藥 物的消費量及毒副反應(yīng)。因此，研制新型抗結(jié)核藥物來縮短治療周期、減少化療藥物的毒副 反應(yīng)及控制耐藥性依然是結(jié)核病防治工作的難點、重點。
貓爪草為毛茛科毛茛屬植物小毛茛ternatus Thunb.)的干燥塊莖。 具有清熱解毒、散結(jié)消瘀的功效，治療肺結(jié)核、淋巴結(jié)核、咽喉炎等有顯著效果。系統(tǒng)的化學(xué) 成分研究表明貓爪草含甾醇、Y -酮-δ -戊內(nèi)酯、5-羥甲基糠醛、4-[R)rmyl-5-(methOXym ethyl)-ΙΗ-pyrrol-l-yl] butanoate等多種化合物，我們通過藥理活性指導(dǎo)，追蹤到貓爪 草抗結(jié)核的有效部位，采用系統(tǒng)分離的手段證實該有效部位主要含有344-0-i3-D-葡萄 糖基]-苯基]-2-丙烯酸、4-[Formyl-5-(methoxymethyl)-lH-pyrrol-l_yl] butanoate, 5-羥甲基糠醛三種成分；并通過體內(nèi)、體外的藥效評價證實該有效部位對結(jié)核分支桿菌標(biāo) 準(zhǔn)株、耐藥結(jié)核菌株均具有顯著的治療作用，可以開發(fā)成抗結(jié)核的中藥新藥，對結(jié)核病的臨 床治療具有重要意義。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種貓爪草抗結(jié)核的有效部位及其制備方法和用途。
貓爪草抗結(jié)核的有效部位含有3- [4-0- β -D-葡萄糖基]-苯基]-2-丙烯酸、4_ [F ormyl-5-(methoxymethyl)-ΙΗ-pyrrol-l-yl] butanoate， 5-羥甲基糠醛三種組成成分。
所述的有效部位三種組成成分的含量采用HPLC法測定，其中，3-[4-0-β -D-葡萄 糖基]-苯基]-2-丙烯酸的質(zhì)量百分含量為10% 15%、5_羥甲基糠醛的質(zhì)量百分含量為 10% 15%>4- [Formy 1-5- (methoxymethy 1)-1 H-pyrrο 1 -1 -y 1 ] butanoate 的質(zhì)量百分含量 為 70% 80%ο
所述的有效部位由貓爪草采用乙醇提取結(jié)合大孔樹脂純化的方法制得。
貓爪草抗結(jié)核的有效部位的制備方法是1重量份貓爪草加入5 15重量份的 水或含水乙醇，采用回流、超聲、冷浸或滲濾方法提取2 4次，每次提取時間1 3 h，過 濾，濃縮至0. 25 2g生藥/mL濃度，過濾或離心分離，上清液通過大孔樹脂分離柱分離，按 生藥計上清液上樣量與干大孔樹脂的重量比為1:3 10，上樣流速1 6 BV/h，徑高比為1 2 1 10，上樣后的大孔樹脂，依次采用水、含水乙醇洗脫，其中，水洗脫2 8個柱體積， 乙醇洗脫2 8個柱體積，洗脫流速2 8BV/h，收集乙醇洗脫液，濃縮，烘干、減壓干燥、紅 外干燥或微波干燥，粉碎，得到貓爪草抗結(jié)核的有效部位。
所述的含水乙醇的質(zhì)量百分比濃度為30% 80%。
所述的按生藥計上清液上樣量與干大孔樹脂的重量比為1:5 10，上樣流速1 4 BV/h，徑高比為1:5 1:8，上樣后的大孔樹脂，依次采用水、含水乙醇洗脫，其中，水洗脫 3 5個柱體積，含水乙醇洗脫3 5個柱體積，洗脫流速為2 4BV/h，。
貓爪草抗結(jié)核的有效部位用于制備治療結(jié)核病的藥物。
本發(fā)明制備的貓爪草有效部位，采用最小二倍稀釋法測定體外抗結(jié)核菌實驗，結(jié) 果顯示其對結(jié)核分支桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv、耐多藥結(jié)核分支桿菌(MDR-TB)、全耐藥結(jié)核分支 桿菌UDR-TB)均具有良好的抑制作用，最小抑菌濃度均為2. 5mg/mL。
由此方法制備的貓爪草有效部位，體內(nèi)抗結(jié)核實驗證實，其對荷結(jié)核桿菌小鼠具 有顯著的治療作用，能減少小鼠感染器官的荷菌數(shù)，延長生存時間。
由此方法制備的貓爪草有效部位，體內(nèi)抗結(jié)核實驗證實，與異煙胼聯(lián)合使用能顯 著減少荷結(jié)核菌小鼠感染器官的荷菌數(shù)，延長生存時間。
由此方法制備的貓爪草有效部位，添加輔料或賦形劑后，可以制成膠囊劑、片 劑、顆粒劑等藥物劑型，成為治療結(jié)核病的藥物。


圖1是貓爪草抗結(jié)核有效部位的高效液相(HPLC-DAD)分析圖譜。
具體實施方式
下面實驗例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明。
貓爪草抗結(jié)核的有效部位含有3-W-O-β -D-葡萄糖基]-苯基]-2-丙烯酸、4-[F ormyl-5-(methoxymethyl)-ΙΗ-pyrrol-l-yl] butanoate， 5-羥甲基糠醛三種組成成分。
所述的有效部位三種組成成分的含量采用HPLC法測定，其中，3-[4-0-β -D-葡萄 糖基]-苯基]-2-丙烯酸的質(zhì)量百分含量為10% 15%、5_羥甲基糠醛的質(zhì)量百分含量為 10% 15%>4- [Formy 1-5- (methoxymethy 1)-1 H-pyrrο 1 -1 -y 1 ] butanoate 的質(zhì)量百分含量 為 70% 80%ο
所述的有效部位由貓爪草采用乙醇提取結(jié)合大孔樹脂純化的方法制得。
貓爪草抗結(jié)核的有效部位的制備方法是1重量份貓爪草加入5 15重量份的 水或含水乙醇，采用回流、超聲、冷浸或滲濾方法提取2 4次，每次提取時間1 3 h，過 濾，濃縮至0. 25 2g生藥/mL濃度，過濾或離心分離，上清液通過大孔樹脂分離柱分離，按 生藥計上清液上樣量與干大孔樹脂的重量比為1:3 10，上樣流速1 6 BV/h，徑高比為 1:2 1:10，上樣后的大孔樹脂，依次采用水、含水乙醇洗脫，其中，水洗脫2 8個柱體積， 乙醇洗脫2 8個柱體積，洗脫流速2 8BV/h，收集乙醇洗脫液，濃縮，烘干、減壓干燥、紅 外干燥或微波干燥，粉碎，得到貓爪草抗結(jié)核的有效部位。
所述的含水乙醇的質(zhì)量百分比濃度為30% 80%。
所述的按生藥計上清液上樣量與干大孔樹脂的重量比為1:5 10，上樣流速1 4 BV/h，徑高比為1:5 1:8，上樣后的大孔樹脂，依次采用水、含水乙醇洗脫，其中，水洗脫 3 5個柱體積，含水乙醇洗脫3 5個柱體積，洗脫流速為2 4BV/h，。
貓爪草抗結(jié)核的有效部位用于制備治療結(jié)核病的藥物。
實施例11重量份貓爪草加入5重量份的水或含水乙醇，采用回流提取2次，每次提取時間1 h， 過濾，濃縮至0. 25g生藥/mL濃度，過濾，上清液通過大孔樹脂分離柱分離，按生藥計上清液 上樣量與干大孔樹脂的重量比為1:3，上樣流速1 BV/h，徑高比為1:2，上樣后的大孔樹脂， 依次采用水、含水乙醇洗脫，其中，水洗脫2個柱體積，乙醇洗脫2個柱體積，洗脫流速2BV/ h，收集乙醇洗脫液，濃縮，烘干、減壓干燥、紅外干燥或微波干燥，粉碎，得到貓爪草抗結(jié)核 的有效部位。
實施例21重量份貓爪草加入15重量份的水或含水乙醇，采用超聲提取2 4次，每次提取時 間3 h，過濾，濃縮至2g生藥/mL濃度，離心分離，上清液通過大孔樹脂分離柱分離，按生藥 計上清液上樣量與干大孔樹脂的重量比為1:10，上樣流速6 BV/h，徑高比為1:10，上樣后 的大孔樹脂，依次采用水、含水乙醇洗脫，其中，水洗脫8個柱體積，乙醇洗脫8個柱體積，洗 脫流速8BV/h，收集乙醇洗脫液，濃縮，烘干、減壓干燥、紅外干燥或微波干燥，粉碎，得到貓 爪草抗結(jié)核的有效部位。
實施例3取粉碎后的貓爪草藥材2 kg，加6倍量10%乙醇，加熱回流提取4次，每次lh，過濾， 合并提取液，濃縮至0. 25 g生藥/mL ；過濾后通過DlOl型大孔樹脂，提取液按貓爪草總苷 含量計與干樹脂的比例為1:5，上柱流速lBV/h，樹脂徑高比為1:3 ；用水洗滌樹脂:3BV，洗 脫流速為2BV/h，水洗脫液棄去；用含30%含水乙醇洗脫8BV，流速為2BV/h，收集乙醇洗 脫液；乙醇洗脫液減壓濃縮至相對密度為1. 1，減壓干燥，得貓爪草有效部位。HPLC法測得 3- [4-0- β -D-葡萄糖基]-苯基]-2-丙烯酸的含量為17%，5-羥甲基糠醛為35%，4- [Formy 1-5-(methoxymethyl)-ΙΗ-pyrrol-l-yl] butanoate 的含量為 40%。該有效部位粉碎，加 入5%的微粉硅膠，裝入1號膠囊，即得膠囊劑。
實施例4將貓爪草飲片1kg，加15倍量80%乙醇，加熱回流提取4次，每次3h，過濾，合并提取 液，濃縮至2. 0 g生藥/mL ；離心后通過AB-8型大孔樹脂的層析柱，提取液按貓爪草總苷含 量計與干樹脂的比例為1 :10，上柱流速4BV/h，樹脂徑高比為1:9 ；用水洗滌樹脂8BV，洗脫 流速為4BV/h，水洗脫液棄去；用含95%含水乙醇洗脫，流速為4BV/h，收集乙醇洗脫液；乙 醇洗脫液減壓濃縮至相對密度為1.25，減壓或噴霧干燥，得貓爪草有效部位。HPLC法測得 3- [4-0- β -D-葡萄糖基]-苯基]-2-丙烯酸的含量為11%，5-羥甲基糠醛為28%，4~ [Formy 1-5-(methoxymethyl)-ΙΗ-pyrrol-l-yl] butanoate 的含量為 50%。該有效部位粉碎，加 入5%的糊精、1%的硬脂酸鎂，再加入1%的阿斯巴甜，制成顆粒劑，即得。
實施例5取粉碎后的貓爪草藥材^g，加8倍量70%乙醇，加熱回流提取3次，每次lh，過濾，合 并提取液，濃縮至1.0 g生藥/mL ；離心(4000轉(zhuǎn)/分鐘)后通過AB-8型大孔樹脂，藥液按 貓爪草總苷含量計與干樹脂的比例為1:5，上柱流速2BV/h，樹脂徑高比為1:5 ；用水洗滌樹5脂3BV，洗脫流速為4BV/h，水洗脫液棄去；用含70%水乙醇洗脫:3BV，流速為2BV/h，收集乙 醇洗脫液；乙醇液減壓濃縮至相對密度為1. 1 (50°C熱測)，減壓干燥，得貓爪草有效部位。 HPLC法測得344-0- β -D-葡萄糖基]-苯基]-2-丙烯酸的含量為24%，5-羥甲基糠醛為 34%,4-[Formy 1 -5-(methoxymethy 1)-1 H-pyrro 1 -1 -y 1 ] butanoate 的含量為 47%。該有效 部位粉碎，加入3%的淀粉，1%的蔗糖，壓制成片，即得片劑。
實施例6貓爪草藥材飲片^g，加10倍量50%乙醇，加熱回流提取2次，每次1. 5h，過濾，合并 提取液，濃縮至0. 5g生藥/mL ；過濾后通過D201型大孔樹脂，藥液按貓爪草總苷含量計與 干樹脂的比例為1:9，上柱流速!3BV/h，樹脂徑高比為1:7 ；用水洗滌樹脂5BV，洗脫流速為 4BV/h，水洗脫液棄去；用含50%水乙醇洗脫10BV，流速為4BV/h，收集乙醇洗脫液；乙醇 液減壓濃縮至相對密度為1.25 (50°C熱測)，噴霧干燥，得貓爪草有效部位。HPLC法測得 3- [4-0- β -D-葡萄糖基]-苯基]-2-丙烯酸的含量為11%，5-羥甲基糠醛為28%，4~ [Formy 1-5-(methoxymethyl)-ΙΗ-pyrrol-l-yl] butanoate 的含量為 50%。該有效部位粉碎，加 入5%的半乳糖，壓制成片，即得片劑。
實施例7貓爪草藥材飲片^g，加15倍量30%乙醇，加熱回流提取3次，每次0. 5h,過濾，合并提 取液，濃縮至0. 25g生藥/mL ；離心(8000轉(zhuǎn)/分鐘)后通過HPD450大孔樹脂，藥液按貓爪草 總苷含量計與干樹脂的比例為1:6，上柱流速4BV/h，樹脂徑高比為1:9 ；用水洗滌樹脂2BV， 洗脫流速為3BV/h，水洗脫液棄去；用含50%水乙醇洗脫5BV，流速為!3BV/h，收集乙醇洗脫 液；乙醇液減壓濃縮至相對密度為1.2(50°C熱測)，噴霧干燥，得貓爪草有效部位。HPLC法 測得3-W-O-β -D-葡萄糖基]-苯基]-2-丙烯酸的含量為3%，5_羥甲基糠醛為5%，4-[R) rmyl-5- (methoxymethyl) -ΙΗ-pyrrol-l-yl] butanoate 的含量為 21%。該有效部位粉碎, 加入5%的硬脂酸鎂，裝入2號膠囊，即得膠囊劑。
實驗例1高效液相色譜法檢測貓爪草有效部位中主要成分的含量 采用高效液相色譜法測定貓爪草有效部位的組成成分4-[Formyl-5-(methoxymethyl )-lH-pyrrol-l-yl] butanoate,5-羥甲基糠醛、3-[4_0-β -D-葡萄糖基]-苯基]_2_ 丙 烯酸的含量。儀器Shimadzu 20Α高效液相色譜儀-DAD紫外檢測器(Japan)。色譜柱TC RP-C18色譜柱，250mmX 4. 6 mm(Aglient，USA)。流動相甲醇_0. 4%醋酸水(梯度洗脫)。洗 脫程序為:0. 01min-35min 甲醇 5%_19%，醋酸水 95%-81% ；35min_45min 甲醇 19%_19%，醋酸 水81%-81%。流速1.0 mL/min。柱溫40 °C。檢測波長290 nm。進(jìn)樣量10 μ L。保留 時間(RT):3-W-O-β-D-葡萄糖基]-苯基]-2-丙烯酸(化合物1)為8-10 min，5-羥甲基 糠酸為 12-15 min, 4-[Formyl-5-(methoxymethyl)-ΙΗ-pyrrol-l-yl] butanoate 為 39-42 min。采用外標(biāo)法測定344-0-β -D-葡萄糖基]-苯基]_2_丙烯酸、5-羥甲基糠醛、4_[R) rmyl-5- (methoxymethyl) -ΙΗ-pyrrol-l-yl] butanoate 白勺含量。
實驗例2貓爪草有效部位體外抗結(jié)核菌實驗 材料和方法1)培養(yǎng)基7H9液體培養(yǎng)基(含10%ADC、0. 03%瓊脂)。
2)藥物及其處理(試管二倍稀釋法)貓爪草有效部位、異煙胼(INH) 二甲基亞砜溶解制成初溶液(儲備液)，流通蒸氣滅菌后，使其在培養(yǎng)基中為所設(shè)計的濃度。
3)結(jié)核菌及其在培養(yǎng)基中濃度實驗菌為結(jié)核分支桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv，MDR-TB、 )(DR-TB。將在改良羅氏培養(yǎng)基上生長良好的菌株，用瑪瑙乳缽磨成菌懸液，使其在培養(yǎng)基中 的濃度為IXlO5 CFU/mL。
4)培養(yǎng)與觀察置37°C培養(yǎng)，以培養(yǎng)四周的結(jié)果為準(zhǔn)。
結(jié)果在7H9培養(yǎng)基中，貓爪草有效部位針對H37Rv、耐多藥結(jié)核分支桿菌(MDR-TB)、全耐藥 結(jié)核分支桿菌UDR-TB)的最小抑菌濃度(MIC)均為2. 5 mg/mL，表明貓爪草有效部位對結(jié) 核菌標(biāo)準(zhǔn)株及耐藥株均有良好體外抑制作用。
實驗例3貓爪草有效部位體內(nèi)抗結(jié)核實驗1)實驗動物SPF級C57BL/6小鼠，6_8周齡，雌性和雄性小鼠各半。稱重，標(biāo)記，隨機(jī) 分組。
2)實驗試劑或材料結(jié)核桿菌H37Rv毒株；改良羅氏培養(yǎng)基(谷氨酸鈉，磷酸二氫鉀，硫酸鎂，枸櫞酸 鎂，甘油，蒸餾水，全卵液，洲孔雀綠，馬鈴薯淀粉)；Middlebrook 7H9液體培養(yǎng)基以及 Middlebrook 7H11固體培養(yǎng)基；生理鹽水；磷酸緩沖鹽溶液(PBS)；甲醛。
3)藥物供試藥物貓爪草有效部位；中藥對照貓爪草膠囊(為市售的臨床現(xiàn)用的治療結(jié)核病的中成藥)； 西藥對照異煙胼(為市售的臨床現(xiàn)用的治療結(jié)核病的藥物)。
4)取在改良羅氏培養(yǎng)基上生長2周的、并在動物體內(nèi)復(fù)毒的人型結(jié)核菌H37Rv 的培養(yǎng)物，用研磨器磨成lmg/ml的均勻菌懸液(滅菌生理鹽水溶液或PBQ。將待建結(jié)核 病模型的小鼠麻醉后，每只小鼠滴鼻10 yL上述菌懸液。
5)將建模成功的小鼠隨機(jī)分組，分別為模型組、陰性對照組、貓爪草有效部位高、 中、低劑量組、中藥陽性藥對照組(貓爪草膠囊)、西藥陽性藥對照組(異煙胼)、貓爪草有效 部位高、中、低劑量加入異煙胼對照組(聯(lián)合用藥高、中、低劑量組)，每天灌胃給以不同濃度 的藥物或蒸餾水，持續(xù)給藥8周。
6 )實驗結(jié)束后，測定各組小鼠感染器官-肺、脾的荷菌數(shù)。
結(jié)果對感染結(jié)核菌H37Rv的豚鼠，貓爪草有效部位能顯著減少荷菌小鼠肺、脾的荷菌數(shù)，致 病指數(shù)明顯降低(P < 0.01)，效果略次與異煙胼，貓爪草有效部位與異煙胼合用，致病指 數(shù)進(jìn)一步降低(P < 0.001)，效果優(yōu)于異煙胼(表1)。
表1貓爪草總苷及聯(lián)合利福平、異煙胼對豚鼠臟器病變指數(shù)的影響權(quán)利要求
1.一種貓爪草抗結(jié)核的有效部位，其特征在于有效部位含有344-0-i3-D-葡萄糖 基]-苯基]_2_ 丙烯酸、4-[Formyl-5-(methoxymethyl)-lH-pyrrol_l-yl] butanoate， 5-羥甲基糠醛三種組成成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種貓爪草抗結(jié)核的有效部位，其特征在于所述的有效部 位三種組成成分的含量采用HPLC法測定，其中，3-[4-0-β -D-葡萄糖基]-苯基]-2-丙烯 酸的質(zhì)量百分含量為10% 15%、5_羥甲基糠醛的質(zhì)量百分含量為10% 15%、4-Pormyl-5- (methoxymethyl) -ΙΗ-pyrrol-l-yl] butanoate 的質(zhì)量百分含量為 70% 80%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種貓爪草抗結(jié)核的有效部位，其特征在于所述的有效部 位由貓爪草采用乙醇提取結(jié)合大孔樹脂純化的方法制得。
4.一種如權(quán)利要求1所述的貓爪草抗結(jié)核的有效部位的制備方法，其特征在于1重量 份貓爪草加入5 15重量份的水或含水乙醇，采用回流、超聲、冷浸或滲濾方法提取2 4 次，每次提取時間1 3 h，過濾，濃縮至0. 25 2g生藥/mL濃度，過濾或離心分離，上清液 通過大孔樹脂分離柱分離，按生藥計上清液上樣量與干大孔樹脂的重量比為1:3 10，上 樣流速1 6 BV/h,徑高比為1 2 1 10，上樣后的大孔樹脂，依次采用水、含水乙醇洗脫， 其中，水洗脫2 8個柱體積，乙醇洗脫2 8個柱體積，洗脫流速2 8BV/h，收集乙醇洗 脫液，濃縮，烘干、減壓干燥、紅外干燥或微波干燥，粉碎，得到貓爪草抗結(jié)核的有效部位。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種貓爪草抗結(jié)核的有效部位的制備方法，其特征在于所 述的含水乙醇的質(zhì)量百分比濃度為30% 80%。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種貓爪草抗結(jié)核的有效部位的制備方法，其特征在于所 述的按生藥計上清液上樣量與干大孔樹脂的重量比為1:5 10，上樣流速1 4 BV/h，徑 高比為1 5 1 8，上樣后的大孔樹脂，依次采用水、含水乙醇洗脫，其中，水洗脫3 5個柱 體積，含水乙醇洗脫3 5個柱體積，洗脫流速為2 4BV/h。
7.—種如權(quán)利要求1所述的貓爪草抗結(jié)核的有效部位的用途，其特征在于用于制備 治療結(jié)核病的藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種貓爪草抗結(jié)核的有效部位及其制備方法和用途，該有效部位主要含有3-[4-O-β-D-葡萄糖基]-苯基]-2-丙烯酸、4-[Formyl-5-(methoxymethyl)-1H-pyrrol-1-yl]butanoate，5-羥甲基糠醛，該有效部位是采用貓爪草提取經(jīng)大孔樹脂富集而成。運(yùn)用HPLC法制定了該有效部位的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)其中，3-[4-O-β-D-葡萄糖基]-苯基]-2-丙烯酸的含量在10%-15%之間、5-羥甲基糠醛的含量在10%-15%之間、4-[Formyl-5-(methoxymethyl)-1H-pyrrol-1-yl]butanoate的含量在70%-80%之間，該有效部位可以制備抗結(jié)核菌及耐藥結(jié)核菌的藥物，并可與臨床現(xiàn)有治療結(jié)核的藥物聯(lián)合使用，提高治療效果及降低復(fù)發(fā)率。
文檔編號A61K36/71GK102028764SQ20101060638
公開日2011年4月27日 申請日期2010年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月27日
發(fā)明者應(yīng)弘梅, 張琳, 戚中杰, 田景奎, 榮語媚, 陳潤澤 申請人:浙江大學(xué)