專利名稱：用于治療TNF-α相關(guān)病癥的人抗體的制劑的制作方法
用于治療TNF-Ci相關(guān)病癥的人抗體的制劑本申請是申請日為2003年8月15日，申請?zhí)枮?38M272. 9，發(fā)明名稱為“用于治 療TNF-α相關(guān)病癥的人抗體的制劑”的發(fā)明專利申請的分案申請。
背景技術(shù)：
腫瘤壞死因子α (TNF-α)是由多種類型的細胞產(chǎn)生的細胞因子，包括單核細 胞和巨噬細胞，最初是根據(jù)它們誘導(dǎo)某些小鼠腫瘤壞死的能力鑒定的(例如，參見，Old， L. (1985) Science 230:630-632)。隨后，證實了與惡病質(zhì)相關(guān)的被稱為惡病質(zhì)蛋白的因子 是與TNF-a相同的分子。業(yè)已證實TNF-a與介導(dǎo)休克相關(guān)(例如，參見，Beutler，B.和 Cerami,A. (1988)Annu. Rev. Biochem. 57 :505-518 ；Beutler,B. And Cerami,A. (1989)Annu. Rev. Immunol. 7 :625-655)。另外，業(yè)已證實TNF-α與多種其他人類疾病和失調(diào)的病理生 理學(xué)相關(guān)，包括膿毒癥，感染，自身免疫性疾病，移植排斥和移植物抗宿主病(例如，參見， Moeller, A.，等(1990)Cytokine 2 :162-169 ；Moeller 等的美國專利 5，231，024 ；Moeller,A.等的歐洲專利公開260 610 Bi, Vasilli, P. (1992)Annu. Rev. Immunol. 10 :411-452 ； Tracey, K. J.禾口 Cerami，Α. (1994) Annu. Rev. Med. 45 :491-503)。由于人TNFa (hTNF α )在多種人類疾病中的有害作用，業(yè)已設(shè)計了治療方案，以 抑制或抵消hTNFa活性。具體地講，業(yè)已尋求能結(jié)合并且中和hTNF-α的抗體，作為抑 制hTNFa活性的手段。所述抗體中的一些最早的抗體是由雜交瘤分泌的小鼠單克隆抗體 (mAbs)，所述雜交瘤是用hTNF α免疫的小鼠的淋巴細胞制備的(例如，參見，Hahn T ；等， (1985) Proc Natl Acad Sci USA 82 :3814-3818 ;Liang，C-M.，等(1986) Biochem. Biophys. Res. Commun. 137 ；847-854 ；Hirai, M.，等(1987) J. Immunol. Methods 96 :57-62 ；Fendly,B.Μ.,等(1987)Hybridoma 6 :359-370 ；Moeller, Α.,等(1990) Cytokine 2:162-169; Moeller等的美國專利5，231，024 ；ffallach, D.的歐洲專利公開186 833 Bl ；Old等的歐 洲專利申請公開218868A1 ;M0eller，A.等的歐洲專利公開沈0 610 Bi)。盡管這些小鼠 抗-hTNF- α抗體通常表現(xiàn)出對hTNF α的高的親和力(例如，Kd彡10_9Μ)，并且能夠中和 hTNF α活性，它們在體內(nèi)的應(yīng)用可能會受到與將小鼠抗體用于人類相關(guān)的問題的制約，如 短的血清半衰期，不能夠誘導(dǎo)某些人效應(yīng)物功能，并且在人體內(nèi)引發(fā)不希望的對所述小鼠 抗體的免疫反應(yīng)("人抗-小鼠抗體"(HAMA)反應(yīng))。為了克服與將全鼠抗體用于人體相關(guān)的問題，業(yè)已通過遺傳工程方法使鼠 抗-hTNFa抗體更“人樣”。例如，業(yè)已制備了嵌合抗體，其中，所述抗體鏈的可變區(qū)是 源于鼠的，而所述抗體鏈的恒定區(qū)是源于人的(Knight, D.M，等(1993)Mol. Immunol. 30 1443-1453 ；Daddona,P. E.，等的PCT公開WO 92/16553)。另外，業(yè)已制備了人源化抗體，其 中，所述抗體可變區(qū)的高變區(qū)是源于鼠的，而所述可變區(qū)的其余部分和抗體恒定區(qū)是源于 人的(Adair，J.R.等的PCT公開WO 92/11383)。不過，由于所述嵌合的和人源化抗體仍然 保持了某些鼠序列，它們?nèi)匀粫T導(dǎo)不希望的免疫反應(yīng)，所述人抗-嵌合抗體(HACA)反應(yīng)， 特別是在長期施用時的反應(yīng)，例如，用于慢性疾病，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎時更是如此(例如，參 見，Elliott，M. J.，等(1994) Lancet 344:1125-1127 ；Elliot，M. J.，等(1994) Lancet 344 1105-1110)。
對鼠mAbs或其衍生物(例如，嵌合的或人源化抗體)的優(yōu)選的hTNFa抑制劑 將是全人的抗hTNFa抗體，因為這種試劑不會引起HAMA反應(yīng)，即使是長期使用時也是如 此。業(yè)已利用雜交瘤技術(shù)制備了抗hTNFa的人單克隆自身抗體(Boyle，P.，等(1993) Cell. Immunol. 152 :556-568 ；Boyle, P.，等(1993)Cell. Immunol. 152 :569-581 ；Boyle 等 的歐洲專利申請公開614 984 A2)。不過，據(jù)報導(dǎo)，所述雜交瘤衍生的單克隆自身抗體對 hTNFa的親和力太低，以至于不能通過常規(guī)方法計算，這種抗體不能結(jié)合可溶性hTNF α， 并且不能中和hTNF α-誘導(dǎo)的細胞毒性(參見Boyle，等；同上)。另外，人雜交瘤技術(shù)的成 功取決于產(chǎn)生對hTNFa特異的自身抗體的淋巴細胞在人外周血中的天然存在。某些研究 業(yè)已檢測到了人類受試者中抗hTNFa的血清自身抗體(i^msgaard，Α.，等(1989)kand. J.Immureo1. 30 :219-223 ；Bendtzen, K.，等(1990)Prog. Leukocyte Biol. 10B :447-452)， 而其他研究沒有(Leusch, H-G.，等(1991) J. Immunol. Methods 139 :145-147)。作為天然存在的人抗-hTNFa抗體的替代，可以使用重組hTNF α抗體。業(yè)已披露 了能以較低的親和力(即，&約I(T7M)和快的解離速度(即，U 10_2秒一1)結(jié)合hTNFa 的重組人抗體(Griffiths, A. D.，等(1993)EMB0J. 12 :725-734)。不過，由于它們較快的解 離動力學(xué)，這種抗體可能不適合治療用途。另外，業(yè)已披露了重組人抗-hTNFa不能中和 hTNFa活性，相反能促進hTNFa與細胞表面的結(jié)合，并且促進hTNF α的內(nèi)化(Lidbury， Α.，等(1994) Biotechnol. Ther. 5 :27-45 ；Aston, R.等的 PCT 公開 WO 92/03145)。另外，業(yè)已披露了能夠以高的親和力和慢的解離動力學(xué)結(jié)合可溶性hTNFa，并且 具有中和hTNF α活性的能力的重組人抗體，包括hTNF α-誘導(dǎo)的細胞毒性(體外和體內(nèi)) 和hTNF a -誘導(dǎo)的細胞活化(參見美國專利6，090，382)。發(fā)明概述需要具有長的保質(zhì)期的穩(wěn)定的含水藥物制劑，它包括適合治療用途的抗體，以便 抑制或抵消有害的hTNF α活性。還需要具有長的保質(zhì)期的穩(wěn)定的含水藥物制劑，它包括適 合治療用途的抗體，這種藥物制劑便于施用，并且含有高蛋白濃度。本發(fā)明提供了液體含水藥物制劑，由存在于緩沖液中的治療有效量的抗體組成， 形成了 PH大約4-大約8的制劑，并且保質(zhì)期至少為18個月。本發(fā)明還包括含水藥物制劑， 包括存在于緩沖液中的治療有效量的抗體，形成了 PH大約為4-8的制劑，并且在液體狀態(tài) 下的保質(zhì)期至少為18個月。在一種實施方案中，所述藥物制劑具有增強了的穩(wěn)定性。在另 一種實施方案中，本發(fā)明的制劑在經(jīng)過至少3次凍/融循環(huán)之后是穩(wěn)定的。在另一種實施 方案中，所述抗體針對TNFa。在另一種實施方案中，所述抗體針對人TNFa。在另一種實 施方案中，所述抗體是D2E7。本發(fā)明還提供了液體含水藥物制劑，包括存在于緩沖液中的治療有效量的抗體， 形成了 PH為4-8的制劑，并且在2-8°C下具有至少12個月的增強了的穩(wěn)定性。在一種實 施方案中，所述制劑具有至少18個月增強了的穩(wěn)定性。在另一種實施方案中，所述抗體針 對TNFa。在另一種實施方案中，所述抗體針對人TNFa。在另一種實施方案中，所述抗體 是 D2E7。本發(fā)明還提供了液體含水藥物制劑，包括存在于緩沖液中的治療有效量的抗體， 形成了 PH為大約4-大約8的制劑，它是便于施用的。在一種實施方案中，所述抗體針對 TNFa。在另一種實施方案中，所述抗體針對人TNFa。在另一種實施方案中，所述抗體是D2E7。在本發(fā)明的一種實施方案中，所述液體含水藥物制劑是適合注射的。在另一種實 施方案中，所述制劑是適合單次皮下注射使用的。在另一種實施方案中，所述抗體在所述液 體含水藥物制劑中的濃度為大約l-150mg/ml。在另一種實施方案中，所述制劑中抗體的濃 度為大約50mg/ml。在另一種實施方案中，所述制劑具有高蛋白濃度。在本發(fā)明的另一種實 施方案中，所述制劑不是光敏感的。在本發(fā)明的一種實施方案中，所述液體含水藥物制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部 分，它從人TNF α解離的Kd為1 X 或以下，并且K。ff速度常數(shù)為1 X ΙΟ—Υ1或以下，兩種 參數(shù)都是通過表面等離子共振測定的，并且在標準體外測定中能中和人TNF α細胞毒 性，IC5tl為IX IO-7M或以下。在另一種實施方案中，本發(fā)明的制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部 分，它從人TNFa解離的K。ff速度常數(shù)為5Χ10ΛΓ1或以下。在另一種實施方案中，所述制劑 包括抗體或其抗原結(jié)合部分，它從人TNF α解離的K。ff速度常數(shù)為IX ΙΟ、—1或以下。在另 一種實施方案中，本發(fā)明的制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部分，在標準體外測定中，IC50 為1X10-1或以下。在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述要求保護的制劑包括抗體或其抗 原結(jié)合部分在標準體外測定中能中和人TNF α細胞毒性，其IC5tl為1 X 10_9Μ或以下。 本發(fā)明的另一種實施方案中包括制劑，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分，在標準體外 測定中，它能中和人TNFa細胞毒性，其IC5tl為IX IO-kiM或以下。在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述液體含水藥物制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部 分，它是重組抗體或其抗原結(jié)合部分。在另一種實施方案中，所述制劑包括抗體或其抗原結(jié) 合部分，它能抑制人TNF α -誘導(dǎo)的ELAM-I在人臍靜脈內(nèi)皮細胞上的表達。在另一種實施 方案中，所述要求保護的制劑包括D2E7抗體。在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述液體含水藥物制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部 分，它從人TNF α解離的K。ff速度常數(shù)為IX ΙΟ、—1或以下，該參數(shù)是通過表面等離子共振 測定的；b)具有輕鏈⑶R3結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO 3的氨基酸序列，或通過在1， 4，5，7或8號位置上進行單丙氨酸取代或通過在1，3，4，6，7，8和/或9號位置上進行1_5 個保守性氨基酸取代對SEQ ID NO :3進行修飾所得到的氨基酸序列；c)具有重鏈⑶R3結(jié)構(gòu)域，包括SEQ ID NO :4的氨基酸序列，或通過在2，3，4，5，6， 8，9，10或11號位置上進行單丙氨酸取代或在2，3，4，5，6，8，9，10，11和/或12號位置上進 行1-5個保守性氨基酸取代對SEQ ID NO :4進行修飾的所得到的氨基酸序列。在另一種實 施方案中，本發(fā)明的制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部分，它從人TNF α解離的K。ff速度常數(shù)為 5X IO-V或以下。在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部分， 它從人TNF α解離的K。ff速度常數(shù)為1Χ10ΛΓ1或以下。在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述液體含水藥物制劑，包括抗體或其抗原結(jié)合 部分，它具有輕鏈可變區(qū)(LCVR)，該可變區(qū)具有CDR3結(jié)構(gòu)域，它包括SEQ ID NO 3的氨基 酸序列，或通過在1，4，5，7或8號位置上進行單丙氨酸取代對SEQ ID NO 3進行修飾所得 到的氨基酸序列，并且具有重鏈可變區(qū)(HCVR)，它具有CDR3結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO 4的氨基酸序列，或通過在2，3，4，5，6，8，9，10或11號位置上進行單丙氨酸取代對SEQ ID NO :4進行修飾所得到的氨基酸序列。在另一種實施方案中，本發(fā)明的制劑包括抗體，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分的LCVR還具有CDR2結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO 5的 氨基酸序列，并且所述抗體或其抗原結(jié)合部分的HCVR還具有CDR2結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包括 SEQ ID NO :6的氨基酸序列。在另一種實施方案中，本發(fā)明的制劑包括抗體，其中，所述抗 體或其抗原結(jié)合部分的LCVR還具有CDRl結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO 7的氨基酸序 列，并且，HCVR具有⑶Rl結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO 8的氨基酸序列。在本發(fā)明的另一種實施方案中，包含在所述液體含水藥物制劑中的所述抗體或其 抗原結(jié)合部分具有輕鏈可變區(qū)(LCVR)，該可變區(qū)包括SEQ IDNO :1的氨基酸序列，并且具有 重鏈可變區(qū)(HCVR)，該可變區(qū)包括SEQ IDNO :2的氨基酸序列。在另一種實施方案中，所述 抗體或其抗原結(jié)合部分具有IgGl重鏈恒定區(qū)。在另一種實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié) 合部分，具有IgG4重鏈恒定區(qū)。在另一種實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分是Fab 片段。在另一種實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分是單鏈Fv片段。在本發(fā)明的一種實施方案中，所述液體含水藥物制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部 分，它具有輕鏈可變區(qū)(LCVR)或重鏈可變區(qū)(HCVR)，輕鏈可變區(qū)具有CDR3結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu) 域包括選自下組的氨基酸序列:SEQ IDNO 3,SEQ ID N0:11，SEQ ID NO 12,SEQ ID NO :13, SEQ ID NO :14, SEQ ID NO :15, SEQ ID NO :16, SEQ ID NO :17, SEQ ID NO :18, SEQ ID NO 19,SEQ ID NO :20,SEQ ID NO :21,SEQ ID NO :22,SEQ IDNO :23,SEQ ID NO :24,SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO :26，重鏈可變區(qū)具有CDR3結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域具有選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO 4, SEQ ID NO :27，SEQ ID NO :28，SEQ ID NO :29，SEQ ID NO :30，SEQ IDNO :31，SEQ ID NO 32, SEQ ID N0:33和SEQ ID NO :34。在另一種實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合 部分能中和人TNF α，黑猩猩TNF α和選自下組的至少一種其他靈長類TNF α的活性狒狒 TNF α，狨猴TNF α，獼猴TNF α和恒河猴TNF α。在另一種實施方案中，本發(fā)明的制劑包括 抗體或其抗原結(jié)合部分，它還能中和小鼠TNFa的活性。本發(fā)明的制劑還包括抗體或其抗 原結(jié)合部分，它能中和豬TNF α的活性。在另一種實施方案中，本發(fā)明提供了液體含水藥物制劑，它包括抗體或其抗原結(jié) 合部分，它能結(jié)合人TNF α，并且包括輕鏈⑶R3結(jié)構(gòu)域，它包括SEQ ID NO :3的氨基酸序列，或通過在1，4，5，7或8號 位置上進行單丙氨酸取代或在1，3，4，6，7，8和/或9號位置上進行1-5個保守性氨基酸取 代對SEQ ID NO :3進行修飾的所得到的氨基酸序列，和重鏈CDR3結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO :4的氨基酸序列，或通過在2，3，4，5，6，8，9，10 或11號位置上進行單丙氨酸取代或在2，3，4，5，6，8，9，10，11和/或12號位置上進行1_5 個保守性氨基酸取代對SEQIDN0 4進行修飾得到的序列。在一種實施方案中，所述液體含 水藥物制劑包括抗體，該抗體能結(jié)合人TNFa，并且包括輕鏈可變區(qū)(LCVR)或重鏈可變區(qū) (HCVR)，輕鏈可變區(qū)具有⑶R3結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域具有選自下組的氨基酸序列SEQ ID Ν0 3，SEQ ID NO :11, SEQ ID NO: 12，SEQ IDNO 13, SEQ ID NO: 14，SEQ ID NO: 15，SEQ ID NO: 16，SEQ ID NO :17, SEQ ID NO :18, SEQ ID NO :19, SEQ ID NO :20, SEQ ID NO :21，SEQ ID NO :22, SEQ ID NO :23，SEQ ID NO :24，SEQ ID NO :25，SEQ IDNO :26，重鏈可變區(qū)具有 CDR3 結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域具有選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO 4, SEQ ID NO :27，SEQ ID N0: 28，SFQ ID NO :29，SEQ ID NO :30，SEQ ID NO :31，SEQ ID NO :32，SEQ ID NO 33 和 SEQID N0:34。在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分能結(jié)合人TNFa，并且是抗體D2E7或其抗原結(jié)合部分。本發(fā)明還提供了含水的藥用組合物，它包括多元醇，表面活性劑，含檸檬酸鹽和/ 或磷酸鹽的緩沖系統(tǒng)，PH為大約4-8，其用量足以配制用于治療目的的濃度超過大約45mg/ ml的抗體。在一種實施方案中，所述多元醇是甘露糖醇，而所述表面活性劑是失水山梨醇聚 氧乙烯00)醚油酸酯。在另一種實施方案中，所述組合物包括5-20mg/ml的甘露糖醇，和 0. l-10mg/ml的失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚油酸酯。在另一種實施方案中，所述組合物包 括抗體D2E7。本發(fā)明還提供了液體含水藥物制劑，它由l-150mg/ml的抗體，5-20mg/ml的甘露 糖醇，0. l-10mg/ml的吐溫-80，以及檸檬酸鹽和/或磷酸鹽的緩沖系統(tǒng)組成，pH為4_8。在 一種實施方案中，所述抗體針對hTNF α。在另一種實施方案中，所述制劑包括大約40mg的 抗體。本發(fā)明還提供了液體含水藥物制劑，它包括大約50mg/ml的抗體，大約12mg/ml的甘 露糖醇，大約lmg/ml的吐溫-80，以及含檸檬酸鹽和/或磷酸鹽的緩沖系統(tǒng)，pH為大約4-大 約8。在一種實施方案中，所述制劑的pH為大約4. 5-大約6.0。在另一種實施方案中，pH 為大約4. 8-大約5. 5。在另一種實施方案中，本發(fā)明的pH為大約5. 0-大約5. 2。在本發(fā)明的一種實施方案中，所述液體含水藥物制劑還包括大約1. 305mg/ml的 檸檬酸，大約0. 305mg/ml的檸檬酸鈉，大約1. 53mg/ml的二水合磷酸氫二鈉，大約0. 86mg/ ml的二水合磷酸二氫鈉，和大約6. 165mg/ml的氯化鈉。在另一種實施方案中，本發(fā)明的制 劑包括抗體，它是針對hTNFa的。在另一種實施方案中，本發(fā)明的制劑包括抗體D2E7。在 另一種實施方案中，本發(fā)明的制劑給患有以下病癥的受試者施用其中TNFa活性是有害 的，以便抑制所述受試者體內(nèi)的TNF α活性。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及pH為大約4-大約8的液體含水藥物制劑，它包括高蛋白濃度，包括大 約1-大約150mg/ml的抗體濃度，并且具有增強了的穩(wěn)定性。本發(fā)明還涉及用于治療患有 以有害的TNFa活性為特征的狀況的受試者的液體含水藥物制劑。本發(fā)明的制劑包括以下 成分能以高親和力、低解離速度和高中和能力結(jié)合人TNFa的抗體；緩沖液，它包括檸檬 酸，檸檬酸鈉，二水合磷酸氫二鈉，和二水合磷酸二氫鈉；滲透壓調(diào)節(jié)劑，它包括甘露糖醇和 氯化鈉；去污劑，包括失水山梨醇聚氧乙烯00)醚油酸酯；和用于調(diào)節(jié)pH的氫氧化鈉。定義為了更便于理解本發(fā)明，首先對某些術(shù)語進行定義。術(shù)語"受試者"意在包括活的生物體，例如，真核生物和真核生物。受試者的例子 包括哺乳動物，例如，人，犬，牛，馬，豬，綿羊，山羊，貓，小鼠，兔，大鼠，和轉(zhuǎn)基因非人動物。 在本發(fā)明的具體實施方案中，所述受試者是人。術(shù)語"藥物制劑"表示以下形式的制劑它的形式使得活性成分的生物學(xué)活性 是明確有效的，并且它不包括對施用所述制劑的受試者明顯有毒的其它成分?！翱梢运幱?的"賦形劑(載體，添加劑)能夠合理地施用于哺乳動物動物受試者，以便提供有效劑量的 所采用的活性成分。“穩(wěn)定的"制劑是這樣的制劑，其中，在保存時，其中的抗體基本上能保持它的 物理穩(wěn)定性和/或化學(xué)穩(wěn)定性和/或生物學(xué)活性。在本領(lǐng)域中可以獲得用于測定蛋白 穩(wěn)定性的各種分析技術(shù)，并且在以下文獻中作過綜述例如，P印tide and ProteinDrugDelivery,247-301, Vincent LeeEd. ，Marcel Dekker, Inc. ，New York, N. Y. ，Pubs. (1991) 和Jones，A. Adv. Drug Delivery Rev. 10 :29-90 (1993)?？梢栽谶x定溫度下用選定時間測 定穩(wěn)定性。優(yōu)選的是，所述制劑在室溫(大約30°C )或40°C下能穩(wěn)定至少1個月和/或在 大約2-8°C下穩(wěn)定至少1年或2年。另外，所述制劑優(yōu)選在進行冷凍(例如，冷凍至_70°C) 或解凍，以下稱之為"凍/融循環(huán)"之后是穩(wěn)定的。如果在通過對顏色和/或透明度進行肉眼檢查，或通過UV光散射或通過大小排阻 層析測定時基本沒有表現(xiàn)出明顯的聚集，沉淀和/或變性的跡象，則藥物制劑中的抗體" 保持它的物理穩(wěn)定性"。如果在特定時間化學(xué)穩(wěn)定性使得抗體被認為仍然保留了下面所定義的生物學(xué)活 性，則在藥物制劑中所述抗體"保持它的化學(xué)穩(wěn)定性"?？梢酝ㄟ^檢測和定量所述抗體的 化學(xué)改變形式評估化學(xué)穩(wěn)定性。化學(xué)改變可能涉及大小改變(例如，剪切)，例如，可以通 過采用大小排阻層析，SDS-PAGE和/或矩陣輔助的激光解析離子化/飛行時間質(zhì)譜分析 (MALDI/TOF MS)進行評估。其他類型的化學(xué)改變包括電荷改變(例如，因為脫酰胺導(dǎo)致的 改變)，例如，可以通過離子交換層析對它進行評估。如果一種藥物制劑中的抗體具有它預(yù)期用途的生物學(xué)活性，則所述抗體在藥物制 劑中"保持它的生物學(xué)活性"。例如，如果所述藥物制劑中的抗體的生物學(xué)活性為在制備 所述藥物制劑時所表現(xiàn)出的生物學(xué)活性的大約30%，大約20%，或大約10% (在測定的誤 差范圍內(nèi))內(nèi)，就認為保持了它的生物學(xué)活性(例如，通過抗原結(jié)合測定確定)?！暗葷B"是本領(lǐng)域所公認的術(shù)語。例如，等滲可以表示感興趣的制劑具有與人血 液基本上相同的滲透壓。等滲制劑通常具有大約250-350m0sm的滲透壓。例如，等滲可以 采用蒸汽壓力或冰凍型滲壓計測定。“滲透壓調(diào)節(jié)劑"是能使所述制劑等滲的化合物?！岸嘣?是具有多個羥基的物質(zhì)，并且包括糖(還原糖和非還原糖)，糖醇和糖 酸。本發(fā)明的優(yōu)選的多元醇的分子量低于大約600kD(例如，在大約120-大約400kD范圍 內(nèi))。"還原糖"是包括半縮醛基的糖，它能夠還原金屬離子或與蛋白中的賴氨酸和其他氨 基共價反應(yīng)，而"非還原糖"是不具備還原糖的上述特征的糖。還原糖的例子包括果糖，甘 露糖，麥芽糖，乳糖，阿拉伯糖，木糖，核糖，鼠李糖，半乳糖，和葡萄糖。非還原糖包括蔗糖， 海藻糖，山梨糖，松三糖和棉子糖。糖醇的例子包括甘露糖醇，木糖醇，赤蘚糖醇，蘇糖醇，山 梨糖醇和甘油。至于糖酸，包括L-葡糖酸和它的金屬鹽。如果需要所述制劑是凍-融穩(wěn)定 的，所述多元醇優(yōu)選是在冷凍溫度(例如，-20°C )下不會結(jié)晶的，以便它使所述制劑中的抗 體去穩(wěn)定化。所述多元醇還可以起著滲透壓調(diào)節(jié)劑的作用。在本發(fā)明的一種實施方案中， 所述制劑的一種成分是濃度為-20mg/ml的甘露糖醇。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，甘露糖 醇的濃度為7. 5-15mg/ml。在本發(fā)明的更優(yōu)選的實施方案中，甘露糖醇的濃度為IO-Hmg/ ml ο在本文中，“緩沖液"表示緩沖溶液，它能通過它的酸堿共軛成分的作用抑制PH 的改變。本發(fā)明緩沖液的PH為大約4-大約8 ；優(yōu)選大約4. 5-大約7 ；最優(yōu)選的pH為大約 5.0-大約6.5。能夠?qū)H控制在該范圍內(nèi)的緩沖液的例子包括乙酸鹽(例如，乙酸鈉)，琥 珀酸鹽(如琥珀酸鈉)，葡糖酸鹽，組氨酸，檸檬酸和其他有機酸緩沖液。在藥理學(xué)含義上，在本發(fā)明的范圍內(nèi)，抗體的"治療有效量"或"有效量"表示 在預(yù)防或治療疾病方面的有效量，對于所述疾病的治療來說，所述抗體是有效的。“病癥”是能夠用所述抗體治療獲益的任何狀況。其中包括慢性和急性病癥或疾病，包括傾向于使受 試者出現(xiàn)相關(guān)病癥的病理學(xué)狀態(tài)?！胺栏瘎?是可以添加在所述制劑中以便顯著其中的細菌作用，例如，因此促進 多用途制劑的生產(chǎn)的化合物。潛在的防腐劑的例子包括十八烷基二甲基芐基氯化銨，氯化 己烷雙胺，殺藻胺(烷基芐基二甲基氯化銨的混合物，其中，所述烷基是長鏈化合物)，和氯 化芐乙氧銨。其他類型的防腐劑包括芳香醇，如苯酚，丁醇和苯甲醇，烷基對羥基苯甲酸酯， 如甲基或丙基對羥基苯甲酸酯，兒茶酚，間苯二酚，環(huán)己醇，3-戊醇，和間-甲酚?！爸委?表示治療性治療和預(yù)防性或防御性措施。需要治療的受試者包括業(yè)已患 有有關(guān)病癥的受試者，以及需要預(yù)防有關(guān)疾病的受試者。在本文中，短語"腸胃外施用"和"通過腸胃外施用"表示除了腸道和局部施用 以外的施用模式，通常通過注射施用，并且包括，但不局限于靜脈內(nèi)，肌內(nèi)，動脈內(nèi)，鞘內(nèi)，囊 內(nèi)，眶內(nèi)，心臟內(nèi)，皮內(nèi)，腹膜內(nèi)，經(jīng)氣管，皮下，表皮下，關(guān)節(jié)內(nèi)，囊下，蛛網(wǎng)膜下，脊柱內(nèi)和膜 內(nèi)注射和輸液。本文所使用的短語〃系統(tǒng)施用〃，‘‘系統(tǒng)性地施用〃，‘‘外周施用〃和〃通過外 周施用"表示以除了直接用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)以外的方式施用化合物，藥物或其他材料，以 便它進入患者的系統(tǒng)，因此，會進行代謝和其他類似過程，例如，皮下施用。短語"可以藥用的載體"是本領(lǐng)域所公認的術(shù)語，并且包括適合給哺乳動物施用 的可以藥用的材料，組合物或媒介物。所述載體包括液體或固體填充物，稀釋劑，賦形劑，溶 劑或膠囊化材料，涉及到將所述主題試劑從身體的一個器官或部分攜帶或轉(zhuǎn)運到身體的另 一個器官或部分。在與所述制劑的其他成分兼容并且不會對患者造成傷害的含義上，每一 種載體必須是“可接受的”。在本文中，術(shù)語〃人TNF α “(本文簡稱為hTNF α，或簡單地表示為hTNF)，意在 表示人細胞因子，它是以17kD的分泌形式和^kD膜締合形式存在的，它的生物學(xué)活性形 式包括共價結(jié)合的17kD分子的三聚體。HTNFa的結(jié)構(gòu)進一步披露于以下文獻中例如， Pennica, D.，等(1984)Nature 312:724-729 ；Davis, J. Μ·，等(1987)Biochemistry 26 1322-1326 ；和 Jones，Ε. Y.，等(1989) Nature 338:225-228。術(shù)語人 TNF α 意在包括重組 AATNFa (rhTNFa)，它可以是通過標準重組表達方法制備的或通過商業(yè)渠道購買的(R & D Systems, Catalog No. 210-TA, Minneapolis, MN)。在本文中，術(shù)語"抗體"意在表示由四個多肽鏈組成的免疫球蛋白分子，其中兩 個重(H)鏈和兩個輕(L)鏈，通過二硫鍵相互連接在一起。每一個重鏈由重鏈可變區(qū)(本文 簡稱為HCVR或VH)和重鏈恒定區(qū)組成。所述重鏈恒定區(qū)由三個結(jié)構(gòu)域CHl，CH2和CH3組 成。每一個輕鏈包括輕鏈可變區(qū)(本文簡稱為LCVR或VL)和輕鏈恒定區(qū)。輕鏈恒定區(qū)由一 個結(jié)構(gòu)域CL組成。VH和VL區(qū)還可以進一步細分成超變區(qū)，它被稱為互補性決定區(qū)(CDR)， 其中間隔有更保守的，并稱為構(gòu)架區(qū)(FR)的區(qū)域。每一個VH和VL由三個CDRs和四個FRs 組成，從氨基末端到羧基末端按以下順序排列FR1，CDRl，F(xiàn)R2，CDR2，F(xiàn)R3，CDR3，F(xiàn)R4。在本 發(fā)明的一種實施方案中，所述制劑包括具有CDR1，CDR2和CDR3序列的抗體，正如在分別被 收作本文參考的美國專利號6，090, 382和6，258，562中所披露的。在本文中，術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合部分”(或簡稱為”抗體部分”)，表示保留了能特 異性結(jié)合抗原(例如，hTNFa)的抗體的一個或多個片段。業(yè)已證實，抗體的抗原結(jié)合功能可以通過全長抗體的片段實現(xiàn)。包含在術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合部分”的含義內(nèi)的結(jié)合片段 的例子包括(i)Fab片段，它是由VL，VH，CL和CHl結(jié)構(gòu)域組成的單價片段；(ii)F(ab' )2 片段，它是二價片段，包括通過二硫鍵在鉸鏈區(qū)連接在一起的兩個Fab片段；(iii)由VH和 CHl結(jié)構(gòu)域組成的Fd片段；(iv)由抗體的單個臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段，(v) dAb 片段(Ward等，(1989)Nature341 :544-546)，它由VH結(jié)構(gòu)域組成，和(vi)分離的互補性決 定區(qū)(⑶R)。另外，盡管Fv片段的兩個結(jié)構(gòu)域VL和VH是由獨立的基因編碼的，可以通過重 組方法用合成的接頭將它們連接在一起，使它們能夠以單個蛋白鏈的形式生產(chǎn)，其中，VL和 VH區(qū)配對，以便形成一價分子(被稱為單鏈Fv(scFv)；例如，參見，Bird等(1988)Science 242 :423-426 ；和 Huston 等(1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 :5879-5883)。所述單鏈 抗體也被認為包括在術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合部分”的含義內(nèi)。還包括其他形式的單鏈抗體， 如雙抗體。雙抗體是二價的，雙特異性抗體，其中，VH和VL結(jié)構(gòu)域是在單條多肽鏈上表達 的，不過，使用的接頭太短，以至于不能使得同一條鏈上的這兩個結(jié)構(gòu)域配對，從而迫使所 述結(jié)構(gòu)域與另一條鏈上的互補的結(jié)構(gòu)域配對，并且產(chǎn)生兩個抗原結(jié)合位點(例如，參見， Holliger,P.，等(1993)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 :6444-6448 ；Poljak，R. J.，等(1994) Structure 2:1121-1123)。在本發(fā)明的一種實施方案中，所述制劑包括披露于分別被收作 本文參考的美國專利號6，090, 382和6，258，562中的抗原結(jié)合部分。另外，抗體或其抗原結(jié)合部分可以是較大的免疫粘附分子的一部分，它是通過所 述抗體或抗體部分與一種或多種其他蛋白或肽共價或非共價締合形成的。所述免疫粘附分 子的例子包括利用抗生物素蛋白鏈菌素核心區(qū)制備四聚體scFv分子(Kipriyanov，S. Μ.， 等(1995) HumanAntibodies and Hybridomas 6 :93-101)，并且用半胱氨酸殘基，標記肽和 C-末端聚組氨酸標記制備二價和生物素化的scFv分子(Kipriyan0V，S.M.，等(1994)Mol. Immunol. 31 :1047-1058)?？贵w部分，如Fab和F(ab‘ ) 2片段可以利用常規(guī)技術(shù)用完整抗 體制備，如分別用木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化完整抗體制備。另外，可以通過采用本文所披 露的標準重組DNA技術(shù)獲得抗體，抗體部分和免疫粘附分子。在本文中，術(shù)語"人抗體"，意在包括具有來自人種系免疫球蛋白序列的可變區(qū) 和恒定區(qū)的抗體。本發(fā)明的人抗體可以包括不是由人種系免疫球蛋白序列編碼(例如，通 過體外隨機或定點誘變導(dǎo)入的突變或通過體內(nèi)體細胞突變導(dǎo)入的突變)的氨基酸殘基，例 如，在⑶Rs中，特別是⑶R3中。不過，在本文中，術(shù)語"人抗體"不希望包括這樣的抗體， 其中，源于諸如小鼠的另一種哺乳動物種系的CDR系列業(yè)已嫁接到人構(gòu)架序列上。在本文中，術(shù)語"重組人抗體"，意在包括通過重組方法制備，表達，生產(chǎn)或分離 的人抗體，如利用轉(zhuǎn)染到宿主細胞中的重組表達載體表達的抗體(在下面的第II部分進 一步說明)，從重組的，組合的人抗體文庫中分離的抗體(在下面的第III部分進一步說 明)，從用人免疫球蛋白基因進行轉(zhuǎn)基因的動物(例如，小鼠)中分離的抗體(例如，參見 Taylor, L. D.，等(1992) Nucl. Acids Res. 20 :6沘7_6295)，或通過任何其他方法制備，表達， 生產(chǎn)，或分離的抗體，所述方法包括將人免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列上。所述 重組人抗體具有源于人種系免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)。不過，在某些實施方案中， 所述重組人抗體接受了體外誘變(或在使用用人Ig序列轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因動物時，進行體內(nèi) 體細胞誘變)，因此所述重組抗體的VH和VL區(qū)的氨基酸序列盡管是源于人種系VH和VL序 列或與所述序列相關(guān)，但是在體內(nèi)的人抗體種系所有組成成分中可能不是天然存在的。
在本文中，“分離的抗體"，意在表示基本上不含具有不同抗原特異性的其他 抗體的抗體(例如，能特異性結(jié)合hTNF α的分離的抗體基本上不含能特異性地結(jié)合除了 hTNFa以外的抗原的抗體)。不過，能特異性地結(jié)合hTNFa的分離的抗體可能具有與其他 抗原，如，來自其他物種的TNFa分子的交叉反應(yīng)性。另外，分離的抗體可能基本上不含其 他分子材料和/或化學(xué)物質(zhì)。在本文中，"中和抗體"(或"能中和hTNFa活性的抗體")，意在表示它與 hTNFa的結(jié)合導(dǎo)致了對hTNFa的生物學(xué)活性的抑制作用的抗體。對hTNF α的生物學(xué)活性 的抑制可以通過測定hTNF α生物學(xué)活性的一種或多種指標評估，如hTNF a -誘導(dǎo)的細胞 毒性(體外或體內(nèi))，hTNF α-誘導(dǎo)的細胞激活和hTNF α與hTNF α受體的結(jié)合。hTNFa生 物學(xué)活性的上述指標可以通過本領(lǐng)域所公知的一種或多種標準體外或體內(nèi)測定方法評估， 并且，這些方法披露于被分別收作本文參考的美國專利號6，090, 382和6，258，562中。優(yōu)選 的是，抗體中和hTNF α活性的能力是通過抑制細胞中的hTNF a -誘導(dǎo)的細胞毒性評 估的。作為hTNF α活性的另一種或替代的參數(shù)，可以評估抗體抑制hTNFa誘導(dǎo)的ELAM-I 在HUVEC上表達的能力，作為hTNF a -誘導(dǎo)的細胞激活的指標。在本文中，術(shù)語"表面等離子共振"，表示可以通過在生物傳感器基質(zhì)中檢 測蛋白濃度改變分析實時生物特異性相互作用的光學(xué)現(xiàn)象，例如，使用BIAcore系統(tǒng) (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden andPiscataway, NJ)。有關(guān)進一步的說 明，參見 J5nss0n, U.，等(1993)Ann. Biol. Clin. 51 :19-26 ； J8nsson，U.，等(1991) Biotechniquesll :620-627 ； JfihllSSOn，B.，等(1995) J. Mol. Recognit. 8 :125-131 ；禾口 Jtthnnson, B.，等(1991) Anal. Biochem. 198 :268_277。在本文中，術(shù)語"K。ff"意在表示抗體從抗體/抗原復(fù)合物解離的解離速度常數(shù)。在本文中，術(shù)語"Kd"意在表示特定抗體-抗原相互作用的解離常數(shù)。II.所述制劑的抗體本發(fā)明涉及液體含水藥物制劑，包括存在于緩沖液中的治療有效量的抗體，構(gòu)成 了 PH為大約4-大約8的制劑，并且具有較長的保質(zhì)期，優(yōu)選至少18個月。在另一種實施 方案中，本發(fā)明的液體含水藥物制劑具有增強了的穩(wěn)定性。在本發(fā)明的另一種實施方案中， 所述制劑不是光敏感的。在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述要求保護的制劑在至少3次 凍/融循環(huán)之后保持穩(wěn)定。在另一種實施方案中，本發(fā)明的藥物制劑適合單次皮下注射使 用?？捎糜谒鲋苿┲械目贵w包括多克隆抗體，單克隆抗體，重組抗體，單鏈抗體，雜 合抗體，嵌合抗體，人源化抗體，或它們的片段。還可以使用包括一個或兩個用于結(jié)合抗 原的結(jié)合位點和免疫球蛋白的Fc-部分的抗體樣分子?？贵w樣分子的例子是活性成分 etanerc印t或infliximab。用于所述制劑中的優(yōu)選抗體是人抗體，它是從人細胞或從代表 人抗體所有組成成分的基因文庫中克隆的。特別優(yōu)選的人抗體是針對抗原TNFa，包括人 TNFa (或hTNF a )的抗體。在一種實施方案中，本發(fā)明的制劑包括抗體(兩種或兩種以上)的組合，或抗體的 “雞尾酒”。例如，所述制劑可以包括抗體D2E7和一種或多種其他抗體。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部分，從人TNFa 解離的Kd為IX10、或以下，并且K。ff速度常數(shù)為IXKT3iT1或以下，兩種參數(shù)都是通過表面等離子共振測定的，并且在標準體外測定中能中和人TNF α細胞毒性，其IC50為 IX IO-7M或以下。在另一種優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部分，如 在分別被收作本文參考的美國專利號6，090, 382和6，258，562中所披露的。在一個方面，本發(fā)明的制劑包括D2E7抗體和抗體部分，D2E7-相關(guān)抗體和抗體部 分，以及與D2E7具有相同特性的其他人抗體和抗體部分，如與hTNFa結(jié)合的高親和力，低 解離動力學(xué)和高中和能力。在另一種實施方案中，本發(fā)明的制劑包括分離的人抗體或其抗 原結(jié)合部分，從人TNF α解離的常數(shù)Kd為1X101或以下，并且K。ff速度常數(shù)為IXKT1iT1 或以下，兩種參數(shù)都是通過表面等離子共振測定的，并且在標準體外測定中能中和人 TNFa細胞毒性，其IC5tl為IXlOl或以下。更優(yōu)選的是，所述分離的人抗體或其抗原結(jié)合 部分，從人TNF α解離的K。ff為5 X KT4iT1或以下，更優(yōu)選，K。ff為1 X KT4iT1或以下。更優(yōu)選， 所述分離的人抗體或其抗原結(jié)合部分，在標準的體外測定中，能中和人TNF α細胞毒 性，其IC5tl為1 X 10、或以下，更優(yōu)選其IC5tl為1 X 10、或以下，更優(yōu)選其IC5tl為5 X IO-10M 或以下。在優(yōu)選實施方案中，所述制劑包括抗體，它是分離的人重組抗體或其抗原結(jié)合部 分。在另一種優(yōu)選實施方案中，所述制劑包括抗體，它還能中和TNF a -誘導(dǎo)的細胞激活，是 利用用于分析TNF α-誘導(dǎo)的ELAM-I在人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)上表達的標準體外測定 方法評估的。III.制劑的制備本發(fā)明涉及與本領(lǐng)域已知制劑相比具有改善了的特性的制劑(例如，蛋白制劑和 /或抗體制劑)。例如，與本領(lǐng)域已知制劑相比，本發(fā)明的制劑具有改善了的保質(zhì)期和/或 穩(wěn)定性。在優(yōu)選方面，本發(fā)明的制劑包括高蛋白濃度，例如，包括超過大約45mg/ml的蛋白 濃度，超過大約50mg/ml的蛋白濃度，超過大約100mg/ml的蛋白濃度，或超過大約150mg/ml 的蛋白濃度。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述蛋白是抗體。在另一種優(yōu)選實施方案中，所 述抗體是D2E7。本發(fā)明還提供了含水的藥用組合物，它包括多元醇，表面活性劑，和pH為大 約4-8的包括檸檬酸鹽和/或磷酸鹽的緩沖系統(tǒng)，其用量足以制備用于治療目的的濃度超 過例如大約45mg/ml的抗體。感興趣的抗體的制備是按照本領(lǐng)域公知的標準方法進行的。在本發(fā)明的優(yōu)選實施 方案中，用于所述制劑中的抗體是在CHO細胞中表達的，并且通過一系列標準的層析步驟 純化。在另一種實施方案中，所述抗體針對hTNF a，并且，是按照披露于分別被收作本文參 考的美國專利號6，090，382和6，258，562中的方法制備的。在制備感興趣的抗體之后，制備含有所述抗體的藥物制劑。例如，存在于所述制劑 中的抗體的治療有效量是通過考慮需要的劑量體積和施用模式?jīng)Q定的。在本發(fā)明的一種實 施方案中，所述制劑中抗體的濃度為大約1-大約150mg抗體/每ml液體制劑。在優(yōu)選實 施方案中，所述制劑中抗體的濃度為大約5-大約80mg/ml。在另一種優(yōu)選實施方案中，所述 制劑中抗體的濃度為大約25-大約50mg/ml。所述制劑特別適用于超過15mg/ml的大的抗 體劑量。在優(yōu)選實施方案中，所述抗體的濃度為50mg/ml。在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述制劑中抗體的濃度為大約l-150mg/ml，大 約 5-145mg/ml,大約 10_140mg/ml，大約 15_135mg/ml，大約 20_130mg/ml，大約 25_125mg/ ml，大約 30-120mg/ml，大約;35-115mg/ml，大約 40-110mg/ml，大約 45_105mg/ml，大約 50-100mg/ml，大約 55_95mg/ml，大約 60_90mg/ml，大約 65_85mg/ml，大約 70_80mg/ml，或大約75mg/mL介于上述濃度之間的范圍，例如，大約6-lMmg/ml也屬于本發(fā)明的部分。例如， 本發(fā)明包括使用上述任意值的組合作為上限和/或下限的值的范圍。在一種實施方案中，本發(fā)明提供了具有長的保質(zhì)期的制劑，包括活性成分，優(yōu)選抗 體，與甘露糖醇，一水合檸檬酸，檸檬酸鈉，二水合磷酸氫二鈉，二水合磷酸二氫鈉，氯化鈉， 失水山梨醇聚氧乙烯00)醚油酸酯，水，和氫氧化鈉組合。在另一種實施方案中，本發(fā)明的 制劑在液體狀態(tài)下具有至少18個月的長的保質(zhì)期。冷凍本發(fā)明的制劑還可以用于進一步 延長它的保質(zhì)期。制備了含水制劑，包括存在于pH緩沖溶液中的所述抗體。本發(fā)明的緩沖液的pH 為大約4-大約8，優(yōu)選大約4. 5-大約6. 0，更優(yōu)選大約4. 8-大約5. 5，最優(yōu)選的pH為大約 5.0-大約5. 2。介于上述pH之間的范圍也被認為是本發(fā)明的一部分。例如，意在包括將上 述任何值的組合作為上限和/或下限的值的范圍。能夠?qū)H控制在該范圍內(nèi)的緩沖液的 例子包括乙酸鹽(例如乙酸鈉)，琥珀酸鹽(例如琥珀酸鈉)，葡糖酸鹽，組氨酸，檸檬酸鹽 和其他有機酸緩沖液。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述制劑包括緩沖系統(tǒng)，該系統(tǒng)包括磷酸鹽和檸檬 酸鹽，以便將PH保持在大約4-大約8。在另一種實施方案中，pH范圍為大約4. 5-大約6.0， 更優(yōu)選大約PH 4. 8-大約5. 5，最優(yōu)選的pH范圍為大約5. 0-大約5. 2。在另一種優(yōu)選實施方 案中，所述緩沖系統(tǒng)包括一水合檸檬酸，檸檬酸鈉，二水合磷酸氫二鈉，和/或二水合磷酸 二氫鈉。在另一種實施方案中，所述緩沖系統(tǒng)包括大約1. 3mg/ml的檸檬酸(例如，1. 305mg/ ml)，大約0. 3mg/ml的檸檬酸鈉(例如，0. 305mg/ml)，大約1. 5mg/ml的二水合磷酸氫二鈉 (例如1. 53mg/ml)，大約0. 9mg/ml的二水合磷酸二氫鈉(例如，0. 86)，和大約6. 2mg/ml的 氯化鈉(例如，6. 165mg/ml)。在其他優(yōu)選實施方案中，所述緩沖系統(tǒng)包括1-1. 5mg/ml的檸 檬酸，0. 25-0. 5mg/ml的檸檬酸鈉，1. 25-1. 75mg/ml的二水合磷酸氫二鈉，0. 7-1. lmg/ml的 二水合磷酸二氫鈉，和6.0-6.%ig/ml的氯化鈉。在另一種實施方案中，所述制劑的pH是用 氫氧化鈉調(diào)節(jié)的。在所述制劑中還包括可以作為滲透壓調(diào)節(jié)劑并且能夠穩(wěn)定所述抗體的多元醇。將 所述多元醇添加到所述制劑中，其用量可以根據(jù)需要的所述制劑的等滲性而改變。所述含 水的制劑優(yōu)選是等滲透的。所添加的多元醇的量還可以根據(jù)多元醇的分子量而改變。例 如，與二糖(如海藻糖)相比，可以添加較少量的單糖(例如甘露糖醇)。在本發(fā)明的優(yōu)選 實施方案中，被作為滲透壓調(diào)節(jié)劑用在所述制劑中的多元醇是甘露糖醇。在本發(fā)明的優(yōu)選 實施方案中，甘露糖醇的濃度為大約5-20mg/ml。在本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方案中，甘露 糖醇的濃度為大約7. 5-15mg/ml。在本發(fā)明的制劑的更優(yōu)選的實施方案中，甘露糖醇的濃度 為大約10-Hmg/ml。在最優(yōu)選的實施方案中，甘露糖醇的濃度為大約12mg/ml。在本發(fā)明 的另一種實施方案中，在所述制劑中含有多元醇山梨糖醇。另外，將去污劑或表面活性劑添加到所述抗體制劑中。典型的去污劑包括非離子 去污劑，如失水山梨醇聚氧乙烯醚脂肪酸酯(例如失水山梨醇聚氧乙烯00)醚月桂酸酯， 失水山梨醇聚氧乙烯00)醚油酸酯等)或泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)。所添加的去污劑 的量是這樣的，它能減少所述制備的抗體的聚集和/或減少顆粒在所述制劑中的形成和/ 或減少吸附。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述制劑包括聚山梨醇酯作為表面活性劑。在本 發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方案中，所述制劑包括去污劑失水山梨醇聚氧乙烯00)醚油酸酯或吐溫80。吐溫80是用于表示聚氧乙烯00)失水山梨醇一油酸酯的名詞(參見Fiedler， Lexikon derHifsstoffe, Editio Cantor Verlag Aulendorf,4th edi. ,1996)。在一禾中優(yōu) 選實施方案中，所述制劑包括大約0. 1-大約10mg/ml的失水山梨醇聚氧乙烯QO)醚油酸 酯，更優(yōu)選大約0. 5-大約5mg/ml。在另一種優(yōu)選實施方案中，在本發(fā)明的制劑中存在大約 0. 失水山梨醇聚氧乙烯00)醚油酸酯。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述制劑是裝在管形瓶瓶中的含有下面表1所示成 分的0. 8mL的溶液。表 1具有用于注射的0. SmL溶液υ的1個管形瓶包括
權(quán)利要求
1.一種選自下組的藥物制劑(a)液體含水藥物制劑，包括存在于緩沖液中的治療有效量的抗體，該制劑的PH為大 約4-8，并且保質(zhì)期至少為18個月；(b)含水藥物制劑，包括存在于緩沖液中的治療有效量的抗體，該制劑的PH為大約 4-8，并且在液體狀態(tài)下的保質(zhì)期至少為18個月；(c)液體含水藥物制劑，包括存在于緩沖液中的治療有效量的抗體，該制劑的PH為大 約4-8，所述制劑能在至少3次凍/融循環(huán)之后保持穩(wěn)定性；和(d)液體含水藥物制劑，包括存在于緩沖液中的治療有效量的抗體，該制劑的PH為 4-8，并且在2-8°C的溫度下具有至少12個月的增強的穩(wěn)定性。
2.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述抗體針對TNFα。
3.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述抗體的濃度大約為l-150mg/ml。
4.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述抗體的濃度大約為50mg/ml。
5.如權(quán)利要求1的制劑，它還適合進行單次皮下注射。
6.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述抗體是抗體或其抗原結(jié)合部分，從人TNFα解離的 Kd為IX 10、或以下，并且K。ff速度常數(shù)為IX ΙΟ、—1或以下，兩種參數(shù)都是通過表面等離 子共振測定的，并且，在標準體外測定中，能中和人TNF α細胞毒性，其IC5tl為1 X ΙΟ^Μ 或以下。
7.如權(quán)利要求6的制劑，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分，是重組抗體或其抗原結(jié)合 部分。
8.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述抗體是抗體或其抗原結(jié)合部分，它a)從人TNFα解離的K。ff速度常數(shù)為1 X KT3iT158以下，該參數(shù)是通過表面等離子共振 測定的；b)具有輕鏈⑶R3結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包括SEQID NO :3的氨基酸序列，或通過在1，4，5， 7或8號位置上進行單丙氨酸取代或在1，3，4，6，7，8和/或9號位置上進行1_5個保守性 氨基酸取代對SEQ ID NO :3進行修飾得到的氨基酸序列；c)具有重鏈⑶R3結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包括SEQID NO :4的氨基酸序列，或通過在2，3，4， 5，6，8，9，10或11號位置上進行單丙氨酸取代或在2，3，4，5，6，8，9，10，11和/或12號位置 上進行1-5個保守性氨基酸取代對SEQ ID NO :4進行修飾得到的氨基酸序列。
9.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分，具有包括SEQID N0:1的 氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)(LCVR)和包括SEQ IDNO 2的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)(HCVR)。
10.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分，能中和人TNFα，黑猩猩 TNF α和選自下組的至少一種其他靈長類動物TNF α的活性狒狒TNF α，狨猴TNF α，獼猴 TNF α和恒河猴TNF α 0
11.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分，還能中和小鼠TNFα和/ 或豬TNF α的活性。
12.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分，它能結(jié)合人TNFa，并且 是抗體D2E7或其抗原結(jié)合部分。
13.含水的藥用組合物，包括多元醇，表面活性劑，含檸檬酸鹽和/或磷酸鹽的緩沖系 統(tǒng)，PH為大約4-8，其用量足以配制用于治療目的的濃度超過大約45mg/ml的抗體。
14.如權(quán)利要求13的藥用組合物，其中，所述多元醇是甘露糖醇，而所述表面活性劑是 失水山梨醇聚氧乙烯00)醚油酸酯。
15.如權(quán)利要求14的藥用組合物，它包括5-20mg/ml的甘露糖醇和0.l-10mg/ml的失 水山梨醇聚氧乙烯00)醚油酸酯。
16.如權(quán)利要求13的制劑，它包括抗體或其抗原結(jié)合部分，它結(jié)合人TNFa，并且是抗 體D2E7或其抗原結(jié)合部分。
17.液體含水藥物制劑，包括(a)l-150mg/ml 的抗體，(b)5-20mg/ml的甘露糖醇， (C)O. l-10mg/ml 的吐溫-80，和(d)含檸檬酸鹽和/或磷酸鹽的緩沖系統(tǒng)，pH為4-8。
18.如權(quán)利要求17的制劑，其中，所述pH選自下組大約4.5-大約6. 0，大約4. 8-大 約5. 5，和大約5. 0-大約5. 2。
19.如權(quán)利要求17的液體含水藥物制劑，它包括(a)大約50mg/ml的抗體，(b)大約12mg/ml的甘露糖醇，(c)大約lmg/ml的吐溫-80，和(d)含檸檬酸鹽和/或磷酸鹽的緩沖系統(tǒng)，pH為大約4-大約8.
20.如權(quán)利要求17的制劑，其中，所述緩沖系統(tǒng)包括(a)大約1.3mg/ml的檸檬酸，(b)大約0.3mg/ml的檸檬酸鈉，(c)大約1.5mg/ml的二水合磷酸氫二鈉，(d)大約0.9mg/ml的二水合磷酸二氫鈉，和(e)大約6.2mg/ml的氯化鈉。
21.如權(quán)利要求19的制劑，其中，所述抗體針對TNFα。
22.如權(quán)利要求19的制劑，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分，能結(jié)合人TNFα，并且是 抗體D2E7或其抗原結(jié)合部分。
23.如權(quán)利要求22的制劑，將它施用于患有其中TNFa活性是有害的病癥的受試者，使 得所述受試者體內(nèi)TNF α活性受到抑制。
全文摘要
本申請發(fā)明名稱為“用于治療TNF-α相關(guān)病癥的人抗體的制劑”。描述了一種液體含水藥物制劑，它具有高蛋白濃度，pH為大約4-8，并且具有增強的穩(wěn)定性。
文檔編號A61K9/19GK102049045SQ20101061394
公開日2011年5月11日 申請日期2003年8月15日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月16日
發(fā)明者H·-J·克勞澤, L·鮑斯特, M·迪克斯 申請人:艾博特生物技術(shù)有限公司