專利名稱：基于谷胱甘肽的藥物遞送系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及靶向藥物遞送領(lǐng)域。本發(fā)明涉及任選地包含于載體或納米容器 (nanocontainer)中的活性藥物成分的綴合物，所述活性藥物成分或者載體或納米容器與介導(dǎo)特異性結(jié)合、胞吞作用或轉(zhuǎn)胞吞作用的谷胱甘肽轉(zhuǎn)運蛋白的配體連接。這些綴合物優(yōu)選用于治療或預(yù)防基于腦的疾病狀況的方法中。
背景技術(shù)：
為了適當(dāng)發(fā)揮功能，神經(jīng)元需要受到緊密調(diào)控的細(xì)胞外環(huán)境。通過調(diào)養(yǎng)稱為星形膠質(zhì)細(xì)胞(或星形膠質(zhì))的腦細(xì)胞，這種明確的重要微環(huán)境在局部受到維護。為了有效處理血液組成和腦細(xì)胞外空間之間相當(dāng)大且易變的差異，中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)受到多種血-CNS屏障的保護而不受基本血液循環(huán)的傷害，即血腦屏障、血腦脊液(CSF)屏障、軟膜血管(pial vessel)-CSF屏障、室管膜和膠質(zhì)界膜，還有血視網(wǎng)膜屏障、血神經(jīng)屏障、血脊髓屏障。血腦屏障(BBB)被認(rèn)為是最重要的血-CNS屏障，因為與其他血-CNS屏障相比，其覆蓋的表面積大1000倍。BBB的特征在于覆蓋CNS中毛細(xì)血管的獨特的緊密內(nèi)皮細(xì)胞層。此外， 在這些內(nèi)皮細(xì)胞中，通過在毛細(xì)血管上伸出“膠質(zhì)足(gl ialfoot) ”，星形膠質(zhì)細(xì)胞是BBB特性的主要誘導(dǎo)物。特別地，BBB調(diào)節(jié)離子(Na+、K+、Ca2+)、水、養(yǎng)分、代謝物、神經(jīng)遞質(zhì)(谷氨酸、色氨酸)、血漿蛋白(白蛋白、纖維蛋白原、免疫球蛋白)、來自免疫系統(tǒng)的細(xì)胞以及異生素(藥物)進出腦的運輸。與外周毛細(xì)血管相比，腦中的毛細(xì)血管內(nèi)皮具有獨特的性質(zhì)。其具有狹窄的緊密連接、無孔、低胞飲活性以及連續(xù)的基膜。狹窄的緊密連接導(dǎo)致1500-20000hm. cm2的高電阻。另外，內(nèi)皮細(xì)胞具有排斥帶負(fù)電化合物的表面負(fù)電荷。它們具有許多分解化合物的線粒體和酶以及將養(yǎng)分和其他化合物主動運輸?shù)侥X內(nèi)外的各種選擇性轉(zhuǎn)運系統(tǒng)。通常，BBB被認(rèn)為是保護腦穩(wěn)態(tài)的器官。然而，BBB也因此限制了異生素(如藥物和診斷劑) 向腦的遞送，這使得腦病癥的經(jīng)典藥物治療(即靶向神經(jīng)元)復(fù)雜化。因此，期望經(jīng)由內(nèi)源 BBB轉(zhuǎn)運系統(tǒng)將藥物選擇性靶向腦。另外，對于到達(dá)其細(xì)胞內(nèi)靶標(biāo)的一些藥物類型，需要將它們跨親脂細(xì)胞膜遞送到親水細(xì)胞質(zhì)中。這種親脂到親水轉(zhuǎn)運要求成為設(shè)計和遞送許多此類藥物的挑戰(zhàn)。以非磷酸化形式給予藥物可以改善藥物的細(xì)胞進入，因為細(xì)胞膜不易滲透磷酸化的藥物。隨后，可以通過胸腺嘧啶核苷激酶將藥物磷酸化成其活性形成。然而，所有機體組織都非特異性地發(fā)生藥物吸收。另一缺陷是，為了實現(xiàn)藥物的穩(wěn)態(tài)血漿水平，需要花費高達(dá)4周的劑量給藥。 例如，一些治療要求每日給予高劑量(800-1200mg/天)，持續(xù)24-48周。這對于非慢性疾病狀況的治療而言太晚。另一缺陷是，此類治療通常受到毒性的限制?？傊?，對于許多治療和療法，需要在合適的時間段將有效量的藥物遞送到期望的位點，同時降低副作用。可能最大的挑戰(zhàn)是將藥物(及時)遞送到受生理屏障保護的位點，如CNS、視網(wǎng)膜、胎盤以及睪丸。市場上還沒有靶向特異性吸收受體的CNS藥物。實際上，用于治療神經(jīng)病癥(如中風(fēng)、偏頭痛和MS)的大部分市售藥物針對腦外靶標(biāo)(如腦血管系統(tǒng)或免疫系統(tǒng))。與小分子不同，生物制藥藥物不大可能是增強其跨血腦屏障滲透性的化學(xué)修飾的候選者。與直接和局部定向注射、鞘內(nèi)輸注和甚至血腦屏障的(藥理)破壞一樣，此類化合物目前還依賴對患者的侵入和傷害技術(shù)。由于這些技術(shù)的嚴(yán)重神經(jīng)后果，這些技術(shù)僅在所選的威脅生命的疾病中得到許可。此外，在遞送藥物遍及大體積的人腦時，局部給藥是無效的。因此，亟需創(chuàng)新的CNS藥物遞送技術(shù)。谷胱甘肽(GSH)是內(nèi)源抗氧化劑。如果其在血清中的濃度不足，則可能會發(fā)生一些神經(jīng)疾病，如慢性疲勞綜合征(CFS)。在1994年，Berislav V. Zlokovic宣稱，GSH通過諸如GSH轉(zhuǎn)運蛋白的特殊途徑到達(dá)并穿過豚鼠的BBB而不分解(1994，Biochem. Biophys. Res. Commun. 201 :402_408)。在 1995 年，Berislav V. Zlokovic 斷言 GSH 以毫摩爾濃度存在于腦、星形膠質(zhì)細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中(1995，Pharm. Res. 12 1395-1406)。在1995年，Ram Kannan 宣稱，GSH 吸收依賴于 Na+ 濃度(1995，Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 36 1785-1792)。如果Na+濃度低，則腦內(nèi)皮細(xì)胞的GSH吸收可能受到抑制。他還指出，位于BBB腔側(cè)(luminal side)的Na依賴性GSH轉(zhuǎn)運蛋白管理GSH吸收，而位于BBB腔側(cè)的Na非依賴性GSH轉(zhuǎn)運蛋白管理GSH的流出(1996，J. Biol. Chem. 271 =9754-9758)。另外，Kannan利用小鼠和豚鼠的腦構(gòu)建了大鼠肝小管GSH轉(zhuǎn)運蛋白(RcGSHT)系統(tǒng)來分析cDNA片段5、7和11。結(jié)果表明，片段7代表Na依賴性GSH轉(zhuǎn)運蛋白，片段5和11代表Na非依賴性GSH轉(zhuǎn)運蛋白。 在1999年，Ram Kannan構(gòu)建了刺激BBB環(huán)境的小鼠腦內(nèi)皮細(xì)胞系(MBEC-4)模型(1999， J. Neurochem. 73 390-399)。該模型證實，Na依賴性GSH轉(zhuǎn)運蛋白位于MBEC-4細(xì)胞的腔側(cè)。在2000年，Ram Kannan斷言，GSH經(jīng)由Na依賴性GSH轉(zhuǎn)運蛋白穿過BBB進入人腦血管內(nèi)皮細(xì)胞(HCBC)，而Na依賴性GSH轉(zhuǎn)運蛋白存在于HCEC的腔細(xì)胞膜中(2000，Brain. Res. 852 374-382)。在2003年，Zhao Zhiyang提供了通過氨磺酰共價鍵與谷胱甘肽s_轉(zhuǎn)移酶(GST)/谷胱甘肽(GSH)鍵合的抗癌前藥，來在US2003109555所述的氨磺酰鍵斷裂后靶向并治療特定癌細(xì)胞。這種修飾能夠保護藥物的氨基，增加其溶解性并改變其在體內(nèi)的吸收和分布。在2005年，Ae-June Wang et al.在美國專利第7，446，096號中公開了一項發(fā)明，其提供了包含載體或接枝于載體上的活性化合物和谷胱甘肽或谷胱甘肽衍生物的遞送系統(tǒng)。該發(fā)明還提供了包含這樣的部分的化合物，該部分包含維生素E衍生物或磷脂衍生物、與其鍵合的聚乙二醇(PEG)或聚乙二醇衍生物，以及與聚乙二醇或PEG衍生物鍵合的谷胱甘肽(GSH)或谷胱甘肽衍生物。在2008年，Pieter Gaillard在美國專利申請第 60/907，176號中公開了抗病毒化療劑和其他抗病毒劑的(CNS)靶向遞送，其在體外和體內(nèi)利用GSH-PEG脂質(zhì)體。那一年之后，Swati More和Robert Vince發(fā)表了利用體外方法設(shè)計、合成和生物學(xué)評價作為抗帕金森前藥組分的谷胱甘肽擬肽類(p^tido mimetics)的論文(More，2008，J.Med. Chem. 51 :4581_4588)。然而，這些公開并沒有提供藥物和化合物之間的特定相關(guān)組合的充分細(xì)節(jié)，其對特定CNS和相關(guān)病癥的診斷和/或(預(yù)防)治療具有特殊用途。因此本發(fā)明的目的是提供安全有效且通用的方法，以用于利用谷胱甘肽轉(zhuǎn)運受體運送負(fù)荷如小分子、肽、蛋白和含有藥物和基因的納米容器(如脂質(zhì)體)穿過細(xì)胞膜并穿過血組織屏障，如特別是CNS藥物靶向的血腦屏障。令人驚訝的是，除了上文所述的公開以外，我們確定谷胱甘肽和谷胱甘肽衍生物與肽、蛋白(如酶和抗體)、其他小分子和陽離子聚合物DNA復(fù)合物(polyplex)通過直接偶聯(lián)或利用間隔分子連接的綴合在將上述物質(zhì)特異性靶向谷胱甘肽轉(zhuǎn)運受體中是有效的。發(fā)明概述本文所用術(shù)語“寡核苷酸”和“多核苷酸”包括天然或修飾的單體或連接物的線性寡聚體和聚合物，所述天然或修飾的單體或連接物包括脫氧核糖核苷、核糖核苷、其α "異頭形式、聚酰胺核酸等，并能通過單體與單體相互作用(如核苷與核苷)的常規(guī)模式與靶多核苷酸特異性結(jié)合，如Watson-Crick型堿基配對、Hoogsteen或反向Hoogsteen型堿基配對等。通常，單體通過磷酸二酯鍵或其類似物連接以形成大小為諸如3-4個的若干單體單元到數(shù)百個單體單元的寡核苷酸。只要寡核苷酸以諸如"ATGCCTG"的字母序列表示，都應(yīng)當(dāng)理解除非另有說明，核苷酸從左到右為5' ->3'的順序，且"Α"表示脫氧腺苷，“C"表示脫氧胞苷，“G"表示脫氧鳥苷以及"Τ"表示胸腺嘧啶核苷。磷酸二酯鍵的類似物包括硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯(phosphoroselenoate)、二硒代磷酸酉旨(phosphorodiselenoate)、phosphoroaniIothioate> phosphoranilidate、氛基憐酸酉旨、 N3' —P5'氨基磷酸酯等。多核苷酸基本上可以為任何長度，通常為約10個核苷酸到約 IxlO9個核苷酸或更大。如本文所用，“寡核苷酸”定義為長度為4-100個核苷酸的多核苷酸。因此，寡核苷酸是多核苷酸的子集。本文所用的術(shù)語“特異性結(jié)合”表示可測量地不同于非特異性相互作用的結(jié)合。特異性結(jié)合可以通過以下方式測定，例如與對照分子(配體)的結(jié)合相比測定分子(配體) 的結(jié)合，所述對照分子通常是不具有親和活性的類似結(jié)構(gòu)的分子，如缺少特異性親和序列的類似大小的肽。如果配體對受體具有比對照配體可測量地高的親和力，則存在特異性結(jié)合。結(jié)合的特異性可以通過例如與已知與靶標(biāo)結(jié)合的對照配體的競爭來測定。本文所用的術(shù)語“特異性結(jié)合”包括低和高親和力特異性結(jié)合。特異性結(jié)合可以通過例如Kd為至少約 IO-4M. E. g.的低親和力靶向劑來展示，如果受體具有多個配體結(jié)合位點，則具有低親和力的配體可用于靶向微血管內(nèi)皮。特異性結(jié)合也可以通過高親和力配體來展示，如Kd為至少約 10_7M、至少約1(Γ8Μ、至少約1(Γ9Μ、至少約ΙΟ,Μ的配體，或者Kd可以為至少約IiT11M或ICT12M 或更大的配體。低親和力和高親和力靶向配體都可用于并入本發(fā)明的綴合物中。發(fā)明詳述本發(fā)明基于稱為受體介導(dǎo)的胞吞作用的安全內(nèi)源(非毒性)轉(zhuǎn)運機制，以用于運送治療性部分如大蛋白以及含有藥物和基因的脂質(zhì)體即封裝于脂質(zhì)體中的藥物和基因，穿過細(xì)胞膜或穿過諸如血腦屏障的血組織屏障來進行例如所述治療部分的腦遞送。一系列有效且公知的內(nèi)化受體存在于用于此用途的細(xì)胞和血腦屏障中。這些受體包括但不限于硫胺轉(zhuǎn)運蛋白、α (2，3)_唾液酸糖蛋白受體、運鐵蛋白受體、清道夫受體、LDL受體、LRP1B、 LRP2、DTR、胰島素受體、IGF受體、瘦蛋白受體、6-磷酸甘露糖受體。然而，本發(fā)明涉及一種更安全且更有效的方式，其通過靶向腦中毛細(xì)血管上的谷胱甘肽內(nèi)源內(nèi)化吸收(轉(zhuǎn)運)受體，將藥物特異性遞送至細(xì)胞并穿過血腦屏障或者特異性增強藥物遞送至細(xì)胞并穿過血腦屏障，而無需修飾或破壞神經(jīng)保護性血腦屏障的正常功能。在第一方面，本發(fā)明涉及一種綴合物，其包含a)谷胱甘肽轉(zhuǎn)運蛋白的配體；和b) 診斷或治療劑和包含所述診斷或治療劑的藥學(xué)可接受的納米容器中的至少一種；其中a) 中的配體優(yōu)選綴合至b)中的診斷或治療劑和納米容器中的至少一種。
“綴合物”在本文中定義為由偶聯(lián)在一起的兩個實體組成。優(yōu)選地，兩個實體通過以下方式綴合非特異性或特異性蛋白_蛋白相互作用；共價鍵合；非共價鍵合；配位化學(xué)鍵合；化學(xué)合成，直接或經(jīng)由(不)可切割間隔物、接頭(linker)或納米容器的組分；或通過重組技術(shù)。在本發(fā)明中，第一實體可以是診斷和/或治療劑或者包含所述診斷和/或治療劑的藥學(xué)可接受的納米容器，而第二實體是靶細(xì)胞上的谷胱甘肽轉(zhuǎn)運蛋白的配體。下文進一步定義了用于本發(fā)明綴合物的合適診斷和/或治療劑、用于此類診斷和/或治療劑的藥學(xué)可接受的納米容器以及合適的谷胱甘肽轉(zhuǎn)運蛋白的配體。治療或診斷劑本發(fā)明的綴合物包含至少一種診斷或治療劑。并入本發(fā)明綴合物的優(yōu)選診斷或治療劑為小分子化學(xué)劑。本文的化學(xué)劑應(yīng)理解為定義明確的化學(xué)分子，通常是較小的非聚合分子(如小于2kDa)，其至少部分是有機的，通常通過化學(xué)合成獲得并且不包含寡核苷酸或多核苷酸。可以衍生小分子藥物部分的所關(guān)注藥物化合物或者診斷或治療劑還列于 Goodman & Gilman' s,The Pharmacological Basis of Therapeutics(9th Ed)(Goodman et al. eds) (McGraw-Hill) (1996)；和 1999 Physician' s Desk Reference (1998)?？裳苌幬锊糠值乃P(guān)注的其他具體藥物和化合物包括但不限于中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制劑(cbpressant)全身麻醉藥(巴比妥酸鹽、苯二氮罩類、類固醇、環(huán)己酮衍生物以及混和藥劑(miscellaneous agent))、鎮(zhèn)靜催眠藥(苯二氮罩類、 巴比妥酸鹽、哌啶二酮和三酮、喹唑啉衍生物、氨基甲酸酯、醛和衍生物、酰胺、無環(huán)酰脲、 苯并氮雜罩和相關(guān)藥物、吩噻嗪等)、中樞隨意肌張力修飾藥物(抗驚厥藥，如乙內(nèi)酰脲、 巴比妥酸鹽、噁唑烷二酮、琥珀酰亞胺、?；ｋ?acylureide)、戊二酰亞胺、苯二氮罩類、仲醇和叔醇、二苯并氮雜罩衍生物、丙戊酸和衍生物、GABA類似物等)、鎮(zhèn)痛藥(嗎啡和衍生物、東罌粟堿衍生物、嗎啡喃衍生物、苯基哌啶、2，6_甲烷-3-苯并氮雜環(huán)辛烯(2， 6-methane-3-benzazocaine)衍生物、二苯基丙胺和電子等排物、水楊酸鹽、對氨基苯酚衍生物、5-吡唑啉酮衍生物、芳基乙酸衍生物、芬那酯和電子等排物、納曲酮、甲基納曲酮等)以及止吐藥(抗膽堿能藥、抗組胺劑、抗多巴胺劑等)，以下美國專利所所公開的鎮(zhèn)
_I藥:5292，736，5丨，688，825，5，554，789，5，455，230，5，292，736，5，298，522，5，216’ 165，5,,438，064,5，204，365,5,,017，578,4;,906，655, 4;,906，655,4,,994，450,4,749，792，4，980，365,4，794,110,4,670，541,4;,737:’ 493, 4;,622，326,4,,536，512,4,719，231，4，533，671,4，552，866,4，539，312,4,,569;,942,4,,681，879,4，511，724,4，556，672，4，721，712,4，474，806,4，595，686,4，440;,779,4,434，175,4,608，374,4,395，402，4，400，534,4’ 374，139,4,361，583,4,252;,816,4,251，530，5，874，459，5，688，825，5，554，789，5:’ 455，230，5，438，064，5，298,,5 2 2，5，216，165，5，204，365,5，030，639，5，017，578，5:’ 008，264,4，994，450,4，980,,365,4，906，655,4，847，290,4，844，907，4，794，110,4;,791,129,4,774，256,4，749:’ 792,4,,737，493,4，721，712,4,719，231，4，681，879,4，670，541,4,667，039,4，658;,037,4,634，708,4,623，648,4，622，326，4，608，374,4，595，686,4，594，188,4,569;,942,4,556，672,4，552，866,4，539，312，4，536，512,4，533，671,4,511，724,4，440;,779,4,434，175,4,400，534,4,395，402，4，391，827,4:,374，139,4,361，583,4,322,,420,4,306，097,4，252，816,4,251，530，4，244，955,4，232，018,4，209，520,4，164，514,4，147，872,4，133，819,4，124，713, 4，117，012，4，064，272，4，022，836，3，966，944 ；中樞神經(jīng)系統(tǒng)刺激劑興奮劑(呼吸刺激劑、驚厥刺激劑、精神運動刺激劑)、麻醉劑拮抗劑(嗎啡衍生物、東罌粟堿衍生物、2，6_甲烷-3-苯并噁嗪衍生物、嗎啡喃衍生物)、 促智藥物、氟馬西尼；精神藥物(psychopharmacological)抗焦慮鎮(zhèn)靜藥(苯二氮罩類、丙二醇氨基甲酸酯)、抗精神病藥(吩噻嗪衍生物、硫黃嘌呤衍生物、其他三環(huán)化合物、丁酰苯衍生物和電子等排物、二苯基丁胺衍生物、取代的苯甲酰胺、芳基哌嗪衍生物、吲哚衍生物等)、
抗抑郁藥(三環(huán)化合物、MAO抑制劑等)，以下美國專利所公開的精神藥物5，192,799,5,,036’070,4，778，800,4，753，951,4，590，180,4,690，930，4，645，773,4，427，694，4，424:’ 202,4，440，781，5，686，482,5，478，828，5,461,062, 5，387，593, 5，387，586，5，256;,664,5，192，799,5，120，733, 5，036，070,4:,977，167，4，904，663,4，788,188，4，778;,800,4，753，951,4，690，930,4，645，773,4,631，285，4，617，314,4，613，600，4，590:’ 180,4，560，684,4，548，938,4,529，727,4,459,306，4，443，451,4，440，781，4，427;,694,4，424，202,4，397，853,4，358，451,4:,324，787，4，314，081,4，313，896，4，294;,828,4，277，476,4，267，328,4,264，499,4,231，930，4，194，009,4，188，388，4，148;,796,4，128，717,4,062，858,4,031，226,4,020，072，4，018，895,4，018，779，4，013，672，3，994，898，3，968，125，3，939，152，3，928，356, 5！，880，834，3，668,210 ；呼吸道藥物中樞性鎮(zhèn)咳藥(阿片生物堿及其衍生物)；外周神經(jīng)系統(tǒng)藥物局部麻醉藥(酯衍生物、酰胺衍生物)； 在突觸連接位點或神經(jīng)效應(yīng)器連接位點起作用的藥物膽堿能劑、膽堿能阻斷劑、神經(jīng)肌肉阻斷劑、腎上腺素能劑、抗腎上腺素能劑、以下美國專利所公開的膽堿能
劑:5，219，872，5，219，873，5，073，560，5，073，560，5，346，911，5，424，301, 5;,073，560，5，219:’ 872,4’ 900，748,4，786，648,4，798，841,4,782，071,4,710，508,5,482，938，5，464:’ 842,5:’ 378，723,5，346，911,5,318，978，5，219，873, 5，219，872，5，084，281，5，073;,560, 5;,002，955,4，988，710,4,900，748,4,798，841,4,786，648,4，782，071，4，745，123,4,‘710，508;以下美國專利所公開的腎上腺素能劑:5，091，528,5丨，091，528，4，835:’ 157，5:’ 708，015，5，594，027，5，580，892, 5，576，332,5，510，376，5，482，961，5，334;,601, 5:’ 202，347,5，135，926,5，116，867, 5，091，528,5，017，618,4,835，157，4，829;,086, 4;,579，867,4，568，679,4，469，690,4，395，559,4,381，309,4,363，808，4，343;,800,4;,329，289,4,314，943,4，311，708,4,304，721,4,296，117,4,285，873，4，281,,189,4,,278，608,4，247，710,4,145，550,4，145，425,4，139，535,4，082，843，
4，011，321,4, 001，421,3, 982，010,3, 940，407,3, 852，468,3, 832，470 ；平滑肌活性藥物(active drug)解痙藥(抗膽堿能藥、向肌肉性解痙藥)、血管舒張劑、平滑肌刺激劑；組胺劑和抗組胺劑組胺及其衍生物(倍他唑)、抗組胺劑(Hl-拮抗劑、H2-拮抗劑)、組胺代謝藥，以下美國專利所公開的組胺劑和抗組胺劑5，874，479，5，863，938， 5，856，364, 5，770，612, 5，702，688, 5，674，912, 5，663，208, 5，658，957, 5，652，274, 5，648，380,5，646，190,5，641，814,5，633，285,5，614，561,5，602，183,4，923，892,4，782，058，4，393，210，4，180，583，3，965，257，3，946，022，3，931，197 ；
心血管藥物強心藥(植物提取物、丁烯羥酸內(nèi)酯、pentadienolid、來自格木屬 (erythrophleum)物種的生物堿、離子載體、腎上腺素能受體刺激劑等)、抗心律不齊藥、抗高血壓劑、降血脂劑(氯貝酸衍生物、煙酸衍生物、激素和類似物、抗生素、水楊酸和衍生
物)、抗靜脈曲張藥、止血劑，以下美國專利所公開的心血管藥物:4，966，967，￡，661129，5552411，5332737, 5389675, 5198449,5，079247,4966967,4，874，760，4954526, 5051423,4888335,4853391,4,906634,4775757,4，727，072，4542160,4522949,4524151,4525479,4，474804,4520026,4，520，026，5869478, 5859239, 5837702, 5807889,5，731322,5726171,5,723，457，5705523,5696111,5691332,5679672, 5，661129，5654294，5，646，276，5637586，5631251, 5612370，5612323,5，574037, 5563170，5，552，411，5552397, 5547966, 5482925, 5457118，5，414017,5414013,5,401，758，5393771,5362902,5332737,5310731,5,260444,5223516，5，217，958，5208245, 5202330，5198449, 5189036，5，185362, 5140031, 5，128，349，5116861, 5079247, 5070099, 5061813，5，055466, 5051423,5，036，065，5026712，5011931,5006542,4981843,4，977144,4971984,4，966，967，4959383,4954526,4952692,4939137,4,906634,4889866,4，888，335，4883872,4883811,4847379,4835157,4,824831,4780538,4，775，757，4774239,4771047,4769371,4767756,4，762837,4753946,4，752，616，4749715,4738978,4735962,4734426,4，734425,4734424,4,730，052，4727072,4721796,4707550,4704382,4，703120,4681970,4，681，882，4670560,4670453,4668787,4663337,4，663336,4661506,4，656，267，4656185,4654357,4654356,4654355,4，654335,4652578,4,652，576，4650874,4650797,4649139,4647585,4，647573,4647565,4，647，561，4645836,4639461,4638012,4638011,4,632931,4631283,4，628，095，4626548,4614825,4611007,4611006,4，611005,4609671,4，608，386，4607049,4607048,4595692,4593042,4，593029,4591603,4，588，743，4588742,4588741,4582854,4575512,4,568762,4560698,4，556，739，4556675,4555571,4555570,4555523,4，550120,4542160,4,542，157，4542156,4542155,4542151,4537981,4，537904,4536514,4,536，513，4533673,4526901,4526900,4525479,4,524151,4522949,4，521，539，4520026,4517188,4482562,4474804,4，474803,4472411,4,466，979，4463015,4456617,4456616,4456615,4,418076,4416896,4，252，815，4220594,4190587,4177280,4164586,4,151297,4145443,4，143，054，4123550,4083968,4076834,4064259,4，064258,4064257,4，058，620，4001421, 3993639,3991057,3982010,3,980652,3968117，3，959，296，3951950,3933834, 3925369，3923818，3，898210，3897442,3，897，441，3886157，3883540，3873715，3867383,3，873715，3867383,3，691，216，3624，126 ；
胃腸道藥物助消化藥(健胃藥、利膽藥)、抗?jié)兯帯⒅篂a劑；類固醇劑(steroidal agent)氫化可的松(皮質(zhì)醇)、醋酸可的松、潑尼松、潑尼松龍、甲潑尼龍或醋酸甲潑尼龍或半琥珀酸甲潑尼龍、地塞米松、倍他米松、曲安西龍、倍氯米松、醋酸氟氫可的松或半琥珀酸氟氫可的松、醋酸脫氧皮質(zhì)酮(DOCA)或半琥珀酸脫氧皮
質(zhì)酮、·If甾酮，包括以下美國專利所公開的5，863, 538,5, 855, 9075，855, 866,5，780592，5776427，5651，987，5346887,5，256408，5252319，5209926，4，996，335，4927807，4910，192，4710495,4，049805，4004005，3670079，3，608，076，5892028，5888，995，5883087, 5，880115，5869475，5866558，5,861，390，5861388，5854，235，5837698,5，834452，5830886，5792758，5,792，757，5763361，5744，462，5741787，5，741786，5733899，5731345，5,723，638，5721226，5712，264，5712263,5，710144，5707984，5705494，5,700，793，5698720，5698，545，5696106,5,677293，5674861，5661141，5,656，621，5646136，5637，691，5616574，5，614514，5604215，5604213，5,599，807，5585482，5565，588，5563259，5，563131，5561124，5556845，5,547，949，5536714，5527，806，5506354, 5，506221，5494907，5491136，5,478，956，5426179，5422，262，5391776,5,382661，5380841，5380840，5,380，839，5373095，5371，078，5352809，5，344827，5344826，5338837，5,336，686，5292906，5292，878，5281587,5，272140，5244886，5236912，5,232，915，5219879，5218，109，5215972,5，212166，5206415，5194602，5,166，201，5166055，5126，488，5116829，5，108996，5099037，5096892，5,093，502，5086047，5084，450，5082835, 5，081114，5053404，5041433，5,041，432，5034548，5032，586，5026882,4，996335，4975537，4970205，4，954，446，4950428，4946，834，4937237,4，921846，4920099，4910226，4，900，725，4892867，4888，336，4885280,4,882322，4882319，4882315，4，874，855，4868167，4865，767，4861875,4，861765，4861763，4847014，4，774，236，4753932，4711，856，4710495,4，701450，4701449，4689410，4，680，290，4670551，4664，850，4659516,4,647410，4634695，4634693，4，588，530，4567000，4560，557，4558041,4，552871，4552868，4541956，4，519，946，4515，787,4，512，986,4,502，989，4，495，102 細(xì)胞生長抑制劑或抗腫瘤劑抗代謝藥葉酸(氨基蝶呤、甲氨喋呤、培美曲塞、雷替曲塞)、嘌呤(克拉屈濱、氯法拉濱、氟達(dá)拉濱、巰嘌呤、噴司他丁、硫鳥嘌呤)、嘧啶(阿糖胞苷、地西他濱、氟尿嘧啶/卡培他濱、氟尿苷、吉西他濱、依諾他濱、沙帕他濱)；烷化劑/烷化劑樣氮芥(苯丁酸氮芥、氮芥(Chlormethine)、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、美法侖、 苯達(dá)莫司汀、曲磷胺、烏拉莫司汀)、亞硝基脲(卡莫司汀、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、 潑尼莫司汀、雷莫司汀、司莫司汀、鏈佐星)、鉬(烷化劑樣)(卡鉬、順鉬、奈達(dá)鉬、奧沙利鉬、四硝酸三鉬、沙鉬)、烷基磺酸酯(白消安、甘露舒凡、曲奧舒凡)、胼(丙卡巴胼)、三氮烯(達(dá)卡巴嗪、替莫唑胺)、吖丙啶(卡波醌、塞替派、三亞胺醌、三亞乙基蜜胺)；紡錘體毒素/有絲分裂抑制劑紫杉烷(多西他賽、拉羅他賽、奧他賽、紫杉醇、替司他賽)和長春花生物堿(長春堿、長春新堿、長春氟寧、長春地辛、長春瑞濱)、伊沙匹隆；細(xì)胞毒素/抗腫瘤抗生素蒽環(huán)霉素(阿柔比星、柔紅霉素、多柔比星、表柔比星、伊達(dá)比星、氨柔比星、吡柔比星、戊柔比星、佐柔比星)、蒽二酮(anthracenedione)(米托蒽醌、匹蒽醌)、鏈霉菌(Streptomyces)(放線菌素、博來霉素、絲裂霉素、普卡霉素)、羥基脲；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑喜樹(Camptotheca)(喜樹堿、托泊替康、伊立替康、盧比替康、貝洛替康)、鬼臼 (Podophyllum)(依托泊苷、替尼泊苷)；酪氨酸激酶抑制劑阿昔替尼、波舒替尼、西地尼布、達(dá)沙替尼、厄洛替尼、吉非替尼、伊馬替尼、拉帕替尼、來妥替尼、來那替尼、尼洛替尼、司馬沙尼、索拉非尼、舒尼替尼、凡德他尼；細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑阿伏西地、塞利西利；光敏劑氨基酮戊酸/氨基酮戊酸甲酯、乙法昔羅、嚇啉衍生物(卟吩姆鈉、他拉泊芬、替莫泊芬、維替泊芬)；其他六甲蜜胺、安吖啶、貝沙羅汀、雌莫司汀、伊羅夫文、曲貝替定、融合蛋白(阿柏西普)、地尼白介素-毒素連接物、類視黃醇(阿利維A酸、維甲酸)、 阿那格雷、三氧化二砷、天冬酰胺酶/培門冬酶、阿曲生坦、硼替佐米、卡莫氟、塞來考昔、 秋水仙胺、伊利司莫、依沙蘆星、依托格魯、氯尼達(dá)明、硫蒽酮、馬索羅酚、二溴甘露醇、米托胍腙、米托坦、奧利美生、替加氟、睪內(nèi)酯、噻唑呋林、替匹法尼、伏林司他；以及以下美國專
利所公開的細(xì)胞生長抑制劑或抗腫瘤:劑5，880,16]，5，877，206，5，786，344，5丨，760:,041,5，753，668,5，698，529,5,684，004,5，665，715,5,654，484，5，624，924, 5，618，813，5，610，292，5，597，831, 5，530，026，5，525，633,5，525，606,5，512，678,5，508，277，5，463，181，5，409，893, 5，358，952, 5，318,,965, 5，223，503,5，214，068,5，196，424，5，109，024,5，106，996,5，101，072,5，077，404,5,071，848，5，066，493,5，019，390，4，996，229,4,996，206,4,970，318,4，968，800,4，962，114,4,927，828,4，892，887，4，889，859,4,886，790,4，882，334,4，882，333,4，871，746,4，863，955,4，849，563，4，845，216,4,833，145,4,824，955,4:’ 785，085,4，684，747,4，618，685,4，611，066，4，550，187,4,550，186,4,544，501,4;,541，956,4,532，327,4，490，540,4,399，283，4，391，982,4，383，994,4，294，763,4，283，394,4,246，411,4,214，089,4，150，231，
4，147，798，4，056，673，4，029，661，4，012，448 ；抗感染劑殺外寄生蟲藥(氯化烴、除蟲菊酯、加硫化合物)、驅(qū)腸蟲劑、抗原生動物劑、抗瘧劑、抗阿米巴劑、抗利什曼原蟲藥、抗毛滴蟲劑、抗錐體蟲劑、氨磺酰、抗分支桿菌藥、抗病毒化療劑和美國專利申請第60/907，176號所公開的其他抗病毒劑；抗生素氨基糖苷類，如阿米卡星、安普霉素、阿貝卡星、班貝霉素、布替羅星、地貝卡星、雙氫鏈霉素、福提霉素、慶大霉素、異帕米星、卡那霉素、小諾米星、新霉素、乙基西梭霉素、巴龍霉素、核糖霉素、西索米星、大觀霉素、鏈霉素、妥布霉素、丙大觀霉素；酰胺醇類 (amphenicols)，如疊氮氯霉素、氯霉素、氟苯尼考以及甲砜霉素(theimaphenicol)；安莎霉素類，如利福米特、利福平、利福霉素、利福噴汀、利福昔明；β -內(nèi)酰胺類，如碳頭孢烯、 碳青霉烯、頭孢菌素、頭霉素、單環(huán)內(nèi)酰胺、氧頭孢烯(oxaphem)、青霉素；林可胺類抗生素， 如克林霉素、林可霉素；大環(huán)內(nèi)酯，如克拉霉素、地紅霉素、紅霉素等；多肽，如安福霉素、桿菌肽、卷曲霉素等；四環(huán)素，如阿哌環(huán)素、金霉素、氯莫環(huán)素等；合成抗菌劑，如2，4 二氨基嘧啶、硝基呋喃類、喹諾酮類及其類似物、氨磺酰、砜；抗真菌劑多烯，如兩性霉素B、克念菌素、制皮菌素、菲律賓菌素、制霉色基素、曲古霉素、哈霉素、魯斯霉素、美帕曲星、那他霉素、制霉菌素、培西洛星、表霉素；合成抗真菌劑，如烯丙胺，如布替萘芬、萘替芬、特比萘芬；咪唑，如聯(lián)苯芐唑、布康唑、氯登妥因、氯米達(dá)唑等；硫代氨基甲酸酯，如托西拉酯、三唑，如氟康唑、伊曲康唑、特康唑；驅(qū)腸蟲劑檳榔堿、綿馬素、綿馬酚、雙氯芬、恩貝酸、苦蘇素、萘、氯硝柳胺、石榴堿、奎納克林、阿蘭內(nèi)酯、阿莫卡嗪、硝硫氰胺、驅(qū)蛔素、酚乙銨(bephenium)、雙硫氰苯、四氯化碳、香芹酚、環(huán)苯達(dá)唑、乙胺嗪等；抗瘧劑醋氨苯砜、阿莫地喹、蒿乙醚、蒿甲醚、青蒿素、青蒿琥酯、阿托伐醌、貝比堿、黃連素、印度當(dāng)藥(chirata)、氯胍、氯喹、氯丙胍、金雞納、金雞尼丁、辛可寧、環(huán)氯胍、龍膽苦苷、鹵泛群、羥氯喹、鹽酸甲氟喹、3-甲基醋氨苯胂(3-methylarsacetin)、帕馬喹、甲氧胺喹(plasmocid)、伯氨喹、乙胺嘧啶、奎納克林、奎寧、奎寧、喹西特、奎寧、砷酸氫二鈉；抗原生動物劑氯甲氧吖啶、替硝唑、異丙硝唑、乙月弟胺、噴他脒、乙酰胂胺 (acetarsone)、醋胺硝唑、茴香霉素、硝呋太爾、替硝唑、苯并咪唑(benzidazole)、蘇拉明等；抗微生物劑如以下美國專利所公開的5, 902, 5945，874，476，5，874,436,5，859027,5，856，320，5，854242, 5，811，091，5,786，350, 5783，177,5,773，469，5，762919，5，753，715,5,741526,5,709，870，5,707，990,5696，117,5,684，042，5，683709,5,656，591,5,643，971,5,643，950，5,610，196，5608，056，5，604，262，5，595742,5,576，341，5，554，373,5，541，233，5,534，546, 5534，508,5，514，715，5，508417,5,464，832,5，428073, 5，428，016，5,424，396, 5399，553, 5，391，544，5，385902, 5，359，066,5，356803,5，354，862，5,346，913,5302，592,5,288，693，5，266567,5,254，685,5，252，745,5,209，930，5,196，441, 5190，961, 5，175，160，5，157051, 5，096，700，5，093，342,5，089，251，5,073，570, 5061，702,5，037，809，5，036，077,5,010，109,4,970，226,4，916，156，4，888，434,4870，093,4，855，318，4，784，991,4,746，504,4,686，221,4,599，228，4，552，882, 4492，700,4,489，098，4，489085,4，487，776,4,479953,4，477，448，4，474，807,4470，994,4，370，484，4，337199,4,311，709,4，308283,4，304，910，4，260，634,4233，311,4,215，131，4，166122,4,141，981,4，130，664,4，089，977，4，089，900,4069，341,4,055，655，4，049665,4，044，139,4,002，775，3，991，201，3，966，968, 3954，868,3，936，393，3，917，476,3,915，889,3，867，548,3，865，748，3，867，548, 3865，748,3，783，160，3，764，676，3，764，677 ；
抗炎劑如以下美國專利所公開的5, 872, 1095，837，735,5，827,837,5，821250,5，814，648，5，780026, 5，776，946，5,760，002, 5750，543, 5，741，798，5，739279，5，733，939,5，723481,5,716，967，5,688，949, 5686，488,5，686，471，5，686434,5,684，204,5，684，041,5,684，031，5,684，002, 5677，318，5，674，891，5，672620,5，665，752，5，656，661, 5，635，516，5,631，283, 5622，948,5，618，835，5，607，9 5 9 j 5，593，980,5，593，960,5，580，888，5,552，424, 5552，422, 5，516，764，5，510，361,5，508，026,5，500417,5,498，405，5,494，927, 5476，876,5，472，973，5，470885, 5，470，842,5,464856,5，464，849，5,462，952,5459，151，5，451，686，5，444043,5，436，265，5，432，181,5,393，756，5,380，738，5376，670，5，360，811，5，354768，5，348，957,5，347，029,5，340，815，5,338，753, 5324，648,5，319，099，5，318971,5,312，821, 5，302，597,5，298，633，5,298，522,5298，498,5，290，800，5290788，5284949, 5280045, 5，270，319，5266562, 5256680,5，250，700，5250552, 5248682, 5244917,5,240，929,5234939,5234937,5，232，939，5225571,5225418,5220025, 5，212，189，5212172，5208250，5，204，365，5202350，5196431, 5191084,5，187，175，5185326, 5183906,5，177，079，5171864, 5169963, 5155122，5，143，929,5143928,5143927,5，124，455，5124347,5114958,5112846,5，104，656,5098613,5095037,5，095，019，5086064,5081261,5081147，5，081，126，5075330，5066668，5，059，602，5043457, 5037835, 5037811，5，036，088, 5013850, 5013751, 5，013，736，5006542,4992448,4992447,4，988，733,4988728,4981865,4，962，119，4959378,4954519,4945099,4，942，236,4931457,4927835,4，912，248，4910192,4904786,4904685,4，904，674,4904671,4897397,4，895，953，4891370,4870210,4859686,4，857，644,4853392,4851412,4,847，303，4847290,4845242,4835166,4,826，990,4803216,4801598,4,791，129，4788205,4778818,4775679,4,772，703,4767776,4764525,4，760，051，4748153,4725616,4721712,4,713，393,4708966,4695571,4，686，235，4686224,4680298,4678802,4，652，564,4644005,4632923,4，629，793，4614741,4599360,4596828,4，595，694,4595686,4594357,4，585，755，4579866,4578390,4569942,4，567，201,4563476,4559348,4，558，067，4556672,4556669,4539326,4，537，903,4536503,4518608,4，514，415，4512990,4501755,4495197,4,493，839,4465687,4440779,4,440，763，4435420,4412995,4400534,4，355，034,4335141,4322420,4，275，064，4244963,4235908,4234593,4，226，887,4201778,4181720,4，173，650，4173634,4145444,4128664,4，125，612,4124726,4124707,4,117，135，4027031,4024284,4021553,4，021，550,4018923,4012527,4，011，326，3998970，3998954, 3993763,3，991，212，3984405, 3978227, 3，978，219，3978202, 3975543, 3968224,3，959，368,3949082,3949081,3，947，475，3936450,3934018,3930005，3，857，955, 3856962, 3821377,3,821，401，3789，121，3，789，123，3，726，978，3，694，471,3, 691，214，3，678，169，3624，216 ；
免疫抑制劑如以下美國專利所公開的4, 450，1594，450，159,5, 905085，5883119,5,880，280，5，877，184，5，874，594, 5843，452, 5817672, 5，817，661，5817660,5，801，193，5，776，974,5，763，478,5739，169,5723466,5，719，176，5696，156,5,695，753,5，693，648，5，693，645, 5691，346，5686469,5，686，424，5679，705，5，679，640，5，670，504，5，665，774，5665，772, 5648376,5，639，455，5633，277, 5，624，930,5，622，970,5，605，903,5604，229,5574041,5，565，560，5550，233,5，545，734, 5，540，931, 5，532，248, 5527，820,5516797,5，514，688，5512687,5，506，233,5，506，228,5,494，895,5484，788，5470857, 5，464，615，5432，183，5，431，896，5，385，918，5，349，061, 5344，925, 5330993, 5，308，837，5290，783,5，290，772, 5，284，877, 5，284，840, 5273，979, 5262533,5，260，300，5252，732, 5，250，678,5，247，076,5，244，896,5238，689,5219884，5，208，241，5，208，228，5，202，332,5，192，773, 5，189，042, 5，169，851, 5，162，334, 5，151，413，5，149，701，5，147，877, 5，143，918,5,138，051,5，093，338,5,091，389,5,068，323，5，068，247,5，064，835,5，061，728，5，055，290,4,981，792,4，810，692,4，410，696，
4，346，096，4，342，769，4，317，825，4，256，766，4，180，588，4，000，275，3，759，921 ；亞氨基糖脫氧野尻霉素或脫氧野尻霉素衍生物，如正丙基脫氧野尻霉素、正丁基脫氧野尻霉素、正丁基脫氧半乳糖野尻霉素、正戊基脫氧野尻霉素、正庚基脫氧野尻霉素、 正戊酰脫氧野尻霉素、N- (5-金剛烷-1-基甲氧基)戊基)-脫氧野尻霉素、N- (5-膽留烯氧基戊基)_ 脫氧野尻霉素(N-(5-cholesteroxypentyl)-deoxynojirimycin)、N_(4_ 金剛烷甲酉先氧基羧基"I"氧)-脫氧里予尻霉素(N- (4-adamantanemethanylcarboxy-l-oxo) -deoxy no jirimycin)、N- (4-金剛烷基羧基氧)_脫氧野尻霉素、N- (4-菲基羧基氧)_脫 MtBfBiMM (N-(4-phenantrylcarboxy-l-oxo)-deoxynojirimycin)、N-(4- |H ^基-1-氧)-脫氧野尻霉素或N- (4- β -膽留烷基羧基-1-氧)-脫氧野尻霉素；神經(jīng)酰胺類似物D_蘇型-1-苯基-2-棕櫚酰氨基-3-吡咯烷-1-丙醇(P4)或 P4衍生物，如D-蘇型-4'-羥基-1-苯基-2-棕櫚酰氨基-3-吡咯烷-1-丙醇-羥基-P4)、D-蘇型-1-(3' ,4'-三亞甲二氧基)苯基-2-棕櫚酰氨基-3-吡咯烷-1-丙醇(三亞甲二氧基(trimethylenedioxy)-P4)、D-蘇型-1-(3' ,4'-亞甲二氧基)苯基-2-棕櫚酰氨基-3-吡咯烷-1-丙醇(亞甲二氧基-P4)和D-蘇型-1-(3' ,4'-亞乙二氧基)苯基-2-棕櫚酰氨基-3-吡咯烷-1-丙醇(亞乙二氧基-P4或D-t-et-P4)；在本發(fā)明綴合物的可選實施方案中，所述診斷或治療劑是包含肽或多肽(蛋白) 的診斷或治療劑，所述肽或多肽(蛋白)如生長因子、細(xì)胞因子、酶、抗體、抗體片段等。藥物部分所衍生的具體所關(guān)注(多)肽藥物和化合物包括但不限于血液和造血系統(tǒng)藥物抗貧血藥、凝血藥(止血劑、抗凝血劑、抗血栓藥、溶栓劑、 血液蛋白及其組分)、血紅蛋白；細(xì)胞因子dntron 或α -干擾素；Proleukin. IL_2或阿地白介素、干擾素-α、 干擾素-β (Avonex 或干擾素 β -Ia ；Betaseron /Betaferon 或干擾素 β -Ib ；Rebif 或干擾素β -la)、干擾素-Y、白介素1 (IL-I)、白介素2 (IL-2)、白介素3 (IL-3)、白介素 4(IL-4)、白介素5(IL-5)、白介素6(IL_6)、TNF、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF Leukine 或沙格司亭)、粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF =Neupogen或非格司亭)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)、血小板衍生生長因子(PDGF)；酶Cerezyme⑧或葡糖腦苷脂酶；Aldurazyme 或拉羅尼酶；Aryplase 或芳基硫酸酯酶B ； I2S或艾杜糖硫酸酯酶；α -L-艾杜糖醛酸苷酶；N-乙酰半乳糖胺4_硫酸酯酶；苯酶(phenylase)；天冬氨酰氨基葡糖苷酶；酸性脂酶；半胱氨酸轉(zhuǎn)運蛋白；Lamp-2 ； α -半乳糖苷酶A ；酸性神經(jīng)酰胺酶；α -L-巖藻糖苷酶；ss_氨基己糖苷酶A ；GM2-激活蛋白缺陷(GM2-aCtiVator deficiency) ； α-D-甘露糖苷酶；ss-D-甘露糖苷酶；芳基硫酸酯酶A ；皂化蛋白B ；神經(jīng)氨酸苷酶；α -N-乙酰氨基葡糖苷酶磷酸轉(zhuǎn)移酶；磷酸轉(zhuǎn)移酶7-亞基；類肝素-N-硫酸酯酶；a-N-乙酰氨基葡糖苷酶；乙酰輔酶A =N-乙酰轉(zhuǎn)移酶； N-乙酰葡糖胺6-硫酸酯酶；半乳糖6-硫酸酯酶；0-半乳糖苷酶；透明質(zhì)酸氨基葡糖苷酶 (hyaluronoglucosaminidase)；多種硫酸酯酶；棕櫚酰蛋白硫酯酶；三肽基肽酶I ；酸性鞘磷脂酶；膽固醇運輸；組織蛋白酶K ； α -半乳糖苷酶B ；唾液酸轉(zhuǎn)運蛋白SOD或Cu/Si過氧化物歧化酶；腦啡肽酶(N^rilysin)；(有機磷酸酯)解毒劑或清除劑硫氰酸酶、對硫磷水解酶；磷酸三酯酶；丁酰膽堿酯酶；有機磷酸酐酶(organophosphorus acid anhydrolase)；或非多肽清除劑樣噴替酸或二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)；肟；腦作用激素(brain-acting hormone)和神經(jīng)遞質(zhì)生長抑素、縮宮素、加壓素、咖啡因、VIP、促腎上腺皮質(zhì)素(ACTH)、縮膽囊肽(CCK)、P物質(zhì)、蛙皮素、胃動素、腸高血糖素、 胰高血糖素、胰高血糖素-樣肽(GLP-I)、瘦蛋白；神經(jīng)肽及其衍生物肽YY (PYY)、神經(jīng)肽Y (NPY)、胰多肽(PP)、神經(jīng)激肽A、神經(jīng)激肽B、內(nèi)啡肽、腦啡肽、met-腦啡肽(Tyr-Gly-Gly-Phe-Met)、亮啡肽類似物、洛哌丁胺、內(nèi)嗎啡肽-1和2、神經(jīng)降壓素、神經(jīng)調(diào)節(jié)肽K、神經(jīng)調(diào)節(jié)肽L、降鈣素相關(guān)肽(CGRP)、內(nèi)皮素、 ANP ( “心鈉肽”)、BNP( “腦鈉肽”)、CNP( “C型利鈉肽”)和PACAP ( “垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽”)、TAPP (H-Tyr-D-Ala-Phe-Phe-NH2)、senktide (具有修飾的序列 DFFGLM =Asp-I = 琥珀酰-Asp, Phe-3 = Me-Phe，Met_6 = C-末端酰胺)；神經(jīng)營養(yǎng)因子NGF或神經(jīng)生長因子；BDNF或腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子；NT3或神經(jīng)營養(yǎng)蛋白-3 ；NT4或神經(jīng)營養(yǎng)蛋白-4 ；NT5或神經(jīng)營養(yǎng)蛋白_5 ；RDGF或視網(wǎng)膜衍生生長因子；CNTF或睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子；活化素；bFGF或堿性成纖維細(xì)胞生長因子；aFGF或酸性成纖維細(xì)胞生長因子；GDNF或膠質(zhì)細(xì)胞系衍生神經(jīng)營養(yǎng)因子或神經(jīng)胚活素(neublastin)或青蒿琥酯(artemin)或enovin、pres印hin、神經(jīng)生長因子(neurturin) ；CTGF或結(jié)締組織生長因子；EGF或上皮生長因子)；紅細(xì)胞生成素(EPO) (Procrit愈/Eprex 或紅細(xì)胞生成素α ；Epogen 或紅細(xì)胞生成素；NeoRecormon 或紅細(xì)胞生成素β ；Aranesp 或達(dá)貝泊汀 α )；生長激素或促生長素(Humatrope ； Protropin (g) /Nutropin ； Serostim ； Saizen )；抗-NogoA Mab(IN-I) ；Nogo-A、B 或 C 拮抗劑，或 Nogo66 抑制劑(NEP1-40)； Lingo-I ；FGL 月太(pGlu-Val-Tyr-Val-Val-Ala-Glu-Asn-Gln-Gln-Gly-Lys-Ser-Lys-Al a 或 EVYVVAENQQGKSKA) ；NAP (Asn-Ala-Pro-Val-Ser-Ile-Pro-Gln,單氨基酸字母代碼， NAPVSIPQ) ；ADNF-9(Ser-Ala-Leu-Leu-Arg-Ser-Ile-Pro-Ala, SALLRSIPA)；抗體或其功能性(表位結(jié)合)片段3F8、阿巴伏單抗(Abagovomab)、阿巴西普 (Orencia)、阿昔單抗(ReoPro)、ACZ885(卡那單抗(canakinumab))、阿達(dá)木單抗(Humira)、
Htt S1 (Aflibercept) > H^±(Afutuzumab) > Alacizumab pegol、|5可侖珠單抗(Campath)、阿妥莫單抗、阿非莫單抗、麻安莫單抗、安蘆珠單抗(Anrukinzumab) (IMA-638)、阿泊珠單抗、阿西莫單抗、阿塞珠單抗、Atlizumab,阿托木單抗、巴匹珠單抗、巴利昔單抗(舒萊)、巴土昔單抗、貝妥莫單抗(Lymphc^can)、貝拉西普、貝利木單抗 (LymphoMat-B)、柏替莫單抗、貝索單抗、貝伐珠單抗(阿瓦斯丁)、比西單抗溴烯比妥、 比伐單抗-DM1、Blinatumomab、卡那單抗、美坎珠單抗、卡羅單抗噴地肽(ftOstascint)， 卡妥索單抗(Removab)、西利珠單抗、培舍珠單抗O^imzia)、西妥昔單抗(愛必妥)、 Citatuzumab bogatox> H ^ 7^ Jil (Cixutumumab)、Claretuzumab tetraxetan> tL 昔單抗、Clivatuzumab tetraxetan、CNTO 148(戈利木單抗)、CNTO 1275(優(yōu)特克單抗 (ustekinumab))、西他土珠(Conatumumab)、達(dá)西珠單抗(Dacetuzumab)、達(dá)昔單抗或達(dá)克珠單抗(賽尼哌)、地舒單抗、地莫單抗、阿托度單抗、Dorlixizumab, Drimakinzumab、 依美昔單抗、依庫珠單抗(Soliris)、埃巴單抗、依決洛單抗(單抗17-1A)、依法珠單抗(Raptiva)、依夫單抗(Mycograb)、艾西莫單抗、培戈賴莫單抗、西依匹莫單抗(Epitumomab cituxetan)、依帕珠單抗、厄立珠珠單抗(Erlizumab)、厄馬索單抗(Rexomun)、依那西普 (恩利)、埃達(dá)珠單抗^taracizumab)、艾韋單抗、法索單抗(NeutroSpec)、法拉莫單抗、 非維珠單抗、Figitumumab、芳妥珠單抗(HuZAF)、夫瑞韋如(Foravirumab)、加利昔單抗、 Gantenerumab> Gavilimomab、吉妥珠單抗奧佐米星(Mylotarg)、Ginakinzumab、戈利木單抗、戈利昔單抗、rtalizumab、替伊莫單抗(Zevalin)、伊戈伏單抗、英西單抗、英利昔單抗 (Remicade)、伊諾莫單抗、伊珠單抗奧佐米星、伊匹木單抗、伊妥木單抗、Ixutumumab、凱利昔單抗、拉貝珠單抗、來馬索單抗(Lemalesomab)、Lebrilizumab、樂地單抗、來沙木單抗、利韋單抗、林妥珠單抗、魯卡木單抗(Lucatumumab)、魯昔單抗、馬帕木單抗、馬司莫單抗、馬妥珠單抗、美泊利單抗(Bosatria)、美替木單抗、Milatuzumab、明瑞莫單抗、米妥莫單抗、莫羅木單抗、莫他珠單抗(Numax)、莫羅單抗、MY0-029 (司他蘆單抗)、他那可單抗、 他那莫單抗(Naptumomab estafenatox)、那他珠單抗(Tysabri)、奈巴庫單抗、奈瑞莫單抗、尼妥珠單抗(BIOMAbEGFR)、巰諾莫單抗(Verluma)、奧瑞珠單抗、奧度莫單抗、奧法木單抗、奧馬珠單抗(Xolair)、奧戈伏單抗(OvaRex)、奧昔珠單抗(Otelixizumab)、帕昔單抗、帕利珠單抗(Synagis)、Pamtuzumab tetraxetan、帕尼單抗(Vectibix)、帕考珠單抗、 Pemtumomab (Theragyn)、培妥珠單抗(Omnitarg)、培克珠單抗、平妥單抗(Pintumomab)、普立昔單抗、普立木單抗、PRO 140、瑞非韋魯(Rafivirumab)、雷莫蘆單抗(Ramucirumab)、 雷珠單抗(Lucentis)、雷昔庫單抗、瑞加韋單抗、瑞利珠單抗、利洛西普(Arcalyst)、 Rintalizumab、利妥昔單抗(MabThera, Rituxan)、Robatumumab、羅維珠單抗、魯利單抗、沙妥莫單抗、司韋單抗、西羅珠單抗、西利珠單抗、Sonepcizumab、松妥珠單抗、司他蘆單抗、 Stolanezumab> /1 (LeukoScan) > If ftk3 Jil (Tacatuzumab tetraxetan) ^ftll^5 單抗、他利珠單抗、他尼珠單抗(Tanezumab)、帕他普莫單抗(Taplitumomab paptox)、替非珠單抗(金息斯)、阿替莫單抗、Tenatumomab、替奈昔單抗、替利珠單抗(I^plizumab)、 TGN1412、替西木單抗(tremelimumab)、替加珠單抗(Tigatuzumab) ,TNX-355 (ibalizumab)、 TNX-650、TNX-901 (他利珠單抗)、托珠單抗(Actemra)、托利珠單抗、托西莫單抗(Bexxar)、 曲妥珠單抗(赫賽汀)、Tremelimumab、西莫白介素單抗、妥韋單抗、烏珠單抗、優(yōu)特克單抗 (Ustekinumab)、伐利昔單抗、維多珠單抗(Vedolizumab)、維妥珠單抗(Veltuzumab)、維帕莫單抗、Vimakinzumab、維西珠單抗(Visilizumab) (Nuvion)、伏洛昔單抗、Vontakinzumab、 伏妥莫單抗(HumaSPECT)、扎蘆木單抗、扎木單抗(Zanolimumab) (HuMax_CD4)、齊拉木單抗 (Ziralimumab)、阿佐莫單抗。在本發(fā)明綴合物的可選實施方案中，所述診斷或治療劑是包含寡核苷酸或多核苷酸的診斷或治療劑。包含寡核苷酸或多核苷酸的診斷或治療劑可以是DNA疫苗、反義寡核苷酸、核酶、催化性DNA(DNA核酶)或RNA分子、siRNA或編碼其的表達(dá)構(gòu)建體中的任一種。 DNA疫苗在本文中應(yīng)理解為表示包含編碼特定抗原的序列的核酸構(gòu)建體，在將所述構(gòu)建體引入要用DNA疫苗接種的宿主有機體的細(xì)胞中時，其能表達(dá)所述抗原。所有上述專利公開的內(nèi)容，在此通過援引加入本文。配體本發(fā)明綴合物中的第二實體是谷胱甘肽轉(zhuǎn)運蛋白的配體。優(yōu)選地，谷胱甘肽轉(zhuǎn)運蛋白介導(dǎo)以下作用中的至少一種配體和包含所述配體的綴合物特異性結(jié)合、胞吞和轉(zhuǎn)胞吞進入和/或通過表達(dá)所述轉(zhuǎn)運蛋白的靶細(xì)胞。轉(zhuǎn)運蛋白或受體介導(dǎo)的遞送是近幾年發(fā)展的一種可能的靶向藥物遞送技術(shù)。其具有向表達(dá)與藥物或藥物載體綴合的配體的受體/轉(zhuǎn)運蛋白的細(xì)胞高特異性遞送的潛在優(yōu)勢。通過使用轉(zhuǎn)運蛋白/受體介導(dǎo)的遞送，可以大大增強低分子量以及多肽和基于核酸的治療或診斷劑和包含這些診斷或治療劑的納米容器向細(xì)胞和組織的特異性靶向。在一實施方案中，本發(fā)明綴合物中的配體是谷胱甘肽轉(zhuǎn)運蛋白的配體，所述谷胱甘肽轉(zhuǎn)運蛋白表達(dá)于血組織屏障的內(nèi)皮細(xì)胞上，所述血組織屏障包括例如血睪丸屏障和血-CNS屏障，如血腦屏障、血腦脊液(CSF)屏障、軟膜血管-CSF屏障、室管膜和膠質(zhì)界膜、 血視網(wǎng)膜屏障、血神經(jīng)屏障以及血脊髓屏障。優(yōu)選的配體是谷胱甘肽轉(zhuǎn)運蛋白的配體，所述谷胱甘肽轉(zhuǎn)運蛋白表達(dá)于血腦屏障和/或腦實質(zhì)細(xì)胞(神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì))的內(nèi)皮細(xì)胞上。這類配體的使用會允許這類靶向的診斷或治療劑向中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的特異性遞送或特異性增強的遞送以用于治療腦疾病。受體介導(dǎo)的靶向可以進一步與非特異性藥物遞送系統(tǒng)(如蛋白綴合物、PEG化(聚乙二醇化，PEGylation)、納米顆粒、脂質(zhì)體等)組合以大大改善藥物的藥物動力學(xué)和生物分布特性，這會顯著地使藥物特異性地再定向至表達(dá)受體的細(xì)胞、組織和器官，包括受到如CNS、血腦屏障(BBB)、視網(wǎng)膜和睪丸的特定血組織屏障保護的細(xì)胞、組織和器官。因此，在優(yōu)選的實施方案中，要并入本發(fā)明綴合物的配體是靶細(xì)胞上內(nèi)源谷胱甘肽轉(zhuǎn)運蛋白的配體。配體優(yōu)選為脊椎動物靶細(xì)胞的谷胱甘肽轉(zhuǎn)運蛋白、更優(yōu)選哺乳動物靶細(xì)胞的谷胱甘肽轉(zhuǎn)運蛋白并且最優(yōu)選人靶細(xì)胞的谷胱甘肽轉(zhuǎn)運蛋白的配體。配體優(yōu)選為特異性結(jié)合谷胱甘肽轉(zhuǎn)運蛋白的配體。更優(yōu)選地，如Karman et al. (2000, Brain Res. 852(2) =374-82)所述，配體特異性結(jié)合存在于人腦血管內(nèi)皮細(xì)胞中的Na依賴性GSH 轉(zhuǎn)運蛋白。配體與轉(zhuǎn)運蛋白的特異性結(jié)合優(yōu)選地如本文上文所定義。在另一實施方案中，配體為被胞吞和/或轉(zhuǎn)胞吞進入和/或通過靶細(xì)胞的配體，這可以通過Gaillard et al. (2001,Eur J Pharm Sci. 12(3) :215-222)所述的BBB細(xì)胞培養(yǎng)模型(利用初步分離的牛腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞(BCEC))或利用如RBE4細(xì)胞或MDCK細(xì)胞作為靶細(xì)胞的類似模型來測定。被胞吞和/或轉(zhuǎn)胞吞進入和/或通過靶細(xì)胞的配體在本文中定義為這樣的配體，當(dāng)將所述配體添加至BCEC或MDCK靶細(xì)胞后15、30或60分鐘或者1、2、4、8或18小時或更少測量時，與選自以下的對照條件相比，所述配體以提高至少5、10、20或50%的速率被胞吞或轉(zhuǎn)胞吞進入或通過所述靶細(xì)胞a)缺少GSH轉(zhuǎn)運蛋白表達(dá)的細(xì)胞；b)用過量游離GSH預(yù)處理的細(xì)胞；和c)缺少GSH部分的參照化合物?？蛇x地，GSH轉(zhuǎn)運蛋白靶向的配體的胞吞作用和/或轉(zhuǎn)胞吞作用可以利用例如與其綴合的近紅外染料或放射性標(biāo)記，通過體內(nèi)生物成像技術(shù)測定，這使得與合適對照條件相比(如與缺少GSH部分的參照化合物比較)，在給定的時間點(基于目標(biāo)區(qū)(region of interest, R0I)像素定量)，配體在CNS區(qū)域的保留提高至少10、20或50%。本發(fā)明所用的結(jié)合谷胱甘肽轉(zhuǎn)運蛋白的優(yōu)選配體包括例如選自以下的配體谷胱甘肽(GSH或γ -谷氨酰半胱氨酰甘氨酸)；S-(對溴芐基)谷胱甘肽；Y - (L- γ -氮雜谷氨酰)-S-(對溴芐基)-L-半胱氨酰甘氨酸；S-丁基谷胱甘肽；S-癸基谷胱甘肽；谷胱甘肽還原乙酯；谷胱甘肽磺酸；S-己基谷胱甘肽；S-乳酰谷胱甘肽；S-甲基谷胱甘肽；S-(4-硝基芐基)谷胱甘肽；S-辛基谷胱甘肽；S-丙基谷胱甘肽；正丁酰Y -谷氨酰半胱氨酰甘氨酸
隊和1 2獨立地選自H、線性或支化的烷基(1-25C)、芳烷基(6-26C)、環(huán)烷基 (6-25C)、雜環(huán)(6-20C)、醚或聚醚(3-25C)、以及其中R1-Ii2 —起具有2-20C原子，并與式I 的剩余部分(remainder)形成大環(huán)；R3 選自 H 和 CH3,
R4選自6-8C烷基、芐基、萘基和治療活性化合物，并且Ii5選自H、苯基、CH3和CH2苯基。在優(yōu)選的實施方案中，上文通式中的民為H。在另一優(yōu)選的實施方案中，上文通式中的R4為芐基。在另一優(yōu)選的實施方案中，上文通式中的&為苯基。在本發(fā)明的一優(yōu)選實施方案中，經(jīng)由N端氨基酸殘基即谷氨酸殘基的氨基(amine group)綴合或合成配體。在本發(fā)明的另一優(yōu)選實施方案中，經(jīng)由C端氨基酸殘基即甘氨酸殘基的羧基綴合或合成配體。在本發(fā)明的另一優(yōu)選實施方案中，經(jīng)由半胱氨酸部分的巰基(SH)基團綴合或合成配體。納米容器本發(fā)明綴合物中的配體可以直接綴合至診斷或治療劑，或者可選地，配體可以綴合至包含所述診斷或治療劑的藥學(xué)可接受的納米容器。在此類綴合物中，診斷或治療劑可以例如封裝于諸如納米顆粒、脂質(zhì)體或納米凝膠(nanogel)的納米容器中，由此配體優(yōu)選地綴合偶聯(lián)至此類納米容器。與納米容器的綴合可以是直接的或經(jīng)由任何公知的聚合綴合劑，如鞘磷脂、聚乙二醇(PEG)或其他有機聚合物。制備包含靶向(PEG)脂質(zhì)體的此類藥物組合物的細(xì)節(jié)描述于美國專利第6，372，250號。因此，在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的綴合物是這樣的綴合物，其中藥學(xué)可接受的載體包括以下物質(zhì)中的至少一種載體蛋白、納米容器、脂質(zhì)體、陽離子聚合物DNA復(fù)合物系統(tǒng)、陽離子脂質(zhì)體DNA復(fù)合物(lipoplex)系統(tǒng)和聚乙二醇。在診斷或治療劑包含多核苷酸或寡核苷酸的本發(fā)明綴合物中，藥學(xué)可接受的載體優(yōu)選是陽離子脂質(zhì)體DNA復(fù)合物系統(tǒng)，其包含陽離子脂質(zhì)或兩性脂質(zhì)(如W02002/066012 所詳述)中的至少一種；或者是陽離子聚合物DNA復(fù)合物系統(tǒng)，其包含聚-L-賴氨酸、
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(還簡寫為GSH-C4)或其乙酰、己酰、辛?；蚴Ｑ苌?還分別簡寫為GSH-C2、GSH-C6、 GSH-C8和GSH-C12) ；GSH單異丙酯(還稱為N_(N_L_谷氨酰-L-半胱氨酰)甘氨酸1_異丙酯硫酸鹽一水合物或YM737)；以及美國專利第6，747，009號所公開的式I的GSH衍生物或其藥學(xué)可接受的鹽
Rt
I
οrο聚-L-鳥氨酸、聚乙烯亞胺和聚酰胺胺(polyamidoamine)中的至少一種。存在兩類主要的用于細(xì)胞內(nèi)遞送基于核酸的抗病毒藥物(如DNA疫苗、反義寡核苷酸、核酶、催化性DNA(DNA 核酶)或RNA分子、siRNA或編碼其的質(zhì)粒)的非病毒遞送系統(tǒng)，包括陽離子脂質(zhì)體DNA復(fù)合物系統(tǒng)(含有DNA的陽離子脂質(zhì)體)和陽離子聚合物DNA復(fù)合物系統(tǒng)(連接至陽離子聚合物的DNA)。在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，藥學(xué)可接受的載體是陽離子脂質(zhì)體DNA復(fù)合物系統(tǒng)或陽離子聚合物DNA復(fù)合物系統(tǒng)。另外，藥學(xué)可接受的載體還可以優(yōu)選地包含蛋白綴合物、聚乙二醇(PEG化)、納米顆?；蛑|(zhì)體。陽離子聚合物DNA復(fù)合物系統(tǒng)包含陽離子聚合物，如聚-L-賴氨酸(pLL)、聚-L-鳥氨酸(POL)、聚乙烯亞胺(PEI)、聚酰胺胺(PAM)或其與 DNA的組合。聚陽離子系統(tǒng)主要通過吸附或液相胞吞作用進入細(xì)胞。包括PEI在內(nèi)的陽離子聚合物能夠濃縮(Condens)DNA并使膜電勢不穩(wěn)定。而且，已經(jīng)證實通過PEI陽離子聚合物 DNA復(fù)合物系統(tǒng)的質(zhì)粒遞送可以通過控制復(fù)合物的物理化學(xué)和生物學(xué)特性來實現(xiàn)。然而，與病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)相比，轉(zhuǎn)染效率和基因表達(dá)受到限制。因為PEI系統(tǒng)可以干擾膜，所以它們也能夠引起與聚合物的分子量和核濃度相關(guān)的毒性。在這一方面，已經(jīng)證實線性PEI (22kDa) 比支化的PEI (25kDa)毒性更高，并且還如N/P比(與DNA的量有關(guān)的聚合物中氮的量)所表示的，與陽離子聚合物DNA復(fù)合物系統(tǒng)中所用的PEI的量有關(guān)。其他觀點認(rèn)為，線性PEI 陽離子聚合物DNA復(fù)合物系統(tǒng)表現(xiàn)出改善的細(xì)胞成活力和更高的轉(zhuǎn)染效率。最近已經(jīng)合成了比線性PEI轉(zhuǎn)染特性更好且毒性更低的各種生物可降解PEI衍生物?？偟膩碚f，PEI和或許聚陽離子系統(tǒng)的效率通常取決于分子量、整體陽離子電荷和支化程度。當(dāng)連接至DNA時， 其他因素如DNA的量、粒徑和ζ電勢是重要的特征。此外，當(dāng)靜脈內(nèi)給藥時，帶正電荷的聚陽離子系統(tǒng)與帶負(fù)電荷的血漿蛋白容易地發(fā)生相互作用，并且在與靶向它們以被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(REQ清除的血液蛋白結(jié)合后發(fā)生調(diào)理作用。特別地，聚集體(aggregate)的形成導(dǎo)致被吞噬細(xì)胞吸收和被毛細(xì)血管網(wǎng)絡(luò)(主要是靜脈內(nèi)給藥后的肺)捕獲，這導(dǎo)致從血漿空間(compartment)的快速清除和靶組織/器官的較差轉(zhuǎn)染。然而，PEG化可以顯著地減少這種情況。此外，靶向/內(nèi)化配體的應(yīng)用避免了以大N/P比應(yīng)用陽離子聚合物DNA復(fù)合物系統(tǒng)以及因此的高整體正電荷的需要，并因此可以減少與陽離子聚合物有關(guān)的許多問題(如毒性、與血液組分的結(jié)合)。裸陽離子脂質(zhì)體DNA復(fù)合物系統(tǒng)也容易被血清組分調(diào)理，并且被與陽離子聚合物DNA復(fù)合物系統(tǒng)類似的機制如被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)清除。此外，盡管陽離子脂質(zhì)體DNA復(fù)合物系統(tǒng)未甲基化的CpG受到掩護從而防止先天免疫應(yīng)答，但一旦它們進入基本循環(huán)(general circulation)，則陽離子脂質(zhì)體DNA復(fù)合物系統(tǒng)可以和陽離子聚合物DNA復(fù)合物系統(tǒng)類似地被血液蛋白(C3、IgG、脂蛋白和纖連蛋白)調(diào)理，從而在肺和肝中導(dǎo)致炎性反應(yīng)(受TNF- α、IL-6和IL-12介導(dǎo))。另外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了復(fù)合物激活和T-、 B-、NK-細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的激活，并且它們與陽離子脂質(zhì)體DNA復(fù)合物的注射劑量有關(guān)。在減少未甲基化CpG的數(shù)量之后，此類相互作用可以通過這些系統(tǒng)的PEG化或通過使用免疫抑制劑(如地塞米松)而受到限制。另外，通過PEG化減少它們的全身清除并增加靶向效率(通過應(yīng)用選擇性/特異性靶向配體)相當(dāng)大地改善了這些系統(tǒng)的動力學(xué)。此外，降低陽離子脂質(zhì)體DNA復(fù)合物系統(tǒng)的大小看起來在其組織分布和細(xì)胞吸收中是關(guān)鍵因素，并且增加了它們的轉(zhuǎn)染效率。通常，胃腸外給藥后陽離子脂質(zhì)體DNA復(fù)合物和陽離子聚合物DNA 復(fù)合物系統(tǒng)表達(dá)的組織分布和持續(xù)與小分子藥物一樣還主要取決于藥物動力學(xué)(清除、分布體積)、制劑(大小、電荷、PEG化等)以及劑量治療方案(大體積丸藥、順序注射、持續(xù)輸注)。對于劑量治療方案，令人感興趣的是注意到陽離子脂質(zhì)體DNA復(fù)合物和質(zhì)粒DNA的順序注射導(dǎo)致更高的表達(dá)，但也降低細(xì)胞因子誘導(dǎo)。此外，向靶組織/器官的遞送依賴于血流和組織/器官吸收或通透性以及靶和非靶組織/器官的清除平衡。因此，應(yīng)基于藥物動力學(xué)參數(shù)設(shè)計合適的劑量治療方案以優(yōu)化向器官和組織的遞送/靶向。另外，這對于細(xì)胞內(nèi)藥物動力學(xué)應(yīng)當(dāng)是協(xié)調(diào)的。細(xì)胞吸收后，陽離子脂質(zhì)體DNA復(fù)合物和陽離子聚合物DNA 復(fù)合物系統(tǒng)的細(xì)胞內(nèi)藥物動力學(xué)(分布、除去)是重要的問題。除了受體介導(dǎo)的吸收外，特別是非靶向的PEI系統(tǒng)的內(nèi)化(經(jīng)由網(wǎng)格蛋白或胞膜窖依賴性途徑)看起來取決于細(xì)胞系和PEI-陽離子聚合物DNA復(fù)合物類型(線性PEI比支化的PEI)。此類系統(tǒng)經(jīng)常結(jié)束于后期內(nèi)體，因此它們需要逃避這些細(xì)胞器以進入細(xì)胞質(zhì)，最終到達(dá)細(xì)胞核。諸如陽離子聚合物 DNA復(fù)合物系統(tǒng)的陽離子系統(tǒng)能夠逃避內(nèi)體/溶酶體，因為根據(jù)所謂的“質(zhì)子海綿介導(dǎo)的逃脫(proton sponge-mediated escape) ”理論，它們能夠緩沖pH并引起這些細(xì)胞器的滲透溶脹。然而，看起來小部分內(nèi)化的系統(tǒng)逃脫入細(xì)胞質(zhì)，而大部分則停留在內(nèi)體/溶酶體中并被降解。然而，已經(jīng)證實融合脂質(zhì)(fusogenic lipid)或陽離子肽(蜂毒肽(mellitin)) 并入這些系統(tǒng)能增強它們的內(nèi)體逃脫。一旦在胞液中，線性質(zhì)?？梢员缓怂崦溉菀椎亟到?， 而環(huán)狀質(zhì)粒則穩(wěn)定的多。因此環(huán)狀(脫氧)核酸分子是優(yōu)選的。特別地，鈣敏感性核酸酶看起來負(fù)責(zé)這種降解。最后，質(zhì)粒必須經(jīng)由形成水通道的核孔復(fù)合物(NPC)通過核膜被轉(zhuǎn)運入細(xì)胞核，并且據(jù)估計約0. 的質(zhì)粒能夠從胞液進入細(xì)胞核。小于40kDa的分子能夠被動穿過NPC，而較大的分子(> 60kDa)則需要特異性核定位信號(NLQ來主動轉(zhuǎn)運以通過允許轉(zhuǎn)運高達(dá)25-50MDa分子的NPC。實際上，已經(jīng)證實NLS與質(zhì)粒的偶聯(lián)增強了質(zhì)粒DNA 的核聚集和表達(dá)。因此，優(yōu)選地將NLS偶聯(lián)至用于本發(fā)明綴合物的任何表達(dá)構(gòu)建體。配體與診斷或治療劑或載體綴合的各種方法在本領(lǐng)域是已知的。這類方法描述于例如 Hermanson (1996，Bioconjugate Techniques，Academic Press)、U. S. 6，180，084 和U. S. 6，264, 914，并包括如用于將半抗原連接至載體蛋白的方法，如應(yīng)用免疫學(xué)所常用的(參閱 Harlow and Lane, 1988, “ antibodies :A laboratory manual" , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY)。己經(jīng)認(rèn)i只至Ij,在一些'清況下，綴合時配體或者診斷或治療劑可能失去效力或功能，這取決于例如其中所用的綴合方法或化學(xué)基團。然而，鑒于用于綴合的大量方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員能發(fā)現(xiàn)不影響或最小影響要綴合的實體的效力或功能的綴合方法。用于將配體與診斷或治療劑或者載體綴合的合適方法包括，例如碳二亞胺綴合(Bauminger and ffilchek, 1980，Meth. Enzymo 1. 70 :151-159)。 可選地，診斷或治療劑或者載體能夠偶聯(lián)至Nagy et al.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93 7269-7273(1996)和 Nagy et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 :1794-1799(1998)所述的配體，上述每一篇文獻在此通過援引并入?？珊线m地使用的用于綴合的其他方法是，例如高碘酸鈉氧化隨后適當(dāng)反應(yīng)物的還原性烷基化以及戊二醛交聯(lián)。當(dāng)配體以及診斷或治療劑或者載體都是(多)肽時，可以應(yīng)用特別有利的綴合方法。在這類情況下，可以將兩個實體合成為包含配體以及肽診斷或治療劑或者載體的氨基酸序列的單個(多)肽鏈。除了共價鍵合外，在本發(fā)明的綴合物中，診斷或治療劑或載體也可以通過非特異性或特異性蛋白-蛋白相互作用、非共價鍵合和/或配位化學(xué)鍵合直接綴合至配體分子，所述綴合可以任選地經(jīng)由結(jié)合至診斷或治療劑和配體的間隔物(spacer)或接頭而實現(xiàn)。在另一方面，本發(fā)明涉及上文所限定的本發(fā)明的綴合物，其用于治療和/或預(yù)防CNS病癥。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的綴合物用于制備用于治療和/或預(yù)防CNS病癥的藥物。類似地，本發(fā)明涉及用于治療和/或預(yù)防CNS病癥的方法，其中向有需要的個體給予有效劑量的本發(fā)明的綴合物。需要治療或預(yù)防CNS病癥的個體可以是脊椎動物、哺乳動物或優(yōu)選的人。CNS疾病和相關(guān)病癥下列段落提供了在本發(fā)明的各種實施方案中可以用包含GSH轉(zhuǎn)運蛋白靶向活性劑的本發(fā)明綴合物來治療和/或預(yù)防的CNS和相關(guān)疾病狀況或相關(guān)病癥的各種病理描述。在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，CNS病理是以下疾病中的一種神經(jīng)變性病癥如阿爾茨海默病(AD)、帕金森病(PD)、亨廷頓病(HD)、多發(fā)性硬化(MQ、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥(ALS)、腦血管意外(CVA 缺血性腦卒中、腦內(nèi)出血(ICH)或蛛網(wǎng)膜下出血(SAH))、血管相關(guān)癡呆、腦創(chuàng)傷(創(chuàng)傷性腦損傷)、脊椎損傷、酒精中毒，朊病毒疾病克雅病(CJD)、瘋牛病(BSE)。在本發(fā)明的一實施方案中，阿爾茨海默病用基于膽堿脂酶抑制劑的下述靶向的藥物或化合物中的一種來治療艾斯能(利凡斯得明)、Razadyne ER(加蘭他敏)、Debio 9902 SR、NGX267 ；NMDA 拮抗劑Namenda/Axura/Ebixa(美金剛)、Dimebon(dimebolin)、 NP-O361 ； α -7 煙堿乙酰膽堿拮抗劑ABT-089、AZD-0328、R-4996/MEM-63908、EVP_6124 ；被動免疫療法=Gammagard(IVIG)、巴匹珠單抗(AAB-OOl)、LY2062430、PF-4360365 (RN1219)、 AAB-002、ACU-5A5、R-1450、ACI-01_Ab7、BAN-2401 ； γ -分泌酶抑制劑 / Y -分泌酶調(diào)節(jié)劑弗祿里贊(tarenf Iurbil ；右旋氟比洛芬)、LY-450139、GSI-953、MK-0752 ； β -分泌酶抑制劑:CTS-21166 ；抗-TNF 恩利(依那西普)、培舍珠單抗(CDP870，商品名Cimzia)、 Remicade (英利昔單抗)或Humira(阿達(dá)木單抗)；胰島素相關(guān)文迪雅(羅格列酮)、 TTP-488 (RAGE 抑制劑)、NGX-96992、胰島素降解酶、Ketasyn (AC-1202)、SRT-501 ；Tau/ GSK3抑制劑:NP031112、Dimebon ；凝血級聯(lián)=PAI-I拮抗劑；金屬螯合劑:PBT2 ；抑制素 立普妥(阿托伐他汀)、舒降之(辛伐他汀)；激素易維持(雷洛昔芬)；5-HT/GABA 來考佐坦/來考佐坦SR、PRX-03140, MK-0249,742457 (SB-742457)；其他抗淀粉樣蛋白 ELND005(鯊肌醇(scyllo-inositol) ；AZD-103)、姜黃素、caprospinol (SP-233) ； β 片層破壞肽(Leu-Pro-Phe-Phe-Asp 或 LPFFP、Ac-LPFFP_NH2，如美國專利第 5，948，763 號和第 6，462，171 號所公開，或 Leu-Pro-Tyr-Phe-Asp-酰胺或 LPYFDa，如 Juhdsz et al.，2009， J. Alzheimers Dis. 16 :189-196)所述；或BACEl抑制劑抗-BACEl抗體或其片段或腦啡肽酶。在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，CNS病理是以下疾病中的一種具有CNS組分的外周病癥，如敗血性休克、腦轉(zhuǎn)移、肝性腦病、(糖尿病)高血壓、糖尿病(微)血管病、昏睡病、 惠普爾病(Whipple disease)、杜氏肌營養(yǎng)不良(DMD)、天冬氨酰氨基葡萄糖尿癥、膽固醇脂貯積病、酸性脂酶缺乏癥(Wolman disease)、胱氨酸過多癥、Danon病、法布萊病、法伯脂肪肉芽腫病(Farber lipogranulomatosis)、法勃氏病(Farber disease)、巖藻糖代謝癥、 I/II型半乳糖唾液酸代謝癥、Ι/ΙΙ/ΠΙ型戈謝病(Gaucher disease types I/II/III)、戈謝病(Gaucher disease)、球形細(xì)胞腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(globoid cell leucodystrophy)、克拉伯病(Krabbe disease)、II 型糖原貯積病、龐帕病(Pompe disease)、1/11/111 型 GMl 神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥、I型GM2神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥、泰-薩病、II型GM2神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥、山德霍夫氏病(Sandhoff disease)、GM2神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥、1/11型α甘露糖苷過多癥、 甘露糖苷過多癥、異染色性腦白質(zhì)障礙癥、I型粘脂貯積癥、1/11型唾液酸貯積癥11/ΙΠ 型粘脂貯積癥1-細(xì)胞病、IIIC型粘脂貯積癥假胡爾勒氏多種營養(yǎng)不良(pseudo-Hurler polydystrophy)、I型粘多糖代謝病、II型粘多糖代謝病、亨特綜合征、IIIA型粘多糖代謝病、山菲利普綜合征、IIIB型粘多糖代謝病、IIIC型粘多糖代謝病、IIID型粘多糖代謝病、 IVA型粘多糖代謝病、莫爾基奧綜合征(Morquio syndrome)、IVB型粘多糖代謝病莫爾基奧綜合征、VI型粘多糖代謝病、VII型粘多糖代謝病、Sly綜合征、IX型粘多糖代謝病、多種硫酸酯酶缺陷(multiple sulphatase deficiency)、神經(jīng)元蠟樣脂褐質(zhì)沉積癥(neuronal ceroid lipofuscinosis)、CLNl 巴登氏病(CLN1 Batten disease)、Α/Β 型尼曼-皮克病 (Niemann-Pick disease)、尼曼-皮克病、Cl型尼曼-皮克病、C2型尼曼-皮克病、致密性成骨不全、VII型Schindler病(Schindler disease)、Schindler病、唾液酸積貯病以及 (先兆)子癇((pre) eclampsia) ο 在本發(fā)明的另一實施方案中，溶酶體貯積病用基于減少溶酶體貯積病中的溶酶體貯積物質(zhì)的藥物和化合物的下述靶向的藥物或化合物中的一種來治療所述溶酶體貯積物質(zhì)如葡糖腦苷脂、鞘磷脂、神經(jīng)酰胺、GMl-神經(jīng)節(jié)苷脂、GM2-神經(jīng)節(jié)苷脂、紅細(xì)胞糖苷脂、半乳糖神經(jīng)酰胺、硫酸皮膚素、硫酸乙酰肝素、硫酸角質(zhì)素、硫苷脂、粘多糖、唾液酸寡糖、糖蛋白、唾液酸寡糖、糖脂、三聚己糖神經(jīng)酰胺(globotriaosylceramide)、0-聯(lián)糖肽、糖原、游離唾液酸、巖藻糖脂(fucoglycolipid)、巖藻糖基寡糖(fucosyloligosaccharide)、甘露糖基寡糖(marmosyloligosaccharide)、天冬氨酰氨基葡糖、膽固醇酯、甘油三酯，以及溶酶體貯積病中的蠟樣脂褐質(zhì)色素如戈謝病(貯積的葡糖腦苷脂)利用使用葡糖腦苷脂酶(如伊米苷酶(Genzyme銷售的Cerezyme)或velalglucerase (由Siire研發(fā)中)、基因激活葡糖腦苷脂酶的靶向酶替代療法，使用用亞氨基糖(如麥格司他(Actelion銷售的麥格司他膠囊(Zavesca))=正丁基-脫氧野尻霉素(NB-DNJ)、正丁基-半乳糖-脫氧野尻霉素(NB-DGJ)、N- (5-金剛烷-1-基-甲氧基戊基)-脫氧野尻霉素(AMP-DNJ)、N_ (5-金剛烷-1-基-甲氧基-戊基)脫氧野尻霉素(AMP-DNM)的葡糖神經(jīng)酰胺合酶的底物抑制，或用葡糖神經(jīng)酰胺類似物(如Genz 112638 :d-蘇型-亞乙二氧基苯基-2-棕櫚酰氨基-3-吡咯烷-丙醇)，或用分子伴侶療法(如酒石酸異蕎麥堿(isofagomine tartrate)、 AT2101(將由 Amicus Therapeutics 作為 Plicera 銷售，化學(xué)名(3R，4R，5R)-3，4-二羥基-5-羥甲基-哌啶)；法布萊病(貯積的三聚己糖神經(jīng)酰胺)，利用使用α-半乳糖苷酶 A (如 Algalsidase-α (Shire 銷售的 R印lagal)、Algalsidase-β (Genzyme 銷售的法布瑞酶)的靶向酶替代療法，或使用用亞氨基糖(如麥格司他(Actelion銷售的麥格司他膠囊) =正丁基-脫氧野尻霉素(NB-DNJ)，正丁基-半乳糖-脫氧野尻霉素(NB-DGJ)、N-(5-金剛烷-I-基-甲氧基戊基)(AMP-DNJ)、AMP-D匪或來自Macrozyme的MZ-21和MZ-31)的葡糖神經(jīng)酰胺合酶的底物抑制，或用葡糖神經(jīng)酰胺類似物(如Genz 112638 :d_蘇型-亞乙二氧基苯基-2-棕櫚酰氨基-3-吡咯烷-丙醇)，或用分子伴侶療法(AT1001，鹽酸米加司他 (待由Amicus Therpeutics作為Amigal 銷售，化學(xué)名為3，4，5-哌啶三醇、2-(羥甲基) 鹽酸鹽、(2R，3S，4R，5S)-，(+) - (2R，3S，4R，5S)-2-(羥甲基)哌啶 _3，4，5-三醇鹽酸鹽、1， 5-雙脫氧-1，5-亞氨基-D-半乳糖醇鹽酸鹽)；MPS 1(賀勒-施艾氏癥(Hurler-Scheie), 貯積的硫酸皮膚素、硫酸乙酰肝素)，利用使用α-L-艾杜糖醛酸苷酶(如拉羅尼酶(由Genzyme/Biomarin銷售的阿杜拉酶)的靶向酶替代療法；MPS II (亨特綜合征(Hunter)， 貯積的硫酸皮膚素、硫酸乙酰肝素)，利用使用艾杜糖-2-硫酸酯酶(如艾度硫酸酯酶(由 Shire銷售的Elaprase)的靶向酶替代療法；MPS III A(Sanfilippo A，貯積的硫酸乙酰肝素)，利用使用乙酰肝素硫酸胺酶O^paran sulfamidase)的靶向酶替代療法；MPS III B (Sanfilippo B，貯積的硫酸乙酰肝素)，利用使用α-N-乙酰葡糖苷酶的靶向酶替代療法；MPS III C (Sanf ilippo C，貯積的硫酸乙酰肝素)，利用使用α -氨基葡糖苷N-乙酰轉(zhuǎn)移酶的靶向酶替代療法；MPS III D(Sanfilippo D，貯積的硫酸乙酰肝素)利用使用N-乙酰葡糖胺-6-硫酸酯硫酸酯酶的靶向酶替代療法；MPS IV (莫爾基奧綜合征(Morquio)，貯積的硫酸角質(zhì)素)，利用使用N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸酯酶的靶向酶替代療法；MPS VI (馬洛托-拉米氏癥(Maroteaux-Lamy)，貯積的糖胺聚糖(GAG))，利用使用芳基硫酸酯酶B (如戈硫酯酶(由Biomarin銷售的Naglazyme)的靶向酶替代療法；MPS VII (Sly綜合征(Sly)， 貯積的硫酸皮膚素、硫酸乙酰肝素)，利用使用β -葡糖苷酸酶的靶向酶替代療法；克拉伯病(Krabbe)(貯積的半乳糖神經(jīng)酰胺)，利用使用半乳糖腦苷脂酶的靶向酶替代療法；A和 B型尼曼-皮克病(貯積的鞘磷脂)，利用使用酸性鞘磷脂酶(Genzyme研發(fā)中)的的靶向酶替代療法；C型尼曼-皮克病(貯積的鞘磷脂)，利用使用麥格司他(Actelion銷售的麥格司他膠囊)=正丁基-脫氧野尻霉素(NB-DNJ)或環(huán)糊精(特別是羥丙基環(huán)糊精) 葡糖神經(jīng)酰胺合酶的靶向底物抑制；異染色性腦白質(zhì)障礙癥(貯積的硫苷脂)，利用使用芳基硫酸酯酶A的靶向酶替代療法；ΙΙ/ΙΙΙ型粘脂貯積癥(貯積的唾液酸寡糖、糖蛋白、糖脂)，利用使用UDP-N-乙酰葡糖胺或溶酶體酶N-乙酰葡糖胺-1-磷酸轉(zhuǎn)移酶(GNPT)的靶向酶替代療法；GMl神經(jīng)節(jié)苷脂沉積病(貯積的GMl神經(jīng)節(jié)苷脂)，利用使用β -半乳糖苷酶的靶向酶替代療法；山德霍夫氏病(具有貯積的GM2神經(jīng)節(jié)苷脂的GM2神經(jīng)節(jié)苷脂沉積病)，利用使用氨基己糖苷酶A的靶向酶替代療法，或利用亞氨基糖(如麥格司他(由 Actelion銷售的麥格司他膠囊)=正丁基-脫氧野尻霉素(NB-DNJ))的葡糖神經(jīng)酰胺合酶的底物抑制；泰-薩病(GM2神經(jīng)節(jié)苷脂)，利用使用α-氨基己糖苷酶A的靶向酶替代療法，或利用亞氨基糖(如麥格司他(由Actelion銷售的麥格司他膠囊)=正丁基_脫氧野尻霉素(NB-DNJ))的葡糖神經(jīng)酰胺合酶的底物抑制。 仍然在本發(fā)明的另一優(yōu)選實施方案中，CNS病理是以下疾病中的一種神經(jīng)精神病癥，如抑郁癥(如通過利用腦靶向的脂質(zhì)體鹽皮質(zhì)激素受體激動劑如氟氫可的松、脫氧皮質(zhì)酮或醛固酮修飾，由此減少外周心血管副作用)，孤獨癥，焦慮癥，注意力不足多動癥 (ADHD)，成癮和其他物質(zhì)相關(guān)病癥，神經(jīng)精神性系統(tǒng)性紅斑性狼瘡，雙相情感障礙(bipolar disorder)，進食障礙(eating disorder)，精神分裂癥，和他精神?。换蚱渌鸆NS病癥，如原發(fā)性腦瘤、癲癇/癲癇發(fā)作、偏頭疼和其他頭疼(集束性頭痛、血管性頭痛、緊張性頭痛)、發(fā)作性睡病、失眠癥(和其他睡眠障礙)、慢性疲勞綜合征、高原病、肥胖、細(xì)菌和病毒性腦炎、細(xì)菌和病毒性腦膜炎、AIDS相關(guān)癡呆；或血管發(fā)生相關(guān)病癥，如血管瘤、增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、克羅恩病、動脈粥樣硬化、卵巢過度刺激、牛皮癬、與新血管形成相關(guān)的子宮內(nèi)膜異位、球囊血管成形術(shù)后的再狹窄、疤組織過度產(chǎn)生、外周血管疾病、高血壓、炎性血管炎、雷諾氏病(Reynaud' s disease)、雷諾氏現(xiàn)象(Reynaud ‘ s phenomenon)、動脈瘤、動脈再狹窄、血栓性靜脈炎、淋巴管炎、淋巴水腫、創(chuàng)傷愈合和組織修復(fù)、缺血再灌注損傷、心絞痛、心肌梗死、慢性心臟疾病狀況、諸如充血性心力衰竭的心力衰竭、年齡相關(guān)性黃斑變性以及骨質(zhì)疏松。靶向和/或穿過血組織屏障本發(fā)明的另一方面提供了有效量的診斷或治療劑或者包含診斷或治療劑的藥學(xué)可接受的載體向受特定血組織屏障所保護的靶位點靶向藥物遞送的方法，所述血組織屏障如CNS、血腦屏障(BBB)、視網(wǎng)膜和睪丸，其中a)所述診斷或治療劑或者藥學(xué)可接受的載體綴合至配體，由此形成上文所定義的綴合物，所述配體促進特異性結(jié)合靶位點的內(nèi)化GSH 吸收受體和被靶位點的內(nèi)化GSH吸收受體內(nèi)化；和b)在給予有需要的人約1天至約5天后的時期內(nèi)，將所述診斷或治療劑遞送至靶位點。在優(yōu)選的實施方案中，所述方法中的血組織屏障如血腦屏障未受到給予破壞血組織屏障的診斷或治療劑的破壞。在另一優(yōu)選的實施方案中，所述時期為約1天至約7天，更優(yōu)選約1天至約10天，甚至更優(yōu)選約1天至約14天， 最優(yōu)選約1天至約21天。下列段落涉及有關(guān)通過受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)胞吞作用向特定血組織屏障所保護的靶位點的主動靶向的本發(fā)明各種實施方案，所述血組織屏障如CNS、血腦屏障(BBB)、視網(wǎng)膜和睪丸。在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，介導(dǎo)胞吞作用和轉(zhuǎn)胞吞作用中至少一種的GSH轉(zhuǎn)運蛋白位于腦的毛細(xì)血管(腔側(cè))中。通常，不期望受任何理論的束縛，受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)胞吞作用以3個步驟發(fā)生診斷或治療劑在腔(血液)側(cè)的受體介導(dǎo)的胞吞作用、通過內(nèi)皮細(xì)胞質(zhì)的移動以及藥物在腦毛細(xì)血管內(nèi)皮的近腔(腦)側(cè)的胞吐作用。在受體-配體內(nèi)化時形成網(wǎng)格蛋白(chlathrin)包被的囊泡，其直徑為約120nm。這些囊泡可以將它們的內(nèi)容物轉(zhuǎn)運至細(xì)胞的另一側(cè)或進入導(dǎo)致蛋白降解的途徑。實際上，已經(jīng)鑒定了至少兩種重要的降解蛋白的途徑，包括溶酶體和泛素-蛋白酶體途徑。因此，為了逃避內(nèi)體溶酶體 (endosomallysosomal)系統(tǒng)，已經(jīng)應(yīng)用了確保藥物釋放入胞液的機制。這些包括應(yīng)用pH敏感脂質(zhì)體或陽離子分子。然而，在應(yīng)用或不應(yīng)用溶酶體逃避機制的情況下，已經(jīng)證實向腦遞送蛋白是有效的。因此，受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)胞吞作用允許較大藥物分子或攜帶藥物的顆粒(如脂質(zhì)體、聚合物系統(tǒng)、納米顆粒)向腦的特異性靶向。在優(yōu)選的實施方案中，GSH轉(zhuǎn)運蛋白介導(dǎo)胞吞作用和轉(zhuǎn)胞吞作用中的至少一種，選擇配體和藥學(xué)可接受的載體以避開診斷或治療劑在細(xì)胞中的溶酶體降解?；蛑委煴景l(fā)明的一些方面涉及包含核苷酸序列的表達(dá)載體的用途，所述核苷酸序列編碼上文所定義的包含寡核苷酸或多核苷酸的診斷或治療劑，其中所述載體為適合基因治療的載體。適合基因治療的載體描述于Anderson 1998，Nature 392 :25-30 ；Walther and Stein，2000，Drugs 60 :249-71 ；Kay et al.,2001, Nat. Med. 7 :33-40 ；Russell,2000, J. Gen.Virol. 81 :2573-604 ；Amado and Chen,1999，Science 285 :674-6 ；Federico,1999， Curr.Opin. Biotechnol. 10 :448-53 ；Vigna and Naldini,2000, J.Gene Med. 2 :308-16 ； Marin et al. ,1997, Mol. Med. Today 3:396-403 ；Peng and Russell, 1999, Curr. Opin. Biotechnol. 10 :454-7 ；Sommerfelt,1999, J. Gen. Virol. 80 :3049-64 ；Reiser,2000, Gene Ther. 7 :910-3 ；以及本文引用的參考文獻中。特別合適的基因治療載體包括腺病毒和腺伴隨病毒(AAV)載體。這些載體感染許多分裂和非分裂細(xì)胞類型。另外，腺病毒載體能高水平轉(zhuǎn)基因表達(dá)。然而，由于進入細(xì)胞后腺病毒和AAV載體的游離屬性，如上文所述，這些病毒載體最適合僅要求轉(zhuǎn)基因的瞬時表達(dá)的治療應(yīng)用(Russell，2000，J. Gen. Virol. 81 2573-2604)。如Russell (2000，見上文)所綜述的，優(yōu)選的腺病毒載體經(jīng)修飾以減少宿主應(yīng)答。通常，基因治療載體在它們包含編碼待表達(dá)的診斷或治療劑的核苷酸序列的意義上，與上文所述的表達(dá)載體一樣，由此核苷酸序列可操作地連接至上文所述的合適的調(diào)節(jié)基因。這類調(diào)節(jié)序列包含至少一個啟動子序列。如本文所用，術(shù)語“啟動子”指這樣的核酸片段，其功能是控制一個或多個基因的表達(dá)，位于所述基因的轉(zhuǎn)錄起始位點的轉(zhuǎn)錄方向的上游，并且在結(jié)構(gòu)上通過存在DNA依賴性RNA聚合酶的結(jié)合位點、轉(zhuǎn)錄起始位點和任何其他DNA序列而鑒定，所述任何其他DNA序列包括但不限于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點、阻遏物和激活蛋白結(jié)合位點以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的作用為直接或間接調(diào)節(jié)由啟動子轉(zhuǎn)錄的量的任何其他核苷酸序列?！敖M成型”啟動子是在大多數(shù)生理條件和發(fā)育條件下都有活性的啟動子。“誘導(dǎo)型”啟動子是取決于生理條件或發(fā)育條件而受到調(diào)節(jié)的啟動子?！敖M織特異性”啟動子是僅在分化的細(xì)胞/組織的特定類型中有活性的啟動子。用于表達(dá)編碼來自基因治療載體的多肽的核苷酸序列的合適啟動子包括如巨細(xì)胞病毒(CMV)立即早期啟動子 (cytomegalovirus intermediate early promoter)、病毒長末端重復(fù)啟動子(LTR)，如來自莫洛尼鼠白血病病毒(MMLV)勞氏肉瘤病毒的啟動子，或HTLV-1，猿猴病毒40(SV 40)早期啟動子和單純皰疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶啟動子。已經(jīng)描述了數(shù)種誘導(dǎo)型啟動子系統(tǒng)，它們可以通過給予小有機或無機化合物而誘導(dǎo)。此類誘導(dǎo)型啟動子包括受重金屬控制的啟動子如金屬硫蛋白啟動子(Brinster et al. 1982 Nature 296 :39-42 ；May ο et al. 1982 Cell 29 :99-108)、RU-486 (孕酮拮抗劑) (Wang et al. 1994 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91 :8180-8184)、類固醇(Mader and White, 1993 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 :5603-5607)、四環(huán)素(Gossen and Bujard 1992 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 :5547-5551 ；美國專利第 5，464，758 號；Furth et al. 1994 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91 :9302-9306 ；Howe et al. 1995 J.Biol. Chem. 270 :14168-14174 ； Resnitzky et al.1994 Mol.Cell. Biol. 14:1669-1679 ；Shockett et al. 1995 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92 :6522-6526)以及作為VP16激活結(jié)構(gòu)域的基于由tetR多肽組成的多嵌合反式激活劑的tTAER系統(tǒng)和雌激素受體的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(Yee et al. ,2002, US 6，432，705)?；蛑委熭d體可以任選地包含編碼第二或其他蛋白的第二或一個或多個其他核苷酸序列。第二或其他蛋白可以是(選擇)標(biāo)記蛋白，其允許鑒定、選擇和/或篩選含有表達(dá)構(gòu)建體的細(xì)胞。用于此目的的合適標(biāo)記蛋白為例如熒光蛋白如綠色GFP，和選擇標(biāo)記基因 HSV胸腺嘧啶核苷激酶(用于HAT培養(yǎng)基的選擇)、細(xì)菌潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶(用于潮霉素 B的選擇)、Tn5氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶(用于G418的選擇)以及二氫葉酸還原酶OHFR)(用于甲氨蝶呤的選擇)，CD20、低親和力神經(jīng)生長因子基因。獲得這些標(biāo)記基因的來源以及它們的使用方法提供于 Sambrook and Russel (2001) " Molecular Cloning :A Laboratory Manual (3rd edition), Cold Spring Harbor Laboratory, Co1d Spring Harbor Laboratory Press, New York?？蛇x地，第二或其他核苷酸序列可以編碼提供故障安全(fail-safe)機制的蛋白，如果需要，所述故障安全機制允許由轉(zhuǎn)基因細(xì)胞治愈個體。此類核苷酸序列經(jīng)常稱為自殺基因，其編碼能將前藥轉(zhuǎn)化為毒性物質(zhì)的蛋白，所述毒性物質(zhì)能殺死表達(dá)所述蛋白的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞。此類自殺基因的合適實例包括如大腸桿菌胞嘧啶脫氨酶基因或來自單純胞疹病毒、巨細(xì)胞病毒和水痘帶狀皰疹病毒的胸腺嘧啶核苷激酶基因中的一種，在這種情況下，更昔洛韋可以用作在個體中殺死IL-10轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的前藥(參閱例如Clair et al.，1987， Antimicrob. Agents Chemother. 31 :844-849)。優(yōu)選地將基因治療載體配制于如下文所定義的包含合適的藥物載體的藥物組合物中。Si^抗體或抗體片段可以是本發(fā)明綴合物或者診斷或治療劑的組成部分。優(yōu)選地，抗體或其片段是單克隆抗體(MAb)。利用本領(lǐng)域已知的多種技術(shù)包括使用雜交瘤、 重組技術(shù)和噬菌體展示技術(shù)或其組合，可以制備補充組分的MAb。例如，單克隆抗體可以利用雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生，包括本領(lǐng)域已知和教導(dǎo)的那些技術(shù)，例如Harlow et al., Antibodies :A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press,2nd ed. 1988) ；Hammerling, et al. , in :Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier,N. Y. , 1981) 0為了治療人，抗補體MAb優(yōu)選地用作嵌合、去免疫化、人源化或人抗體。此類抗體能夠減少免疫原性并因此避免人抗小鼠抗體(HAMA)應(yīng)答。抗體優(yōu)選為IgG4、IgG2或不增加抗體依賴性細(xì)胞毒性(S. M. Canfield and S. L. Morrison, J. Exp. Med.，1991 :173 :1483-1491)和補體介導(dǎo)的細(xì)胞溶解(Y. Xu et al.，J. Biol. Chem.，1994 269 :3468-3474 ；V. L. Pulito et al.，J. Immunol.，1996 ；156 :2840-2850)的其他基因突變的IgG或IgM。嵌合抗體通過本領(lǐng)域公知的重組方法產(chǎn)生，并具有動物可變區(qū)和人恒定區(qū)。 人源化抗體比嵌合抗體具有更大程度的人肽序列。在人源化抗體中，僅負(fù)責(zé)抗原結(jié)合和特異性的互補性決定區(qū)(CDR)是動物來源的，并具有對應(yīng)于動物抗體的氨基酸序列，而基本上該分子的所有剩余部分(除了在某些情況下可變區(qū)內(nèi)的小部分框架區(qū)外)是人來源的， 并在氨基酸序列上對應(yīng)于人抗體。參閱L. Riechmann et al. ,Nature, 1988 ；332 :323-327 ； G. Winter，美國專利第 5，225，539 號；C. Queen et al.，U. S. 5，530，101。如 W0985^76 所述， 去免疫化的抗體是其中T和B細(xì)胞表位已經(jīng)被去除的抗體。當(dāng)體內(nèi)應(yīng)用時，它們的免疫原性已經(jīng)減少。人抗體能夠通過數(shù)種不同的方式制備，包括通過使用人免疫球蛋白表達(dá)文庫 (Stratagene Corp.，La Jolla, California)來產(chǎn)生人抗體的片段(VH、VL、Fv、FcU Fab 或 (Fab’)2，以及利用與產(chǎn)生嵌合抗體類似的技術(shù)，使用這些片段來構(gòu)建全人抗體。人抗體也能夠用人免疫球蛋白基因組在轉(zhuǎn)基因小鼠中產(chǎn)生。此類小鼠可從Abgenixdnc. ,Fremont, California和Medarex Jnc.，Annandale，New Jersey獲得。也可以產(chǎn)生單肽鏈結(jié)合分子， 其中重鏈和輕鏈Fv區(qū)連接。單鏈抗體C、cFv”)及其構(gòu)建方法描述于美國專利第4，946，778 號?？蛇x地，可以通過類似的方式構(gòu)建并表達(dá)Fab (M. J.Evans et al.，J. Immunol. Meth.， 1995;184:123-138)?？梢杂糜诒景l(fā)明的另一類抗體是重鏈抗體及其衍生物。此類單鏈重鏈抗體天然存在于如駱駝(Camelidae)中，并且它們分離的可變結(jié)構(gòu)域通常稱為“VHH結(jié)構(gòu)域”或“納米抗體(nanobody) ”。獲得重鏈抗體和可變結(jié)構(gòu)域的方法特別提供于下列參考文獻中W0 94/04678,WO 95/04079,WO 96/34103,WO 94/25591,WO 99/37681,WO 00/40968, WO 00/43507， WO 00/65057， WO 01/40310， WO 01/44301， EP 1134231， WO 02/48193， WO 97/49805，WO 01/21817，WO 03/035694, WO 03/054016, WO 03/055527, WO 03/050531, WO 01/90190，WO 03/025020，WO 04/041867，WO 04/041862，W004/041865, WO 04/041863，WO 04/062551。所有完全和部分人抗體的免疫原性比全鼠MAb (或來自其他非人類動物的MAb)小，并且片段和單鏈抗體的免疫原性也小。因此，所有這些類型的抗體不太可能激發(fā)免疫應(yīng)答或變應(yīng)性應(yīng)答。因此，它們比完整動物抗體更適合人的體內(nèi)給藥，特別是當(dāng)需要重復(fù)或長期給藥時。另外，大小較小的抗體片段可以有助于改善組織生物利用度，這對于急性疾病指征如腫瘤治療或一些病毒感染中更好的劑量聚積非常關(guān)鍵。藥物組合物本發(fā)明還涉及一種藥物制劑，其包含作為活性成分的本文所定義的綴合物。除了活性成分(綴合物)外，組合物優(yōu)選地至少包含一種藥學(xué)可接受的載體(除了綴合物中的載體外)。在一些方法中，綴合物包含從哺乳動物、昆蟲或微生物細(xì)胞培養(yǎng)物、轉(zhuǎn)基因哺乳動物的奶或其他來源純化的本發(fā)明的多肽或抗體，將其以純化的形式與藥物載體一起作為藥物組合物給予。制備包含多肽的藥物組合物的方法描述于美國專利第5，789，543號和第 6，207，718號。優(yōu)選的形式取決于給藥和治療應(yīng)用的預(yù)期模式。藥物載體可以是適合將多肽、抗體或基因治療載體遞送至患者的任何相容的非毒性物質(zhì)。無菌水、醇、脂肪、蠟和惰性固體可以用作載體。還可以將藥學(xué)可接受的佐劑、緩沖劑、分散劑等并入藥物組合物中。本發(fā)明的綴合物在藥物組合物中的濃度可以在大范圍變動，即從小于約0. 1重量％，通常為至少約1重量％至多達(dá)20重量％或更多。對于口服給藥，活性成分可以以固體劑型的形式給予，如膠囊劑、片劑、粉劑，或以液體劑型的形式給予，如酏劑、糖漿劑和混懸劑。活性組分可以與非活性成分和粉末狀載體一起封裝于明膠膠囊中，如葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、淀粉或纖維素衍生物、硬脂酸鎂、硬脂酸、糖精鈉、滑石、碳酸鎂等?？梢蕴砑右蕴峁┢谕念伾?、味道、穩(wěn)定性、緩沖能力、分散或其他已知期望特征的其他非活性成分的實例為氧化鐵紅、硅膠、十二烷基硫酸鈉、二氧化鈦、可食白墨(edible white ink)等?？梢杂妙愃频南♂寗┲苽鋲褐破瑒?。可以將片劑和膠囊劑制備為緩釋產(chǎn)品以在數(shù)小時的時間段內(nèi)提供藥物的持續(xù)釋放。壓制片劑可以是糖包衣或薄膜包衣的以掩蓋任何不舒服的味道并保護片劑免受空氣的危害，或者是腸溶衣的以用于胃腸道內(nèi)的選擇性崩解。用于口服給藥的液體劑型可以含有著色劑和調(diào)味劑以增加患者的接受性。本發(fā)明的綴合物優(yōu)選地以胃腸外給予。帶有胃腸外給藥的綴合物的制劑必須是無菌的。在凍干和重構(gòu)前后，滅菌容易地借助通過無菌濾膜的過濾來完成。給予綴合物的胃腸外途徑與已知的方法一致，如通過靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、 肌肉內(nèi)、動脈內(nèi)、病灶內(nèi)、顱內(nèi)、鞘內(nèi)、透皮、鼻、頰、直腸或陰道途徑注射或輸注。通過輸注或通過團注射(bolus injection)來連續(xù)給予綴合物。用于靜脈內(nèi)輸注的典型組合物經(jīng)配制含有10-500ml無菌0. 9% NaCl或5%葡萄糖，任選地補充20%白蛋白溶液以及所需劑量的綴合物。用于肌肉內(nèi)注射的典型藥物組合物經(jīng)配制含有例如I-IOml無菌緩沖水和所需劑量的本發(fā)明的綴合物。制備胃腸外給藥的組合物的方法在本領(lǐng)域是公知的，并且更詳細(xì)地描述于各種資料中，包括例如Remington' s Pharmaceutical Science (15th ed. ,Mack Publishing, Easton，PA, 1980)(通過援引加入本文用于所有目的)。對于治療應(yīng)用，以足以減少癥狀嚴(yán)重性和/或預(yù)防或停滯癥狀進一步發(fā)展的量向患有病毒感染或相關(guān)疾病狀況的患者給予藥物組合物。足以實現(xiàn)這一目的的量定義為“治療有效劑量”或“預(yù)防有效劑量”。這類有效劑量會取決于疾病狀況的嚴(yán)重性和患者的總體健康狀況。在本說明書和權(quán)利要求書中，動詞“包含”及其變形以其非限制意義使用，表示包括該詞后的項目，但不排斥未專門提及的項目。另外，不定冠詞“一個(a)”或“一個(an)”所限定的元素不排除存在多于一個該元素的可能性，除非上下文清楚地要求存在一個且僅一個該元素。因此，不定冠詞“一個(a)”或“一個(an)”通常表示“至少一個”。文說明書所引用的所有專利和文獻在此通過援弓I整體加入本文。僅出于說明目的提供下列實施例而并非意圖以任何方式限制本發(fā)明的范圍。


圖1表示BCEC中谷胱甘肽-PEG-脂質(zhì)體(用I^ho-PE標(biāo)記)吸收的代表性圖。所表示的是在BCEC單培養(yǎng)模式㈧和BBB共培養(yǎng)模式⑶中，牛毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞(BCEC) 對GSH靶向的脂質(zhì)體的吸收。顯微圖表示Ι/air (小時)(A)和^ir(B)的孵育時間后，BCEC 培養(yǎng)物(細(xì)胞核復(fù)染色為藍(lán)色)對GSH靶向的脂質(zhì)體(紅色)的吸收。BCEC單培養(yǎng)模式 (C)和BBB共培養(yǎng)模式⑶與非靶向的脂質(zhì)體的孵育清楚地表明在細(xì)胞內(nèi)或周圍不存在紅色信號。圖2表示連續(xù)12天每日靜脈內(nèi)團注射的最后一次后3天，谷胱甘肽-PEG-脂質(zhì)體 (以50mg/kg/天劑量給藥治療方案)向倉鼠腦的特異性靶向的圖。以上的顯微圖表示GSH 靶向的脂質(zhì)體的熒光信號主要是血管周的。
實施例實施例1診斷或治療劑與受體特異性配體的綴合作為診斷或治療劑與GSH綴合的實例，本文公開了 GSH與蛋白藥物綴合的優(yōu)選方法。將類似的綴合化學(xué)應(yīng)用于其他本文公開的診斷或治療劑和其他本文公開的GSH衍生物。為了觀察GSH-轉(zhuǎn)運蛋白特異性細(xì)胞吸收以及綴合至親水診斷或治療劑的GSH的體內(nèi)藥物動力學(xué)和生物分布，用親水熒光染料異硫氰酸熒光素(FITC)或Cy5.5標(biāo)記GSH。為此， 將GSH溶于PBS和NaHC03 pH 9. 0。添加FITC或Cy5. 5，并在室溫下將溶液避光攪拌Ihr。 通過柱離心(Zeba ，Pierce, Rockford, USA)除去過量的FITC或Cy5. 5，然后將溶液于4°C 下避光保存。實施例2 GSH-轉(zhuǎn)運蛋白特異性配體與含有封裝的診斷或治療劑的納米容器的綴合及其藥物動力學(xué)和藥效學(xué)作為由GSH-轉(zhuǎn)運蛋白特異性配體包被的含有診斷或治療劑的納米容器的實例， 本文公開了 GSH與藥物負(fù)載的PEG化(聚乙二醇化，PEGylated)脂質(zhì)體綴合的優(yōu)選方法。 脂質(zhì)體由數(shù)摩爾比(如2.0 1.5)的磷脂和膽固醇組成。為了修飾血漿中的轉(zhuǎn)變/加工溫度和顆粒穩(wěn)定性，以與膽固醇(Chol)的不同比例，使用磷脂如1，2_ 二棕櫚酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿(DPPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、氫化的大豆磷脂酰膽堿(HSPC)、 大豆磷脂酰膽堿(SPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)或蛋黃磷脂酰膽堿(EYPC)，其中混合物中較少的Chol會導(dǎo)致血漿中較不穩(wěn)定的脂質(zhì)體。將組分溶于乙醇或異丙醇。含有 DSPE-PEG-GSH(0. 2-10摩爾％ )的膠束是在制備脂質(zhì)體前利用DSPE-PEG-MAL和還原的谷胱甘肽(在三肽的半胱氨酸部分賦予MAL反應(yīng)性巰基)的新鮮溶液合成的，并且以不同的摩爾百分比向溶液添加DSPE-mPEG(Mw 2000)(總計高達(dá)5_10摩爾％ )。可選地，利用對 GSH中的氨基具有活性的DSPE-PEG-NHS綴合DSPE-PEG-GSH，或?qū)SH在N或C端殘基直接合成至DSPE-PEG。當(dāng)需要改變脂質(zhì)體的電荷時，向混合物添加磷酸十六烷基酯(DP)或D0TAP。另外，可以向混合物添加非離子表面活性劑聚山梨酯80(Tween 80))。還可以使用其他非離子表面活性劑，如Tween 20、Tween 40、Bri j76、Brij78或美國專利6，288，040 公開的那些表面活性劑(即碳二亞胺、正乙氧基羰基-2-乙氧基-1，2- 二氫喹啉、戊二醛 (glutardioldehyde)、bromozyane、偏高碘酸鹽(Na-鹽或K-鹽)、甲苯磺酰氯和氯甲酸酯)。在存在或不存在賦形劑或諸如環(huán)糊精的增溶劑的情況下，將(脂質(zhì))混合物注射到含有親水診斷或治療劑的水溶液中。向脂質(zhì)混合物中添加親脂診斷或治療劑，或用預(yù)填充例如硫酸銨或乙酸鈣的脂質(zhì)體，利用主動裝載方法將親脂診斷或治療劑封裝(任選地在醫(yī)院藥房中作為制備后過程)。渦旋后，擠壓囊泡通過膜或者在乳化器中均質(zhì)化。可選地，通過在25°C直至60°C下孵育2-M小時(取決于脂質(zhì)混合物的轉(zhuǎn)變溫度和診斷或治療劑的溫度敏感性)，在脂質(zhì)體制備后添加DSPE-PEG-GSH。通過測量粒徑(在Malvern Zetasizer中 50-200nm)、ζ電勢、磷脂含量(利用磷脂B試劑盒或HPLC/UPLC系統(tǒng))和肽含量(0. 2_10摩爾％ GSH,基于HPLC/UPLC或Pierce的OPA測定)以及藥物裝載(loading)來表征脂質(zhì)體。 將該脂質(zhì)體捕獲策略應(yīng)用于本文公開的診斷或治療劑，并且將類似的綴合或合成化學(xué)應(yīng)用于其他本文公開的作為靶向配體的GSH衍生物。另外，將類似的脂質(zhì)體捕獲應(yīng)用于基于核酸的藥物，同時，如 Gao and Huang, 1991, Biochem Biophys Res Commun. 179(1) :280-5 所詳述，通過向脂質(zhì)體添加膽固醇的陽離子衍生物(DC-Chol)，或者如W02002/066012所詳述，通過利用兩性脂質(zhì)體進行核酸捕獲的額外富集。為了觀察受體特異性細(xì)胞吸收以及綴合至填充有診斷或治療劑的脂質(zhì)體的GSH的體內(nèi)藥物動力學(xué)和生物分布，在制備脂質(zhì)體的過程中向脂質(zhì)混合物添加1，2- 二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-麗絲胺磺酰若丹明 B(Rho-PE)。可選地，用放射性示蹤分子標(biāo)記脂質(zhì)體，或者封裝的診斷或治療劑是熒光分子 (如Cy5. 5)或具有綴合至診斷或治療劑的熒光探針(如Cy5. 5或FITC)的化合物。
例如，利用乳化器(Emulsiflex_C3)，將在50°C下以100mg/ml溶于PBS的利巴韋林封裝于溶于2-丙醇中的脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體由DPPC(55% )、膽固醇(41% )、若丹明-PE (0. 04% )和mPEG-DSPE(4. 4% )組成。為了測試GSH分子的量對脂質(zhì)體外層的影響， 通過將GSH-PEG-DSPE膠束后插入預(yù)形成的脂質(zhì)體以代替mPEG_DSPE來制備不同百分比的 GSH-PEG-DSPE (0-2% )，從而提供 O 或 0. 1,0. 2,0. 5 或 2% 的 GSH-PEG 脂質(zhì)體，總 PEG 含量為5%。以此方式，利巴韋林GSH-PEG脂質(zhì)體為90nm，并含有10mg/ml利巴韋林(封裝效率為8-12% )。用EYPC而不是DPPC，制備類似的利巴韋林GSH-PEG脂質(zhì)體。在大鼠中單次靜脈內(nèi)注射50mg/kg后，發(fā)現(xiàn)在0%PEG脂質(zhì)體(基于DPPC)中，利巴韋林的全(脂質(zhì)體封裝的)峰血漿水平以3毫摩爾濃度(millimolar)穩(wěn)定數(shù)小時(據(jù)估計半衰期為約19小時)， 而血漿中的游離部分則為約4微摩爾濃度(micromolar)。對于2% GSH-PEG脂質(zhì)體(基于 DPPC)，全血漿水平也為約3毫摩爾濃度(據(jù)估計半衰期相同)，其中游離部分則僅高于2微摩爾濃度。相反，腦組織液中游離利巴韋林水平(可通過腦微量透析測定)，對于O% PEG 脂質(zhì)體僅高于120納摩爾濃度(nanomolar)，而對于2% GSH-PEG脂質(zhì)體則為約600納摩爾濃度。另外，發(fā)現(xiàn)游離利巴韋林所增強的腦遞送效果通過降低脂質(zhì)體上GSH的％而減少對于0. 5% GSH為450納摩爾濃度，對于0. 2% GSH為250納摩爾濃度，并且對于0. GSH為約120納摩爾濃度，這又與0%相似。這些結(jié)果表明，向PEG化脂質(zhì)體添加GSH增強游離藥物以GSH依賴性方式穿過血腦屏障的遞送，系數(shù)約5倍。相關(guān)的是，不同制劑(0-2% GSH) 的利巴韋林的全血漿水平的曲線下的面積無顯著不同。相反，在基于EYPC的脂質(zhì)體中，利巴韋林的全(脂質(zhì)體封裝的)血漿水平(再次在大鼠中單次靜脈內(nèi)注射50mg/kg后)據(jù)發(fā)現(xiàn)僅在1毫摩爾濃度時達(dá)到峰值，并快速下降(半衰期為約3小時)，在脂質(zhì)體的外表面上在0和2%的GSH之間未觀察到差異。同時，發(fā)現(xiàn)利巴韋林的游離部分為約45微摩爾濃度 (峰值)，并以全血漿水平的相同速率下降，在脂質(zhì)體的外表面上在0和2% GSH之間也沒有差異。這些結(jié)果表明，基于DPPC的脂質(zhì)體具有長循環(huán)時間(和緩慢的利巴韋林釋放)，而基于EYPC的脂質(zhì)體具有短循環(huán)時間(和快速的利巴韋林釋放)。作為另一實例，將PEG化多柔比星脂質(zhì)體(基于Cealyx/Doxil)修飾為在PEG的頂端含有GSH。為此，于60°C下，將GSH-PEG-DSPE膠束(5% )溶于ang/mL硫酸銨溶液。向該溶液添加溶于乙醇(于60°C下)的HSPC(55%)和膽固醇(40% )，并且通過擠壓通過濾器直至獲得約IOOnm的顆粒來制備脂質(zhì)體。隨后，通過透析除去游離的硫酸銨，并添加 2mg/mL多柔比星溶液(于60°C下)以允許多柔比星與銨交換并在脂質(zhì)體核心中沉淀(“主動裝載”)。發(fā)現(xiàn)在大鼠中單次靜脈內(nèi)注射6mg/kg后，在未修飾的PEG化脂質(zhì)體(Caelyx/ Doxil)中，多柔比星的全(脂質(zhì)體封裝的)峰血漿水平穩(wěn)定數(shù)小時(據(jù)估計半衰期為約M 小時)，而GSH修飾的PEG化脂質(zhì)體表現(xiàn)出較快的清除，從而導(dǎo)致估計的半衰期為19小時。 結(jié)果還表明，未修飾的PEG化脂質(zhì)體所獲得的AUC比GSH修飾的PEG化脂質(zhì)體大約50%， 并且Cmax值高約20%。隨后，在無胸腺小鼠中評價這些脂質(zhì)體的效力，其中利用立體定位框架(stereotactic frame)將人成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞(U87)的懸浮液緩慢注射到腦中。將小鼠分為3個處理組對照(鹽水)、未修飾的PEG化脂質(zhì)體(Caelyx/Doxil)中的多柔比星以及GSH修飾的PEG化脂質(zhì)體中的多柔比星。動物接受5mg/kg的i.v.注射，每周2次。 處理在植入U87細(xì)胞后14天開始。沒有觀察到處理的副作用(AE)，動物沒有表現(xiàn)出任何注射相關(guān)的不良事件，它們也沒有表現(xiàn)出任何神經(jīng)癥狀。用GSH修飾的PEG化脂質(zhì)體中的多柔比星處理與鹽水和未修飾的PEG化脂質(zhì)體相比O向AN0VA，ρ < 0. 001)，及時地表現(xiàn)出腦腫瘤生長的強烈顯著減少，并且與對照組相比表現(xiàn)出高顯著存活益處(與鹽水相比增加 42%，與未修飾的PEG化脂質(zhì)體相比增加19% )。相反，在具有皮下植入的人轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞(MDA-MB-231)的裸鼠中，測試相同的處理組(10mg/kg i. v.，每4天)，在兩種脂質(zhì)體制劑之間沒有觀察到處理效力的差異；與媒介物處理相比，兩種制劑在減少腫瘤負(fù)荷方面是等效的。仍然作為另一實例，應(yīng)用上文對多柔比星GSH修飾的PEG化脂質(zhì)體所述的相同脂質(zhì)體制備方法來封裝甲潑尼龍和脫氧皮質(zhì)酮的半琥珀酸鹽。為此，用乙酸鈣溶液代替硫酸銨溶液，從而導(dǎo)致高藥物封裝效率(> 70% )和穩(wěn)定的制劑。測試這些制劑在CNS疾病狀況(例如在多發(fā)性硬化或(應(yīng)激相關(guān))抑郁癥的動物模型中)中的增強的效力以及通常與這些類固醇相關(guān)的外周副作用(主要是心血管的)的減少。作為肽診斷或治療劑的實例，應(yīng)用上文對多柔比星GSH修飾的PEG化脂質(zhì)體所述的相同脂質(zhì)體制備方法來封裝β-片層破壞(breaker)肽LPFFP或Ac-LPFFP_NH2。為此， 用50-100mg/mL的肽溶液代替硫酸銨溶液，從而導(dǎo)致脂質(zhì)體水核心中約15%的肽封裝效率和穩(wěn)定的制劑。在涉及β-淀粉樣蛋白(amyloid-beta)的CNS疾病狀況(例如，在具有增強的噬斑形成的阿爾茨海默病的轉(zhuǎn)基因動物模型中)中測試這些制劑的增強的效力。作為更敏感的蛋白診斷或治療劑如抗體、酶和生長因子的實例，優(yōu)選較低的處理溫度。為此，在 37°C 下，將 95-55%EYPC、DMPC 或 DPPC，以及 0-40% 膽固醇和 1 % mPEG-DSPE溶于乙醇，并添加至如曲妥珠單抗、gammaquin、伊米苷酶、艾度硫酸酯酶(elaprase)、GDNF 或白蛋白的用Tween 80 (< 0. 01 穩(wěn)定的蛋白溶液中，并通過擠壓通過濾器直至獲得約 IOOnm的顆粒來制備脂質(zhì)體。隨后，在制備過程中或就在向個體注射前，于37°C下向預(yù)制的脂質(zhì)體添加4-8%的GSH-PEG-DSPE膠束，保持30分鐘至高達(dá)2小時?？蛇x地，向脂質(zhì)溶液添加5%的GSH-PEG-DSPE凍干產(chǎn)物以代替1 %的mPEG_DSPE。如果需要，通過透析/滲濾除去游離蛋白，或通過蛋白特異性柱(如ftx)tG)再捕獲游離蛋白。具有40%膽固醇的基于 DMPC的脂質(zhì)體的半衰期在與上文所述的具有40%膽固醇的基于DPPC的脂質(zhì)體的半衰期相同的范圍內(nèi)。膽固醇的％減少至10%將血漿半衰期(以及因此的IgG釋放)縮短至約2小時，其中從制劑中省略膽固醇甚至進一步將半衰期減少至約30分鐘。實施例3 GSH與基于核酸的藥物的載體的綴合作為通過靶向吸收機制的基于核酸的藥物的非病毒遞送系統(tǒng)的實例，本文公開了 PEG化GSH與聚乙烯亞胺(polyethylenimine，PEI)jetPEI等或其片段綴合的優(yōu)選方法。 PEG化的復(fù)合物制備如下。將PEI溶于PBS。向此溶液添加聚(乙二醇)-α-馬來酰亞胺-ω -NHS (NHS-PEG-VS)，并在室溫下孵育，同時混合。通過超濾除去過量的NHS-PEG-VS。 將PEI-PEG-VS直接用于與還原的GSH的巰基綴合。實施例4 GSH與蛋白的綴合作為直接綴合方法的實例，本文公開了 GSH與酶、生長因子、單克隆抗體或其片段綴合的優(yōu)選方法。GSH綴合的蛋白制備如下。優(yōu)選地用(硫代)-SMCC修飾賴氨酸基團的氨基，從而提供蛋白上的巰基反應(yīng)性馬來酰亞胺基團。隨后將該反應(yīng)性蛋白直接用于與還原的GSH的巰基綴合。實施例5靶向的診斷或治療劑的GSH特異性細(xì)胞吸收和/或跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運通過分析GSH綴合物的特異性吸收來觀察GSH綴合物的GSH特異性細(xì)胞吸收，并與對照綴合物的吸收水平進行比較。使用來自數(shù)個種類和來源的已知(缺少)表達(dá)GSH轉(zhuǎn)運蛋白的細(xì)胞，包括豬腎上皮細(xì)胞(LLC-PKl)、牛腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞(BCEC)以及犬MDCK 細(xì)胞。細(xì)胞吸收實驗將靶向和非靶向脂質(zhì)體的200納摩爾(nmole)等份添加至血腦屏障的體外模型(大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞和牛毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的共培養(yǎng)物)，并且添加至BCEC的單培養(yǎng)物中。37°C下的孵育時間范圍為l/2-;3hr。處理結(jié)束時，將蓋玻片上的細(xì)胞用4% PFA固定，并洗滌，然后用含有DAPI (細(xì)胞核復(fù)染)的Vectashield封固劑封片于載玻片上。利用NIKON TE2000-E倒置顯微鏡，用于若丹明、GFP和DAPI的三頻帶濾波器(triple band filter)，通過熒光顯微術(shù)以20x或60x的放大率評價細(xì)胞培養(yǎng)物中脂質(zhì)體的結(jié)局。圖 1表示在BCEC單培養(yǎng)模式(圖版A)和BBB共培養(yǎng)模式(圖版B)中，牛毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞 (BCEC)對GSH靶向脂質(zhì)體的吸收。顯微圖表示在l/2hr(A)和^ir(B)的孵育時間后，BCEC 培養(yǎng)物(細(xì)胞核復(fù)染成藍(lán)色)對GSH靶向脂質(zhì)體(紅色I^ho-PE)的吸收。用非靶向脂質(zhì)體孵育清楚地表明，在細(xì)胞內(nèi)或周圍缺少紅色信號。實施例6 GSH靶向的診斷或治療劑的藥物動力學(xué)和生物分布在倉鼠中，在12次每日靜脈內(nèi)團注射后，通過分析脂質(zhì)體中的Iih0-PE標(biāo)記觀察 GSH靶向脂質(zhì)體的藥物動力學(xué)和生物分布，并與非靶向脂質(zhì)體進行比較。在最后注射后3 天，灌注的倉鼠腦中GSH靶向脂質(zhì)體與對照脂質(zhì)體相比表現(xiàn)出較高且特異性的積聚，而在分析的其他組織選擇(包括心臟、肺、肝、脾和腎)中較少，所述對照脂質(zhì)體在腦中不(或幾乎不)可檢測，但在肺、腎和肝組織中的程度相對較高。圖2表示最高劑量組的倉鼠腦載玻片代表性圖。
權(quán)利要求
1.一種綴合物，其包含a)谷胱甘肽轉(zhuǎn)運蛋白的配體；和b)i)和ii)的至少一種i)診斷或治療劑；和 )包含所述診斷或治療劑的藥學(xué)可接受的納米容器，其中a)中的配體綴合至b)中的診斷或治療劑和納米容器中的至少一種。
2.如權(quán)利要求1所述的綴合物，其中所述配體是這樣的配體當(dāng)將所述配體添加至 BCEC或MDCK靶細(xì)胞后18小時或更少測量時，其特異性結(jié)合所述靶細(xì)胞，或者與選自以下的對照條件相比以提高至少10%的速率被胞吞或轉(zhuǎn)胞吞進入或通過所述靶細(xì)胞a)缺少GSH 轉(zhuǎn)運蛋白表達(dá)的細(xì)胞；b)用過量游離GSH預(yù)處理的細(xì)胞；和c)缺少GSH部分的參照化合物。
3.如權(quán)利要求1或2所述的綴合物，其中所述配體選自谷胱甘肽、S-(對溴芐基)谷胱甘肽、Y-(L-γ-氮雜谷氨酰)-S-(對溴芐基)-L-半胱氨酰甘氨酸、S-丁基谷胱甘肽、 S-癸基谷胱甘肽、谷胱甘肽還原乙酯、谷胱甘肽磺酸、S-己基谷胱甘肽、S-乳酰谷胱甘肽、 S-甲基谷胱甘肽、S-(4-硝基芐基)谷胱甘肽、S-辛基谷胱甘肽、S-丙基谷胱甘肽、正丁酰 Y-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸、乙酰Y-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸、己酰Y-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸、辛酰Y-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸、十二酰Y-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸、GSH單異丙酯 (N-(N-L-谷氨酰-L-半胱氨酰)甘氨酸1-異丙酯硫酸鹽一水合物)以及式I的谷胱甘肽衍生物或其藥學(xué)可接受的鹽
4.如權(quán)利要求3所述的綴合物，其中在式I的衍生物中，R3為H，R4為芐基，并且R5為苯基。
5.如前述權(quán)利要求中任一項所述的綴合物，其中所述診斷或治療劑為以下診斷或治療劑中的至少一種a.中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制劑；b.中樞神經(jīng)系統(tǒng)刺激劑；c.精神藥物；d.呼吸道藥物；e.外周神經(jīng)系統(tǒng)藥物；f.在突觸連接位點或神經(jīng)效應(yīng)器連接位點起作用的藥物；g.平滑肌活性藥物；h.組月安能齊Ll(histaminergic agent)；、i.抗組月安能齊Ll(antihistaminergic agent)； j.心血管藥物；k.血液和造血系統(tǒng)藥物； 1.胃腸道藥物； m.類固醇劑；η.細(xì)胞生長抑制劑或抗腫瘤劑；ο.抗感染劑；P.抗生素劑；q.抗真菌劑；r.驅(qū)腸蟲劑；s.抗瘧劑；t.抗原生動物劑；u.抗微生物劑；v.抗炎齊Ll ；w.免疫抑制劑；X.細(xì)胞因子；、1.酶；ζ.亞氨基糖；aa.神經(jīng)酰胺類似物；bb.腦作用激素或神經(jīng)遞質(zhì)；cc.神經(jīng)肽或其衍生物；dd.神經(jīng)營養(yǎng)因子；ee.抗體或其片段；ff.阿爾茨海默病藥物或化合物；gg.基于核酸的化合物；hh.顯像劑；、 .(有機磷酸酯)解毒劑。
6.如前述權(quán)利要求中任一項所述的綴合物，其中所述藥學(xué)可接受的納米容器包括以下物質(zhì)中的至少一種a)載體蛋白；b)脂質(zhì)體；c)陽離子聚合物DNA復(fù)合物系統(tǒng)；d)陽離子脂質(zhì)體DNA復(fù)合物系統(tǒng)；和e)聚乙二醇。
7.如權(quán)利要求6所述的綴合物，其中所述藥學(xué)可接受的納米容器是陽離子脂質(zhì)體DNA 復(fù)合物系統(tǒng)，其包含陽離子脂質(zhì)或兩性脂質(zhì)中的至少一種；或者是陽離子聚合物DNA復(fù)合物系統(tǒng)，其包含聚-L-賴氨酸、聚-L-鳥氨酸、聚乙烯亞胺和聚酰胺胺中的至少一種。
8.如前述權(quán)利要求中任一項所述的綴合物，其用于治療、預(yù)防或診斷CNS病癥。
9.如前述權(quán)利要求中任一項所述的綴合物在制備用于治療、預(yù)防或診斷CNS病癥的藥物中的用途。
10.一種治療、預(yù)防或診斷CNS病癥的方法，其中所述方法包括向有需要的個體給予有效劑量的如權(quán)利要求1-7中任一項所述的綴合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及化合物的靶向藥物遞送方法，所述化合物包括化學(xué)劑、(多)肽和基于核酸的藥物(如DNA疫苗、反義寡核苷酸、核酶、催化性DNA(DNA核酶)或RNA分子、siRNA或編碼其的質(zhì)粒)。而且，本發(fā)明涉及向細(xì)胞、組織和器官中的血管外和細(xì)胞內(nèi)靶位點，特別是向中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的靶位點靶向藥物遞送化合物，進入和穿過血腦屏障的方法，該方法通過靶向存在于這些細(xì)胞、組織和器官上的谷胱甘肽轉(zhuǎn)運蛋白而實現(xiàn)。此外，化合物或其藥學(xué)可接受的載體綴合至基于谷胱甘肽的配體，所述配體促進特異性結(jié)合這些谷胱甘肽轉(zhuǎn)運蛋白和被這些谷胱甘肽轉(zhuǎn)運蛋白內(nèi)化。
文檔編號A61K49/00GK102316902SQ201080008108
公開日2012年1月11日 申請日期2010年2月19日 優(yōu)先權(quán)日2009年2月20日
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