專利名稱：氨基酸接合氰基丙烯酸酯聚合物粒子的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及接合了氨基酸的氰基丙烯酸酯聚合物粒子、以及含有該粒子作為有效成分的癌癥的治療和/或預(yù)防藥。
背景技術(shù)：
T細(xì)胞淋巴瘤是頑癥非何杰金淋巴瘤的一種。除了用細(xì)胞毒性強(qiáng)的抗癌藥進(jìn)行骨髄破壞后移植骨髓的方法之外，不存在有效的治療方法。以往的抗癌藥具有強(qiáng)的細(xì)胞毒性， 因此在產(chǎn)生目標(biāo)抗癌效果的同時(shí)，產(chǎn)生對(duì)正常細(xì)胞的強(qiáng)毒性。因此，在骨髄破壞后的移植步驟中，患者的正常細(xì)胞已經(jīng)受損傷，以此為主要原因，其預(yù)后也常常不良。另外，供體的條件也是嚴(yán)格的，發(fā)現(xiàn)供體也并不容易。胰腺癌是存活率最低的癌癥之一。胰腺癌沒有特有的早期癥狀，因此早期發(fā)現(xiàn)非常困難，大多是在進(jìn)展到相當(dāng)程度后被發(fā)現(xiàn)。目前尚未知曉有效的治療方法，預(yù)后非常不
良ο另一方面，為了通過藥物傳遞系統(tǒng)(DDS)、緩釋來提高藥物的效果，藥劑的微粒子化研究得到發(fā)展，例如，使藥劑接合在氰基丙烯酸酯聚合物粒子中的DDS是公知的(專利文獻(xiàn)1-5以及非專利文獻(xiàn)1)。直至現(xiàn)在，本申請(qǐng)的發(fā)明人也公開了粒徑變化小的氰基丙烯酸酯聚合物粒子的制造方法、抗菌劑接合粒子、以及質(zhì)粒接合粒子(專利文獻(xiàn)3- 。但是，在目前為止的任何研究中均未知的是，以藥物DDS和緩釋為目的，接合了如氨基酸這樣的、其本身沒有特別的藥理作用的物質(zhì)的氰基丙烯酸酯聚合物粒子。使用這種接合粒子的藥物也是完全未知的。現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)
專利文獻(xiàn)1 日本特表平11-503148號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)2 日本特表2002-5045 號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)3 日本特開2008-127538號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)4 國(guó)際公開第2008/U6846號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)5 日本特開2008-208070號(hào)公報(bào)非專利文獻(xiàn)
非專利文獻(xiàn) 1 :Christine Vauthier 等人·，Adv. DrugDeliv. Rev. , 55，519-548 (2003)。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的目的在于提供對(duì)癌癥的治療有用的新手段。本申請(qǐng)的發(fā)明人進(jìn)行了深入的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過使氰基丙烯酸酯單體在氨基酸的共存下進(jìn)行陰離子聚合，合成接合了氨基酸的納米尺寸(平均粒徑小于1000 nm)的氰基丙烯酸酯聚合物粒子。另外發(fā)現(xiàn)該接合粒子對(duì)于來自癌細(xì)胞的各種細(xì)胞系可以誘導(dǎo)凋亡樣細(xì)胞死亡而損害該細(xì)胞；通過選擇接合的氨基酸的種類，可以應(yīng)對(duì)各種癌癥，尤其是對(duì)于來自淋巴瘤的細(xì)胞系可發(fā)揮高親和性；并且對(duì)于一部分來自胰腺癌的細(xì)胞系具有增殖抑制作用，對(duì)于不存在有效的治療方法的胰腺癌的治療也有用，從而完成了本發(fā)明。S卩，本發(fā)明提供平均粒徑小于1000 nm的、接合了氨基酸的氰基丙烯酸酯聚合物粒子。另外，本發(fā)明提供含有上述本發(fā)明的粒子作為有效成分的癌癥的治療和/或預(yù)防藥。本發(fā)明進(jìn)一步提供癌癥的治療和/或預(yù)防方法，該方法包含對(duì)有必要進(jìn)行癌癥的治療和/或預(yù)防的人給予有效量的上述本發(fā)明的粒子。根據(jù)本發(fā)明，首次提供接合了氨基酸的納米尺寸的氰基丙烯酸酯聚合物粒子。該氨基酸接合粒子可以對(duì)癌細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡樣細(xì)胞死亡而損害癌細(xì)胞，因此對(duì)癌癥的治療和預(yù)防是有用的。通過選擇所接合的氨基酸的種類，也可以對(duì)各種癌癥例如來自上皮系統(tǒng)/血液系統(tǒng)的癌細(xì)胞系選擇親和性，因此，對(duì)于來自上皮系統(tǒng)/血液系統(tǒng)的癌癥等各種癌癥的治療/預(yù)防是有用的。特別是，該接合粒子對(duì)于癌細(xì)胞中的來自τ細(xì)胞淋巴瘤、B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞系的親和性高，因此對(duì)于淋巴瘤的治療是尤其有用的。另外，該粒子還具有抑制一部分來自胰腺癌的細(xì)胞系的增殖的作用，對(duì)于不存在有效的治療方法的胰腺癌也期望獲得治療效果。在用于實(shí)際的癌癥治療時(shí)，例如，如果對(duì)于患者自身的癌細(xì)胞事先在體外確認(rèn)效果，并選擇抗癌活性高的氨基酸接合粒子給予患者，則可更有效地治療/預(yù)防癌癥。即，本發(fā)明的治療和/或預(yù)防藥可用作定制(f一，一J 4 F)抗癌藥。本發(fā)明的氨基酸接合粒子可用對(duì)生物體具有適合性的材料制作，因此對(duì)人體的安全性也高，與現(xiàn)有抗癌藥比較在臨床應(yīng)用上非常有利。根據(jù)本發(fā)明，不使用細(xì)胞毒性強(qiáng)的抗癌藥、稱為DDS的手段就可以治療癌癥，因此對(duì)患者的QOL的提高也有貢獻(xiàn)。附圖簡(jiǎn)述


圖1是表示用Lys接合粒子處理的各種細(xì)胞系的存活率的圖。圖2是表示用Arg接合粒子處理的各種細(xì)胞系的存活率的圖。圖3是表示用His接合粒子處理的各種細(xì)胞系的存活率的圖。圖4是表示用Asp接合粒子處理的各種細(xì)胞系的存活率的圖。圖5是表示用Gly接合粒子處理的各種細(xì)胞系的存活率的圖。圖6是表示用Ala接合粒子處理的各種細(xì)胞系的存活率的圖。圖7是表示用Val接合粒子處理的各種細(xì)胞系的存活率的圖。圖8是表示用Leu接合粒子處理的各種細(xì)胞系的存活率的圖。圖9是表示用Try接合粒子處理的各種細(xì)胞系的存活率的圖。圖10是表示用Phe接合粒子處理的各種細(xì)胞系的存活率的圖。圖11是表示用Ser接合粒子處理的各種細(xì)胞系的存活率的圖。圖12是表示用Thr接合粒子處理的各種細(xì)胞系的存活率的圖。圖13是表示用Met接合粒子處理的各種細(xì)胞系的存活率的圖。圖14是表示用氨基酸非接合粒子處理的各種細(xì)胞系的存活率的圖。圖15是表示對(duì)于用Arg接合粒子處理的EL-4細(xì)胞系進(jìn)行膜聯(lián)蛋白V測(cè)定的結(jié)果的圖。圖16是表示各種氨基酸接合粒子對(duì)于來自人B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞系YCUB-2的增殖抑制效果的圖。
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圖17是表示將來自人B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞系YCUB-2用各濃度的氨基酸(Arg、 Asp)接合粒子處理48小時(shí)后的細(xì)胞存活率的圖。圖18是表示將來自人T細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞系H9用各濃度氨基酸(Arg、Asp)接合粒子處理M小時(shí)后的細(xì)胞存活率的圖。圖19是將現(xiàn)有的抗癌藥絲裂霉素C (MMC)和放線菌素D (Act-D)與氨基酸接合粒子之間對(duì)H9細(xì)胞系的細(xì)胞增殖抑制效果進(jìn)行比較的圖。圖20是表示將來自人T細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞系H9用各濃度的Asp接合粒子處理1、 3>6,24小時(shí)時(shí)的細(xì)胞存活率的圖。圖21是表示將來自人T細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞系H9用各濃度的Arg接合粒子處理1、 3>6,24小時(shí)時(shí)的細(xì)胞存活率的圖。圖22是表示將來自人T細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞系H9用各種濃度的抗癌藥絲裂霉素C (MMC)或放線菌素D (ACD)處理M小時(shí)后的細(xì)胞存活率的圖。圖23是表示用3種氨基酸接合粒子(堿性氨基酸D70Arg_NP、酸性氨基酸 D70Asp-NP、中性氨基酸D70Gly-NP)或氨基酸非接合粒子(D70-NP)處理H9細(xì)胞系時(shí)的細(xì)胞增殖抑制率的圖。圖M是表示使用來自各種人胰腺癌的細(xì)胞系研究氨基酸接合粒子(D70Asp-NP、 D70Arg-NP、D70Gly-NP)的增殖抑制效果的結(jié)果圖。D70-NP為氨基酸非接合粒子。
具體實(shí)施方案本發(fā)明的粒子是含有接合了氨基酸的氰基丙烯酸酯聚合物的粒子，該粒子尺寸是平均粒徑小于1000 nm。粒子尺寸的下限沒有特別限定，例如，在利用下述方法通過丙烯酸酯單體的聚合制造聚合物粒子時(shí)，粒子的粒徑通常為7 nm左右以上。平均粒徑優(yōu)選20 nm-600 nm，更優(yōu)選50 nm-550 nm。另外，接合粒子的電荷(ζ電位)沒有特別限定，通常為-40 mV-0 mV左右。ζ電位表示粒子表面的電荷，是粒子分散性的指標(biāo)。粒子尺寸和ζ 電位例如可使用采用He/Ne激光的市售裝置(例如Malvern Inst. UK公司制造的七一夕寸4廿一等)容易地測(cè)定。氨基酸的種類沒有特別限定，通常是構(gòu)成天然蛋白質(zhì)的20種氨基酸中的任一種。 如下所述，本發(fā)明的粒子所接合的氨基酸的種類對(duì)該粒子的抗癌活性有影響。所接合的氨基酸可以是1種，或者也可以接合2種以上。上述氨基酸接合粒子的氰基丙烯酸酯聚合物部分是將氰基丙烯酸酯單體進(jìn)行陰離子聚合得到的。所使用的氰基丙烯酸酯單體優(yōu)選氰基丙烯酸烷基酯單體(烷基的碳原子數(shù)優(yōu)選1-8)，特別地，優(yōu)選在外科領(lǐng)域中作為傷口縫合用膠粘劑使用的、下式所示的2-氰基丙烯酸正丁酯(nBCA)。[化學(xué)式1]
權(quán)利要求
1.接合了氨基酸的氰基丙烯酸酯聚合物粒子，其平均粒徑小于1000nm。
2.權(quán)利要求1的粒子，其中，所述粒子是在氰基丙烯酸酯單體、糖類和/或聚山梨酸酯、 以及氨基酸的共存下，通過使所述單體陰離子聚合而制造的。
3.權(quán)利要求2的粒子，其中，所述糖類為選自具有羥基的單糖類和具有羥基的多糖類的至少一種糖類。
4.權(quán)利要求2的粒子，其中，所述糖類為葡聚糖。
5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的粒子，其中，所述氰基丙烯酸酯為氰基丙烯酸正丁酯。
6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的粒子，其中，所述粒子的平均粒徑為20nm-600 nm。
7.癌癥的治療和/或預(yù)防藥，所述藥物含有權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的粒子作為有效成分。
8.權(quán)利要求7的治療和/或預(yù)防藥，其中，所述癌癥為淋巴瘤。
9.權(quán)利要求8的治療和/或預(yù)防藥，其中，所述癌癥為T細(xì)胞淋巴瘤。
10.權(quán)利要求9的治療和/或預(yù)防藥，其中，與所述粒子接合的氨基酸為選自甘氨酸、天冬氨酸和精氨酸的至少一種。
11.權(quán)利要求8的治療和/或預(yù)防藥，其中，所述癌癥為B細(xì)胞淋巴瘤。
12.權(quán)利要求11的治療和/或預(yù)防藥，其中，與所述粒子接合的氨基酸為選自甘氨酸、 甲硫氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、賴氨酸、丙氨酸、纈氨酸、絲氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、亮氨酸、蘇氨酸、色氨酸、脯氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺的至少一種。
13.權(quán)利要求7的治療和/或預(yù)防藥，其中，所述癌癥為胰腺癌。
14.權(quán)利要求13的治療和/或預(yù)防藥，其中，與所述粒子接合的氨基酸為選自天冬氨酸和甘氨酸的至少一種。
15.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的粒子，所述粒子用于癌癥的治療和/或預(yù)防。
16.癌癥的治療和/或預(yù)防方法，所述方法包含對(duì)需要進(jìn)行癌癥的治療和/或預(yù)防的動(dòng)物給予有效量的權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的粒子。
全文摘要
本發(fā)明公開了平均粒徑小于1000nm的、接合了氨基酸的氰基丙烯酸酯聚合物粒子。本發(fā)明的氨基酸接合粒子可以對(duì)癌細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡樣細(xì)胞死亡而損害該癌細(xì)胞。該粒子尤其對(duì)來自T細(xì)胞淋巴瘤、B細(xì)胞淋巴瘤等淋巴瘤的細(xì)胞系的親和性高，另外，也可對(duì)于一部分來自胰腺癌的細(xì)胞系發(fā)揮增殖抑制效果。因此，本發(fā)明的粒子用作癌癥的治療和/或預(yù)防。
文檔編號(hào)A61K31/198GK102361636SQ20108001017
公開日2012年2月22日 申請(qǐng)日期2010年3月3日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月3日
發(fā)明者吉田篤司, 城武升一, 橫田俊平, 遠(yuǎn)藤格 申請(qǐng)人:公立大學(xué)法人橫浜市立大學(xué)