專利名稱：含有藥物和sirna的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
廣泛地講，本發(fā)明涉及分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、腫瘤學(xué)和治療化合物的遞送領(lǐng)域。具體地講，本發(fā)明涉及含有在單一藥物遞送系統(tǒng)中的疏水性藥物物質(zhì)和抑制性核酸分子例如短干擾RNA(SiRNA)的藥物組合物以及其制備方法和施用方法。
背景技術(shù)：
難溶于水但易溶于有機(jī)溶劑的藥物特的數(shù)目不斷增加。EP0906(埃坡霉素B)是落入所述范疇的帕妥匹?。凰y溶于水(< 0. lmg/1)，但易溶于有機(jī)溶劑例如乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷等。難溶于水即疏水性藥物物質(zhì)給以注射形式例如胃腸外施用的遞送帶來難題。包含這些藥物的制劑必須能向預(yù)期吸收位點(diǎn)以可吸收的形式提供治療有效量的藥物。 用于遞送難溶藥物的藥物組合物必須能運(yùn)載藥物穿過水性環(huán)境，同時(shí)保持藥物處于能被吸收的形式并避免使用生理上有害的溶劑或賦形劑。許多將疏水藥物配制用于口服或腸胃外遞送的方法是已知的，例如其中藥物以水包油乳劑、微乳劑或者膠束溶液、脂質(zhì)體或其他多層載體顆粒存在的制劑。脂質(zhì)體是由兩親分子例如含有疏水區(qū)域和親水區(qū)域的脂質(zhì)制成的微囊泡，并能包封一定的水性體積。短干擾RNA (SiRNA)是19_27個(gè)堿基對長度的雙鏈核糖核苷酸序列，是高度負(fù)電荷的，并主要溶于水。siRNA負(fù)責(zé)RNA干擾，即動物和植物中序列特異性轉(zhuǎn)錄后基因沉默的途徑。siRNA是由核糖核酸酶III從與沉默基因同源的較長雙鏈RNA(dsRNA)裂解產(chǎn)生的或者通過遞送合成的RNA至細(xì)胞產(chǎn)生的。已知siRNA的體內(nèi)遞送是非常困難的，因此，限制了 siRNA的治療潛能。例如，可有效用于其他類型核酸分子的遞送方法對siRNA未必有效。 大多數(shù)體內(nèi)利用siRNA的研究涉及在引入動物模型之前在細(xì)胞系中基因表達(dá)的操作或?qū)?siRNA摻入到病毒載體。體內(nèi)“裸露的” siRNA的遞送局限于位點(diǎn)專一性注射或者通過臨床不實(shí)用的高壓手段。此外，由于其高的水溶性和負(fù)電荷，全身施用的siRNA會被腎臟或肝臟快速清除。因此，優(yōu)選的是將siRNA裝入增加其體內(nèi)循環(huán)時(shí)間和預(yù)防細(xì)胞外核酸酶降解的藥物遞送系統(tǒng)(DDS)。先前用于治療癌癥的組合方法涉及利用兩種獨(dú)立的制劑模式將兩種協(xié)同作用的藥物分別施用，以遞送兩種活性藥物物質(zhì)。例如WO 2006113679公開在中性脂質(zhì)體中配制的siRNA用于第一施用，并且第二的、單獨(dú)的化療劑(例如多柔比星等)的施用可在第一施用之前、與第一施用同時(shí)或在第一施用之后進(jìn)行。目前的現(xiàn)有技術(shù)報(bào)道對于每一藥物個(gè)別特制的DDS，導(dǎo)致不方便的、多步施用。因此，需要含有siRNA和疏水藥物物質(zhì)的方便的、單一藥物遞送系統(tǒng)。本發(fā)明通過提供含有至少兩種藥物物質(zhì)(核酸分子例如siRNA和疏水藥物)的囊泡(vesicular)藥物遞送系統(tǒng)(VDDQ滿足了所述需求。本發(fā)明還提供制造所述VDDS的方法和施用所述VDDS 的方法。


圖1舉例說明合成含有核酸siRNA和疏水藥物物質(zhì)EP0906的脂質(zhì)體的合成反應(yīng)流程圖。圖2舉例說明囊泡藥物遞送系統(tǒng)的排布，其顯示引入脂質(zhì)雙層中的疏水藥物 EP0906和被水性圍套(aqueous enclosure)中的帶有任選的靶向部分的脂質(zhì)體包圍的核酸siRNA、和連接至藥物遞送系統(tǒng)的葉酸鹽/酯-PEG-脂質(zhì)。發(fā)明概述本發(fā)明是囊泡藥物遞送系統(tǒng)(VDDS)，其包含(a)包封有至少一個(gè)水性腔的至少一層脂質(zhì)雙層；(b)包含在所述至少一個(gè)水性腔中的至少一種短干擾核糖核酸(siRNA)分子；和(c)包埋在所述至少一層脂質(zhì)雙層中的至少一種疏水藥物。根據(jù)本發(fā)明，脂質(zhì)雙層包含為磷脂酰膽堿的中性脂質(zhì)。本發(fā)明還包括其中脂質(zhì)雙層包含磷脂酰膽堿和至少一種其他中性脂質(zhì)、陽離子脂質(zhì)和/或陰離子脂質(zhì)的組合的實(shí)施方案。本發(fā)明還包括如下實(shí)施方案，其中“靶向部分”或配體連接至VDDS，用于識別靶組織以改善由VDDS遞送的藥物物質(zhì)的細(xì)胞內(nèi)遞送。靶向部分可與親水聚合物(例如PEG)偶聯(lián)。本發(fā)明提供制備VDDS的方法，所述VDDS包括(a)包封有至少一個(gè)水性腔的至少一層脂質(zhì)雙層，其中脂質(zhì)包含磷脂酰膽堿；(b)包含在所述至少一個(gè)水性腔中的至少一種短干擾核糖核酸(siRNA)；和(c)包埋在所述至少一層脂質(zhì)雙層中的至少一種疏水藥物物質(zhì)。所述方法包括下述步驟(i)形成含有中性脂質(zhì)磷脂酰膽堿、至少一種疏水藥物和可與水混溶的有機(jī)溶劑的第一種溶液，(ii)通過從第一種溶液中蒸發(fā)可與水混溶的有機(jī)溶劑， 形成脂質(zhì)膜，(iii)形成含有至少一種短干擾核糖核酸(siRNA)和水溶液的第二種溶液， (iv)將(ii)的脂質(zhì)膜與(iii)的第二種溶液混合以形成VDDS。本發(fā)明還提供制備VDDS的方法，該VDDS包括(a)包封有至少一個(gè)水性腔的至少一層脂質(zhì)雙層，其中脂質(zhì)包含中性脂質(zhì)磷脂酰膽堿和至少一種其他中性脂質(zhì)、陽離子脂質(zhì)和/或陰離子脂質(zhì)的組合；(b)包含在所述至少一個(gè)水性腔中的至少一種短干擾核糖核酸 (siRNA)；和(c)包埋在所述至少一層脂質(zhì)雙層中的至少一種疏水藥物物質(zhì)。所述方法包括下述步驟(i)形成含有中性脂質(zhì)磷脂酰膽堿、其他中性或陽離子或陰離子脂質(zhì)、至少一種疏水藥物和可與水混溶的有機(jī)溶劑的第一種溶液，( )通過從第一種溶液中蒸發(fā)可與水混溶的有機(jī)溶劑形成脂質(zhì)膜，(iii)形成含有至少一種短干擾核糖核酸(siRNA)和水溶液的第二種溶液，(iv)將(ii)的脂質(zhì)膜與(iii)的第二種溶液混合以形成VDDS。本發(fā)明還提供將至少一種疏水藥物物質(zhì)和至少一種siRNA同時(shí)共遞送至個(gè)體的方法，所述方法包括將囊泡藥物遞送系統(tǒng)施用至個(gè)體，該囊泡藥物遞送系統(tǒng)包括(a)包封有至少一個(gè)水性腔的至少一層脂質(zhì)雙層；(b)包含在所述至少一個(gè)水性腔中的至少一種短干擾核糖核酸(siRNA)；和(c)包埋在所述至少一層脂質(zhì)雙層中的至少一種疏水藥物物質(zhì)。 根據(jù)本發(fā)明，所述脂質(zhì)雙層由至少一種為磷脂酰膽堿的中性脂質(zhì)和任選的至少一種其他中性脂質(zhì)、陽離子脂質(zhì)和/或陰離子脂質(zhì)形成。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及在單一藥物遞送系統(tǒng)(DDS)中含有疏水藥物物質(zhì)和抑制性核酸分子例如短干擾RNA(siRNA)的藥物組合物。本發(fā)明的DDS使得不需要分開施用疏水藥物和抑制性核酸分子例如siRNA，致使患者對治療方案的順應(yīng)性提高。如文中所用，術(shù)語“藥物遞送系統(tǒng)”或“DDS”指含有至少一種待施用至哺乳動物例
6如人類的治療藥物物質(zhì)或核酸分子的藥物組合物。藥物組合物是“藥學(xué)上可接受的”，其指所述化合物、材料、組合物和/或劑型，在可靠醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)是適合與哺乳動物尤其是人類的組織接觸的，不產(chǎn)生過度的毒性、刺激、過敏反應(yīng)和其他問題并發(fā)癥，具有合理的利益/ 風(fēng)險(xiǎn)。如文中所用，術(shù)語“藥物物質(zhì)”指任何具有治療作用或藥理學(xué)作用的化合物、物質(zhì)、 藥劑、核酸或氨基酸序列或者活性成分，并且其適合于施用至哺乳動物。該術(shù)語可指短干擾核糖核酸(“siRNA”)和疏水藥物之一或兩者。如文中所用，術(shù)語“短干擾RNA”或“siRNA”指通常具有15_50個(gè)堿基對并優(yōu)選 19-27個(gè)堿基對長度的雙鏈核糖核苷酸序列，其是高度負(fù)電荷的并主要溶于水中。siRNA可由兩個(gè)退火的核糖核苷酸序列或形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)的單個(gè)核糖核苷酸序列構(gòu)成。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)該理解siRNA負(fù)責(zé)RNA干擾，其為動物和植物中序列特異性轉(zhuǎn)錄后基因沉默的途徑。siRNA是由核糖核酸酶III從與沉默基因同源的較長雙鏈RNA(dsRNA)裂解產(chǎn)生的或者通過遞送合成的RNA至細(xì)胞產(chǎn)生的。設(shè)計(jì)用于基因表達(dá)靶向抑制的此類分子的技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的。本發(fā)明的藥物遞送系統(tǒng)是囊泡藥物遞送系統(tǒng)(“VDDS”)，其包含(a)包封有至少一個(gè)水性腔的至少一層脂質(zhì)雙層；(b)包含在所述至少一個(gè)水性腔中的至少一種短干擾核糖核酸(siRNA)分子；和(c)包埋在所述至少一層脂質(zhì)雙層中的至少一種疏水藥物物質(zhì)。 本發(fā)明的脂質(zhì)雙層由至少一種為磷脂酰膽堿的中性脂質(zhì)和任選的至少一種其他中性脂質(zhì)、 陽離子脂質(zhì)和/或陰離子脂質(zhì)形成。在本發(fā)明的一實(shí)施方案中，VDDS包含(a)包封一個(gè)水性腔的至少一層脂質(zhì)雙層， 其中脂質(zhì)由中性脂質(zhì)磷脂酰膽堿和任選的至少一種其他中性脂質(zhì)、陽離子脂質(zhì)和/或陰離子脂質(zhì)構(gòu)成；(b)包含在所述的一個(gè)水性腔中的短干擾核糖核酸(siRNA)分子；和(c)包埋在脂質(zhì)雙層中的疏水藥物物質(zhì)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，VDDS由多層囊泡(即具有多個(gè)雙層的脂質(zhì)體)構(gòu)成，其包含(a)包封有數(shù)個(gè)水性腔的數(shù)層脂質(zhì)雙層，其中脂質(zhì)由中性脂質(zhì)磷脂酰膽堿構(gòu)成或者由中性脂質(zhì)磷脂酰膽堿和至少一種其他中性脂質(zhì)的組合構(gòu)成；(b)包含在各個(gè)水性腔中的短干擾核糖核酸(siRNA)分子；和(c)包埋在數(shù)個(gè)脂質(zhì)雙層中的疏水藥物物質(zhì)。在任何一個(gè)上述實(shí)施方案中，可根據(jù)方便和需要配置各組分。例如，可將具有特定核苷酸序列的siRNA包封在VDDS的水性腔中?；蛘撸蓪⒕哂胁煌塑账嵝蛄械母鞣NsiRNA 分子包封在VDDS的一個(gè)或多個(gè)水性腔中。類似地，可將一種特定的疏水藥物包埋在脂質(zhì)雙層中，或者，可將各種不同的疏水藥物包埋在脂質(zhì)雙層中。本發(fā)明的VDDS包含一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)雙層，優(yōu)選包含至少一種為磷脂酰膽堿的中性脂質(zhì)，其形成脂質(zhì)體。示例包括單層囊泡藥物遞送系統(tǒng)(ULVDDQ或多層囊泡藥物遞送系統(tǒng)(MLVDDS)。ULVDDS包含一個(gè)圍繞水性腔的單一脂質(zhì)雙層，而MLVDD包含多個(gè)水性腔室和多個(gè)雙層?？蓪⒈景l(fā)明的藥物物質(zhì)包含于MLVDDS中，以使藥物物質(zhì)延時(shí)釋放，一旦疏水藥物物質(zhì)包埋在雙分子層間的水性流體中和/或疏水藥物物質(zhì)被引入雙分子層中，其會隨各個(gè)雙分子層的降解而釋放。本發(fā)明的VDDS預(yù)期具有50-250nm、優(yōu)選50-150nm并最優(yōu)選 50-100nm的粒度。形成脂質(zhì)體的脂質(zhì)是眾所周知的，并通常包括完全中性或帶負(fù)電荷的磷脂類。術(shù)語“磷脂”指含有至少一個(gè)磷基的疏水分子，其可是天然或合成的。例如，磷脂可包含含磷基團(tuán)及任選被0H、C00H、氧代、胺或者取代或未取代的芳基取代的飽和或不飽和的烷基。磷脂類在其無環(huán)(acylic)鏈的長度和不飽和度方面互相不同。普通技術(shù)人員應(yīng)該理解可根據(jù)需要的最終VDDS的大小來選擇磷脂。在PCT 公布 W002/100435AU W003/015757A1 和 W004029213A2 ；U. S.專利號 5，962，016,5, 030，453 和 6，680，068 ；和 U. S.專利申請?zhí)?2004/0208921 中描述了陽離子脂質(zhì)體。此外，已將中性脂質(zhì)并入陽離子脂質(zhì)體中，其已用于遞送siRNA至各種細(xì)胞類型。本發(fā)明中所用的形成脂質(zhì)體的脂質(zhì)或脂質(zhì)類包括至少一種為磷脂酰膽堿的中性脂質(zhì)。文中所用的術(shù)語“磷脂酰膽堿”指磷脂酰膽堿及其衍生物。適合用于本發(fā)明的磷脂酰膽堿的示例包括二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、磷脂酰膽堿(PLPC)、蛋黃磷脂酰膽堿(EPC)、二月桂酰磷脂酰膽堿 (DLPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、1-肉豆蔻酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿(MPPC)、1-棕櫚酰-2-肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(PMPC)、1-棕櫚酰-2-硬脂酰磷脂酰膽堿(PSPC)、1-硬脂酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿(SPPC)、棕櫚酰油酰磷脂酰膽堿(POPC)、溶血磷脂酰膽堿、二亞油酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)或其組合。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明中所用的磷脂酰膽堿選自二棕櫚酰磷脂酰膽堿 (DPPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、磷酸膽堿(DOPC)和二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)。本發(fā)明包括一個(gè)實(shí)施方案，其中至少一種為磷脂酰膽堿的中性脂質(zhì)和至少一種其他中性脂質(zhì)、陽離子脂質(zhì)和/或陰離子脂質(zhì)的組合用于形成本發(fā)明的VDDS的脂質(zhì)雙層。優(yōu)選地，中性脂質(zhì)與本發(fā)明VDDS中的磷脂酰膽堿組合。可用于本發(fā)明的中性脂質(zhì)的示例包括膽固醇、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、磷酸膽堿(DOPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、磷脂酰膽堿(PLPC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、蛋黃磷脂酰膽堿(EPC)、二月桂酰磷脂酰膽堿(DLPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、1-肉豆蔻酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿(MPPC)、1-棕櫚酰-2-肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(PMPC)、1-棕櫚酰-2-硬脂酰磷脂酰膽堿(PSPC)、1-硬脂酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿(SPPC)、1，2- 二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿(DAPC), 1,2- 二花生酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿(DBPC)、1， 2- 二二十碳烯酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿(DEPC)、棕櫚酰油酰磷脂酰膽堿(POPC)、溶血磷脂酰膽堿、二亞油酰磷脂酰膽堿二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺 (DMPE)、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、棕櫚酰油酰磷脂酰乙醇胺(POPE)、溶血磷脂酰乙醇胺或其組合。與本發(fā)明VDDS中的磷脂酰膽堿組合的中性脂質(zhì)可包括聚乙二醇(PEG)-偶聯(lián)的脂質(zhì)?？捎糜诒景l(fā)明的聚乙二醇(PEG)-偶聯(lián)的脂質(zhì)的示例包括羰基甲氧基聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰基乙醇胺(MPEG-750-DSPE、-MPEG-2000-DSPE 和 MPEG-5000-DSPE)、羰基甲氧基聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰基乙醇胺(MPEG-2000-DPPE和MPEG-5000-DPPE)、羰基甲氧基聚乙二醇-二肉豆蔻酰磷脂酰基乙醇胺(MPEG-2000-DMPE和MPEG-5000-DMPE)及其衍生物。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，中性脂質(zhì)選自膽固醇、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、 二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、磷酸膽堿(D0PC)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)和 mPEG-2000-DMPE。
8
適合用于本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)包括例如N-142，3-二油基氧基)丙基-N，N， N-三甲基氯化銨(DOTMA)、1，2-二(油?；趸?-3- '-三甲基銨基)丙烷(DOTAP)、 1，2_ 二油酰基-3-(4'-三甲基銨基)丁?；?sn-甘油(D0TB)、1，2-二油?；?3-琥珀酰基-sn-甘油膽堿酯(D0SC)、(4，-三甲基銨基)丁酸膽固醇基酯(ChoTB)、l，2-二油?；?3- 二甲基-羥基乙基溴化銨D0RI、1，2- 二油基氧基丙基-3- 二甲基-羥基乙基溴化銨(DORIE)、1，2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-二甲基-羥基乙基溴化銨(DMRIE)、0， 0' -二-十二烷基-N-p-(2-三甲基銨基乙基氧基)苯甲?；?N，N，N-三甲基氯化銨、脂精氨(Lipospermine)、DC-Chol (3a-N-(N'，N" -二甲基氨基乙烷)羰基膽固醇)、脂多 (L-賴氨酸)(lipopoly (L-Iysine))、N- (a-三甲基銨基乙?；?_ 二-十二烷基-D-谷氨酸酯氯化物(TMAG)或其組合。適合用于本發(fā)明的陰離子脂質(zhì)包括例如磷脂?；z氨酸、磷脂酰基甘油、二肉豆蔻酰磷脂?；z氨酸(DMPS)、二棕櫚酰磷脂?；z氨酸(DPPS)、腦磷脂?；z氨酸(BPS)、 二月桂酰磷脂?；视?DLPG)、二肉豆蔻酰磷脂酰基甘油(DMPG)、二棕櫚酰磷脂?；视?(DPPG)、二硬脂酰磷脂?；视?DSPG)、二油酰基磷脂?；视?DOPG)或其組合。此外，可將藥學(xué)上可接受的賦形劑用于本發(fā)明的VDDS中。可用于本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的賦形劑的示例包括脂質(zhì)氧化抑制劑(美國專利號5，605，703和WO 9202208)； 穩(wěn)定劑如甾醇、聚乙二醇(PEG)或生育酚、抗氧化劑如α-生育酚或其乙酸鹽；維生素E ；
胡蘿卜素；類胡蘿卜素類如α-胡蘿卜素、番茄紅素、葉黃素、玉米黃素等；和緩沖劑例如檸檬酸鹽緩沖劑、tris-緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑等；或酸化劑例如檸檬酸、馬來酸、草酸、 琥珀酸、酒石酸、鹽酸、氫溴酸、磷酸等?？蓪⑷魏问杷此蝗艿乃幬锘蛘甙辽僖环N疏水藥物的藥物組合 (combination)用于本發(fā)明。適當(dāng)?shù)乃幬锇垢哐獕核幬?、抗生素藥物和抗癌或抗腫瘤藥物?？梢氲奖景l(fā)明VDDS的磷脂雙層中的疏水藥物的示例包括但不限于氮芥類似物如環(huán)磷酰胺、美法侖、異環(huán)磷酰胺或曲磷胺(trophosphamide)；乙烯亞胺類如塞替哌；亞硝基脲類如卡莫司?。籰eased agents如替莫唑胺或達(dá)卡巴嗪；葉酸的類似抗代謝物例如甲氨蝶呤或雷替曲塞；嘌呤類似物例如硫鳥嘌呤、克拉屈濱或氟達(dá)拉濱；嘧啶的類似物如氟尿嘧啶、替加氟或吉西他濱；長春花屬的生物堿和類似物如長春堿、長春新堿或長春瑞濱；鬼臼毒素的衍生物如依托泊苷；紫杉烷類如多西他賽或紫杉醇；蒽環(huán)類如多柔比星、表柔比星、伊達(dá)比星和米托蒽醌；其他細(xì)胞毒抗生素如博來霉素和絲裂霉素；鉬化合物如順鉬、卡鉬和奧沙利鉬；單克隆抗體如利妥昔單抗；其他抗腫瘤物質(zhì)例如噴司他丁、米替福新、雌莫司汀、托泊替康、伊立替康、比卡魯胺、丙卡巴胼、氮芥、環(huán)磷酰胺、喜樹堿、異環(huán)磷酰胺、美法侖、苯丁酸氮芥、白消安、亞硝基脲(nitrosurea)、放線菌素D、柔紅霉素、多柔比星、博來霉素、普卡霉素(plicomycin)、絲裂霉素、依托泊苷(VP16)、他莫昔芬、雷洛昔芬、雌激素受體結(jié)合劑、紫杉醇、吉西他濱、諾維本、法呢基-蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑、反鉬、5-氟尿嘧啶、新長春堿、長春堿、甲氨蝶呤、紫杉烷類、喜樹堿類、多柔比星、米歇爾胺BOiiichellamine B)和長春新堿及其組合。術(shù)語“紫杉烷類”指紫杉醇、三尖杉寧堿、巴卡亭IIIUO-去乙?；涂ㄍ?III、去乙?；仙即?、去乙?；?7-表紫杉醇及其衍生物和前體。在本發(fā)明的一實(shí)施方案中，疏水藥物物質(zhì)是EP0906 (埃坡霉素B)，其難溶于水 (<0. lmg/1)，但易溶于有機(jī)溶劑(乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷等)。因此，將EP09906引入VDDS中是有利的，優(yōu)選引入脂質(zhì)體VDDS中以提高施用期間的有效濃度。就機(jī)制而言，SiRNA和EP0906的作用方式不同。EP0906破壞細(xì)胞的微管結(jié)構(gòu)，致使細(xì)胞死亡，而siRNA可通過利用所關(guān)注基因(“靶基因”)的mRNA的互補(bǔ)核酸序列靶向所關(guān)注的特定基因序列。所述siRNA的定向引起通過稱為RISC(RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體)的多蛋白復(fù)合體的靶mRNA的催化降解，并由此，向下調(diào)節(jié)該mRNA編碼的蛋白質(zhì)。通過將其引入脂質(zhì)體或多層囊泡體的大分子結(jié)構(gòu)中，本發(fā)明克服了 EP0906和其他水難溶藥物的溶解問題。通過將siRNA引入到脂質(zhì)體或多層囊泡體的水性內(nèi)部籠中，本發(fā)明還克服了 siRNA被快速降解和排泄的缺點(diǎn)，并且經(jīng)調(diào)節(jié)細(xì)胞攝取同時(shí)改進(jìn)了兩種藥物物質(zhì)的藥代動力學(xué)和藥效學(xué)特性。將兩種物理化學(xué)性質(zhì)不同的藥學(xué)活性藥物物質(zhì)整合至一個(gè)藥物遞送系統(tǒng)中的所謂的“組合(combo)，，的方法克服了單獨(dú)的兩種藥物的一系列缺點(diǎn)， 例如(i)提高水難溶藥物的有效局部濃度；(ii)增加疏水藥物和siRNA的保護(hù)，使其免于水解和/或特定酶(酯酶、核酸酶)的降解；(iii)改進(jìn)所述兩種藥物物質(zhì)的藥代動力學(xué)和藥效學(xué)特性；和(iv)經(jīng)兩個(gè)不同分子通路攻擊靶細(xì)胞而產(chǎn)生協(xié)同作用(例如EP0906的微管抑制，和mRNA的靶向特異性降解)。siRNA的用途在本領(lǐng)域是眾所周知的。在本發(fā)明的VDDS的設(shè)計(jì)中，至少一種siRNA 靶向所關(guān)注的特定基因序列，引起該mRNA編碼的蛋白的向下調(diào)節(jié)。通過設(shè)計(jì)與所關(guān)注mRNA 同源的siRNA序列，可靶向任何受關(guān)注的可藥化(drugable)或非可藥化基因。隨著現(xiàn)在整個(gè)人類基因組的測序，其任何部分可作為設(shè)計(jì)用于本發(fā)明VDDS中的靶序列。例如，可設(shè)計(jì) siRNA靶向癌基因如BC1-2，引起癌細(xì)胞增殖的下調(diào)和阻止。許多癌基因的序列是已知的， 并可容易獲得。示例包括EphA2、黏著斑激酶(FAK)、β 2-腎上腺素能受體(β 2AR)、ESRU 腫瘤抑制蛋白pRB、MDR-1、NKkB禾口 Nek2。因此，用于本發(fā)明的siRNA的序列可從血漿DNA或人類基因組獲得。siRNA是由核糖核酸酶III從與沉默基因同源的較長雙鏈RNA(dsRNA)裂解產(chǎn)生的或者通過遞送合成的 RNA至細(xì)胞產(chǎn)生的。靶基因序列可以是可藥化的或者是非可藥化的。在本發(fā)明的VDDS中所用的siRNA還可衍生自已知的反義序列。用于本發(fā)明的siRNA是通常具有15-50個(gè)堿基對長度的雙鏈核糖核苷酸序列，其是高度負(fù)電荷的并主要溶于水中。優(yōu)選地，本發(fā)明的siRNA序列具有大約19至大約27個(gè)堿基對的長度，并且是與靶序列高度同源或100%同源的。siRNA可以是被鈍端的(blunt ended)或者也可具有堿基對懸突。siRNA還可包含由絲氨酸-天冬氨酸-蘇氨酸構(gòu)成的重復(fù)氨基酸序列和/或磷硫酰骨架修飾。各類型RNA可作為用于本發(fā)明的VDDS中的siRNA。例如，可使用雙鏈RNA (dsRNA)、 微RNA(miRNA)、短發(fā)夾RNA(shRNA)或其組合。本發(fā)明中所用的脂質(zhì)與siRNA的比率可以是10 1(質(zhì)量)_20 1 (質(zhì)量)。優(yōu)選地，本發(fā)明中所用的脂質(zhì)與siRNA的比率是大約14 1。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，可將VDDS和包含本發(fā)明VDDS的藥物組合物配制成各種適當(dāng)?shù)闹苿┎⒔?jīng)口服、以氣霧劑形式、腸胃外、皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、腹膜間 (interperitoneally)、經(jīng)直腸、局部和陰道施用。優(yōu)選地，將VDDS與藥學(xué)上可接受的載體混合并靜脈內(nèi)(iv)、腹膜內(nèi)(ip)或局部 (tp)施用。經(jīng)iv或ip施用致使副作用例如注射位點(diǎn)的炎癥風(fēng)險(xiǎn)降低。
根據(jù)本發(fā)明，可將“靶向部分”或配體連接至VDDS，用于識別靶組織，并由此提高經(jīng)VDDS遞送的藥物物質(zhì)的細(xì)胞內(nèi)遞送，例如抗體、抗體片段、多糖、糖類和本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其他配體或其他物質(zhì)和/或方法(Klibanov等人，J. Liposome Res. ,2(3) 321 (1992))?？蓪⑸窠?jīng)節(jié)苷脂、多糖和聚合物例如聚乙二醇連接到VDDS，以降低其體內(nèi)經(jīng)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的非特異性攝取。還已將各種細(xì)胞和病毒蛋白引入到脂質(zhì)體中，用于靶向目的且由于其融合性質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，將靶向部分與親水聚合物(例如PEG)偶聯(lián)，以修飾靶向特異性。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，靶向部分是葉酸鹽/酯 (folate)-mPEG-DSPE轉(zhuǎn)鐵蛋白、α -生育酚、維甲酸或RGD肽。本發(fā)明提供制備VDDS的方法，所述VDDS包含(a)包封有至少一個(gè)水性腔的至少一層脂質(zhì)雙層；(b)包含在所述至少一個(gè)水性腔中的至少一種短干擾核糖核酸(siRNA)；和 (c)包埋在所述至少一層脂質(zhì)雙層中的至少一種疏水藥物物質(zhì)。所述方法包括下述步驟 (i)形成含有中性脂質(zhì)磷脂酰膽堿、至少一種疏水藥物和可與水混溶的有機(jī)溶劑的第一種溶液，(ii)通過從第一種溶液中蒸發(fā)可與水混溶的有機(jī)溶劑形成脂質(zhì)膜，(iii)形成含有至少一種短干擾核糖核酸(siRNA)和水溶液的第二種溶液，和(iv)將(ii)的脂質(zhì)膜與 (iii)的第二種溶液混合以形成VDDS。制備本發(fā)明的VDDS所用的脂質(zhì)與siRNA的比率可以是10 1(質(zhì)量)_20 1(質(zhì)量)。優(yōu)選地，用于本發(fā)明的脂質(zhì)與siRNA的比率是大約14 1。本發(fā)明中所用的“可與水混溶的有機(jī)溶劑”依據(jù)疏水藥物在該溶劑中的溶解度、溶劑與水互溶的程度和溶劑的毒性來選擇?？墒褂玫娜軇┑氖纠ǖ幌抻诙谆鶃嗧?(DMSO) ；二甲基乙酰胺(DMA) ；二甲基甲酰胺；各種醇類例如乙醇、乙二醇、甘油、丙二醇和各種聚乙二醇。根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)施方案，制備VDDS的方法使用乙醇作為可與水混溶的有機(jī)溶劑，來形成含有至少一種磷脂和至少一種疏水藥物的混合物，進(jìn)一步與包含至少一種短干擾核醣核酸(siRNA)的水溶液混合，以形成VDDS。用于形成含有siRNA的第二種溶液的水溶液包含pH 3-6優(yōu)選pH 4的緩沖劑和金屬鹽。該水溶液根據(jù)siRNA的溶解度來選擇。普通技術(shù)人員應(yīng)該知道如何選擇用于本發(fā)明水溶液的緩沖液和金屬鹽。適當(dāng)?shù)木彌_劑的示例包括乙酸的任何鹽(包括乙酸鈉和乙酸鉀)、琥珀酸鹽緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑、檸檬酸鹽緩沖劑、HEPES、PBS和任何本領(lǐng)域公知的其他緩沖劑。適當(dāng)?shù)慕饘冫}的示例包括氯化鈣、氯化鋅和氯化鎂?？蓪⑻岣咚幬锓€(wěn)定性或降低藥物毒性的添加劑例如脂質(zhì)氧化抑制劑(U.S.專利號5，605，703和WO 9202208)和穩(wěn)定劑如甾醇類、聚乙二醇(PEG)或生育酚加到VDDS中。 當(dāng)加入到VDDS中時(shí)，留醇類例如膽固醇通過使小分子和離子更不易透過所述脂質(zhì)雙層和降低脂質(zhì)雙層間蛋白質(zhì)的運(yùn)輸而提高穩(wěn)定性?？衫帽绢I(lǐng)域普通技術(shù)人員所公知的方法，將用于識別靶組織的“靶向部分”或配體連接至VDDS (Klibanov等人，J. Liposome Res. ,2(3) :321 (1992))。將這些公知的方法引入文中作為參考。可利用切向(膜)流過濾(TFF)系統(tǒng)或透析來除去游離、非脂質(zhì)體藥物和siRNA。本發(fā)明還提供制備VDDS的方法，該VDDS包含(a)包封有至少一個(gè)水性腔的至少一層脂質(zhì)雙層，所述脂質(zhì)雙層包含中性脂質(zhì)磷脂酰膽堿和至少一種其他中性脂質(zhì)、陽離子脂質(zhì)和/或陰離子脂質(zhì)的組合；(b)包含在所述至少一個(gè)水性腔中的至少一種短干擾核糖
11核酸(SiRNA)；和(c)包埋在所述至少一層脂質(zhì)雙層中的至少一種疏水藥物物質(zhì)。所述方法包括下述步驟(i)形成包含中性脂質(zhì)磷脂酰膽堿、其他中性或陽離子或陰離子脂質(zhì)、至少一種疏水藥物和可與水混溶的有機(jī)溶劑的第一種溶液，( )通過從第一種溶液中蒸發(fā)可與水混溶的有機(jī)溶劑形成脂質(zhì)膜，(iii)形成含有至少一種短干擾核糖核酸(siRNA)和水溶液的第二種溶液，和(iv)將(ii)的脂質(zhì)膜與(iii)的第二種溶液混合以形成VDDS。制備本發(fā)明VDDS所用的脂質(zhì)與siRNA的比率可以是10 1(質(zhì)量)_20 1(質(zhì)量)。優(yōu)選地，本發(fā)明中所用的脂質(zhì)與siRNA的比率是大約14 1。本發(fā)明VDDS的優(yōu)選配方具有81. 9 15.4 2 0. 7 (摩爾)比率的 PC chol DMPE-PEG2000 D，L-α -生育酚(維生素E)，其中“PC”是磷脂酰膽堿， “chol”是膽固醇，并且“DMPE-PEG2000”是二肉豆蔻基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000。脂質(zhì)-比-siRNA的優(yōu)選比率是14 1(質(zhì)量)。嵌入脂質(zhì)體雙分子層的藥物的量取決于具體的藥物。對于EP0906，嵌入雙分子層的最終濃度優(yōu)選是0.5mg/mL。脂質(zhì)體水性內(nèi)部中 siRNA的蓄積優(yōu)選終濃度是大約1-1. ang/mL。本發(fā)明還提供同時(shí)共遞送至少一種疏水藥物物質(zhì)和至少一種siRNA至個(gè)體的方法，所述方法包括施用囊泡藥物遞送系統(tǒng)至個(gè)體，所述囊泡藥物遞送系統(tǒng)包含(a)包封有至少一個(gè)水性腔的至少一層脂質(zhì)雙層；(b)包含在所述至少一個(gè)水性腔中的至少一種短干擾核糖核酸(siRNA)；和(c)包埋在所述至少一層脂質(zhì)雙層中的至少一種疏水藥物物質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明，脂質(zhì)雙層包含為磷脂酰膽堿的中性脂質(zhì)。本發(fā)明還包括一實(shí)施方案，其中脂質(zhì)雙層包含磷脂酰膽堿和至少一種其他中性脂質(zhì)、陽離子脂質(zhì)和/或陰離子脂質(zhì)的組合。本發(fā)明的VDDS可用于治療各種疾病，尤其用于腫瘤學(xué)應(yīng)用。例如，可將含有 EP0906和siRNA的VDDS用于治療卵巢癌，其中施用優(yōu)選腹膜內(nèi)或全身/腸胃外施用。還可將含有EP0906和siRNA的本發(fā)明的VDDS用于治療乳腺癌、肺癌、黑色素瘤、腹膜癌、輸卵管癌和結(jié)腸癌。優(yōu)選的劑量范圍是每單次施用0. l-10mg/kg siRNA，其相應(yīng)于每單次施用 0.05-5mg/kg EP0906。下面的實(shí)施例是舉例說明性的，但不用于限制文中所述的本發(fā)明的范圍。實(shí)施例僅旨在于建議實(shí)施本發(fā)明的方法。實(shí)施例1無靶向部分的脂質(zhì)膜的制備將磷脂酰膽堿(PLPC，104.4mg)、膽固醇(IOmg)、MPEG-2000-DMPE (9mg)和 D， L- α -生育酚(0. 49mg)溶解于2mL乙醇中，以得到62. 01mg/mL (或者0. 0840mmol/mL)。加入EP0906 (22. Hmg)，并將其完全溶解。從所述溶液中，吸取11 μ L移至獨(dú)立的圓底燒瓶中，并將所有的乙醇蒸發(fā)以產(chǎn)生脂質(zhì)膜。具有靶向部分的脂質(zhì)膜的制備本實(shí)施例中所用的靶向部分是FA-mPEG-DSPE。將磷脂酰膽堿(PLPC，104. Img)、 膽固醇(10. 22mg)、mPEG-2000-DMPE(9mg)、FA-PEG3000-DSPE(2. 2mg)和 D，L-a-生育酚(0. 52mg)溶解于2mL乙醇中以得到62. 92mg/mL(或0. 084mmol/mL)。加入 EP0906Q2.46mg)，并將其完全溶解。從所述溶液中，吸取1113 μ L轉(zhuǎn)移至獨(dú)立的圓底燒瓶中，并將乙醇蒸發(fā)以產(chǎn)生脂質(zhì)膜。siRNA水溶液的制備
在本實(shí)施例中，使用螢光素酶基因特異性siRNA。通過混合，制備1000 μ L siRNA 貯備液(5mg/mL)、125 μ L CaCl2 (0· 1Μ)、125 μ L 乙酸緩沖液(ρΗ4,1Μ)和 250 μ L 水的 siRNA 溶液。將siRNA溶液在45°C的水浴中溫?zé)?。VDDS 的制備將特定的脂質(zhì)膜與siRNA水溶液混合并水合，以形成脂復(fù)合物(lipoplex)溶液。 將脂復(fù)合物溶液在45°C的熱水浴中放置30min，然后加入1000 μ L乙醇。利用液氮將脂復(fù)合物溶液冷凍，并在45°C的熱水浴中溫?zé)?。將冷凍和溫?zé)岵襟E重復(fù)3次，以增加對水溶性藥物物質(zhì)的捕獲效率，形成本發(fā)明VDDS。微粒分析顯示140士56nm的平均大小和0. 5的PDI， 及通過凝膠電泳測定的80%的包封效率。利用切向(膜)流過濾(TFF)系統(tǒng)完成游離、非脂質(zhì)體EP0906和siRNA的除去。
權(quán)利要求
1.囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其包含a)包封有至少一個(gè)水性腔的至少一層脂質(zhì)雙層，其中脂質(zhì)包含至少一種為磷脂酰膽堿的中性脂質(zhì)；b)包含在所述至少一個(gè)水性腔中的至少一種短干擾核糖核酸(siRNA)；和c)包埋在所述至少一層脂質(zhì)雙層中的至少一種疏水藥物物質(zhì)。
2.權(quán)利要求1的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其中脂質(zhì)還包含至少一種其他的中性脂質(zhì)、陽離子脂質(zhì)或陰離子脂質(zhì)。
3.權(quán)利要求1或2的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其中至少一種siRNA包括雙鏈RNA(dsRNA)、 微RNA(miRNA)、短發(fā)夾RNA(shRNA)或其組合。
4.權(quán)利要求1或2的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其中所述siRNA的核苷酸序列衍生自反義寡核苷酸、血漿DNA或人類基因組。
5.權(quán)利要求1或2的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其中疏水藥物選自紫杉烷類、多西他賽、紫杉醇、順鉬(CDDP)、卡鉬、丙卡巴胼、氮芥、環(huán)磷酰胺、喜樹堿、異環(huán)磷酰胺、美法侖、苯丁酸氮芥、白消安、亞硝基脲、放線菌素D、柔紅霉素、多柔比星、博來霉素、普卡霉素、絲裂霉素、 依托泊苷(VP16)、他莫昔芬、雷洛昔芬、雌激素受體結(jié)合劑、泰素、吉西他濱、諾維本、法呢基-蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑、反鉬、5-氟尿嘧啶、新長春堿、長春堿、甲氨蝶呤、環(huán)孢霉素、米歇爾胺B、苔蘚抑素1、軟海綿素、順鉬、EP0906或其組合。
6.權(quán)利要求5的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其中疏水藥物是EP0906。
7.權(quán)利要求2的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其中所述至少一種其他中性脂質(zhì)是膽固醇、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、磷酸膽堿(DOPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、磷脂酰膽堿(PLPC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、蛋黃磷脂酰膽堿(EPC)、二月桂酰磷脂酰膽堿(DLPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、1-肉豆蔻酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿(MPPC)、1-棕櫚酰-2-肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(PMPC)、1-棕櫚酰-2-硬脂酰磷脂酰膽堿 (PSPC)、1-硬脂酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿(SPPC), 1,2- 二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿(DAPC), 1,2- 二花生酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿(DBPC)、1，2- 二- 二十碳烯酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿(DEPC)、棕櫚酰油酰磷脂酰膽堿(POPC)、溶血磷脂酰膽堿、二亞油酰磷脂酰膽堿二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、棕櫚酰油酰磷脂酰乙醇胺(POPE)、溶血磷脂酰乙醇胺、羰基甲氧基聚乙二醇-二硬脂酰磷脂?；掖及?MPEG-750-DSPE、-MPEG-2000-DSPE 和 MPEG-5000-DSPE)、羰基甲氧基聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂?；掖及?MPEG-2000-DPPE和MPEG-5000-DPPE)、羰基甲氧基聚乙二醇-二肉豆蔻酰磷脂?；掖及?MPEG-2000-DMPE和MPEG-5000-DMPE)或其組合。
8.權(quán)利要求7的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其中中性脂質(zhì)是DPPC、DSPC、DOPC,DMPC, PLPC, PE、MPEG-2000-DMPE 或其組合。
9.權(quán)利要求2的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其中所述至少一種其他陽離子脂質(zhì)是N-I-Q， 3-二油基氧基)丙基-N，N，N-三甲基氯化銨(DOTMA)、1，2-二(油?；趸?-3- '-三甲基銨基)丙烷(DOTAP)、1，2-二油?；?3-(4'-三甲基銨基)丁?；?sn-甘油(DOTB)、 1，2-二油?；?3-琥珀?；?sn-甘油膽堿酯(DOSC)、(4，-三甲基銨基)丁酸膽固醇基酯 (ChoTB) ,1,2- 二油?；?3- 二甲基-羥基乙基溴化銨D0RI、1，2- 二油基氧基丙基_3_ 二甲基-羥基乙基溴化銨(DORIE) ,1,2- 二肉豆蔻基氧基丙基-3- 二甲基-羥基乙基溴化銨 (DMRIE)、0，0' -二-十二烷基-N-p-(2-三甲基銨基乙氧基)苯甲?；?N，N，N-三甲基氯化銨、脂精氨、DC-Chol (3a-N-(N'，N" -二甲基氨基乙烷)羰基膽固醇)、脂多(L-賴氨酸)、N-(a-三甲基銨基乙?；?-二-十二烷基-D-谷氨酸酯氯化物(TMAG)或其組合。
10.權(quán)利要求2的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其中所述至少一種其他陰離子脂質(zhì)是磷脂?；z氨酸、磷脂?；视?、二肉豆蔻酰磷脂?；z氨酸(DMPQ、二棕櫚酰磷脂?；z氨酸 (DPPS)、腦磷脂?；z氨酸(BPS)、二月桂酰磷脂?；视?DLPG)、二肉豆蔻酰磷脂?；视?DMPG)、二棕櫚酰磷脂?；视?DPPG)、二硬脂酰磷脂?；视?DSPG)、二油?；字；视?DOPG)或其組合。
11.權(quán)利要求1或2的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其還包含其他藥學(xué)上可接受的賦形劑。
12.權(quán)利要求11的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其中其他藥學(xué)上可接受的賦形劑是選自膽固醇、聚乙二醇(PEG)或生育酚的穩(wěn)定劑。
13.權(quán)利要求1或2的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其中siRNA抑制促進(jìn)增生細(xì)胞或癌細(xì)胞生長的基因的翻譯。
14.權(quán)利要求1或2的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其中siRNA是15-50個(gè)核堿基。
15.權(quán)利要求13的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其中基因選自EphA2、黏著斑激酶(FAK)、β2-腎上腺素能受體(P2AR)、ESRl、腫瘤抑制蛋白pRB、MDR-I、NKkB和Nek2。
16.權(quán)利要求1的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其還包含靶向部分。
17.權(quán)利要求16的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其靶向部分選自葉酸鹽/酯-mPEG-DSPE轉(zhuǎn)鐵蛋白、α-生育酚、維甲酸或RGD肽。
18.權(quán)利要求9的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其還包含膽固醇、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺聚乙二醇 2000 (DMPE-PEG2000)和生育酚。
19.權(quán)利要求18的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其中PC膽固醇DMPE-PEG2000 生育酚的比率是大約81. 9 15. 4 2 0. 7(摩爾)。
20.權(quán)利要求1的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其中脂質(zhì)siRNA的比率是10 1(質(zhì)量)至 20 1(質(zhì)量)。
21.權(quán)利要求20的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其中磷脂siRNA的比率是14 1 (質(zhì)量)。
22.權(quán)利要求1的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其中疏水藥物的濃度是至少約0.5mg/mL。
23.權(quán)利要求1的囊泡藥物遞送系統(tǒng)，其中siRNA的濃度是約1-1.ang/mL。
24.制備權(quán)利要求1的囊泡藥物遞送系統(tǒng)的方法，所述方法包括a)形成包含至少一種為磷脂酰膽堿的中性脂質(zhì)、至少一種疏水藥物和可與水混溶的有機(jī)溶劑的第一種溶液，b)通過從第一種溶液中蒸發(fā)可與水混溶的有機(jī)溶劑形成脂質(zhì)膜，c)形成包含至少一種短干擾核糖核酸(siRNA)和水溶液的第二種溶液，d)將(b)的脂質(zhì)膜與(c)的第二種溶液混合以形成囊泡藥物遞送系統(tǒng)。
25.制備權(quán)利要求2的囊泡藥物遞送系統(tǒng)的方法，所述方法包括a)形成含有至少一種為磷脂酰膽堿的中性脂質(zhì)；至少一種其他中性脂質(zhì)、陽離子脂質(zhì)或陰離子脂質(zhì)；至少一種疏水藥物和可與水混溶的有機(jī)溶劑的第一種溶液，b)通過從第一種溶液中蒸發(fā)可與水混溶的有機(jī)溶劑形成脂質(zhì)膜，c)形成含有至少一種短干擾核糖核酸(SiRNA)和水溶液的第二種溶液，和d)將(b)的脂質(zhì)膜與(c)的第二種溶液混合以形成囊泡藥物遞送系統(tǒng)。
26.權(quán)利要求M或25的方法，其中將靶向部分加入到(a)的第一種溶液中。
27.權(quán)利要求對或25的方法，其中所述疏水藥物是紫杉烷類、喜樹堿、多柔比星、米歇爾胺B、長春新堿、苔蘚抑素1、軟海綿素、順鉬、EP0906、多西他賽、紫杉醇、順鉬(CDDP)、 卡鉬、丙卡巴胼、氮芥、環(huán)磷酰胺、喜樹堿、異環(huán)磷酰胺、美法侖、苯丁酸氮芥、白消安、亞硝基脲、放線菌素D、柔紅霉素、多柔比星、博來霉素、普卡霉素、絲裂霉素、依托泊苷(VP16)、他莫昔芬、雷洛昔芬、雌激素受體結(jié)合劑、泰素、吉西他濱、諾維本、法呢基-蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑、反鉬、5-氟尿嘧啶、新長春堿、長春堿、甲氨蝶呤和環(huán)孢霉素或其組合。
28.權(quán)利要求對或25的方法，其中所述可與水混溶的有機(jī)溶劑選自醇、丙酮、二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、二甲基乙酰胺或聚乙二醇。
29.權(quán)利要求觀的方法，其中可與水混溶的有機(jī)溶劑是選自甲醇、乙二醇、甘油、丙二醇或乙醇的醇。
30.權(quán)利要求M或25的方法，其中所述至少一種其他中性脂質(zhì)選自二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、磷酸膽堿(DOPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、 磷脂酰膽堿(PLPC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、蛋黃磷脂酰膽堿(EPC)、二月桂酰磷脂酰膽堿 (DLPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、1-肉豆蔻酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿(MPPC)、1-棕櫚酰-2-肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(PMPC)、1-棕櫚酰-2-硬脂酰磷脂酰膽堿(PSPC)、1-硬脂酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿(SPPC) ,1,2- 二硬脂酰-sn-甘油_3_磷酸膽堿(DAPC)、1，2- 二花生酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿(DBPC)、1，2- 二- 二十碳烯酰-sn-甘油_3_磷酸膽堿(DEPC)、 棕櫚酰油酰磷脂酰膽堿(POPC)、溶血磷脂酰膽堿、二亞油酰磷脂酰膽堿二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、棕櫚酰油酰磷脂酰乙醇胺(POPE)和溶血磷脂酰乙醇胺或其組合。
31.權(quán)利要求M或25的方法，其中將穩(wěn)定劑加入到(a)的第一種溶液中。
32.權(quán)利要求31的方法，其中穩(wěn)定劑是膽固醇、聚乙二醇(PEG)或生育酚。
33.將疏水藥物和siRNA同時(shí)共遞送至個(gè)體的方法，所述方法包括施用權(quán)利要求1的囊泡藥物遞送系統(tǒng)至個(gè)體。
全文摘要
廣泛地講，本發(fā)明涉及分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、腫瘤學(xué)和治療化合物的遞送領(lǐng)域。具體地講，本發(fā)明涉及含有在單一藥物遞送系統(tǒng)中的疏水性藥物和抑制性核酸分子例如短干擾RNA(siRNA)的藥物組合物，及其制備方法和施用方法。
文檔編號A61K9/127GK102361631SQ201080013049
公開日2012年2月22日 申請日期2010年3月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月25日
發(fā)明者G·弗蘭切塞, M·凱勒 申請人:諾瓦提斯公司