專利名稱：生物膜有機(jī)體的抑制的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在關(guān)于生物膜的預(yù)防和治療中有用的產(chǎn)品、組合物、方法和用途。
背景技術(shù)：
微生物生物膜是嵌入在聚合物質(zhì)的細(xì)胞外基質(zhì)中的微生物細(xì)胞的群落并且附著在生物或非生物表面。在這些生物膜中可以發(fā)現(xiàn)一系列的微生物(細(xì)菌、真菌和/或原生動(dòng)物，以及相關(guān)的噬菌體和其他病毒)。生物膜在自然界中普遍存在，通常存在于大多數(shù)環(huán)境中。由于生物膜與許多感染相關(guān)，尤其是它們有助于感染治療的頑抗性(recalcitrance)， 因此日益受到科學(xué)界和醫(yī)學(xué)界的認(rèn)可。生物膜是許多哺乳動(dòng)物疾病狀態(tài)的病因(etiologic agents)并且與80%的人類感染有關(guān)。感染的實(shí)例包括皮膚和傷口感染、中耳感染、胃腸道感染、腹膜感染、泌尿生殖道感染、口腔軟組織感染、牙菌斑的形成、眼部感染(包括隱形眼鏡污染)、心內(nèi)膜炎、囊性纖維化中的感染，以及內(nèi)置醫(yī)療裝置的感染，所述內(nèi)置醫(yī)療裝置例如人工關(guān)節(jié)、牙植入物、導(dǎo)管和心臟植入物。如由美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI)和歐洲抗菌藥物敏感性試驗(yàn)委員會(huì)(European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing,EUCAST)所描述的，浮游微生物(即懸浮在液體培養(yǎng)基中或者在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的微生物)通常用作抗微生物敏感性研究的模型。生物膜中的微生物對(duì)抗微生物治療的抗性顯著大于它們的浮游生物相對(duì)物(counterparts)。然而，還沒有用于研究生物膜微生物的抗生素敏感性的標(biāo)準(zhǔn)化方法。生物膜的形成不僅僅限于微生物附著在表面上的能力。在生物膜中生長(zhǎng)的微生物與生物膜在其上最初發(fā)育的實(shí)際物質(zhì)層(physical substratum)的相互作用相比，更加能夠彼此之間相互作用。例如，這種現(xiàn)象有助于接合基因轉(zhuǎn)移，所述接合基因轉(zhuǎn)移在生物膜中的細(xì)胞之間的發(fā)生率大于在浮游生物細(xì)胞之間的發(fā)生率。該現(xiàn)象表示在細(xì)菌之間水平基因轉(zhuǎn)移的機(jī)會(huì)增加，并且這是重要的，因?yàn)樵摤F(xiàn)象可以促進(jìn)從抗敏感性微生物轉(zhuǎn)移為抗生素抗性或毒性決定基因。細(xì)菌可以通過稱為群體感應(yīng)的系統(tǒng)相互交流，通過該群體感應(yīng)系統(tǒng)， 將信號(hào)分子釋放到環(huán)境中并且可以通過周圍微生物檢測(cè)其濃度。群體感應(yīng)系統(tǒng)使細(xì)菌間相互作用成為可能，從而增強(qiáng)它們的生存能力。對(duì)群體感應(yīng)的響應(yīng)包括對(duì)營(yíng)養(yǎng)物的可用性的適應(yīng)、防御可以競(jìng)爭(zhēng)相同養(yǎng)分的其它微生物和避免對(duì)細(xì)菌具有潛在危險(xiǎn)性的毒性化合物。 在宿主(例如，人類、其它動(dòng)物或植物)的感染過程中，對(duì)于致病菌來說非常重要的是，協(xié)調(diào)它們的毒性以逃避宿主的免疫應(yīng)答從而能夠建立成功的感染。生物膜的形成在許多感染性疾病例如囊性纖維化和牙周炎中，在血流和尿路感染中以及由內(nèi)置醫(yī)療裝置的存在而引起的結(jié)果中具有關(guān)鍵作用。生物膜相關(guān)的微生物在它們的宿主中通過建議的機(jī)制引起疾病，所述建議的機(jī)制包括以下(i)抗微生物劑通過生物膜基質(zhì)的延遲穿透；(ii)細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)塊與內(nèi)置醫(yī)療裝置生物膜的分離；(iii)內(nèi)毒素的產(chǎn)生；(iv)對(duì)宿主免疫系統(tǒng)的抗性；(ν)通過抗微生物抗性和/或毒性決定基因的水平基因轉(zhuǎn)移提供用來產(chǎn)生抗性生物的小生境；和(vi)生長(zhǎng)速率的改變(即代謝休眠)(Donlan禾口 Costerton，Clin Microbiol Rev 15 167—193，2002 ;Parsek禾口 Singh，Annu Rev Microbiol 57 :677-701,2003 ；Costerton JW,Resistance of biofilms to stress. In'The biofilm primer'。(Springer Berlin Heidelberg)。第 56-64 頁.2007)。最近的實(shí)驗(yàn)證據(jù)已經(jīng)表明，在生物膜之內(nèi)存在專門的非代謝持留細(xì)胞(persister cells)(休眠細(xì)胞)的小亞群。一般認(rèn)為，這些細(xì)胞是生物膜對(duì)于抗微生物劑的高抗藥性/耐藥性的原因。耐多藥(Multi-drug-tolerant)的持留細(xì)胞存在于浮游生物和生物膜群體中，并且似乎酵母和細(xì)菌已經(jīng)演變成對(duì)該亞群分配生存功能的類似策略。由聚合物基質(zhì)提供的保護(hù)使持留細(xì)胞能避開被除去并作為種群恢復(fù)的來源。有證據(jù)表明，持留細(xì)胞可以是微生物生物膜的多種耐藥性的主要原因(LaFleur等人，Antimicrob Agents Chemother. 50 :3839-46,2006 ；Lewis, Nature Reviews Microbiology 5，48—562007)。當(dāng)前需要用于預(yù)防生物膜形成并治療與微生物生物膜相關(guān)的病癥的更好療法。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)本發(fā)明的第一個(gè)方面，提供了包含至少兩種抗生物膜劑的產(chǎn)品，其中所述抗生物膜劑的至少一種是抗微生物肽。其他抗生物膜劑可以是分散劑或防粘劑。本文使用的術(shù)語“抗生物膜劑”是用于描述能夠破壞或者抑制微生物生物膜的生長(zhǎng)的試劑?？股锬┛赡苣軌蚱茐纳锬さ慕Y(jié)構(gòu)，例如細(xì)胞外粘液基質(zhì)，或者可能能夠破壞或者抑制微生物細(xì)胞在生物膜內(nèi)的生長(zhǎng)。本發(fā)明還提供了預(yù)防在環(huán)境中形成生物膜的方法，該方法包括向所述環(huán)境中給藥抗微生物肽的步驟。有利地，該方法包括向所述環(huán)境中給藥根據(jù)本發(fā)明的產(chǎn)品的步驟。本發(fā)明還提供了通過預(yù)防或治療法來治療微生物感染，特別是微生物生物膜的方法，該方法包括給藥治療有效量的抗微生物肽，例如陽離子肽。通常，該方法涉及順序或者聯(lián)合給藥治療有效量的 第一抗生物膜劑；和 不同于第一抗生物膜劑的第二抗生物膜劑；其中，第一抗生物膜劑和第二抗生物膜劑的至少一種為抗微生物肽，例如陽離子肽。上述活性劑可以以自由組合或固定組合的形式來給藥。自由組合可以以包含自由組合中所有活性劑的組合包裝的形式來提供。固定組合常為片劑或膠囊劑。包括在本發(fā)明中的是，通過以上列出的抗微生物肽或者活性劑的組合的預(yù)防或治療法，在制備用于治療微生物感染特別是微生物生物膜感染的藥物中的用途。所述產(chǎn)品具有優(yōu)點(diǎn)，即該產(chǎn)品證明了尤其是存在于生物膜中的持留細(xì)胞的抗菌活性，這對(duì)生物膜去除是必需的步驟。本發(fā)明的試劑可以以藥學(xué)上可接受的鹽的形式來給藥。本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽可以通過常規(guī)化學(xué)方法，由包含堿性或酸性部分的母體化合物來合成。通常，此種鹽可以通過將這些化合物的游離酸或堿形式與化學(xué)計(jì)算量的適當(dāng)?shù)膲A或酸在水中或在有機(jī)溶劑中、或者在水和有機(jī)溶劑的混合物中反應(yīng)而制備；一般地，非水介質(zhì)如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈是優(yōu)選的。適合的鹽的名單參見Remington' s Pharmaceutical Sciences,第 17 版，Mack Publishing Company, Easton, Pa. , US, 1985,第 1418 頁，其公開內(nèi)容以引用方式并入本文，另見Mahl等人，Eds，“Handbook of Pharmaceutical SaltsProperties Selection and Use，，,Verlag Helvetica Chimica Acta and Wiley-VCH,2002。 本文使用的短語“藥學(xué)上可接受的”是指在合理醫(yī)學(xué)判斷的范圍內(nèi)，適合用于與人類組織或者根據(jù)具體情況的動(dòng)物組織接觸，而沒有過度毒性、刺激性、過敏反應(yīng)或者其他與合理的受益/風(fēng)險(xiǎn)比相適應(yīng)的問題或并發(fā)癥的那些化合物、材料、組合物和/或劑型。因此，本發(fā)明包括所公開的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽，其中通過制備所公開化合物的酸鹽或堿鹽的方式來改性母體化合物，所述的鹽例如諸如由無機(jī)酸或堿或者有機(jī)酸或堿形成的常規(guī)的無毒鹽或季銨鹽。此種酸加成鹽的實(shí)例包括乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、 天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽(digluconate)、十二烷基硫酸鹽、乙烷磺酸鹽、延胡索酸鹽、葡萄糖庚酸鹽(glucoh印tanoate)、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽(hemisulfate)、庚酸鹽、己酸鹽、 鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽Q-hydroxyethanesulfonate)、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽(mathMiesulfomite)、2_ 萘磺酸鹽(2-naphthanlenesulfonate)、煙酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、 琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽和i^一酸鹽。堿鹽包括銨鹽；堿金屬鹽，例如鈉鹽和鉀鹽；堿土金屬鹽，例如鈣鹽和鎂鹽；與有機(jī)堿形成的鹽，例如二環(huán)己基胺鹽、N-甲基-D-葡糖胺；以及與氨基酸形成的鹽，例如精氨酸、賴氨酸等。另外，可以采用此類試劑將含有堿性氮的基團(tuán)季銨化為低級(jí)烷基鹵，例如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；二烴基硫酸鹽如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基的硫酸鹽，長(zhǎng)鏈鹵化物例如癸基、 月桂基、肉豆蔻基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物，芳烷基鹵如芐基和苯乙基的溴化物以及其他。因此，本發(fā)明包括通常含有至少以下的藥物產(chǎn)品 第一抗生物膜劑；和 不同于第一抗生物膜劑的第二抗生物膜劑，其中第一和第二抗生物膜劑中的至少一種是抗微生物肽，例如陽離子肽。第一抗生物膜劑第一抗生物膜劑可以是抗微生物肽，例如抗菌肽。優(yōu)選地，第一抗生物膜劑是抗微生物肽，以下稱為“第一抗微生物劑”。第一抗微生物劑可以包含根據(jù)式I的氨基酸((X)1(Y)Jn (I)其中，1和m是從1至10的整數(shù)，例如1至5 ;n是從1至10的整數(shù)；X和Y可以相同或不同，獨(dú)立地為疏水性氨基酸或陽離子氨基酸。優(yōu)選地，第一抗微生物劑包含根據(jù)式(I)的氨基酸，其中X和Y是陽離子氨基酸。抗微生物肽可以包含2至200個(gè)氨基酸，例如3、4、5、6或7至高達(dá)100個(gè)氨基酸， 包括3、4、5、6或7至高達(dá)10、15、20、25、30、35、40、45或50個(gè)氨基酸。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案， 抗微生物肽包含3或4至50個(gè)氨基酸。作為另外一種選擇，肽可以包含多于27個(gè)氨基酸， 一般地為27至300個(gè)氨基酸，適當(dāng)?shù)?7至200個(gè)氨基酸。肽可以包含100至200個(gè)氨基酸，20至100、20和45個(gè)氨基酸，例如20、25、30、35、 40,42或45個(gè)氨基酸。肽可以包含3至15個(gè)氨基酸，例如5至15個(gè)氨基酸。如本文所使用的，術(shù)語“疏水性”是指具有側(cè)鏈的氨基酸，所述氨基酸在生理pH下不帶電荷、沒有極性并且一般通過水溶液來排斥。
如本文所使用的，術(shù)語“陽離子”是指靜電荷大于或等于0的氨基酸。通常，術(shù)語 “陽離子”是指靜電荷大于0的氨基酸。通常，疏水性氨基酸殘基的疏水性大于或等于-1. 10而電荷大于或等于0。疏水性氨基酸可以包括，亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丙氨酸、色氨酸、纈氨酸、異亮氨酸和蛋氨酸。優(yōu)選地，X和/或Y是例如選自組氨酸、精氨酸和賴氨酸的陽離子氨基酸。還優(yōu)選地，X和/或Y是精氨酸或賴氨酸。X和/或Y可以選自非天然存在的氨基酸，例如陽離子
氨基酸鳥氨酸。X和/或Y可以是如本文所定義的陽離子氨基酸的任選異構(gòu)體，例如D或L-氨基酸。此外，X和/或Y可以是替代的氨基酸。氨基酸可以是天然存在的或者合成的。本發(fā)明還包括上述氨基酸的已知的異構(gòu)體(結(jié)構(gòu)的、立體的、構(gòu)象的和構(gòu)型的)和結(jié)構(gòu)類似物，以及那些天然修飾(例如，翻譯后修飾)或化學(xué)修飾的氨基酸，所述的修飾包括但不限于磷酸化、糖基化、磺?；?或羥基化。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，所述的肽可以包括陽離子或疏水性氨基酸X和Y的一種或多種替代物。然而，肽將主要地包括陽離子或疏水性氨基酸X和Y。通常，肽可以包含1至5 種替代物，適當(dāng)?shù)?至3種替代物，一般地1種替代物。所述替代物可以是末端替代物或非末端替代物。替代物可以由氨基酸或非氨基酸組成。替代物可以帶電荷或不帶電荷。通常，一種或多種替代物是不帶電荷的氨基酸。替代地或另外，一種或多種替代物可以是非氨基酸， 例如半胱胺。優(yōu)選地，X和Y是相同的并且為賴氨酸或精氨酸。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，所述的肽主要包含可以由一個(gè)或多個(gè)不是精氨酸的氨基酸替代的精氨酸氨基酸。一般地，所述的肽包含，任選地由1至5個(gè)非精氨酸的氨基酸替代的7至20個(gè)精氨酸氨基酸，通常為3至5個(gè)非精氨酸替代物。作為另外一種選擇，所述的肽可以包含，任選地由1至5個(gè)非賴氨酸的氨基酸替代的7至20個(gè)賴氨酸氨基酸，通常為3至5個(gè)非賴氨酸替代物。根據(jù)再一個(gè)實(shí)施方案，所述的肽可以主要地包含可以由一個(gè)或多個(gè)不是精氨酸的
氨基酸替代的精氨酸氨基酸。一般地，所述的肽包含，任選地由1至5個(gè)非精氨酸氨基酸替代的精氨酸氨基酸， 通常為3至5個(gè)非精氨酸替代物。作為另外一種選擇，所述的肽可以包含，任選地由1至5個(gè)非賴氨酸的氨基酸替代的7至20個(gè)賴氨酸氨基酸，通常為3至5個(gè)非賴氨酸替代物。根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，所述的肽可以包含27至300個(gè)賴氨酸氨基酸，一般地27至 200個(gè)賴氨酸氨基酸。通常，所述的肽不含帶有非賴氨酸氨基酸的非末端替代物。在式(I)的肽中，1和m可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，而η可以是1、2、3、4、 5、6、7、8、9 或 10。在式(I)的肽中，1可以是1，η可以是1，以及m可以是4至9，例如m可以是3、4、 5、6、7、8 或 9。
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在式(I)的肽中，l、n和/或m可以是1至5，例如1、2、3、4或5。在式(I)的肽中，1和m可以是0至7的整數(shù)，而η可以是1至10的整數(shù)。在式(I)的肽中，1和m可以是0、1或2，而η可以是1至10的整數(shù)。在式(I)的肽中，X和Y可以是相同的，1可以是0，m可以是1，并且η可以是3、 4、5、6、7、8、9 或 10。在式(I)的肽中，X和Y可以是相同的，1和m可以是1并且η可以是2、3、4或5。在式(I)的肽中，X和Y可以是相同的，1可以是1，m可以是2，并且η可以是1、 2、3、或 4。在式(I)的肽中，X和Y可以是相同的，1和m可以是2，并且η可以是1、2、3、或4。優(yōu)選地，第一抗微生物劑包含選自聚賴氨酸和聚精氨酸的肽序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，第一抗微生物劑包含聚賴氨酸。在替代實(shí)施方案中，第一抗微生物劑包含聚精氨酸。根據(jù)本發(fā)明的再一個(gè)方面，提供了第一抗微生物劑在生物膜的預(yù)防治療中的用途。通常，第一抗微生物劑是如下所述的本發(fā)明的產(chǎn)品的形式。第二抗生物膜劑第二抗生物膜劑可以是抑制生物膜形成的任何試劑。舉例來說，第二抗生物膜劑可以抑制細(xì)菌的粘附性、疏水性或粘液的產(chǎn)生。第二抗生物膜劑可以選自分散劑和防粘齊U。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，所述的第二抗生物膜劑不是肽。術(shù)語“分散劑”旨在包括能夠分散生物膜的顆粒的任何試劑。特別地，分散劑可以促進(jìn)由微生物例如細(xì)菌所產(chǎn)生的粘液、形成部分生物膜的粘膜以及生物膜微生物(例如， 細(xì)菌)的分散，所述粘膜例如是通過生物膜微生物粘附至的細(xì)胞所形成的。分散劑可以是粘液溶解劑。粘液溶解劑可以是酶，例如脫氧核糖核酸酶、褐藻酸酶、蛋白酶和糖酶(carobohydrase)。作為另外一種選擇，粘液溶解劑可以是小分子，例如諸如氨基硫醇之類的胺或者諸如乙二胺四乙酸(EDTA)之類的酸。胺可以選自乙酰半胱氨酸和半胱胺。術(shù)語“防粘劑”旨在包括能夠抑制細(xì)胞、蛋白質(zhì)和有機(jī)體(例如微生物)之間的粘附，從而預(yù)防生物膜的形成或者促進(jìn)生物膜自體破壞的任何試劑。特別地，防粘劑可以預(yù)防粘附在微生物的生物膜特別是自由生活微生物(即浮游生物細(xì)胞)中遇到的所有細(xì)胞類型的表面或基底。防粘劑可以包括但不限于，乙酰透明質(zhì)酸、肝素或Carbopol 934。第二抗生物膜劑可以是抗菌劑。抗菌劑可以是粘液溶解劑，例如具有粘液溶解性和抗菌活性的粘液溶解劑。優(yōu)選地，抗菌劑是半胱胺。發(fā)明的產(chǎn)品本發(fā)明的產(chǎn)品可以包含抗微生物肽。優(yōu)選的產(chǎn)品包含抗微生物肽和粘液溶解劑。在本發(fā)明的產(chǎn)品中，所述第一抗生物膜劑與所述第二抗生物膜劑的比例可以是 1 10至10 1;—般地至少2 1，例如至少3 1或4 1。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，所述第一抗生物膜劑與所述第二抗生物膜劑的比例是大約1 1。優(yōu)選地，第一抗生物膜劑是陽離子肽而第二抗生物膜劑是粘液溶解劑，并且陽離子肽與粘液溶解劑的比例為2 1至 4 1。根據(jù)再一個(gè)實(shí)施方案，所述的比例可以是大約1 1?；钚詣┛梢酝瑫r(shí)地、順序地或者分別地來給藥?；钚詣┛梢砸越M合包裝形式提供。 組合包裝可以包含本發(fā)明的產(chǎn)品，以及每種活性劑的同時(shí)、分別或順序給藥的說明書。對(duì)于順序給藥，可以以任何順序給藥活性劑。本發(fā)明產(chǎn)品的活性劑可以以另外包含一種或多種藥學(xué)上可接受的稀釋劑、賦形劑和/或載體的藥物組合物來提供。該藥物組合物施用于固定組合和自由組合。本發(fā)明的活性劑可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何適合的途徑，優(yōu)選地以適用于這樣的給藥途徑的藥物組合物形式，并且采用對(duì)治療目的有效的劑量的施用?；钚曰衔锖徒M合物可以，例如經(jīng)胃腸外、口服、鼻內(nèi)、支氣管內(nèi)、腸內(nèi)、皮膚、舌下、直腸、陰道、眼部或者局部給藥。局部和全身給藥均是預(yù)期的。出于胃腸外給藥的目的(如本文所使用的“胃腸外”是指包括靜脈、肌肉、腸、腹腔、胸骨內(nèi)、皮下和關(guān)節(jié)內(nèi)注射給藥的形式，并且靜脈輸注(包括連續(xù)靜脈給藥)是最優(yōu)選的)，可以使用丙二醇水溶液，以及相應(yīng)的水溶性鹽的無菌水溶液。如果必要，可以將此種水溶液進(jìn)行適當(dāng)緩沖，并首先使液體稀釋液與足夠的鹽水或葡萄糖等滲。這些水溶液尤其適合于靜脈、肌肉、皮下和腹腔注射的目的。在這一點(diǎn)上，使用的無菌水溶液通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)可以很容易地得到。本發(fā)明的產(chǎn)品也可以通過鼻內(nèi)或者吸入給藥并且常規(guī)地以從加壓的容器、泵、噴霧器、霧化器、噴灑器得到的干粉吸乳器或者氣霧噴霧器形式，在使用或不使用適合的推進(jìn)劑的情況下遞送。作為另外一種選擇，本發(fā)明的產(chǎn)品可以以栓劑或者陰道栓劑的形式給藥，或者可以以凝膠、水凝膠、洗劑、溶液、乳膏、軟膏或粉末的形式局部施用。本發(fā)明的產(chǎn)品可以經(jīng)表皮或者皮膚給藥，例如通過使用皮膚貼劑、貯存或皮下注射給藥。本發(fā)明的產(chǎn)品也可以通過肺或直腸途徑給藥。對(duì)于口服給藥，藥物組合物的形式可以為例如片劑、膠囊、懸液或液體的形式。藥物組合物優(yōu)選地以包含特定量的活性成分的計(jì)量單位的形式來制備。此種劑量單位的實(shí)例包括具有常規(guī)添加劑例如乳糖、甘露醇、玉米淀粉或馬鈴薯淀粉；粘合劑例如結(jié)晶纖維素、 纖維素衍生物、阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠；具有崩解劑例如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉或羧甲基纖維素鈉；和潤(rùn)滑劑例如滑石粉或硬脂酸鎂的膠囊、片劑、粉劑、顆粒劑或懸液?；钚猿煞忠部梢酝ㄟ^注射給藥，因?yàn)樵诮M合物中，例如鹽水、葡萄糖或水分可以用作適合的載體。本發(fā)明的產(chǎn)品也可以發(fā)現(xiàn)作為/以口服制劑應(yīng)用，在口服制劑中，將所述的產(chǎn)品配制在載體中，所述載體例如選自膜、帶、凝膠、微球、錠劑、口香糖、牙粉(dentrifices)和漱口水。給藥的治療活性化合物的量和采用本發(fā)明的化合物和/或組合物治療疾病病癥的劑量方案依賴于多種因素，包括受試者的年齡、體重、性別和身體狀況、疾病的嚴(yán)重程度、 給藥的途徑和頻率及使用的特定化合物、以及治療個(gè)體的藥代動(dòng)力學(xué)特性，因此可以有很大變化。如果通過局部給藥化合物而非全身給藥并且用于預(yù)防而非治療，則化合物的劑量一般將較低。根據(jù)治療醫(yī)師的判斷，必要時(shí)此種治療可以盡可能經(jīng)常給藥并持續(xù)一段時(shí)間。 本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，待給藥的抑制劑的劑量方案或治療有效量對(duì)于每個(gè)個(gè)體來說可能需要優(yōu)化。藥物組合物可以包含約0. 1至2000mg，優(yōu)選地為約0. 5至500mg并且最優(yōu)選地為約1至200mg的活性成分。約0. 01至100mg/kg體重，優(yōu)選地為約0. 1至約500mg/kg體重并且最優(yōu)選地為約1至20mg/kg體重的每日劑量是適當(dāng)?shù)?。每日劑量可以?至4次/
日給藥。優(yōu)選地，將本發(fā)明的產(chǎn)品施用于呼吸道。因此，本發(fā)明也可以提供包含本發(fā)明的產(chǎn)品的氣霧劑藥物制劑。還提供了包含本發(fā)明的產(chǎn)品的霧化器或吸入器。此外，本發(fā)明的產(chǎn)品可以適合于作為緩釋劑型等的制劑。所述的制劑可以如此構(gòu)成以致其可能需要一段時(shí)間來將活性劑釋放于例如腸道或呼吸道的特定部位。包衣、包膜和保護(hù)基質(zhì)可以例如由聚合物質(zhì)制備，所述聚合物質(zhì)例如聚交酯-乙醇酸酯、脂質(zhì)體、微乳劑、微粒、納米顆粒或蠟。這些包衣、包膜和保護(hù)基質(zhì)對(duì)于包被內(nèi)置裝置例如支架、導(dǎo)管、腹膜透析管、弓I流裝置等是有用的。本發(fā)明的產(chǎn)品可以包括本文定義的協(xié)同有效量的各種活性劑。因此，本發(fā)明包括含有協(xié)同有效量的以下物質(zhì)的產(chǎn)品(i)第一抗生物膜劑；(ii)不同于第一抗生物膜劑并且通常為抗微生物肽的第二抗生物膜劑。所述的產(chǎn)品可以用于制備在治療微生物感染例如生物膜感染中同時(shí)、分別或順序給藥所述試劑的藥物。如本文所使用的“協(xié)同”可以描述本發(fā)明產(chǎn)品的兩種或多種試劑一起使用以產(chǎn)生大于分別使用所述試劑的預(yù)期組合效果的作用。在本發(fā)明的又一個(gè)方面，提供了將本發(fā)明的產(chǎn)品應(yīng)用于或者附著在其上的基底。 優(yōu)選地，所述基底適合施用在傷口或者遞送至創(chuàng)傷部位。優(yōu)選地，所述基底允許將本發(fā)明產(chǎn)品的活性劑從基底轉(zhuǎn)移到創(chuàng)傷面以實(shí)現(xiàn)其抗生物膜的作用。所述基底可以是敷料，例如創(chuàng)傷敷料。敷料可以包含纖維材料或者其可以是膠原狀材料。所述基底可以為用于涂覆傷口的任何適合的形式，通常所述基底為水凝膠、膠體、軟膏、乳膏、凝膠、泡沫或噴霧劑的形式。本發(fā)明的產(chǎn)品也可以發(fā)現(xiàn)作為/以消毒劑或殺蟲劑來使用。在這種情況下，可以將本發(fā)明的肽或藥物組合物單獨(dú)地或者與其他消毒劑組合涂覆于待處理的表面。如本文所使用的，“待處理的表面”可以作為本文所定義的基底并且可以包括醫(yī)療裝置和內(nèi)置裝置， 例如支架、導(dǎo)管、腹膜透析管、引流裝置、人工關(guān)節(jié)、牙植入物等。方法和用途本發(fā)明提供了預(yù)防生物膜在環(huán)境中形成的方法，所述方法包括將根據(jù)本發(fā)明的產(chǎn)品給藥于所述環(huán)境中的步驟。該方法可以在體內(nèi)或體外。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，所述方法包括給藥抗微生物肽的步驟。有利地，所述方法包括給藥以下藥物的步驟 第一抗生物膜劑；和 不同于第一抗生物膜劑的第二抗生物膜劑；其中，第一和第二抗生物膜劑中的至少一種是抗微生物肽，例如陽離子肽。所述環(huán)境可以包含選自細(xì)菌、真菌、酵母、病毒和原生動(dòng)物的任何生物膜形成微生物。通常，微生物是細(xì)菌，例如革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌。細(xì)菌性病原體可以得自選自以下的細(xì)菌種類葡萄球菌屬Staphylococcus spp.)，例如金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)；腸球菌屬(Enterococcus spp.),例如糞腸球菌(Enterococcusfaecalis)；酉良膿鏈球菌 (Streptococcus pyogenes)；李斯特菌屬(Listeria spp.)；假單胞菌屬(Pseudomonas spp.)；分支桿菌屬(Mycobacterium spp.),例如結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)；腸桿菌屬(Enterobacter spp.)；彎曲菌屬(Campylobacter spp.)； 沙門氏菌屬(Salmonella spp.)；鏈球菌屬(Sti^ptococcus spp.)，例如A型或B型鏈球菌(Streptococcus Group A or B)、月市炎鏈球菌(Streptoccocus pneumoniae)； 螺桿菌屬(Helicobacter spp.)，例如幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)；奈瑟球菌屬(Neisseria spp.)，例如淋病奈瑟球菌(Neisseria gonorrhea)、腦膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)；伯氏疏螺方寵體菌(Borrelia burgdorferi)；志賀菌屬 (Shigella spp.),例如弗氏志賀菌(Shigellaflexneri)；大腸桿菌(Escherichia coli)； 嗜血桿菌屬(Haemophilus spp.),例如流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)；衣原體屬(Chlamydia spp.),例如沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis)、月市炎衣原體(Chlamydia pneumoniae)、鸚鵡熱衣原體(Chlamydia psittaci) ；土拉熱弗朗西絲氏菌(Francisella fularensis)；芽孢桿菌屬(Bacillus spp.),例如炭疽芽孢桿菌(Bacillus anthracis)； 梭菌屬(Clostridia spp.)，例如肉毒梭菌(Clostridium botulinum)；耳口爾森菌屬 (Yersinia spp.)，例如鼠疫耶爾森氏桿菌(Yersinia pestis)；密螺旋體屬(Ti^ponema spp.)；伯克霍爾德菌屬(Burkholderia spp.)；例如鼻疽伯克霍爾德菌(Burkholderia mallei)和類鼻疽伯克氏菌(B. pseudomallei)。特別地，所述細(xì)菌可以包括假單胞菌屬(I^eudomonas spp.)，例如銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)；葡萄球菌屬(Staphylococcus spp.)，例如金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)禾口表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis) ； 血桿菌屬(Haemophilus spp.),例如流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)；伯克霍爾德菌屬(Burkholderia spp.)，例如洋蔥伯克霍爾德菌(Burkholderia cepacia)； 鏈球菌屬(Streptococcus spp.)；丙酸桿菌屬(Propionibacterium spp.)，例如痤瘡丙酸桿菌(Propionibacterium acnes)。優(yōu)選地，所述細(xì)菌選自假單胞菌屬 (Pseudomonas spp.),例如銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)；禾口葡萄球菌屬 (Staphylococcus spp.)，例如金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)禾口表皮葡萄球菌 (Staphylococcusepidermidis)。病毒病原體可以得自選自以下的病毒人免疫缺陷病毒(HTV說2);人T細(xì)胞白血病病毒(HTLV 1&2)；埃博拉病毒；人乳頭瘤病毒(例如，HPV-2、HPV-5、HPV-8、HPV-16、 HPV-18、HPV-31、HPV-33、HPV-52、HPV-54和HPV-56)；乳多空病毒；鼻病毒；脊髓灰質(zhì)炎病毒；皰疹病毒；腺病毒；EB病毒(Epstein Barr virus)；流感病毒；乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒；天花病毒；輪狀病毒或SARS冠狀病毒。寄生病原體可以得自選自以下組的寄生病原體錐蟲屬(Trypanosoma spp.) (克魯其i 錐蟲(Trypanosoma cruzi)、布魯其jf錐蟲(Trypansosoma brucei)),禾丨J氏曼原蟲屬(Leishmania spp.)，賈第蟲屬(Giardia spp.)，毛滴蟲屬(Trichomonas spp.),內(nèi)阿米巴屬(Entamoeba spp.),耐格里屬(Naegleria spp.),棘阿米巴屬(Acanthamoeba spp.)，血吸蟲屬(Schistosoma spp.)，皰原蟲屬(Plasmodium spp. ), Crytosporidiwn spp. , ^ife^it^M (Isospora spp.) ,^f ^M (Balantidium spp.), ^M (LoaLoa),人蟲回蟲(Ascaris lumbricoides),犬惡絲蟲(Dirofilaria immitis),弓形蟲屬 (Toxoplasma ssp.)例如鼠弓形蟲(Toxoplasma gondii)。真菌病原體可以得自具有以下屬的真菌病原體念珠菌屬(Candida spp.)(例如白色念珠菌C. albicans)、表皮癬菌屬(Epidermophyton spp·)、夕卜瓶霉屬(Exophiala spp·)、小抱子菌屬(Microsporiim spp.)、毛癬菌屬(Trichophyton spp.)(例如紅色毛癬菌(T. rubrum)和指間毛癬菌(T. interdigitale))、癬屬(Tinea spp·)、曲霉菌屬(Aspergillus spp·)、芽生菌屬(Blastomyces spp.)、芽生裂殖菌屬(Blastoschizomyces spp.)、球抱子菌屬 (Coccidioides spp.)、隱球菌屬(Cryptococcus spp·)、組織胞菜菌屬(Histoplasma spp.)、苜Ij 球抱子菌屬(Paracoccidiomyces spp·)、抱子絲菌屬(Sporotrix spp·)、犁頭霉菌屬(Absidia spp. )、Cladophialophora spp.、著色真菌屬(Fonsecaea spp·)、瓶霉 |if M (Phialophora spp. ) > Lacazia spp. > i 1 ^M (Arthrographis spp. )> ^TjS3 M (Acremonium spp.)、馬杜拉菌屬(Actinomadura spp.)、鱗質(zhì)霉屬(Apophysomyces spp.)、 枝蟲霉屬(Emmonsia spp·)、娃獎(jiǎng)霉菌屬(Basidiobolus spp·)、白僵菌屬(Beauveria spp·)、金小孢子屬(Chrysosporium spp·)、耳霉屬(Conidiobolus spp·)、小克銀漢霉屬(Cunninghamella spp·)、鍵刀菌屬(Fusarium spp·)、地絲菌屬(Geotrichum spp·)、 粘束孢霉屬(Graphium spp.)、小球腔菌屬(Leptosphaeria spp.)、馬拉色霉菌屬 (Malassezia spp·)、毛霉菌屬(Mucor spp·)、新龜甲屬(Neotestudina spp·)、奴卡菌屬 (Nocardia spp·)、諾卡土壤菌屬(Nocardiopsis spp.)、擬青霉屬(Paecilomyces spp·)、 蓬點(diǎn)霉屬(Phoma spp·)、毛結(jié)節(jié)菌屬(Piedraia spp.)、肺囊蟲屬(Pneumocystis spp·)、 假霉樣真菌屬(Pseudallescheria spp.)、棘殼孢屬(Pyrenochaeta spp·)、根毛霉菌屬 (Rhizomucor spp.)、根霉菌屬(Rhizopus spp.)、紅酵母屬(Rhodotorula spp·)、酵母菌屬(Saccharomyces spp·)、絲抱菌屬(Scedosporium spp·)、帚霉屬(Scopulariopsis spp·)、擲抱酵母屬(Sporobolomyces spp·)、共頭霉屬(Syncephalastrum spp·)、木霉屬 (Trichoderma spp·)、絲抱酵母屬(Trichosporon spp·)、單格抱屬(Ulocladium spp.、黑粉菌屬(Ustilago spp·)、輪枝孢屬(Verticillium spp.)、瓶霉屬(ffangiella spp)。根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，所述微生物是真菌，尤其是念珠菌屬。本發(fā)明的方法可以用于將生物膜在多種環(huán)境中的形成最小化并且優(yōu)選地，預(yù)防生物膜在多種環(huán)境中的形成，所述環(huán)境包括但不限于家居、工作場(chǎng)所、實(shí)驗(yàn)室、工業(yè)環(huán)境、水生環(huán)境(例如，流水線系統(tǒng))、醫(yī)療裝置、動(dòng)物體例如人體，所述醫(yī)療裝置包括諸如本文所定義的內(nèi)置裝置、牙科裝置或牙植入物。因此，本發(fā)明的方法可以用于口腔從而預(yù)防在人牙齒上或者牙植入物例如假牙上形成牙菌斑或齲齒。本發(fā)明的方法可以用于預(yù)防或限制在人體尤其是在微生物感染的治療中生物膜的形成。與生物膜感染有關(guān)的狀況可以包括局部感染、口腔感染和全身感染。局部感染可以包括，創(chuàng)傷、潰瘍和損害，例如諸如切口或燒傷之類的皮膚創(chuàng)傷，以及與其有關(guān)的病癥?？谇桓腥究梢园ㄑ例l炎、牙周炎和粘膜炎。全身感染可以包括與粘膜感染有關(guān)的囊性纖維化和其他狀況，例如胃腸道感染、 泌尿生殖道感染或呼吸道感染。本發(fā)明的又一個(gè)方面在于通過向哺乳動(dòng)物給藥治療有效量的本發(fā)明的產(chǎn)品，治療、預(yù)防或推遲哺乳動(dòng)物尤其是人類中與微生物生物膜感染的存在有關(guān)的疾病或病癥的進(jìn)展?！坝行А绷炕蛘摺爸委熡行Я俊币馑际窃谡_醫(yī)學(xué)判斷的范圍內(nèi)，足以提供期待的效果，而沒有過度毒性、刺激性、過敏反應(yīng)或者其他與合理的受益/風(fēng)險(xiǎn)比相當(dāng)?shù)膯栴}或并發(fā)癥的一種或多種活性物質(zhì)的量。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，所述方法包括給藥抗微生物肽的步驟。有利地，所述方法包括給藥以下藥物的步驟 第一抗生物膜劑；和 不同于第一抗生物膜劑的第二抗生物膜劑；其中，第一和第二抗生物膜劑中的至少一種是抗微生物肽，例如陽離子肽。本發(fā)明還提供了本發(fā)明的產(chǎn)品在制備用于通過以上列出的活性劑的組合的預(yù)防或治療法來治療微生物感染尤其是微生物生物膜感染中的藥物中的用途。此外，本發(fā)明提供了以上所描述的抗微生物肽在制備用于通過預(yù)防或治療法來治療微生物感染尤其是微生物生物膜感染中的藥物中的用途。因此，本發(fā)明的產(chǎn)品可以用于疾病或病癥的預(yù)防、進(jìn)展的推遲或治療，所述的疾病或病癥選自皮膚和傷口感染、中耳感染、胃腸道感染、腹膜感染、泌尿生殖道感染、口腔軟組織感染、牙菌斑的形成、眼部感染(包括隱形眼鏡污染)、心內(nèi)膜炎、囊性纖維化中的感染和如本文所述的內(nèi)置醫(yī)療裝置的感染。本發(fā)明還包括治療方法，其中將本發(fā)明的產(chǎn)品和一種或多種其他抗菌劑例如抗生素一起給藥哺乳動(dòng)物。本發(fā)明人出人意料地發(fā)現(xiàn)，某些分散劑，特別是粘液溶解劑抑制生物膜持留細(xì)胞的生長(zhǎng)。因此，本發(fā)明也包括治療/預(yù)防生物膜在環(huán)境中形成的方法，該方法包括向所述環(huán)境中給藥粘液溶解劑，例如半胱胺。所述粘液溶解劑可以單獨(dú)地或者與另一種抗微生物劑例如抗微生物肽聯(lián)合給藥。本發(fā)明另外提供了通過預(yù)防或治療法來治療微生物感染尤其是微生物生物膜的方法，該方法包括給藥治療有效量的分散劑，尤其是粘液溶解劑例如半胱胺。本發(fā)明還提供了分散劑，尤其是粘液溶解劑例如半胱胺在制備用于治療微生物感染尤其是微生物生物膜感染的藥物中的用途。在本說明書中所述的活性劑可以以不同的形式存在，例如游離酸、游離堿、酯以及例如其他前體藥物、鹽和互變異構(gòu)體，并且本發(fā)明包括所述試劑的所有不同形式。在本文的整個(gè)說明書和權(quán)利要求書中，除非上下文另有規(guī)定，單數(shù)涵蓋復(fù)數(shù)。特別地，除非上下文另有規(guī)定，如果使用不確定的物品，說明書應(yīng)理解為預(yù)期的復(fù)數(shù)以及單數(shù)。除非與其不匹配，與本發(fā)明的具體方面、實(shí)施方案或?qū)嵗Y(jié)合描述的特征、整數(shù)、 特性、化合物、化學(xué)部分或基團(tuán)應(yīng)理解為適用于本文所述的任何其他方面、實(shí)施方案或?qū)嵤├?。在本文的整個(gè)說明書和權(quán)利要求書中，單詞“包含”和“含有”以及其變型，例如“包含(comprising)”和“包括(comprises) ”是指“包括但不限于”，并且不是為了(也不是) 排除其他部分、添加劑、組分、整數(shù)或步驟。一般來說，術(shù)語“大約”意欲涵蓋應(yīng)用于其上的10%或小于10%的任何數(shù)值范圍。
在以下的說明書和權(quán)利要求書中記載了本發(fā)明的再一個(gè)方面和實(shí)施方案?，F(xiàn)通過僅結(jié)合附圖作為參考的實(shí)施例的方式來描述本發(fā)明。

圖1 :NP108 和 NM001 (半胱胺)抗銅綠假單胞菌(P. aeruginosa) ATCCBAA-47 浮游生物細(xì)胞的抗菌活性圖 2 :NP108 和 NM001 (半胱胺)聯(lián)合抗銅綠假單胞菌(P. aeruginosa) ATCC BAA-47 浮游生物細(xì)胞的抗菌活性圖3 :NP108和NM001 (半胱胺)抗金黃色葡萄球菌(S. aureus) DSMl 1729浮游生物細(xì)胞的抗菌活性圖4 :NP108和NM001 (半胱胺)聯(lián)合抗金黃色葡萄球菌(S. aureus) DSM 11729浮游生物細(xì)胞的抗菌活性圖5 :NP339抗革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的生物膜細(xì)胞的活性圖6 :NP339抗革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的持留細(xì)胞的活性圖7 :NP341抗革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的生物膜細(xì)胞的活性圖8 :NP341抗革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的持留細(xì)胞的活性圖9 =NMOOl (半胱胺)抗革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的生物膜細(xì)胞的活性圖10 =NMOOl (半胱胺)抗革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的持留細(xì)胞的活性圖11 :NP108和NM001 (半胱胺)聯(lián)合抗銅綠假單胞菌(P. aeruginosa) ATCC BAA-47生物膜細(xì)胞的抗菌活性圖 12 :NP108 和 NM001 (半胱胺)抗銅綠假單胞菌(P. aeruginosa) ATCC BAA-47 持留細(xì)胞的抗菌活性圖13 :NP108和NM001 (半胱胺)聯(lián)合抗銅綠假單胞菌(P. aeruginosa) ATCC BAA-47持留細(xì)胞的抗菌活性圖14 :NP339和NM001 (半胱胺)聯(lián)合抗(a)銅綠假單胞菌(P. aeruginosa)DSM 1128、(b)銅綠假單胞菌(P. aeruginosa) ATCC BAA-47、(c)銅綠假單胞菌(P. aeruginosa) DSM 1四9、和(d)銅綠假單胞菌(P. aeruginosa) ATCC27853生物膜細(xì)胞的抗菌活性圖15 :NP339和NM001 (半胱胺)聯(lián)合抗(a)銅綠假單胞菌(P. aeruginosa)DSM 11 和(b)銅綠假單胞菌(P. aeruginosa) ATCC BAA-47持留細(xì)胞的抗菌活性圖16 :NP108和匪001 (半胱胺)抗金黃色葡萄球菌(S. aureus) DSMl 1729生物膜細(xì)胞的抗菌活性圖17 :NP108和匪001(半胱胺)聯(lián)合抗金黃色葡萄球菌(S. aureus) DSM 117 生物膜細(xì)胞的抗菌活性圖18 :NP108和NM001 (半胱胺)抗金黃色葡萄球菌(S. aureus)DSMl 1729持留細(xì)胞的抗菌活性圖19 :NP108和匪001 (半胱胺)聯(lián)合抗金黃色葡萄球菌(S. aureus) DSM 11729持留細(xì)胞的抗菌活性圖20和圖21 粘液溶解劑N-乙酰半胱氨酸(圖20 (a)和圖20(b))和NM001 (半胱胺)(圖21 (a)和圖21 (b))單獨(dú)地以及與NP341聯(lián)合抗銅綠假單胞菌(P. aeruginosa) 27853 浮游生物細(xì)胞的活性圖22a 24小時(shí)后未治療的對(duì)照金黃色葡萄球菌(S. aureus)生物膜
圖22b 采用NM001 (半胱胺)以2mg/ml治療后M小時(shí)的金黃色葡萄球菌 (S. aureus)生物膜圖22c 采用粘菌素以0. 2mg/ml治療后M小時(shí)的金黃色葡萄球菌(S. aureus)生物膜圖22d 采用肽NP108以2mg/ml治療后M小時(shí)的金黃色葡萄球菌(S. aureus)生物膜圖23a 24小時(shí)后未治療的對(duì)照金黃色葡萄球菌(S. aureus)生物膜圖23b 采用NM001 (半胱胺)以2mg/ml治療后M小時(shí)的金黃色葡萄球菌 (S. aureus)生物膜圖23c 采用粘菌素以0. 2mg/ml治療后M小時(shí)的金黃色葡萄球菌(S. aureus)生物膜圖23d 采用肽NP108以2mg/ml治療后M小時(shí)的金黃色葡萄球菌(S. aureus)生物膜圖Ma 24小時(shí)后未治療的對(duì)照銅綠假單胞菌(P. aeruginosa)生物膜圖Mb 采用NM001 (半胱胺)以2mg/ml治療后M小時(shí)的銅綠假單胞菌 (P. aeruginosa) Lli圖Mc 采用粘菌素以0. 2mg/ml治療后M小時(shí)的銅綠假單胞菌(P. aeruginosa) 生物膜圖Md 采用肽NP108以2mg/ml治療后M小時(shí)的銅綠假單胞菌(P. aeruginosa) 生物膜圖2 24小時(shí)后未治療的對(duì)照銅綠假單胞菌(P. aeruginosa)生物膜圖25b 采用NM001 (半胱胺)以2mg/ml治療后M小時(shí)的銅綠假單胞菌 (P. aeruginosa) Lli圖25c 采用粘菌素以0. 2mg/ml治療后M小時(shí)的銅綠假單胞菌(P. aeruginosa) 生物膜圖25d 采用肽NP108以2mg/ml治療后M小時(shí)的銅綠假單胞菌(P. aeruginosa) 生物膜圖沈:NP432單獨(dú)地和與NM001 (半胱胺)聯(lián)合或者與NP108聯(lián)合抗銅綠假單胞菌 (P. aeruginosa) PAOl生物膜的活性圖27 :NP445單獨(dú)地和與NM001 (半胱胺)聯(lián)合或者與NP108聯(lián)合抗銅綠假單胞菌 (P. aeruginosa) PAOl生物膜的活性圖28 :NP458單獨(dú)地和與NM001 (半胱胺)聯(lián)合或者與NP108聯(lián)合抗銅綠假單胞菌 (P. aeruginosa) PAOl生物膜的活性圖四:NP462單獨(dú)地和與NM001 (半胱胺)聯(lián)合或者與NP108聯(lián)合抗銅綠假單胞菌 (P. aeruginosa) PAOl生物膜的活性圖30 :NP432單獨(dú)地和與NM001 (半胱胺)聯(lián)合或者與NP108聯(lián)合抗金黃色葡萄球菌(S. aureus) ATCC25923生物膜的活性圖31 :NP445單獨(dú)地和與NM001 (半胱胺)聯(lián)合或者與NP108聯(lián)合抗金黃色葡萄球菌(S. aureus) ATCC25923生物膜的活性
圖32 :NP458單獨(dú)地和與NM001 (半胱胺)聯(lián)合或者與NP108聯(lián)合抗金黃色葡萄球菌(S. aureus) ATCC25923生物膜的活性圖33 :NP462單獨(dú)地和與NM001 (半胱胺)聯(lián)合或者與NP108聯(lián)合抗金黃色葡萄球菌(S. aureus) ATCC25923生物膜的活性表1 試驗(yàn)的抗微生物劑抗革蘭氏陰性銅綠假單胞菌(P. aeruginosa)菌株和革蘭氏陽性葡萄球菌屬Staphylococcus spp.)的活性的匯總表2 試驗(yàn)的抗微生物劑抗金黃色葡萄球菌(S. aureus)、表皮葡萄球菌 (S. epidermidis)和銅綠假單胞菌(P. aeruginosa)的活性的匯總
權(quán)利要求
1.一種包含至少兩種抗生物膜劑的產(chǎn)品，其中，所述抗生物膜劑中的至少一種是抗微生物肽。
2.如權(quán)利要求1所述的產(chǎn)品，其中，另一種所述抗生物膜劑是分散劑或防粘劑。
3.如權(quán)利要求1或2所述的產(chǎn)品，其中，所述抗微生物肽是抗菌肽。
4.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的產(chǎn)品，其中，所述抗微生物肽包含根據(jù)式I的氨基酸 ((X)1(Y)Jn (I)其中1和m是1至10的整數(shù)，例如1至5 ;n是1至10的整數(shù)；X和Y可以相同或不同， 獨(dú)立地為疏水性氨基酸或陽離子氨基酸。
5.如權(quán)利要求4所述的產(chǎn)品，其中，所述抗微生物肽包含根據(jù)式(I)的氨基酸，式(I) 中X和Y是陽離子氨基酸。
6.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的產(chǎn)品，其中，所述抗微生物肽包含2至200個(gè)氨基酸。
7.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的產(chǎn)品，其中，X和/或Y是陽離子氨基酸。
8.如權(quán)利要求7所述的產(chǎn)品，其中，X和/或Y選自組氨酸、精氨酸和賴氨酸。
9.如權(quán)利要求8所述的產(chǎn)品，其中，X和/或Y選自精氨酸和賴氨酸。
10.如權(quán)利要求2至9中任一項(xiàng)所述的產(chǎn)品，其中，所述分散劑是能夠分散生物膜的顆粒的試劑。
11.如權(quán)利要求10所述的產(chǎn)品，其中，所述分散劑是粘液溶解劑。
12.如權(quán)利要求10至12中任一項(xiàng)所述的產(chǎn)品，其中，所述分散劑是酶。
13.如權(quán)利要求12所述的產(chǎn)品，其中，所述酶選自脫氧核糖核酸酶、褐藻酸酶、蛋白酶和糖酶。
14.如權(quán)利要求10至12中任一項(xiàng)所述的產(chǎn)品，其中，所述分散劑是胺。
15.如權(quán)利要求14所述的產(chǎn)品，其中，所述胺是氨基硫醇。
16.如權(quán)利要求15所述的產(chǎn)品，其中，所述胺選自乙酰半胱氨酸和半胱胺。
17.如權(quán)利要求10至12中任一項(xiàng)所述的產(chǎn)品，其中，所述分散劑是酸。
18.如權(quán)利要求17所述的產(chǎn)品，其中，所述酸是乙二胺四乙酸(EDTA)。
19.如權(quán)利要求2至9中任一項(xiàng)所述的產(chǎn)品，其中，所述防粘劑是能夠抑制細(xì)胞、蛋白質(zhì)和有機(jī)體之間粘著的試劑。
20.如權(quán)利要求19所述的產(chǎn)品，其中，所述防粘劑選自乙酰透明質(zhì)酸、肝素和Carbopol934。
21.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品包含協(xié)同有效量的(i)第一抗生物膜劑，和(ii)第二抗生物膜劑，其中，所述第二抗生物膜劑與所述第一抗生物膜劑不同并且為抗微生物肽。
22.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品用作消毒劑或殺蟲劑。
23.如權(quán)利要求1至21中任一項(xiàng)所述的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品用作藥物。
24.一種基底，將如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的產(chǎn)品涂敷或者附著到該基底上。
25.如權(quán)利要求M所述的基底，其中，所述基底選自敷料、醫(yī)療裝置和內(nèi)置裝置。
26.如權(quán)利要求25所述的基底，其中，所述內(nèi)置裝置選自支架、導(dǎo)管、腹膜透析管、引流裝置、人工關(guān)節(jié)和牙植入物。
27.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含如權(quán)利要求1至21中任一項(xiàng)所述的產(chǎn)品和一種或多種藥學(xué)上可接受的稀釋劑、賦形劑和/或載體。
28.如權(quán)利要求1至21中任一項(xiàng)所述的產(chǎn)品在治療微生物感染或疾病或與疾病相關(guān)的病癥中的用途。
29.包含根據(jù)式I的氨基酸的抗微生物肽在治療微生物感染或疾病或與疾病相關(guān)的病癥中的用途。
30.如權(quán)利要求觀和四中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中，所述感染或疾病或與疾病相關(guān)的病癥選自皮膚和傷口感染、中耳感染、胃腸道感染、腹膜感染、泌尿生殖道感染、口腔軟組織感染、牙菌斑的形成、眼部感染、心內(nèi)膜炎、囊性纖維化中的感染和內(nèi)置醫(yī)療裝置的感染。
31.一種預(yù)防在環(huán)境中形成生物膜的方法，所述方法包括向環(huán)境中給藥如權(quán)利要求1 至21中任一項(xiàng)所述的產(chǎn)品或者如權(quán)利要求M至沈中任一項(xiàng)所述的基底的步驟。
32.一種預(yù)防在環(huán)境中形成生物膜的方法，所述方法包括向所述環(huán)境中給藥抗微生物肽的步驟，所述抗微生物肽包含根據(jù)式I的氨基酸。
33.如權(quán)利要求31和32中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述環(huán)境包含選自細(xì)菌、真菌、酵母、病毒和原生動(dòng)物的形成生物膜的微生物。
34.如權(quán)利要求33所述的方法，其中，所述微生物是細(xì)菌。
35.如權(quán)利要求34所述的方法，其中，所述細(xì)菌選自可以包括假單胞菌屬 (Pseudomonas spp.)、葡萄球菌屬(Staphylococcus spp.)、嗜血桿菌屬(Haemophilus spp.)、伯克霍爾德菌屬(Burkholderia spp.)、鏈球菌屬(Streptococcus spp.)、丙酸桿菌屬(Propionibacterium spp.)。
36.如權(quán)利要求35所述的方法，其中，所述細(xì)菌選自假單胞菌屬(i^eudomonasspp.) 禾口葡萄球菌屬(Staphylococcus spp.)。
37.如權(quán)利要求36所述的方法，其中，所述細(xì)菌是銅綠假單胞菌(i^eudomonas aeruginosa)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)或表皮葡萄球菌 (Staphylococcus epidermidis)0
38.如權(quán)利要求32至37中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述環(huán)境是口腔。
39.如權(quán)利要求38所述的方法，所述方法用于預(yù)防在人類牙齒或牙植入物上形成噬菌斑或齲齒。
40.一種通過預(yù)防或治療法來治療微生物感染的方法，所述方法包括順序或者聯(lián)合給藥治療有效量的 第一抗生物膜劑；和 不同于所述第一抗生物膜劑的第二抗生物膜劑；其中，所述第一抗生物膜劑和第二抗生物膜劑中的至少一種是抗微生物肽。
41.如權(quán)利要求40所述的方法，其中，所述第一抗生物膜劑是抗微生物肽，而所述第二抗生物膜劑選自分散劑和防粘劑。
42.如權(quán)利要求40或41所述的方法，其中，所述微生物感染是局部感染。
43.如權(quán)利要求42所述的方法，其中，所述局部感染選自創(chuàng)傷、潰瘍和損害。
44.如權(quán)利要求40或41所述的方法，其中，所述微生物感染是口腔感染。
45.如權(quán)利要求44所述的方法，其中，所述口腔感染選自牙齦炎、牙周炎和粘膜炎。
46.如權(quán)利要求40或41所述的方法，其中，所述微生物感染是全身感染。
47.如權(quán)利要求46所述的方法，其中，所述全身感染是粘膜感染。
48.如權(quán)利要求47所述的方法，其中，所述粘膜感染是胃腸感染、泌尿生殖感染或呼吸感染。
49.如權(quán)利要求47或48所述的方法，其中，所述粘膜感染是囊性纖維化。
50.一種治療或預(yù)防在環(huán)境中形成生物膜的方法，所述方法包括向所述環(huán)境中給藥有效量的半胱胺。
51.半胱胺在治療微生物感染，特別是微生物生物膜感染中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含至少兩種抗生物膜劑的產(chǎn)品，其中所述抗生物膜劑的中德至少一種是抗微生物肽。第二種抗生物膜劑一般是分散劑或防粘劑。還提供了所述產(chǎn)品在治療微生物感染中的用途。
文檔編號(hào)A61P31/04GK102387794SQ201080014896
公開日2012年3月21日 申請(qǐng)日期2010年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月31日
發(fā)明者C·沙里耶, D·歐內(nèi)勒, D·莫瑟爾 申請(qǐng)人:諾瓦生命科學(xué)有限公司