專利名稱：包含4-異丙基-3甲基苯酚和鋅離子的抗菌組合物的制作方法
包含4-異丙基-3甲基苯酚和鋅離子的抗菌組合物本發(fā)明涉及一種組合物，其包括含4-異丙基-3甲基苯酚(IPMP)的抗菌系統(tǒng)、鋅離子源和陰離子表面活性劑。合適的組合物包括用于口腔、咽喉和皮膚護(hù)理的消毒組合物、 藥物組合物或個(gè)人護(hù)理組合物。特別感興趣的是包含抗菌系統(tǒng)的口腔護(hù)理組合物，其用于維持健康牙齦和牙齒，并用于對(duì)抗(例如，輔助預(yù)防、抑制和或治療)由口腔中的存在的細(xì)菌引起的或惡化的口腔健康狀況。這些狀況包括牙周(牙齦)疾病、齲齒(蛀牙)、口臭(口腔惡臭)、牙菌斑和牙石。數(shù)百種細(xì)菌與一些種類的真菌、病毒以及偶爾地寄生蟲一起形成口腔微生物群落，在牙齒表面以最明顯可見的粒狀灰白沉著物的形式存在一一其被稱作牙菌斑。大多時(shí)候，口腔微生物群落與宿主存在健康并穩(wěn)定的關(guān)系，甚至可能通過(guò)提供防護(hù)以提供益處——稱為抗移植性——對(duì)抗不斷攝入的可能致病的微生物對(duì)口腔的侵害。但是，口腔微生物群落也是影響人類的兩種最常見疾病——離齒(蛀牙)和牙周(牙齦)疾病的病原體。齲齒由飲食中糖的反復(fù)消耗引起，其中糖由許多生存在牙表面的細(xì)菌(尤其是細(xì)菌中的鏈球菌屬的成員，特別是變異鏈球菌(Streptococcus mutans))轉(zhuǎn)化成乳酸，其中乳酸去除牙釉質(zhì)中的礦物質(zhì)。相反地，牙周疾病由牙齦緣的牙菌斑的累積引起，并與微生物群落(尤其是厭氧菌)中的一些成分的比例增加有關(guān)。這增加的斑塊激發(fā)宿主免疫應(yīng)答，引起牙齦組織的炎癥，其可包括出血。這被稱為牙齦炎。牙齦炎可導(dǎo)致牙齦袋的形成，其中更多的細(xì)菌可累積在牙齒和發(fā)炎牙齦之間的袋中。如果任其發(fā)展，齦下菌斑可能導(dǎo)致更嚴(yán)重的牙齦疾病—— 牙周炎的發(fā)生，其最終可能導(dǎo)致掉牙。其他口腔微生物群落的副產(chǎn)物可能導(dǎo)致口臭——一種常見的但社交上令人苦惱的病癥。牙菌斑可能在牙表面附著得更牢固并且鈣化，形成牙石。飲食成分如咖啡、茶和紅酒可以使該結(jié)石以難看的方式著色。接著上述的討論，口腔微生物群落的徹底清除是既不可行，也不是目的。取而代之的，策略旨在定期地清潔口腔以減少大量牙菌斑，或者限制口腔微生物群落的再生或發(fā)展， 以使它們維持在與牙齒和齒齦健康平衡協(xié)調(diào)的狀態(tài)。通過(guò)刷牙定期機(jī)械清除是減少牙菌斑數(shù)量的關(guān)鍵，并因此維護(hù)齒齦健康。使用化學(xué)試劑作為菌斑的物理機(jī)械控制的一種輔助手段已被推薦了許多年?；瘜W(xué)菌斑控制通過(guò)直接殺死菌斑細(xì)菌、抑制菌斑的再生、減少菌斑的代謝活性或通過(guò)所有三種機(jī)制的結(jié)合，以增加機(jī)械菌斑控制。這樣，菌斑可被維持在與齒齦健康相協(xié)調(diào)的水平。當(dāng)齒齦菌斑攻擊不再增加時(shí)，牙齦緣可以保持緊密，從而向牙齒的齦下部分和其他組織提供保護(hù)。這樣，可以避免在整個(gè)范圍內(nèi)的潛在有害的口腔健康影響。因此，在口腔健康護(hù)理產(chǎn)品中包含殺滅、抑制或延緩口腔中的細(xì)菌生長(zhǎng)或代謝的材料變得非常合乎需要。在口腔健康護(hù)理產(chǎn)品中經(jīng)常存在抗菌劑。通常包括的是陰離子化合物氯己定、苯扎氯銨和氯化十六烷基吡啶鐺。非離子化合物包括鹵化二苯醚化合物如三氯生、鹵代二苯脲類如三氯碳酰苯胺，和酚類化合物如麝香草酚、IPMP (也稱為4-異丙基-3-甲基苯酚、百速潔(biosol)或ρ-麝香草酚)和它們的混合物。
包括鋅離子源的口腔健康護(hù)理組合物也是已知的，用于改善牙齦健康和對(duì)抗口腔惡臭。JP2006176416(Lion公司)描述了一種包含IPMP和載金屬離子的沸石研磨材料的口腔護(hù)理組合物。該組合物顯示出高的滅菌效果，特別是對(duì)口腔中存在的牙菌斑。US 4，022，880 (Vinson等)描述了一種用于抑制牙菌斑和牙石形成的組合物，其包含一種包括鋅離子源和無(wú)毒的感覺(jué)器官可接受的抗菌劑的組合物。沒(méi)有描述使用IPMP。GB 1,373, 003 (Unilever Ltd)描述并請(qǐng)求保護(hù)一種具有抗菌斑和抗牙石活性的潔牙組合物，其包含少量地水溶性鋅鹽和表面活性劑混合物，其中表面活性劑混合物是堿金屬烷基硫酸鹽與堿金屬烷芳基磺酸鹽或與堿金屬烷基醚磺酸鹽的混合物。該組合物顯示出收斂性減少。US 5，316，758 (Morishima等)描述了一種口腔護(hù)理組合物，其顯示出抑制牙菌斑和預(yù)防牙齦炎的效果，其包含非離子抗微生物劑(如三氯生、麝香草酚或IPMP)和某些兩性表面活性劑。該組合物已顯示出在口腔中保留很長(zhǎng)時(shí)間。U. S. 2008/0253976 (Procter&Gamble)描述了口腔、咽喉和皮膚護(hù)理用的個(gè)人護(hù)理組合物，包含選自檸檬醛、橙花醛、香葉醛、香葉醇和橙花醇的第一組分和選自桉葉腦、丁香酚和香芹烯醇的第二組分的混合物，其中所述的混合物顯示出抗菌和抗炎活性，據(jù)說(shuō)對(duì)細(xì)菌介導(dǎo)的炎癥疾病如牙齦炎特別有效。任選地，該混合物可進(jìn)一步包含其他抗菌劑和/或抗炎組分，在許多其他可能的試劑中特別包括IPMP。US 2007/0053849 (Procter&Gamble)描述了局部口腔護(hù)理組合物，其包含抗炎劑和抗菌劑的組合?？寡讋┑膶?shí)例包括維生素化合物、姜黃素類、來(lái)自香料和植物性藥材的油和提取物、來(lái)自百里香、牛至和鼠尾草的油和提取物、黃酮類化合物和黃酮類、和來(lái)自植物來(lái)源的酚類化合物?？咕鷦┑膶?shí)例包括氯化十六烷基吡啶鐺、亞錫離子劑、鋅離子劑、銅離子劑、鐵離子劑、三氯生、抗壞血酸硬脂酸酯、油?；“彼帷⒒腔《岫刘?、烷基硫酸鹽和其混合物。沒(méi)有描述使用IPMP?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，與包含單個(gè)試劑IPMP、鋅離子源或陰離子表面活性劑的組合物比較，包含IPMP、鋅離子源和陰離子表面活性劑的組合物提高了抗菌活性。不希望受理論的約束，可以肯定的是，陰離子表面活性劑增加口腔細(xì)菌的細(xì)胞壁通透性促使IPMP和鋅離子被細(xì)菌吸收，引起它們的死亡或延緩它們的生長(zhǎng)或代謝。此外，已發(fā)現(xiàn)包含IPMP的組合物具有固有的抗炎活性，其活性由于鋅離子源的存在而增強(qiáng)。相應(yīng)地，本發(fā)明提供了一種包含抗菌系統(tǒng)、鋅離子源和陰離子表面活性劑的組合物，其中抗菌系統(tǒng)包含IPMP。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物是消毒組合物。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物是藥物組合物，其包含藥學(xué)上可接受的載體或輔料。適合口服給藥用的藥物劑型包括片劑和膠囊。適合局部給藥用的藥物劑型包括乳膏劑和軟膏劑，其可以用于皮膚。藥學(xué)上可接受的載體或輔料的實(shí)例描述在藥物輔料手冊(cè)(Handbook of Pharmaceutical Excipients)(如第 4 片反，2003，Pharmaceutial Press 出片反)中。
在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物是口腔、咽喉或皮膚用的個(gè)人護(hù)理組合物，包含適合個(gè)人護(hù)理使用的載體或輔料。合適的個(gè)人護(hù)理劑型和載體或輔料的實(shí)例描述在U. S. 2008/0253976 (Procter&Gamble)中，其內(nèi)容在此引入作為參考。在一個(gè)優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物是口腔護(hù)理組合物，包含口服可接受的載體或輔料。本發(fā)明的組合物顯示出對(duì)口腔中最常見的生物體有特別好的細(xì)菌殺滅效果，如下面的數(shù)據(jù)所示。因此，該口腔護(hù)理組合物用于維護(hù)健康牙齦和牙齒，并用于對(duì)抗由口腔中存在的細(xì)菌引起或惡化的口腔健康狀況。特別地，本發(fā)明的口腔護(hù)理組合物可幫助保持牙齦與牙齒之間緊密封閉，從而封鎖菌斑細(xì)菌并保護(hù)牙齦表面以上和以下的牙齒，即提供整個(gè)牙齒的保護(hù)。此外，本發(fā)明的組合物將有助于防止或消除天然牙齒和假牙表面沉積污漬。本發(fā)明組合物的進(jìn)一步的有益特性包括對(duì)抗源自口腔的口臭(口腔惡臭或口臭)合適地，IPMP的量按總組合物的重量計(jì)為0. 01% -1. 00%，例如0. 04-0. 20%或 0. 05% -0. 10%。合適地，按相應(yīng)地鹽的鋅部分所定義的鋅離子源的量按總組合物的重量計(jì)為 0. 01% -2. 50%，例如 0. 04-0. 70%。合適地，鋅離子源是鋅鹽，如氯化鋅、檸檬酸鋅、醋酸鋅、硫酸鋅、葡萄糖酸鋅、水楊酸鋅、乳酸鋅、蘋果酸鋅、馬來(lái)酸鋅、酒石酸鋅、碳酸鋅、磷酸鋅、氧化鋅或硫酸鋅。其他鋅鹽參見以上提到的Vinson等人的專利(US4，022，880)。優(yōu)選的鋅鹽是氯化鋅。本發(fā)明的組合物可包含緩沖劑，其可以與鋅離子復(fù)合，從而有助于減少與配方輔料之間的任何不良的相互作用，否則這些相互作用可能降低鋅離子的有效性。該緩沖劑的實(shí)例包括檸檬酸/檸檬酸鈉緩沖劑。合適地，它們的量是使本發(fā)明組合物的PH小于pH 7.5 例如小于PH 6. 5。合適地，陰離子表面活性劑的量按總組合物的重量計(jì)為0. 1 % -15 %，例如 0. 5% -2. 5%或例如 0. 75% -2. 0%o陰離子表面活性劑的合適的實(shí)例包括堿金屬C8,烷基硫酸鹽(如十二烷基硫酸鈉，SLS)、堿金屬C8_18烷芳基磺酸鹽(如十二烷基苯磺酸鈉，SDDBS)、Cich18烷基脂肪酸的甘油單酯堿金屬磺酸鹽(如椰子甘油單酯磺酸鈉(sodium coconut monoglyceride sulphonate))、堿金屬Cich18烷基磺基乙酸鹽(如十二烷基磺基乙酸鈉)，和肌氨酸、羥乙基磺酸和?；撬岬膲A金屬鹽，如十二烷基肌氨酸鈉、月桂?；“彼徕c、肉豆蔻酰肌氨酸鈉、 棕櫚酰肌氨酸鈉、硬脂酰肌氨酸鈉、油酰肌氨酸鈉和月桂酰羥乙基磺酸鈉。合適地，陰離子表面活性劑是堿金屬C8_18烷基硫酸鹽、堿金屬C8_18烷芳基磺酸鹽或堿金屬肌氨酸鹽或它們的混合物。最適合在本申請(qǐng)使用的陰離子表面活性劑是SDDBS、SLS、十二烷基肌氨酸鈉和它們的混合物，其總濃度按組合物的重量計(jì)優(yōu)選地為0. 1% -2. 5%，更優(yōu)選0. 5% -2. 0%，甚至更優(yōu)選1. 0% -1. 5%。合適地，組合物的pH值是pH 5. 0-8. 0，比如5. 0-7. 5，例如5. 5-6. 5。
除了上述的成分之外，本發(fā)明的組合物可包含一種或多種常用于潔牙組合物中的活性劑，例如，氟源、脫敏齊 、抗菌斑齊 、抗牙石齊 、美白劑、口腔除臭齊 、抗炎齊 、抗氧化齊U、 抗真菌劑、傷口愈合劑或它們中的至少兩種的混合物。這樣的試劑以可以提供所需的治療效果的濃度存在。本發(fā)明組合物用的合適的氟離子源包括堿金屬氟化物如氟化鈉、堿金屬單氟磷酸如單氟磷酸鈉、氟化亞錫或氟化銨，提供25-3500ppm，優(yōu)選地100-1500ppm的氟離子的量。典型地氟源是氟化鈉，例如組合物可包含按重量計(jì)0. 1-0. 5%的氟化鈉，例如按重量計(jì) 0. 204% (等同927ppm的氟離子)、按重量計(jì)0. 2542% (等同1150ppm的氟離子)或按重量計(jì)0. 315% (等同1^6ppm的氟離子)。這些氟離子有助于促進(jìn)牙齒的補(bǔ)充礦質(zhì)，并可以增加牙堅(jiān)固組織的耐酸性，用于對(duì)抗齲齒、牙侵蝕(即酸化耗損)和/或牙齒磨損。為了治療牙過(guò)敏癥，本發(fā)明的組合物可包含脫敏劑。脫敏劑的實(shí)例包括小管封閉劑或神經(jīng)脫敏劑和它們的混合物，例如W002/15809 (Block)中所描述的。脫敏劑的實(shí)例包括鍶鹽如氯化鍶、醋酸鍶或硝酸鍶或者鉀鹽如檸檬酸鉀、氯化鉀、碳酸氫鉀、葡糖糖酸鉀和特別是硝酸鉀。脫敏劑如鉀鹽通常的量按總組合物的重量計(jì)在2% -8%之間，例如可使用按重量計(jì)為5%的硝酸鉀。本發(fā)明的組合物可包含美白劑，例如選自聚磷酸鹽，如三聚磷酸鈉(STP)和/ 或具有高清潔特性的任何其他的二氧化硅磨擦劑。STP的量按總組合物的重量計(jì)可為 2% -15-10%。高清潔二氧化硅磨擦劑的實(shí)例包括那些商品名為kodent 124、 Tixosil 63,Sorbosil AC39,Sorbosil AC43和 Sorbosil AC35，且以合適的量存在，按總組合物的重量計(jì)可為，例如高達(dá)20%，如5-15%。本發(fā)明的組合物將包含其他配方試劑，如研磨劑、增稠劑、濕潤(rùn)劑、芳香劑、甜味劑、遮光劑或著色劑、防腐劑和水，選自那些在口腔衛(wèi)生組合物領(lǐng)域中用于所述目的的常用試齊LU為促進(jìn)配方的發(fā)泡特性，除了陰離子表面活性劑之外，還可以使用兩性離子型、兩性型和非-或低-離子型表面活性劑。兩性表面活性劑的實(shí)例包括長(zhǎng)鏈烷基甜菜堿如市售的Albright&Wilson生產(chǎn)的商品為“Empigen BB"的產(chǎn)品、長(zhǎng)鏈烷基酰胺烷基甜菜堿如椰油酰胺丙基甜菜堿、烷基兩性 (二)乙酸鹽，或低離子表面活性劑如Croda生產(chǎn)的商品名為Adinol CT的甲基椰油?；撬徕c，或它們中的至少兩種的混合物。合適地，其他表面活性劑或組合的表面活性劑的量按總組合物的重量計(jì)為 0. 1% -15%的范圍，例如 0. 5% -10%或 1.0% -5%0用于本發(fā)明組合物的合適的濕潤(rùn)劑包括甘油、木糖醇、山梨醇、丙二醇或聚乙二醇，或它們中的至少兩種的混合物；該濕潤(rùn)劑的量按總組合物的重量計(jì)為10%到80%，例如 20% -70%或 30% -60%。根據(jù)本發(fā)明的組合物可通過(guò)將適當(dāng)?shù)南鄬?duì)量的組分按任何方便的順序混合而制備得到，如果需要，調(diào)整PH值以獲得最終想要的值。pH值是在組合物和水以1 3的重量比形成漿體時(shí)測(cè)定。
當(dāng)然，本發(fā)明組合物還可以在口腔外使用，用于清潔假牙等。本發(fā)明的口服組合物典型地制成牙膏、噴霧劑、漱口劑、凝膠劑、錠劑(lozenges)、 口香糖、片劑、軟錠劑(pastilles)、速溶粉劑(instant powders)、爽口片(oral strips)、 口腔貼片劑、傷口敷劑、牙科膠粘劑等形式。當(dāng)組合物是牙膏的形式時(shí)，其適用于容納在如本領(lǐng)域常用的層壓管或泵中并從中分配。其他實(shí)例可包括囊罐(bag-in-can)或囊閥(bag-on-valve)遞藥系統(tǒng)，其利用如戊烷或異戊烷的起泡劑。一種制造本發(fā)明組合物的典型方法包括將各組分混合，適合在真空下混合，直到獲得均勻的混合物，并且如果需要，調(diào)節(jié)PH值?，F(xiàn)在將通過(guò)以下非限制的實(shí)施例的方式描述本發(fā)明。實(shí)施例1抗微生物試驗(yàn)MIC 試驗(yàn)方法通過(guò)以下方法測(cè)定材料組合物的MIC。每種細(xì)菌的試驗(yàn)接種物的新鮮培養(yǎng)基用無(wú)菌的0. 專用蛋白胨溶液稀釋以獲得每ml大約IO6菌落形成單位(Cfu)的濃度。測(cè)試材料的樣品用無(wú)菌大豆胰蛋白胨肉湯(TSB)稀釋以獲得初始原液，典型的或2% (10000 或20000ppm)。但是，可以理解地，如果想要研究不同范圍的濃度，材料的初始原液的濃度可以改變。標(biāo)準(zhǔn)的96孔塑料微孔板的每行(標(biāo)記為A-H)分配一個(gè)樣品，即每板8個(gè)樣品。H 行只含有TSB，用作細(xì)菌對(duì)照以顯示沒(méi)有任何測(cè)試材料時(shí)細(xì)菌生長(zhǎng)所導(dǎo)致的渾濁度。在無(wú)菌條件下將200 μ 1的材料原始稀釋液轉(zhuǎn)移至適當(dāng)?shù)男械牡?和第7孔中。用 8道微量移液管使所有其他試驗(yàn)孔充滿100 μ 1的無(wú)菌TSB。在將100 μ 1轉(zhuǎn)移至第2列前， 第1列的每個(gè)孔中的內(nèi)容物用槍頭向上和向下吸取樣品而混合。相同的無(wú)菌槍頭用于轉(zhuǎn)移第7列每個(gè)孔中的100 μ 1至第8列的適當(dāng)孔中。然后， 這組8個(gè)槍頭被丟棄到消毒液中。用8個(gè)新的無(wú)菌槍頭重復(fù)該過(guò)程，從第2列轉(zhuǎn)移100 μ 1 到第3列(以及到第8和9列)。過(guò)程繼續(xù)直到第6和12列的所有孔含有200 μ 1?；旌虾?，從第6和12列的孔中棄除100μ 1。最后，加入100μ 1預(yù)稀釋細(xì)菌試驗(yàn)培養(yǎng)基，從而得到每孔200 μ 1的最終體積。用完全相同的方法制備空白板用于8個(gè)樣品的每個(gè)組，除了加入100μ1的無(wú)菌 TBS代替細(xì)菌培養(yǎng)基外。這板用作對(duì)照板，對(duì)照該板可以讀試驗(yàn)板。然后，試驗(yàn)板和對(duì)照板用高壓滅菌膠帶密封，并在37°C下培養(yǎng)M小時(shí)。M小時(shí)后檢查孔的濁度以確定材料是否抑制了生長(zhǎng)。然后，在合適的微孔板酶標(biāo)儀中在540nm的吸光度下讀板，作為由細(xì)菌生長(zhǎng)導(dǎo)致的濁度的測(cè)量。先讀取用于每組樣品中未經(jīng)接種的對(duì)照板，然后在該酶標(biāo)儀上設(shè)定程序以使用對(duì)照讀數(shù)來(lái)使所有其他用于測(cè)試材料的相同組的接種板的板讀數(shù)清零(即消除由于培養(yǎng)過(guò)程中材料和可能的顏色改變?cè)斐傻臐岫?。因此，產(chǎn)生的校正的讀數(shù)是由細(xì)菌生長(zhǎng)產(chǎn)生的濁度造成的吸光度。MIC試驗(yàn)結(jié)果生物體MIC (百萬(wàn)分之一)IPMPSDDBS葡萄糖戀辛變異鏈球菌 ^Streptococcus mutans)1250106250金黃色葡萄球菌 ^Staphylococcus aureus )156206250大腸桿菌(Escherichia coli)3126251560MIC試驗(yàn)結(jié)果如上所示，并顯示了所有試驗(yàn)的試劑具有一些固有的抗微生物效應(yīng)。這些效應(yīng)在不同菌株之間顯著不同，變異鏈球菌(S.mutans)和金黃色葡萄球菌 (S. aureus)都對(duì)表面活性劑SDDBS高度敏感，但對(duì)IPMP和鋅相對(duì)地耐受。相反地，大腸桿菌(E. coli)對(duì)SDDBS相對(duì)不敏感，但是對(duì)IPMP和鋅更敏感。殺滅時(shí)間懸液試驗(yàn)此處所描述的方法通過(guò)殺滅時(shí)間懸液試驗(yàn)提供體外抗微生物有效性的評(píng)價(jià)。存在或缺少干擾物溶液的測(cè)試生物體懸液加入到已用硬水稀釋的產(chǎn)品樣品中?；旌衔锞S持在 20°C，或者適合產(chǎn)品使用的其他溫度。適當(dāng)?shù)慕佑|時(shí)間后，取等分部分的測(cè)試混合物。該等分部分的抗微生物活性立即用稀釋-中和法中和。計(jì)算來(lái)自測(cè)試混合物和測(cè)試生物體懸液的存活生物體的數(shù)量，并計(jì)算活菌數(shù)的減少量。材料5% ν/ν血瓊脂(BA)(用于變異鏈球菌、粘性放線菌(Actinomyces viscosus)和具核梭桿菌(Fusobacterium nucleatum))胰蛋白胨大豆瓊脂(用于大腸桿菌、金黃色葡萄球菌)稀釋劑——0.1%蛋白胨中和培養(yǎng)基-Letheen肉湯硬水(CaCO3為 375ppm)溶液A19. 84g無(wú)水MgCl2和43. 24g無(wú)水CaCl2溶解于純化水中并用容量瓶補(bǔ)至1L。溶液 B35. 02gNaHC03溶解于純化水中并用容量瓶稀釋至1L。6ml溶液A和8ml溶液B加入到600ml純化水中。用容量瓶稀釋至1L。最后的溶液過(guò)有效孔徑0. 45 μ m的膜濾器滅菌。在25 °C下，溶液的最終pH應(yīng)是7. 0 士 0. 2，必要時(shí)用 0. 5M HCl 或 0. 5M NaOH 調(diào)節(jié)。試驗(yàn)條件3g牛血清白蛋白(BSA) (Sigma, A-3425)溶解在IOOml純化水中。經(jīng)過(guò)有效孔徑 0. 45 μ m的膜濾器滅菌。試驗(yàn)培養(yǎng)基的制備從存儲(chǔ)在2_8°C下的工作培養(yǎng)基中，變異鏈球菌、大腸桿菌、粘性放線菌、具核梭桿菌和金黃色葡萄球菌的原代培養(yǎng)在適當(dāng)瓊脂的斜面上生長(zhǎng)。從繼代培養(yǎng)中轉(zhuǎn)移一些生長(zhǎng)環(huán)(loops of growth)到合適的稀釋液(0. 蛋白胨或其他)中并通過(guò)渦旋混合均勻。調(diào)整制備得到的懸液的濃度，使溶液在^Onm下的光密度相當(dāng)于約0.2。(用0.蛋白胨)制備從1 10至1 100000的十進(jìn)制連續(xù)稀釋組的測(cè)試懸液。0. Iml等分部分的合適稀釋液用傾注培養(yǎng)法(金黃色葡萄球菌、大腸桿菌)或涂布培養(yǎng)法(變異鏈球菌、具核梭桿菌(F.nucleatum)、粘性放線菌(A. viscosus))進(jìn)行雙份平板細(xì)菌計(jì)數(shù)。平板培養(yǎng)適當(dāng)?shù)臅r(shí)間(金黃色葡萄球菌、大腸桿菌約M小時(shí)；變異鏈球菌、聚核梭桿菌和粘性放線菌約72小時(shí))。培養(yǎng)后，計(jì)數(shù)每塊平板以計(jì)算并記錄原始懸液的平均cfu/ ml ο測(cè)試1/4稀釋度(25% w/w)的樣品和牙膏。首先，樣品或牙膏用硬水制成濃度為測(cè)試所需濃度的1.25倍。這考慮到測(cè)試過(guò)程中發(fā)生的產(chǎn)品稀釋。樣品在無(wú)菌容器中制備， 且配制的體積應(yīng)當(dāng)足夠用于測(cè)試每種生物體(每種生物體8ml)。抗微生物活性的評(píng)價(jià)在室溫(約20士2°C )下進(jìn)行，Iml測(cè)試生物體懸液加入到 Iml人工唾液中，然后渦旋5秒鐘。留置2分鐘。加入8ml測(cè)試產(chǎn)品，開始定時(shí)鐘并立即渦旋5秒鐘。恰當(dāng)?shù)慕佑|時(shí)間(30秒或120秒)后，移出Iml等分部分并加入到9ml的中和培養(yǎng)基中以獲得1 10的稀釋度。該稀釋液渦旋混合5秒鐘并允許中和至少5分鐘。該中和混合物進(jìn)一步地進(jìn)行Iml在9ml中的連續(xù)稀釋，且將0. Iml等分部分適當(dāng)?shù)胤峙涞?個(gè)傾注平板(大腸桿菌、金黃色葡萄球菌)或涂布平板(具核梭桿菌、變異鏈球菌、粘性放線菌)中。適當(dāng)培養(yǎng)后，記錄平板上的細(xì)菌數(shù)量，理想地，在稀釋液中每個(gè)瓊脂平板有30-300 菌落。所有實(shí)驗(yàn)均用獨(dú)立制備的細(xì)菌懸液重復(fù)。為了驗(yàn)證中和程序，制備1 10系列稀釋度的測(cè)試生物體以獲得約105CfU/ml的濃度。在8ml的“測(cè)試樣品”中加入Iml無(wú)菌純化水和Iml人造唾液。這是“驗(yàn)證溶液”。 Iml水加入到9ml中和培養(yǎng)基(陽(yáng)性對(duì)照組)中，Iml “驗(yàn)證溶液”加入到第二份的9ml中和培養(yǎng)基(試驗(yàn)組)中。約5分鐘中和時(shí)間后，0.1ml稀釋的測(cè)試生物體懸液加入到每個(gè)組中，將混合物渦旋并留置至少5分鐘。中和的混合物在稀釋液中以1 10稀釋，且未稀釋的和1 10稀釋的都用合適的瓊脂和培養(yǎng)條件進(jìn)行重復(fù)平板細(xì)菌計(jì)數(shù)。培養(yǎng)后，計(jì)數(shù)每塊平板并記錄存在的生物體的平均cfu/ml。如果對(duì)照組和試驗(yàn)組的計(jì)數(shù)相互之間差值在0. 3Logl0cfu/ml之內(nèi)，中和被認(rèn)為是有效的。如果中和是無(wú)效的，那么稀釋度可增加至 1 100。計(jì)算每個(gè)試驗(yàn)和合適的對(duì)照樣品的存活個(gè)體的平均數(shù)量，并表達(dá)為底數(shù)10的對(duì)數(shù)(對(duì)數(shù)計(jì)數(shù))。當(dāng)平板中沒(méi)有存活個(gè)體時(shí)，為了計(jì)算的目的，計(jì)數(shù)被認(rèn)為稀釋液中有0.5 菌落。通過(guò)從未處理對(duì)照溶液的對(duì)數(shù)計(jì)數(shù)中減去試驗(yàn)溶液的對(duì)數(shù)存活個(gè)體來(lái)計(jì)算“對(duì)數(shù)殺滅”。數(shù)據(jù)如下所示。平均對(duì)數(shù)殺滅定義為獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)中測(cè)得的對(duì)數(shù)殺滅值的平均值。在殺滅時(shí)間分析中，測(cè)試了單個(gè)材料和各種組合的材料。這些試驗(yàn)中所用的微生物的范圍包括牙菌斑的典型生物體(變異鏈球菌、具核梭桿菌和粘性放線菌)和分別是糞便或皮膚細(xì)菌的代表的標(biāo)準(zhǔn)的參考生物體(大腸桿菌和金黃色葡萄球菌)。在30s和120s時(shí)對(duì)每種生物體的殺滅時(shí)間數(shù)據(jù)依次顯示在

圖1和圖2中，其中圖 1是變異鏈球菌、具核梭桿菌和粘性放線菌，圖2是大腸桿菌和金黃色葡萄球菌。殺滅時(shí)間數(shù)據(jù)顯示了三種口腔生物體粘性放線菌、具核梭桿菌和變異鏈球菌(圖1)和兩種標(biāo)準(zhǔn)生物體大腸桿菌、金黃色葡萄球菌(圖2~)的數(shù)據(jù)。測(cè)試了以下溶液
IPMP在10%乙醇中0. lw/w溶液的1/4稀釋度SDDBS 1 % w/v水溶液的1/4稀釋度葡萄糖酸鋅1. 25% w/v水溶液的1/4稀釋度。結(jié)果圖1 對(duì)細(xì)菌的殺滅時(shí)間
權(quán)利要求
1.一種組合物，其包括含4-異丙基-3-甲苯酚(IPMP)的抗菌系統(tǒng)、鋅離子源和陰離子表面活性劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其是一種口腔護(hù)理組合物，包含口服可接受的載體或輔料。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的組合物，其中陰離子表面活性劑是堿金屬C8_18烷基硫酸鹽或堿金屬C8_18烷芳基磺酸鹽或堿金屬肌氨酸鹽或它們的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的組合物，其中陰離子表面活性劑是SDDBS、SLS或十二烷基肌氨酸鈉或它們的混合物。
5.根據(jù)前述任一權(quán)利要求中的組合物，其中鋅離子源選自氯化鋅、檸檬酸鋅、醋酸鋅、 硫酸鋅、葡萄糖酸鋅、水楊酸鋅、乳酸鋅、蘋果酸鋅、馬來(lái)酸鋅、酒石酸鋅、碳酸鋅、磷酸鋅、氧化鋅或硫酸鋅。
6.根據(jù)前述任一權(quán)利要求中的組合物，其中IPMP的濃度按總組合物的重量計(jì)是 0. 01% -1. 0%。
7.根據(jù)前述任一權(quán)利要求中的組合物，其中陰離子表面活性劑的濃度按總組合物的重量計(jì)是0. -15%。
8.根據(jù)前述任一權(quán)利要求中的組合物，其中按對(duì)應(yīng)的鹽的鋅部分所定義的鋅離子源存在的量按總組合物的重量計(jì)是0. 01% -2. 5%。
9.根據(jù)前述任一權(quán)利要求中的組合物，其包含一種氟離子源。
10.根據(jù)權(quán)利要求8的組合物，其中氟離子源是氟化鈉。
11.根據(jù)前述任一權(quán)利要求中的組合物，其包含一種脫敏劑。
12.根據(jù)前述任一權(quán)利要求中的組合物，其包含一種美白劑。
13.根據(jù)前述任一權(quán)利要求中的組合物，其包含一種口腔除臭劑。
14.根據(jù)前述任一權(quán)利要求中的組合物，其是牙膏的形式。
15.根據(jù)前述任一權(quán)利要求中的組合物，其是漱口劑的形式。
全文摘要
描述了一種包括含4-異丙基-3-甲苯酚(IPMP)的抗菌系統(tǒng)、鋅離子源和陰離子表面活性劑的組合物，如口腔護(hù)理組合物。
文檔編號(hào)A61K33/30GK102378627SQ201080015215
公開日2012年3月14日 申請(qǐng)日期2010年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月3日
發(fā)明者A·米德爾頓, A·阿克斯, C·S·紐比, D·布拉肖, F·利珀特, G·R·伯內(nèi)特 申請(qǐng)人:葛蘭素集團(tuán)有限公司