專利名稱：用于增強(qiáng)成像對比度的組合物和方法
用于增強(qiáng)成像對比度的組合物和方法背景某些醫(yī)學(xué)X射線成像技術(shù)可檢測包括不同器官、組織、細(xì)胞等等在內(nèi)的受試者目的區(qū)域?qū)Ρ榷茸兓榱嗽黾幽康膮^(qū)域的對比度，某些成像技術(shù)采用給受試者施用一種或多種對比度增強(qiáng)劑的方法。對比度增強(qiáng)劑可突出不同目的區(qū)域之間所存在的對比度差別， 或可在若不使用對比度增強(qiáng)劑此種差別將不存在時產(chǎn)生對比度差別。醫(yī)學(xué)X射線成像已有了長足進(jìn)步，尤其是涉及用于檢測對比度差別的儀器或機(jī)器。這些進(jìn)步包括提高這類儀器的速度，提高這類儀器的分辨力等等。這些進(jìn)步部分已提供給新的醫(yī)學(xué)成像方法。一種示例性方法，整體成像，可提供受試者整個身體脈管系統(tǒng)的信肩、ο與用于X射線成像的儀器的進(jìn)展相比，對比度增強(qiáng)劑的進(jìn)展還沒有開始。當(dāng)前使用X射線的醫(yī)學(xué)成像的對比度增強(qiáng)劑在應(yīng)用(例如整體成像)上有限制，原因尤其在于其以高于所需的外滲速度快速從身體內(nèi)清除、其腎毒性和其不能靶向身體的特定區(qū)域。附圖簡述在結(jié)合于本說明書并構(gòu)成本說明書一部分的附圖中，闡明了對比度增強(qiáng)劑制劑實施方案、含有該制劑的藥物組合物、制造該制劑的方法和在成像中使用該制劑的方法，其與下面給出的詳述共同起闡述制劑、組合物、方法等等實施方案實例的作用。應(yīng)該理解附圖中闡明的實施方案用于闡明的目的而不是用于限制。應(yīng)該理解在不偏離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，可對附圖中闡明的實施方案進(jìn)行改變、修正和變化，其如下文所述。

圖1闡明制備含有或結(jié)合有對比度增強(qiáng)劑的脂質(zhì)體的方法實例100。圖2闡明制備含有或結(jié)合有對比度增強(qiáng)劑的脂質(zhì)體的另一方法實例200。圖3闡明制備含有或結(jié)合有對比度增強(qiáng)劑的脂質(zhì)體的另一方法實例300。圖4顯示在室溫和37°C下在鹽水中使用不同擠出工序制備的碘海醇脂質(zhì)體制劑的實施方案的體外穩(wěn)定性測試的結(jié)果實例400。圖5顯示在室溫下在鹽水中和在37°C下在牛血漿中使用不同擠出工序按不同規(guī)模制備的碘海醇脂質(zhì)體制劑的實施方案的體外穩(wěn)定性測試的結(jié)果實例500。圖6顯示使用不同擠出工序制備的碘海醇脂質(zhì)體制劑的實施方案的體外測試的冠狀最大強(qiáng)度投影圖像，表明相對腹部血管增強(qiáng)和膀胱增強(qiáng)。詳述定義所選擇的術(shù)語或習(xí)語的定義緊接著下文列出，并貫穿整個說明書。定義包括落入術(shù)語范圍的和可用于實行的各種實施方案和/或組分形式的實例。實例的目的不是為了限制，可實行其它實施方案。所有術(shù)語的單數(shù)和復(fù)數(shù)形式二者都適合各種含義。本文所用的術(shù)語“X射線成像” 一般指使用產(chǎn)X射線源的許多程序中的任一種。X 射線成像實例包括計算機(jī)斷層成像等等。本文所用的術(shù)語“計算機(jī)斷層成像”或“CT”或“CAT”，一般指用旋轉(zhuǎn)式X射線儀器或機(jī)器產(chǎn)生X射線輻射且當(dāng)儀器旋轉(zhuǎn)時引導(dǎo)其通過受試者區(qū)域的方法。一般檢測不被受試者吸收的輻射并記錄為數(shù)據(jù)。一般而言，將數(shù)據(jù)送到計算機(jī)，基于受試者不同區(qū)域不同的 X射線吸收，計算機(jī)創(chuàng)作器官和身體部分的詳細(xì)的橫截面圖像或切片。高分辨率CT可稱為 “顯微 CT (micro CT)，，。舉例而言，本文所用的術(shù)語“整體成像”一般指用CT獲得受試者整個身體圖像的方法。在一種類型整體成像中，可檢查整個脈管系統(tǒng)。一般而言，檢查脈管系統(tǒng)的成像稱作 “血池成像”。描述本申請闡述包括含有或結(jié)合有一種或多種對比度增強(qiáng)劑的脂質(zhì)體的組合物實例。 在一個實施例中，脂質(zhì)體含有或結(jié)合有相當(dāng)高濃度的對比度增強(qiáng)劑。在一個實施例中，脂質(zhì)體含有一種或多種X-射線成像(例如，CT成像)的對比度增強(qiáng)劑。在一個實施例中，對比度增強(qiáng)劑為非放射性。在一個實施例中，脂質(zhì)體具有附著于該脂質(zhì)體或結(jié)合有該脂質(zhì)體的一種或多種親水聚合物。在一個實施例中，這類親水聚合物附著于或結(jié)合于脂質(zhì)體表面。當(dāng)給受試者施用時，脂質(zhì)體可使受試者體內(nèi)的對比度增加。在一個實施例中，對比度持續(xù)增加較長時間。本申請還闡述含有脂質(zhì)體和對比度增強(qiáng)劑的藥物組合物實例，以及制造含有對比度增強(qiáng)劑的脂質(zhì)體組合物的方法實例。本申請也闡述在X射線成像中使用該組合物的方法實例。對比度增強(qiáng)劑本文所用的術(shù)語“對比度增強(qiáng)劑”一般指當(dāng)輻射通過基質(zhì)和與基質(zhì)相互作用時影響其衰減或強(qiáng)度或能量損失的物質(zhì)。應(yīng)該了解對比度增強(qiáng)劑可增加或降低衰減。一般而言， 本文提到的對比度增強(qiáng)劑增加輻射衰減。本文所述的對比度增強(qiáng)劑為X射線成像用的對比度增強(qiáng)劑。在一個實施例中，對比度增強(qiáng)劑用于CT。在一個實施例中，本文所用的對比度增強(qiáng)劑為非放射性。在一個實施方案中，對比度增強(qiáng)劑可含有碘，可被稱為“碘化的”。對比度增強(qiáng)劑可用多種方法分類。舉例而言，在一種分類中，碘化的對比度增強(qiáng)劑可為水溶性(例如單碘化吡啶衍生物、二-碘化吡啶衍生物、三-碘化苯環(huán)化合物等等)、水不溶性(例如丙碘酮等等)或油性(例如溶于罌粟籽油的碘、含碘的罌粟籽油的碘化脂肪酸乙酯等等)。在一個實施例中，碘化的對比度增強(qiáng)劑分組為水溶性的。現(xiàn)有的水溶性碘化的對比度增強(qiáng)劑可為三碘化苯甲酸衍生物。這些化合物可具有一個或多個苯環(huán)。這類化合物可為離子或非離子型。合適的非離子型化合物包括但不限于甲泛葡胺、碘海醇、碘帕醇、碘噴托、碘普胺、碘佛醇、碘曲侖、碘克沙醇和其它類。合適的離子型化合物對比度增強(qiáng)劑可為弱酸(pKa大約4. 0到6. 0)或弱堿(pKa 大約6.5到8.幻。一般而言，酸能夠給出或提供一個或多個質(zhì)子。在其質(zhì)子化形式中，這類酸一般基本上為電荷中性或不帶電荷。在其非質(zhì)子化形式中，這類酸一般基本上為帶負(fù)電荷。合適的弱酸物質(zhì)可具有一個或多個羧基。羧基能夠提供質(zhì)子。可將羧基連接到苯環(huán)和 /或可成為苯甲酸的一部分。這類苯甲酸實例包括但不限于醋碘苯酸鹽、泛影葡胺鹽、碘酰胺鹽、碘格利酸鹽(ioglicate)、碘拉酸鹽、碘羥拉酸鹽(ioxithalamate)、甲泛影酸鹽、碘克沙酸葡甲胺鈉和其它類。一般而言，堿能夠接受一個或多個質(zhì)子。在其質(zhì)子化形式中，這類堿一般基本上帶正電荷。在其非質(zhì)子化形式中，這類堿一般基本上為中性或不帶電荷。合適的弱堿物質(zhì)可具有一個或多個伯胺基。這類胺能夠接受質(zhì)子。弱堿物質(zhì)可為酰胺。脂質(zhì)體本文所用的術(shù)語“脂質(zhì)體”一般指含內(nèi)部孔穴的球形或大體球形粒子。脂質(zhì)體壁可包括雙層脂質(zhì)。這些脂質(zhì)可以是磷脂。有眾多脂質(zhì)和/或磷脂可用于制造脂質(zhì)體。舉例而言，常用的是具有疏水性和極性頭部基團(tuán)部分的兩親脂質(zhì)，其如磷脂所例證可在水中自發(fā)形成雙層囊泡，或可穩(wěn)定并入脂質(zhì)雙層，且其疏水部分與雙層膜的內(nèi)部疏水區(qū)接觸，其極性頭部基團(tuán)部分被導(dǎo)向該膜的內(nèi)部極性表面。本文所用的術(shù)語“磷脂”包括但不限于磷脂酸(PA)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰膽堿 (PC)、卵磷脂(EPC)、溶血磷脂酰膽堿(LPC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)和磷脂酰絲氨酸((PS)，以及它們中兩種或多種的混合物。這類形成囊泡的脂質(zhì)可為具兩個烴鏈 (通常為?；?和極性頭部基的脂質(zhì)。包括于該類中的是磷脂，例如磷脂酰膽堿(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰肌醇(PI)和鞘磷脂(SM)及其它。 這些磷脂可完全飽和或部分飽和。它們可天然存在或人工合成。在另一實施例中，可包括于脂質(zhì)體中的其它脂質(zhì)為糖脂。本文所述脂質(zhì)體實例中所用磷脂可為兩個烴鏈長度介于約1414個碳原子并具各種不飽和度的磷脂。這類磷脂的某些實例在下面給出。盡管下面所列磷脂可單用或與其它磷脂聯(lián)合使用，但該列表并非全部。也可使用未列出的其它磷脂。磷脂1-肉豆蔻酰-2-棕櫚酰-sn-甘油基_3_磷酸膽堿、肉豆蔻酰_2_硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1-肉豆蔻酰-2-棕櫚酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、肉豆蔻酰-2-硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1-棕櫚酰-2-油酰-sn-甘油基-3-磷酸酯(POPA)、1_棕櫚酰-2-油酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1_棕櫚酰_2_油酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(POPE)、1_棕櫚酰-2-油酰-sn-甘油基_3_[磷酸-rac-(l-甘油)] (POPG)、1-棕櫚酰-2-油酰-sn-甘油基-3-[磷酸-L-絲氨酸](POPS)、1-棕櫚酰-2-亞油酰-sn-甘油基-3-磷酸酯、1-棕櫚酰-2-亞油酰-sn-甘油基_3_磷酸膽堿、1_棕櫚酰-2-亞油酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺、1-棕櫚酰-2-亞油酰-sn-甘油基_3_[磷酸-rac-(l-甘油)]、1-棕櫚酰-2-亞油酰-sn-甘油基-3-[磷酸-L-絲氨酸]、1-棕櫚酰-2-花生四烯酰-sn-甘油基-3-磷酸酯、1-棕櫚酰-2-花生四烯酰-sn-甘油基_3_磷酸膽堿、1-棕櫚酰-2-花生四烯酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺、1-棕櫚酰-2-花生四烯酰-sn-甘油基-3-[磷酸-rac-(l-甘油)]、1_棕櫚酰-2-花生四烯酰-sn-甘油基-3-[磷酸-L-絲氨酸]、1-棕櫚酰-2- 二十二烷六烯酰-sn-甘油基-3-磷酸酯、1_棕櫚酰-2- 二十二碳六烯酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1-棕櫚酰-2- 二十二碳六烯酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺、1-棕櫚酰-2- 二十二碳六烯酰-sn-甘油基_3-[磷酸-rac-(l-甘油_) ]、1-棕櫚酰-2- 二十二碳六烯酰-sn-甘油基-3-[磷酸-L-絲氨酸]、1-硬脂酰-2-肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1-硬脂酰-2-棕櫚酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1_硬脂酰-2-油酰-sn-甘油基-3-磷酸酯、1-硬脂酰-2-油酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、 1-硬脂酰-2-油酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺、1-硬脂酰-2-油酰-sn-甘油基_3_[磷酸-rac- (1-甘油]、1-硬脂酰-2-油酰-sn-甘油基_3_ [磷酸-L-絲氨酸]、1_硬脂酰_2_亞油酰-sn-甘油基-3-磷酸酯、1-硬脂酰-2-亞油酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1-硬脂
6酰-2-亞油酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺、1-硬脂酰-2-亞油酰-sn-甘油基_3_[磷酸-rac-(l-甘油)]、1-硬脂酰-2-亞油酰-sn-甘油基-3-[磷酸-L-絲氨酸]、1-硬脂酰-2-花生四烯酰-sn-甘油基-3-磷酸酯、1-硬脂酰-2-亞油酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、
1-硬脂酰-2-花生四烯酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺、1-硬脂酰-2-花生四烯酰-sn-甘油基-3-[磷酸-rac- (1-甘油)]、1-硬脂酰-2-花生四烯酰-sn-甘油基-3-[磷酸-L-絲氨酸]、1-硬脂酰-2- 二十二碳六烯酰-sn-甘油基-3-磷酸酯、1-硬脂酰-2- 二十二碳六烯酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1-硬脂酰-2- 二十二碳六烯酰-sn-甘油基_3_磷酸乙醇胺、1-硬脂酰-2- 二十二碳六烯酰-sn-甘油基_3-[磷酸-rac-(l-甘油)-]、1_硬脂酰-2- 二十二碳六烯酰-sn-甘油基-3-[磷酸-L-絲氨酸]、1-油酰-2-肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1-油酰-2-棕櫚酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1-油酰_2_硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1，2-二肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-磷酸酯(DMPA)、1，2-二肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿(DMPC)、1，2-二肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(DMPE)、 1，2- 二肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-[磷酸-rac- (1-甘油)](DMPG) ,1,2- 二肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-[磷酸-L-絲氨酸](DMPS)、1，2-雙十五烷酰-sn-甘油基_3_磷酸膽堿、1，2- 二棕櫚酰-sn-甘油基-3-磷酸酯(DPPA) ,1,2- 二棕櫚酰-sn-甘油基_3_磷酸膽堿(DPPC)、 1,2- 二棕櫚酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(DPPE) ,1,2- 二棕櫚酰-sn-甘油基_3_[磷酸-rac-(l-甘油)](DPPG) ,1,2- 二棕櫚酰-sn-甘油基 _3_[磷酸-L-絲氨酸)(DPPS)、1，
2-二植烷酰-sn-甘油基-3-磷酸酯、1，2- 二植烷酰-sn-甘油基_3_磷酸膽堿、1，2- 二植烷酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺、1，2- 二植烷酰-sn-甘油基_3_ [磷酸-rac- (1-甘油)]、 1,2- 二植烷酰-sn-甘油基_3-[磷酸-L-絲氨酸]、1，2-雙十七烷酰-sn-甘油基_3_磷酸膽堿、1，2- 二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸酯(DSPA) ,1,2- 二硬脂酰-sn-甘油基_3_磷酸膽堿(DSPC)、1，2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(DSPE)、1，2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-[磷酸-rac-(l-甘油)](DSPG) ,1,2- 二硬脂酰-sn-甘油基_3_[磷酸-L-絲氨酸]、1，2- 二溴硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1，2-雙十九烷酰-sn-甘油基_3_磷酸膽堿、1，2_雙二十烷酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1，2-雙二i^一烷酰-sn-甘油基_3_磷酸膽堿、1，2- 二山崳酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、，2-雙二十三烷酰-sn-甘油基_3_磷酸膽堿、1，2-雙二十四烷酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1，2-二順式肉豆蔻烯酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1，2- 二反式肉豆蔻異烯酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1，2- 二順式棕櫚烯酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1，2- 二反式棕櫚異烯酰-sn-甘油基_3_磷酸膽堿、1， 2- 二順式棕櫚烯酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺、1，2- 二油酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿 (DOPC) ,1,2- 二油酰-sn-甘油基-3-磷酸酯(DOPA) ,1,2- 二油酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿 (DOPC) ,1,2- 二油酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(DOPE) ,1,2- 二油酰-sn-甘油基-3-[磷酸-rac- (1-甘油)](DOPG) ,1,2- 二油酰-sn-甘油基-3-[磷酸-L-絲氨酸](DOPS)、1，2- 二反油烯酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1，2- 二反油烯酰-sn-甘油基_3_磷酸乙醇胺、1，2- 二反油烯酰-sn-甘油基-3-[磷酸-rac- (1-甘油)]、1，2- 二亞油酰-sn-甘油基_3_磷酸酯、 1,2- 二亞油酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1，2- 二亞油酰-sn-甘油基_3_磷酸乙醇胺、1， 2- 二亞油酰-sn-甘油基-3-[磷酸-rac- (1-甘油)]、1，2- 二亞油酰-sn-甘油基_3_ [磷酸-L-絲氨酸]、1，2- 二亞油烯酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1，2- 二亞油烯酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺、1，2- 二亞油烯酰-sn-甘油基-3-[磷酸-rac- (1-甘油)]、1，2-雙二十烷烯酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1，2- 二花生四烯酰-sn-甘油基_3_磷酸酯、1，2- 二花生四烯酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1，2- 二花生四烯酰-sn-甘油基_3_磷酸乙醇胺、1， 2- 二花生四烯酰-sn-甘油基_3-[磷酸-rac-(l-甘油)]、1，2- 二花生四烯酰-sn-甘油基-3-[磷酸-L-絲氨酸]、1，2- 二芥酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1，2-雙二十二碳六烯酰-sn-甘油基-3-磷酸酯、1，2-雙二十二碳六烯酰-sn-甘油基_3_磷酸膽堿、1，2-雙二十二碳六烯酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺、1，2- 二十二碳六烯酰-sn-甘油基_3_[磷酸-rac-(l-甘油)]、1，2-雙二十二碳六烯酰-sn-甘油基_3-[磷酸-L-絲氨酸]和1， 2-雙二十四烯酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿。脂質(zhì)體組合物可配制為包括脂肪醇、脂肪酸和/或膽固醇酯或其它藥物上可接受的賦形劑的量。例如，脂質(zhì)體可包括能穩(wěn)定主要由磷脂組成的囊泡或脂質(zhì)體的脂質(zhì)。例如， 可使用約25到40摩爾百分比的膽固醇。在一個實施方案中，所用脂質(zhì)體類型為“空間穩(wěn)定脂質(zhì)體”?？臻g穩(wěn)定脂質(zhì)體一般包括含有或包有柔性水溶性(親水)聚合物鏈包被的表面。這類聚合物鏈可防止脂質(zhì)體與血漿組分之間的相互作用，血漿組分在通過血液細(xì)胞吸收脂質(zhì)體和從血液中除去脂質(zhì)體方面起重要作用?？臻g穩(wěn)定脂質(zhì)體可避免為單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)器官、主要是肝臟和脾臟(網(wǎng)狀系統(tǒng)或REQ所攝取。這類空間穩(wěn)定脂質(zhì)體也可稱作“長循環(huán)脂質(zhì)體”?？臻g穩(wěn)定脂質(zhì)體可含有用聚合物鏈衍生的脂質(zhì)或磷脂。可使用的脂質(zhì)或磷脂一般為上述中的任何一種。一種示例性磷脂為具有活性氨基的磷脂酰乙醇胺(PE)，該氨基便于偶聯(lián)活化聚合物。示例性PE為二硬脂酰PE (DSPE)。適合用于空間穩(wěn)定脂質(zhì)體的聚合物實例包括但不限于親水聚合物聚乙烯吡咯烷酮、聚甲基嗯唑啉、聚乙基嗯唑啉、聚羥基丙基甲基丙烯酸胺、聚甲基丙烯酸胺、聚二甲基丙烯酸胺、聚乳酸、聚乙二醇酸和衍生化纖維素，例如羥甲基纖維素或羥乙基纖維素?？墒褂镁圪嚢彼帷？墒褂眠B接于合適脂質(zhì)(例如PE)的含這些聚合物的脂質(zhì)-聚合物綴合物?？墒褂闷渌酆衔飳嵗Ｔ谝粋€實施方案中，衍生化脂質(zhì)或磷脂中的聚合物為聚乙二醇(PEG)。PEG可為多種分子量中的任一種。在一個實施例中，PEG鏈分子量介于約1，000-10, 000道爾頓之間。 一旦形成脂質(zhì)體，PEG鏈可提供親水鏈的表面包被，足以延長缺乏此種包被情況下的脂質(zhì)體血液循環(huán)時間。這類脂質(zhì)體可稱作“PEG化脂質(zhì)體”。PEG化脂質(zhì)體可包括由ALZA公司提供的所謂的STEALTH. RTM.脂質(zhì)體。PEG化脂質(zhì)體也可包括其表面具PEG的脂質(zhì)體，其中所述PEG可在將該脂質(zhì)體施用于受試者后于某一時間從脂質(zhì)體釋放。在一個實施例中，可存在將PEG或其它親水聚合物附著于脂質(zhì)體表面和/或包含脂質(zhì)體表面的脂質(zhì)分子的一種或多種鍵或聯(lián)接。在一個實施方案中，可裂解這類鍵或聯(lián)接以使PEG從脂質(zhì)體分離。例如，PEG可由一個或多個二硫鍵連接于脂質(zhì)。二硫鍵可由游離硫醇裂解，以從脂質(zhì)體釋放PEG。可使用其它類型的可裂解聯(lián)接或鍵將聚合物連接于脂質(zhì)體。可使用其它類型的藥劑或化合物裂解這類鍵或聯(lián)接。在一個實施例中，如上文所述，所用脂質(zhì)體具有約60和75摩爾％的一種或多種磷脂的組合物，該磷脂具長約1414個碳原子的碳鏈。這些磷脂的一部分可連接于一種或多種親水聚合物，以使約1-20摩爾％的脂質(zhì)體組合物為用聚合物鏈衍生的磷脂。另外，通常為了穩(wěn)定脂質(zhì)體的目的，所用脂質(zhì)體可具有約25-40摩爾％膽固醇或脂肪醇、脂肪酸和/或其它膽固醇酯或其它藥學(xué)上可接受賦形劑。在另一個實施例中，脂質(zhì)體可具有一個或多個可從脂質(zhì)體表面接近的分子，通常稱作“配體”，舉例而言，其特異性結(jié)合或連接一種或多種分子或抗原。這類配體可引導(dǎo)或?qū)⒅|(zhì)體靶向特定細(xì)胞或組織，并可結(jié)合細(xì)胞或組織上的分子或抗原或與細(xì)胞或組織結(jié)合的分子或抗原上。配體可為抗體或抗體片段。抗體可為單克隆抗體或片段。這類脂質(zhì)體可為稱為“靶向脂質(zhì)體”的類型。在一個實施例中，靶向脂質(zhì)體具有已經(jīng)過修飾用于將抗體分子偶聯(lián)到脂質(zhì)體外表面的脂質(zhì)或磷脂。這些修飾過的脂質(zhì)可具不同類型。修飾過的脂質(zhì)可含有連接于脂質(zhì)的間隔鏈。間隔鏈可為親水聚合物。親水聚合物通?？赡┒斯δ芑?，用于將抗體偶聯(lián)到其功能化末端。功能化末端基團(tuán)可為馬來酸亞胺基，用于選擇性偶聯(lián)于抗體巰基。其它功能化末端基團(tuán)可包括用于與抗體巰基反應(yīng)的乙酰溴胺和二硫基，用于與抗體胺基反應(yīng)的活化酯基和醛基。酰胼基可和醛類反應(yīng)，由此產(chǎn)生眾多的生物學(xué)相關(guān)化合物。酰胼也可通過活性酯類或碳二亞胺活化的羧基來醚化。用作?；镔|(zhì)的活性酸疊氮基可易于從酰胼得到，使得可與含氨基的配體連接。在另一個實施例中，磷脂可用生物素分子修飾。為了將抗體分子附著于生物素化脂質(zhì)體表面，一旦形成脂質(zhì)體，也可用生物素修飾抗體分子，然后在抗生物素蛋白存在下溫育。生物素化脂質(zhì)例如市售生物素化PE。在另一個實施例中，脂質(zhì)可由用于將靶向分子與脂質(zhì)體表面結(jié)合的底物修飾。通常底物(用生物素作為例示)相當(dāng)小，例如小于約5，000道爾頓，以使其加入到多室脂質(zhì)體中，而盡可能不破壞脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)。底物可為一種能不可逆結(jié)合到靶分子上的底物，以確保靶分子在血流中經(jīng)脂質(zhì)體整個壽期與脂質(zhì)體持續(xù)結(jié)合。含有對比度增強(qiáng)劑的脂質(zhì)體的制備可通過多種方法制備脂質(zhì)體。方法實例包括但不限于水合干脂質(zhì)、將脂質(zhì)的揮發(fā)性有機(jī)溶液引入到水溶液中以引起有機(jī)溶液蒸發(fā)、透析脂質(zhì)和去污劑或表面活性劑的水溶液以除去該去污劑或表面活性劑，以及其他方法。脂質(zhì)體可含有或結(jié)合有一種或多種對比度增強(qiáng)劑。在一個實施例中，脂質(zhì)體含有對比度增強(qiáng)劑。在制造脂質(zhì)體過程中，可在任何適當(dāng)?shù)臅r間加入對比度增強(qiáng)劑。例如，可在脂質(zhì)體形成前使對比度增強(qiáng)劑與脂質(zhì)體組分結(jié)合。可在制造脂質(zhì)體時使對比度增強(qiáng)劑與脂質(zhì)體組分結(jié)合。也可在脂質(zhì)體形成后加入對比度增強(qiáng)劑。可存在將對比度增強(qiáng)劑與脂質(zhì)體結(jié)合的其它方法。一般而言，親水性對比度增強(qiáng)劑位于脂質(zhì)體粒子的內(nèi)部孔穴或與脂質(zhì)體粒子的內(nèi)部孔穴結(jié)合。親脂性對比度增強(qiáng)劑一般位于或與脂質(zhì)體粒子的脂質(zhì)雙層結(jié)合。一般而言，本文對比度增強(qiáng)劑位于脂質(zhì)體內(nèi)部孔穴或與脂質(zhì)體內(nèi)部孔穴結(jié)合。當(dāng)使用碘化的對比度增強(qiáng)劑時，脂質(zhì)體實例可含有至少30mg碘/毫升(I/ml)脂質(zhì)體懸浮液。脂質(zhì)體的一個實例可含有介于約35-約250mg I/ml之間的脂質(zhì)體懸浮液。脂質(zhì)體的一個實例可含有介于約37-約200mg I/ml之間的脂質(zhì)體懸浮液。脂質(zhì)體的一個實例可含有介于約80-約 160mgl/ml之間的脂質(zhì)體懸浮液。脂質(zhì)體的一個實例可含有介于約100-約120mg I/ml之間的脂質(zhì)體懸浮液。脂質(zhì)體的一個實例可含有介于約85-約IOOmg I/ml之間的脂質(zhì)體懸浮液。脂質(zhì)體的一個實例可含有超過IOOmg I/ml的脂質(zhì)體懸浮液。有很多方法用于將對比度增強(qiáng)劑裝入脂質(zhì)體。參考圖1-3的流程圖可較好理解方法實例。盡管出于簡化說明的目的，用一系列圖框來顯示和闡述要闡明的方法，但應(yīng)該了解這類方法并不受圖框次序限制，某些圖框可以不同的次序出現(xiàn)和/或與來自所顯示和闡述的圖框中的其他圖框同時出現(xiàn)。此外，可能不一定需要所有闡明的圖框就可實行方法實例。 圖框可聯(lián)合起來或分開成為多種組分。另外，可采用另外的和/或備選的并非闡明的圖框中的另外方法。盡管圖例闡明各種行為連續(xù)發(fā)生，但應(yīng)該了解各種行為可同時發(fā)生、基本上平行地發(fā)生和/或基本上在不同時間點發(fā)生。圖1-3圖的目的并非限制所闡述的實施例的實行。圖1中闡明的是用于制備含有或結(jié)合有對比度增強(qiáng)劑的脂質(zhì)體的方法實例100。 該方法可包括選擇一種或多種待用對比度增強(qiáng)劑(圖框10 。該方法也可包括在一種或多種對比度增強(qiáng)劑存在下形成脂質(zhì)體(圖框110)。一般而言，可使用早先闡述的制備脂質(zhì)體的方法來實施如圖框110所闡明的步驟。這些方法可包括水合干脂質(zhì)、將脂質(zhì)的揮發(fā)性有機(jī)溶液引入到水溶液中以引起有機(jī)溶液蒸發(fā)、透析脂質(zhì)和去污劑或表面活性劑的水溶液以除去該去污劑或表面活性劑，以及其它方法。值得注意的是，可通過在高壓下、在高流速下或在所述兩者下擠出脂質(zhì)體而使脂質(zhì)體穩(wěn)定性大幅提高(圖框11 。擠出壓力和/或流速可用數(shù)種方法來處理。兩種方法實例是改變?yōu)V器孔徑以及改變所用濾器的結(jié)構(gòu)。一般而言，流速通過測量流速/總孔面積來計算(LPH/m2)?？讖娇梢?guī)定所用濾器的孔密度，如與濾器的外形尺寸相反。已發(fā)現(xiàn)，流速/ 總孔面積越高并且擠出所述溶液時的壓力越高，則所得脂質(zhì)體更穩(wěn)定。在一個實施方案中，“高”流速可包括至少約800-1，000LPH/m2的流速/總孔面積 (LPH/m2)。在另一個實施方案中，“高”流速可包括約1，000-5，000LPH/m2的流速/總孔面積。在另一個實施方案中，“高”流速可包括約5，000-15, 000LPH/m2的流速/總孔面積。在另一個實施方案中，“高”流速可包括約15，000-25，000LPH/m2的流速/總孔面積。在另一個實施方案中，“高”流速可包括約25，000-50，000LPH/m2的流速/總孔面積。在又另一個實施方案中，“高”流速可包括大于50，000LPH/m2的流速/總孔面積。在一個實施方案中，“高”擠出壓力可包括至少40psi的壓力。在另一個實施方案中，“高”擠出壓力可包括至少約50psi的壓力。在另一個實施方案中，“高”擠出壓力可包括約50-100psi的壓力。在另一個實施方案中，“高”擠出壓力可包括大于約IOOpsi的壓力。在另一個實施方案中，“高”擠出壓力可包括約100-150psi的壓力。在另一個實施方案中，“高”擠出壓力可包括約100-200psi的壓力。在另一個實施方案中，“高”擠出壓力可包括大于約200psi的壓力。在另一個實施方案中，“高”擠出壓力可包括約200-250psi的壓力。在另一個實施方案中，“高”擠出壓力可包括約MOpsi的壓力。在另一個實施方案中， “高”擠出壓力可包括大于250psi的壓力。圖2中闡明的是制備含有或結(jié)合有對比度增強(qiáng)劑的脂質(zhì)體的另一方法實例200。 該方法可包括選擇一種或多種待用對比度增強(qiáng)劑(圖框20 。該方法也可包括濃縮該一種或多種對比度增強(qiáng)劑(圖框210)。該方法也可包括在存在一種或多種對比度增強(qiáng)劑存在情況下形成脂質(zhì)體(圖框21 。該方法也可包括如上所述的擠出脂質(zhì)體(圖框220)和濃縮脂質(zhì)體(圖框225)?？墒褂枚喾N方法來對一種或多種對比度增強(qiáng)劑實施濃縮(圖框210)。在一個實施例中，可使用這類方法來濃縮一種或多種對比度增強(qiáng)劑市購溶液。在一個實施例中，可將對比度增強(qiáng)劑從溶液中沉淀，將沉淀出的對比度增強(qiáng)劑以高于原始溶液的濃度懸浮于液體中。在另一個實施例中，可通過蒸發(fā)濃縮溶液中的對比度增強(qiáng)劑。一個蒸發(fā)實例可為旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)?？墒褂闷渌椒āＴ谝粋€實施例中，對比度增強(qiáng)劑可濃縮至少10%。在一個實施例中，對比度增強(qiáng)劑溶液可濃縮100% (即2倍)或更多。在另一個實施例中，可將固態(tài)形式對比度增強(qiáng)劑以相當(dāng)高的濃度(例如高于市購溶液的濃度)溶于液體中。在一個實施例中， 可使用加熱來增加對比度增強(qiáng)劑在溶液中的溶解性。在另一個實施例中，可使用對比度增強(qiáng)劑在其中溶解性比另一種更好的溶劑。應(yīng)該了解，脂質(zhì)體懸浮液的粘性一般由脂質(zhì)體濃度決定，而一般并非由脂質(zhì)體內(nèi)容物的粘性決定。舉例而言，已裝入脂質(zhì)體的對比度增強(qiáng)劑可在脂質(zhì)體內(nèi)形成凝膠相或甚至是結(jié)晶體(例如若溫度降低)。一般而言，這并不影響脂質(zhì)體懸浮液，而且可促進(jìn)脂質(zhì)體懸浮液的穩(wěn)定性(例如通過降低對比度增強(qiáng)劑從脂質(zhì)體滲漏的可能性)。在制成脂質(zhì)體且處于溶液中后，可通過減少溶液體積而基本上不改變?nèi)芤褐兄|(zhì)體的數(shù)量來濃縮脂質(zhì)體溶液，以得到更濃的脂質(zhì)體溶液?？捎枚喾N方法將脂質(zhì)體濃縮(圖框22幻。當(dāng)脂質(zhì)體在水溶液中時，通過除去水的濃縮可稱為脫水。一個脫水的方法實例可以是超濾。在一個超濾實例中，可將液體中的脂質(zhì)體懸浮液通過濾器或膜，以減少一定量脂質(zhì)體懸浮其間的液體的數(shù)量。還可使用透析過濾來從脂質(zhì)體懸浮液中除去未裝入的碘。其他方法實例可包括離子交換、用超速離心洗滌脂質(zhì)體、透析等等。這些方法可產(chǎn)生具有濃度為約35-250mg I/ml脂質(zhì)體懸浮液的實例。脂質(zhì)體的一個實例可含有介于37 與200mg I/ml之間的脂質(zhì)體懸浮液。脂質(zhì)體的一個實例可含有超過IOOmg I/ml的脂質(zhì)體懸浮液。這些方法也可從脂質(zhì)體懸浮液除去雜質(zhì)。在一個實施例中，雜質(zhì)可包括沒有被包封到脂質(zhì)體中或未與脂質(zhì)體結(jié)合的對比度增強(qiáng)劑。圖3中闡明的是用于制備含有或結(jié)合有對比度增強(qiáng)劑的脂質(zhì)體的另一方法實例 300。方法300可包括在載藥劑存在下形成脂質(zhì)體(圖框30 。該方法也可包括在脂質(zhì)體里外之間建立離子梯度(圖框310)。該方法也可包括將一種或多種離子性碘化的苯裝入脂質(zhì)體(圖框315)。圖3闡明的方法可為一種或一類稱為主動載藥或遠(yuǎn)程載藥的方法。在主動載藥或遠(yuǎn)程載藥的一個實例中，在脂質(zhì)體形成后或部分形成后，待由脂質(zhì)體包含或位于脂質(zhì)體 (例如對比度增強(qiáng)劑)內(nèi)的對比度增強(qiáng)劑或藥劑可進(jìn)入脂質(zhì)體。如此形成的脂質(zhì)體一般為那些制造過程已完成的脂質(zhì)體。部分形成的脂質(zhì)體可能尚未完成制造過程。在一個方法實例中，可從所形成脂質(zhì)體的脂質(zhì)體外面和脂質(zhì)體的里面或之間建立離子梯度(例如，脂質(zhì)體外面的一種或多種離子濃度不同于脂質(zhì)體里面的濃度)。待裝載于脂質(zhì)體內(nèi)的對比度增強(qiáng)劑可從脂質(zhì)體外面移到脂質(zhì)體里面。這種移動可歸因于對比度增強(qiáng)劑通過脂質(zhì)體膜的移動。一般而言，能夠通過膜移動的對比度增強(qiáng)劑可基本上為中性電荷或無電荷。這種移動可基于濃度梯度(例如，脂質(zhì)體外面的對比度增強(qiáng)劑濃度大于脂質(zhì)體內(nèi)面)。這種移動可基于離子梯度。這種移動可基于其他因素或各種因素組合。一旦進(jìn)入到脂質(zhì)體里面，脂質(zhì)體里面與脂質(zhì)體外面相比較的離子濃度差別可阻止或妨礙對比度增強(qiáng)劑從脂質(zhì)體移出。在一個實施例中，脂質(zhì)體里面與脂質(zhì)體外面相比較的離子濃度差別可化學(xué)改變對比度增強(qiáng)劑，以阻止或妨礙其從脂質(zhì)體移出。一個離子梯度實例可為pH梯度。水合脂質(zhì)體可具有選擇的內(nèi)部和外部pH。該pH可基于脂質(zhì)體于其中形成的環(huán)境的PH來選擇。然后可滴定水合脂質(zhì)體所處的外部溶液直至得到所選擇的不同于內(nèi)部PH的pH。也可用所選擇的不同于內(nèi)部pH的另一 pH溶液來交換外部溶液。例如，脂質(zhì)體所存在的初始外部溶液可具有5. 5的pH，然后用可具有8. 5的 PH的溶液滴定或交換。一旦對比度增強(qiáng)劑進(jìn)入脂質(zhì)體，脂質(zhì)體里面的對比度增強(qiáng)劑可通過接受或提供一個或多個質(zhì)子來發(fā)生化學(xué)改變。已接受或提供一個或多個質(zhì)子的對比度增強(qiáng)劑可帶有電荷。帶有電荷的對比度增強(qiáng)劑可能不能夠通過脂質(zhì)體膜，或其通過脂質(zhì)體膜的能力受到抑制。在這些脂質(zhì)體中，對比度增強(qiáng)劑可能不能脫離脂質(zhì)體，或具有降低的脫離脂質(zhì)體的能力。在另一個主動載藥或遠(yuǎn)程載藥實例中，已形成或部分形成的脂質(zhì)體可含有載藥劑。例如，在該載藥劑存在下可形成脂質(zhì)體。載藥劑可幫助或促進(jìn)建立脂質(zhì)體內(nèi)部的某些條件，例如氫離子濃度。載藥劑可促進(jìn)對比度增強(qiáng)劑的化學(xué)改變，例如促進(jìn)對比度增強(qiáng)劑接受或提供一個或多個質(zhì)子。載藥劑可防止或阻止進(jìn)入脂質(zhì)體的對比度增強(qiáng)劑離開脂質(zhì)體。在一個方法實例中，將弱酸性對比度增強(qiáng)劑(pKa從大約4.0到6. 5)裝入脂質(zhì)體。 這種試劑可為弱兩性。弱酸性試劑其質(zhì)子化形式可基本上不帶電荷。弱酸性試劑其非質(zhì)子化形式可基本上帶負(fù)電荷。一般而言，這類弱酸試劑可具有一個或多個游離羧基。這類游離羧基可為能夠提供質(zhì)子的離子化形式。弱酸性對比度增強(qiáng)劑實例可包括醋碘苯酸鹽、泛影葡胺鹽、碘酰胺鹽、碘格利酸鹽、碘拉酸鹽、碘羥拉酸鹽(ioxithalamate)、甲泛影酸鹽、碘克沙酸鹽和其它類。在該方法的一個實例中，可在存在醋酸鈣(例如(CH3COO)2Ca)時形成脂質(zhì)體。醋酸鈣可為載藥劑。醋酸鈣存在于脂質(zhì)體內(nèi)部和外部溶液中。然后可例如通過稀釋將醋酸鈣從外相移到脂質(zhì)體。脂質(zhì)體內(nèi)部的醋酸鈣可分離為鈣離子和醋酸根離子。醋酸根離子可與脂質(zhì)體內(nèi)部的水結(jié)合，產(chǎn)生醋酸和氫氧根離子。稀釋脂質(zhì)體外部溶液可引起醋酸從脂質(zhì)體內(nèi)部彌散到外部溶液中，將氫氧根離子留在脂質(zhì)體內(nèi)部。這可制造PH梯度，其中脂質(zhì)體內(nèi)部比脂質(zhì)體外部堿性更高一些。將弱酸性對比度增強(qiáng)劑以使顯著量的該弱酸性對比度增強(qiáng)劑質(zhì)子化并且不帶電荷的PH加入到外相中，可導(dǎo)致該對比度增強(qiáng)劑移到脂質(zhì)體內(nèi)部。此移動可歸因于該物質(zhì)的內(nèi)外濃度梯度。此移動可歸因于當(dāng)氨移出脂質(zhì)體時幫助滲透平衡的力。 此移動可歸因于其他或另外的力或這類力的組合。當(dāng)對比度增強(qiáng)劑移到脂質(zhì)體內(nèi)部時，對比度增強(qiáng)劑可提供一個或多個質(zhì)子，成為帶負(fù)電，從而受到阻止或妨礙而不能從脂質(zhì)體移出。除此之外，可存在該種方法的替代法或變種。在一各方法實施例中，將弱堿性對比度增強(qiáng)劑(pKa從大約6. 5到8. 8)裝入脂質(zhì)體。這種試劑可為弱兩性。弱堿性試劑一般在中性或接近中性PH時不帶電荷。弱堿性試劑其非質(zhì)子化形式可基本上不帶電荷。弱堿性物質(zhì)其質(zhì)子化形式可基本上帶正電荷。一般而言，這類弱堿性試劑可具有一個或多個伯胺基。這類伯胺基可為能夠接受質(zhì)子的離子化形式。這類弱堿性物質(zhì)可為酰胺。在該方法的一個實例中，可在存在硫酸銨(NH4)2SO4)時形成脂質(zhì)體。硫酸銨可為載藥劑。硫酸銨存在于脂質(zhì)體內(nèi)部和外部溶液中。然后可通過例如稀釋將硫酸銨從外相移到脂質(zhì)體。脂質(zhì)體內(nèi)部的硫酸銨可分裂為銨離子(NH4+)和硫酸根離子(SO4-)。脂質(zhì)體內(nèi)部的銨離子分裂為氨和氫離子。稀釋脂質(zhì)體外部溶液可引起脂質(zhì)體內(nèi)部的氨從脂質(zhì)體彌散到外部溶液中，將氮離子留在脂質(zhì)體內(nèi)部。這可制造PH梯度，其中脂質(zhì)體內(nèi)部比脂質(zhì)體外部酸性更高一些。將弱堿性對比度增強(qiáng)劑以使顯著量的該弱堿性對比度增強(qiáng)劑非質(zhì)子化并且不帶電荷的PH加入到外相中，可導(dǎo)致該對比度增強(qiáng)劑移到脂質(zhì)體內(nèi)部。此移動可歸因于該活性劑的內(nèi)外濃度梯度。此移動可歸因于當(dāng)氨移出脂質(zhì)體時幫助滲透平衡的力。此移動可歸因于其他或另外的力或這類力的組合。當(dāng)對比度增強(qiáng)劑移到脂質(zhì)體內(nèi)部時，該對比度增強(qiáng)劑可接受一個或多個質(zhì)子，成為帶正電，從而受到阻止或妨礙而不能從脂質(zhì)體移出。除此之外，可存在該種方法的替代法或變種。也可存在多種其他主動載藥或遠(yuǎn)程載藥方法。在脂質(zhì)體制成后，可使用處理脂質(zhì)體的技術(shù)。例如，在脂質(zhì)體制成后，通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制成的脂質(zhì)體制劑可在大小和薄層(即壁厚)上有變化。諸如使脂質(zhì)體遭受高剪切力、通過膜擠出脂質(zhì)體或脂質(zhì)體超聲等技術(shù)可用于選擇適當(dāng)大小的脂質(zhì)體，或修改脂質(zhì)體以便其具有適當(dāng)?shù)拇笮?。在通過這些方法處理脂質(zhì)體后，可測量脂質(zhì)體的大小分布，以確保獲得適當(dāng)大小的脂質(zhì)體?？墒褂弥T如Fraimhofer衍射和動態(tài)光散射(DLQ等技術(shù)測量脂質(zhì)體大小分布。在Fraimhofer衍射情況下，這些技術(shù)通常測量等同物的球形直徑，其為具與所測量脂質(zhì)體相同的光散射特性的球體直徑。在DLS情況下，等同物球形直徑可為具與所測量脂質(zhì)體擴(kuò)散系數(shù)相同的球體的直徑。一般而言，脂質(zhì)體實例具有150nm或以下的平均直徑。 脂質(zhì)體制劑實例可具有大約120nm或以下的平均直徑。脂質(zhì)體制劑實例可具有大約IOOnm 或以下的平均直徑。應(yīng)該了解可使用其它大小。在一個實施方案中，每毫升脂質(zhì)體攜帶30mg以上碘海醇的納米級脂質(zhì)體制劑可用被動載藥來配制。在該制劑中，雙層脂質(zhì)組合物如下所述已調(diào)整為可使該對比度增強(qiáng)劑的量包封。在一個實施例中，使用C16鏈長的純DPPC (1，2- 二棕櫚酰-甘油基-3-磷脂酸膽堿)及約40摩爾％膽固醇和5摩爾％ mPEG-DSPE (N-(羰基甲氧基聚乙二醇2000) -1，2- 二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺)(可提供長循環(huán)特性的聚乙二醇-脂質(zhì)綴合物)，相比于可能使用的氫化大豆PC(HSPC) (C16和C18脂質(zhì)混合物)或C18鏈長的純DSPC (1，2- 二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿)，包封到脂質(zhì)體內(nèi)的活性分子可增加20 %。使用55摩爾％ DPPC、40摩爾％膽固醇和5摩爾％ mPEG-DSPE制劑和350mg I/ml的碘海醇溶液，已達(dá)到30mg I/ml以上的總濃度，且如DLS所測定，平均脂質(zhì)體直徑為100. 6 士. 0. 3nm。在另一個實施方案中，用被動載藥配制每毫升脂質(zhì)體攜帶超過80mg碘海醇的脂質(zhì)體制劑。在該制劑中，350mg I/ml碘海醇溶液濃縮為至少400-450mg I/ml，用于制備前段所述的脂質(zhì)體。在得到脂質(zhì)體后，濃縮脂質(zhì)體懸浮液。使用該制劑得到濃度超過85mg I/ ml的脂質(zhì)體懸浮液。藥物組合物和施用于受試者含有或結(jié)合有一種或多種對比度增強(qiáng)劑的脂質(zhì)體可為適于施用于受試者的藥物組合物的一部分。一般用將組合物遞送到目的區(qū)域的途徑施用組合物。在一個實施例中， 將對比度增強(qiáng)劑組合物腸胃外施用于受試者，例如通過靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、皮下或其它注射途徑。具體藥物組合物處方一般將視將組合物施用于患者的方法而定。應(yīng)該了解，藥物組合物可包括鹽、緩沖劑、防腐劑、其它載體和任選的其它試劑。適于腸胃外施用的組合物可包含無菌、無熱原、水性或油性制劑，其一般與受試者血液等滲。這種水性制劑可按照已知方法用合適分散劑或濕潤劑和助懸劑配制。無菌可注射制劑也可為無毒腸胃外可接受稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或懸浮液。在可能采用的可接受載體和溶劑中有水、林格
13氏溶液和等滲氯化鈉或其它鹽、右旋糖、磷酸鹽緩沖液等等或其組合。所用藥物組合物也可含有穩(wěn)定劑、防腐劑、緩沖劑、抗氧化劑或其它添加劑。另外， 可采用無菌不揮發(fā)性油作為溶劑或懸浮基質(zhì)。另外，諸如油酸等脂肪酸可在可注射制劑中使用。可于 Remington' s Pharmaceutical SciencesiMack Publishing 公司，Easton，Pa 中發(fā)現(xiàn)適于給予的載體制劑。藥物組合物可方便地以單位劑量形式存在。腸胃外施用包括使用注射器、導(dǎo)管或相似裝置，其可將藥物組合物遞送到位點。遞送可導(dǎo)致(至少在初期)藥物組合物通過受試者循環(huán)系統(tǒng)系統(tǒng)分布。—般而言，可將藥物組合物在受試者實施成像前某一時間點施用于受試者，但是也可將組合物在成像器件施用。優(yōu)選施用藥物組合物的量引起受試者一種或多種組織對比度增加。最終，一般由主治醫(yī)生或技師決定施用于受試者的藥物組合物的量。一般而言，對比度增加可為超過藥物組合物中不使用對比度增強(qiáng)劑所存在的水平以上的任何水平。對于一種或多種器官系統(tǒng)(包括脈管系統(tǒng))，可獲得對比度增加實例為至少50HU、至少100HU或更多。應(yīng)用當(dāng)將含有對比度增強(qiáng)劑或其藥物組合物的脂質(zhì)體組合物施用于受試者時，可在受試者血液和/或器官中保持對比度增強(qiáng)劑水平，引起對比度增加和可由X射線成像技術(shù)檢測?？砷L時間檢測對比度增加。根據(jù)特定應(yīng)用，本文所述組合物可具從幾分鐘到幾小時甚至到數(shù)天的循環(huán)半衰期。在一個實施例中，可獲得從8到M小時的循環(huán)半衰期。在一個實施例中，所施用的組合物提供在施用后保持至少30分鐘可檢測的增加對比度。在另一個實施例中，所施用的組合物提供在施用后保持至少5分鐘可檢測的增加對比度。包括那些解剖、功能和分子成像在內(nèi)的許多應(yīng)用是可能的。舉例而言，本文所述組合物的用途可在心臟病學(xué)、腫瘤學(xué)、神經(jīng)病學(xué)和其它領(lǐng)域中得到應(yīng)用。在一個實施方案中，血池成像可用于檢測和(在某些情況下)定量缺血。例如，因為注射藥物組合物一般改變整個脈管系統(tǒng)對比度，所以當(dāng)在缺血中存在降低的血液流動時可檢測到。可檢測多種缺血類型，包括引起缺血性腸病、肺栓塞和產(chǎn)生心肌癥的缺血類型和其它缺血。在其它應(yīng)用中，也可檢測動脈瘤。在一個實施方案中，本文所述組合物可用于心肌成像以檢測、檢查和/或評估狹窄和狹窄治療或糾正，例如如在血管成形術(shù)中所出現(xiàn)的。這類技術(shù)應(yīng)用可通過使用對比度增強(qiáng)劑制劑(例如本文所述的那些)來加強(qiáng)。在一個實施方案中，本文所述組合物可用于檢測心肌微循環(huán)不足。已知在心外膜動脈顯示阻塞癥候之前心肌微循環(huán)顯示阻塞癥候。因此，與常規(guī)方法相比，心肌微循環(huán)阻塞檢測可為癥狀前動脈硬化癥危險患者的更早期檢測物。本文所述組合物可促進(jìn)心肌微循環(huán)阻塞的檢測。在另一個實施方案中，本文所述組合物可用于檢測和鑒定大范圍的腫瘤和癌癥。 這些應(yīng)用可通過在循環(huán)中長時間存在空間穩(wěn)定脂質(zhì)體并在脈管系統(tǒng)“滲漏”區(qū)(例如腫瘤) 溢出空間穩(wěn)定脂質(zhì)體的特性來促進(jìn)。腫瘤中脈管系統(tǒng)滲漏可歸因于高比例的新脈管系統(tǒng)， 是隨腫瘤大小生長血管持續(xù)生成的結(jié)果。在遇到此類滲漏脈管系統(tǒng)時，脂質(zhì)體可通過流體靜力學(xué)壓力離開循環(huán)，被驅(qū)于滲出液流中。這類脂質(zhì)體一般在溢出后不回到循環(huán)中，因為壓力梯度反對此回歸。此方法可用于檢測原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性兩種腫瘤。
在其它實施方案中，組合物可用于腫瘤“分期”或分類。這類應(yīng)用尤其可視給定腫瘤或癌癥在不同進(jìn)展階段的脈管系統(tǒng)“滲漏”差別而定。在一個實施方案中，組合物可用于監(jiān)測和鑒別毀壞的脊髓的傷害和康復(fù)領(lǐng)域。在典型的脊髓傷害中，例如如汽車事故所發(fā)生的傷害，在脊髓周圍組織也可有損傷。據(jù)認(rèn)為周圍組織康復(fù)過程對脊髓康復(fù)可能有害。據(jù)認(rèn)為在周圍組織中新脈管系統(tǒng)的形成(如周圍組織康復(fù)過程中出現(xiàn)的)可抑制脊髓康復(fù)。據(jù)認(rèn)為通過抑制周圍組織康復(fù)和周圍組織中新脈管系統(tǒng)的形成，脊髓可康復(fù)。隨后周圍組織可康復(fù)。本文所述對比度增強(qiáng)劑組合物可用于監(jiān)測康復(fù)和監(jiān)測脊髓周圍組織康復(fù)抑制。本文所述組合物有多種其它應(yīng)用。例如，組合物可用于檢測和監(jiān)測炎癥、再灌注損傷等等。另外，例如通過將抗體連接于脂質(zhì)體表面，可將包含對比度增強(qiáng)劑組合物的脂質(zhì)體靶向受試者體內(nèi)適當(dāng)?shù)募?xì)胞和組織。對于身體靶向區(qū)域這類靶向可導(dǎo)致增加對比度。對比度增強(qiáng)劑組合物可具相當(dāng)長體內(nèi)駐留時間，除了在那些如上所述滲漏的脈管系統(tǒng)區(qū)域外低滲出，對于腎臟相當(dāng)無毒性，可用于靶向體內(nèi)特定區(qū)域。另外，因為高滲透相位于脂質(zhì)體內(nèi)部，一般不與血液接觸，所以與離子對比度增強(qiáng)基質(zhì)結(jié)合產(chǎn)生的與毒性有關(guān)的傳統(tǒng)滲透壓問題，一般不是包封脂質(zhì)體的問題。
實施例實施例1 使用褶式濾器以中試規(guī)模制備含有碘海醇的PEG化脂質(zhì)體實施例脂質(zhì)體碘海醇制劑可如下制備。簡言之，在70°C、將1，2_ 二棕櫚酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿(DPPC)、膽固醇(chol)和N-(羰基-甲氧基聚乙二醇2000)-1,2- 二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(DSPE-MPEG2000)以55 40 5摩爾比率的脂質(zhì)混合物(150mM)溶解于乙醇中。將乙醇溶液用碘海醇溶液(350mg I/mL)水合90分鐘。將脂質(zhì)體擠出通過一個或多個10英寸長GE聚碳酸酯track-etch褶式濾器(即，將脂質(zhì)體擠出通過一個這樣的濾器，但是若濾器阻塞或變得不可用，則該濾器被用于后續(xù)擠出的不同濾器代替)。將褶式濾器裝進(jìn)不銹鋼(SS-316)外殼中。在20psi的平均壓力和;348LPH/(m2 孔面積)的平均流速下至少8次擠出通過一個或多個孔徑為200nm的褶式濾器。隨后，在 34psi的平均壓力和348LPH/ (m2孔面積)的平均流速下至少5次擠出通過一個或多個孔徑為IOOnm的褶式濾器。使用500kDa截留的MicroKros 透析過濾模量去除未包封的碘。實施例2 使用平形濾器以中試規(guī)模制備含有碘海醇的PEG化脂質(zhì)體實施例脂質(zhì)體碘海醇制劑可如下制備。簡言之，在70°C、將1，2_ 二棕櫚酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿(DPPC)、膽固醇(chol)和N-(羰基-甲氧基聚乙二醇2000)-1,2- 二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(DSPE-MPEG2000)以55 40 5摩爾比率的脂質(zhì)混合物(150mM)溶解于乙醇中。將乙醇溶液用碘海醇溶液(350mg I/mL)水合90分鐘。隨后將溶液在800mL Lipex Thermoline擠出機(jī)上擠出，且在200psi的平均壓力和6671LPH/(m2孔面積)的平均流速下通過一個或多個200nmNuCl印ore膜(平形濾器)至少8次。隨后在 240psi的平均壓力和17162LPH/(m2孔面積)的平均流速下至少5次擠出通過一個或多個 IOOnm Nucl印ore膜。使用500kDa截留的MicroKros 透析過濾模量去除未包封的碘。實施例3 使用平形濾器以實驗室規(guī)模制備含有碘海醇的PEG化脂質(zhì)體
實施例脂質(zhì)體碘海醇制劑可如下制備。簡言之，在70°C、將1，2_ 二棕櫚酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿(DPPC)、膽固醇(chol)和N-(羰基-甲氧基聚乙二醇2000)-1,2- 二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(DSPE-MPEG2000)以55 40 5摩爾比率的脂質(zhì)混合物(150mM)溶解于乙醇中。將乙醇溶液用碘海醇溶液(350mg I/mL)水合90分鐘。隨后將溶液在IOmL Lipex Thermoline擠出機(jī)上擠出，且在200psi的平均壓力和18676LPH/(m2孔面積)的平均流速下通過一個或多個200nmNuCl印ore膜(平形濾器)至少8次。隨后，在 200psi的平均壓力和35017LPH/(m2孔面積)的平均流速下至少5次擠出通過一個或多個 200nmNucIepore膜(平形濾器)。使用500kDa截留的MicroKros 透析過濾模量去除未包封的碘。實施例4 使用平形濾器以實驗室規(guī)模制備含有碘海醇的PEG化脂質(zhì)體實施例脂質(zhì)體碘海醇制劑可如下制備。簡言之，在70°C、將1，2_ 二棕櫚酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿(DPPC)、膽固醇(chol)和N-(羰基-甲氧基聚乙二醇2000)-1,2- 二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(DSPE-MPEG2000)以55 40 5摩爾比率的脂質(zhì)混合物(150mM)溶解于乙醇中。將乙醇溶液用碘海醇溶液(350mg I/mL)水合90分鐘。隨后將溶液在IOmL Lipex Thermoline擠出機(jī)上擠出，且在20psi的平均壓力和2594LPH/(m2孔面積)的平均流速下通過一個或多個200nmNuCl印ore膜(平形濾器)至少8次。隨后， 在45psi的平均壓力和973LPH/(m2孔面積)的平均流速下至少5次擠出通過一個或多個 IOOnmNucl印ore膜(平形濾器)。使用500kDa截留的MicroKros 透析過濾模量去除未包封的碘。下面表1總結(jié)了用于制備制劑的不同濾器大小、流速和擠出壓力。通過比較流速 /濾器總孔面積(LPH/m2)和流速/總濾器面積(LPH/m2)將流速標(biāo)準(zhǔn)化。
權(quán)利要求
1.一種用于制備組合物的方法，所述方法包括選擇一種或多種含有一種或多種非放射性對比度增強(qiáng)劑的溶液；在一種或多種含有一種或多種非放射性對比度增強(qiáng)劑的溶液存在下形成脂質(zhì)體以提供至少部分包封一種或多種非放射性對比度增強(qiáng)劑的脂質(zhì)體溶液；以及將至少部分包封一種或多種非放射性對比度增強(qiáng)劑的脂質(zhì)體溶液在高流速和高壓的至少一項下通過濾器。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述通過包括在至少45psi的壓力下通過所述濾器。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述通過包括在至少IOOpsi的壓力下通過所述濾器。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述通過包括在至少200psi的壓力下通過所述濾器。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述通過包括在至少約900LPH/m2的流速/總孔面積和至少40psi的壓力下通過所述濾器。
6.權(quán)利要求1的方法，其中所述通過包括在至少約900LPH/m2的流速/總孔面積下通過所述濾器。
7.權(quán)利要求1的方法，其中所述通過包括在至少約5000LPH/m2的流速/總孔面積下通過所述濾器。
8.權(quán)利要求1的方法，其中所述通過包括在至少約15000LPH/m2的流速/總孔面積下通過所述濾器。
9.權(quán)利要求1的方法，其中所述濾器具有約IOOnm至約200nm孔直徑。
10.權(quán)利要求1的方法，其中所述通過包括在大于或等于約IOOpsi的壓力下通過所述濾器約5至約30次。
11.權(quán)利要求1的方法，其中至少部分包封所述一種或多種非放射性對比度增強(qiáng)劑的所述脂質(zhì)體表現(xiàn)出在通過所述濾器后于37°C在鹽水中的碘滲漏低于約5%。
12.權(quán)利要求1的方法，其中至少部分包封所述一種或多種非放射性對比度增強(qiáng)劑的所述脂質(zhì)體包封約37-約200毫克碘/毫升懸浮介質(zhì)，其中至少部分包封所述一種或多種非放射性對比度增強(qiáng)劑的所述脂質(zhì)體懸浮于所述懸浮介質(zhì)中。
13.權(quán)利要求1的方法，其中至少部分包封所述一種或多種非放射性對比度增強(qiáng)劑的所述脂質(zhì)體包封約80-約110毫克碘/毫升懸浮介質(zhì)，其中至少部分包封所述一種或多種非放射性對比度增強(qiáng)劑的所述脂質(zhì)體懸浮于所述懸浮介質(zhì)中。
14.權(quán)利要求1的方法，其中至少部分包封所述一種或多種非放射性對比度增強(qiáng)劑的所述脂質(zhì)體包封約90-約100毫克碘/毫升懸浮介質(zhì)，其中至少部分包封所述一種或多種非放射性對比度增強(qiáng)劑的所述脂質(zhì)體懸浮于所述懸浮介質(zhì)中。
15.權(quán)利要求1的方法，其中至少部分包封所述一種或多種非放射性對比度增強(qiáng)劑的所述脂質(zhì)體具有小于150nm的平均直徑。
16.權(quán)利要求1的方法，其中所述方法還包括將至少部分包封所述一種或多種非放射性對比度增強(qiáng)劑的所述脂質(zhì)體溶液濃縮至少約10%。
17.權(quán)利要求1的方法，所述形成包括以下至少一項在一種或多種含有一種或多種非放射性對比度增強(qiáng)劑的溶液存在下水合干脂質(zhì)；混合脂質(zhì)的揮發(fā)性有機(jī)溶液與一種或多種含有一種或多種非放射性對比度增強(qiáng)劑的溶液；和在一種或多種含有一種或多種非放射性對比度增強(qiáng)劑的溶液存在下透析一種或多種脂質(zhì)、去污劑和表面活性劑的水溶液以去除一種或多種脂質(zhì)、去污劑和表面活性劑。
18.權(quán)利要求1的方法，其中所述脂質(zhì)體由膽固醇、至少一種脂質(zhì)或磷脂、和至少一種用聚合物鏈衍生化的磷脂組成。
19.根據(jù)權(quán)利要求1的方法制備的組合物。
20.一種用于制備組合物的方法，其包括選擇含有碘化對比度增強(qiáng)劑的溶液；在碘化對比度增強(qiáng)劑存在下形成脂質(zhì)體以提供與碘化對比度增強(qiáng)劑結(jié)合的脂質(zhì)體溶液；以及將與碘化對比度增強(qiáng)劑結(jié)合的所述脂質(zhì)體溶液在約900LPH/m2-約50，000LPH/m2的流速/總孔面積下通過濾器，其中所述脂質(zhì)體在通過所述濾器后于37°C在鹽水中的碘滲漏高達(dá)約5%。
21.權(quán)利要求20的方法，其中所述通過還包括在至少約IOOpsi的壓力下通過所述濾ο
22.權(quán)利要求20的方法，其中所述濾器具有約IOOnm至約200nm孔直徑。
23.權(quán)利要求20的方法，其中所述脂質(zhì)體由至少一種脂質(zhì)或磷脂、膽固醇、和至少一種用聚合物鏈衍生化的磷脂組成。
24.權(quán)利要求23的方法，其中至少一種脂質(zhì)或磷脂、膽固醇、和至少一種用聚合物鏈衍生化的磷脂以約陽40 5的摩爾比率存在。
25.權(quán)利要求23的方法，其中所述至少一種脂質(zhì)或磷脂以約55-約75m0l%的量存在， 所述膽固醇以約25-40mOl%的量存在，并且所述至少一種用聚合物鏈衍生化的磷脂以約 l-20mol%的量存在。
26.根據(jù)權(quán)利要求20的方法制備的組合物。
27.一種制備脂質(zhì)體組合物的方法，其包括在碘化對比度增強(qiáng)劑存在下形成脂質(zhì)體以形成至少部分包封所述碘化對比度增強(qiáng)劑的脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體包含以約55-約75mol%的量存在的至少一種脂質(zhì)或磷脂、以約 25-約40mOl%的量存在的膽固醇以及以約l-20mOl%的量存在的至少一種用聚合物鏈衍生化的磷脂；以及在高流速和高壓下擠出至少部分包封所述碘化對比度增強(qiáng)劑的脂質(zhì)體通過濾器，其中所擠出的至少部分包封所述碘化對比度增強(qiáng)劑的脂質(zhì)體具有小于150nm的平均直徑和至少80毫克碘/毫升懸浮介質(zhì)的濃度，其中所述脂質(zhì)體懸浮于所述懸浮介質(zhì)中。
28.權(quán)利要求27的方法，其中所述擠出包括在至少IOOpsi的壓力下擠出通過所述濾ο
29.權(quán)利要求27的方法，其中所述擠出包括在至少約900LPH/m2的流速/總孔面積下擠出通過所述濾器。
30.根據(jù)權(quán)利要求27的方法制備的脂質(zhì)體組合物。
全文摘要
本發(fā)明提供了脂質(zhì)體組合物實例，以及制備含有它們的高濃度的用于計算機(jī)斷層成像的對比度增強(qiáng)劑的方法實例。當(dāng)將這類脂質(zhì)體藥物組合物實例施用于受試者時，如由計算機(jī)斷層成像所測量，在該受試者血流和其它組織中提供長時間的增強(qiáng)對比度。本發(fā)明也提供了用于制造具有對比度增強(qiáng)劑滲漏抗性的穩(wěn)定脂質(zhì)體的方法實例，包括在高壓和高流速/擠出濾器總孔面積下擠出脂質(zhì)體。
文檔編號A61K41/00GK102438591SQ201080015774
公開日2012年5月2日 申請日期2010年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月19日
發(fā)明者A·安娜普拉戈達(dá), K·B·戈革達(dá), R·M·萊博維茨 申請人:德克薩斯大學(xué)系統(tǒng)董事會, 馬維爾生物科學(xué)公司