專(zhuān)利名稱(chēng)：血管新生控制組合物以及控制血管新生的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在治療、預(yù)防與血管新生相伴隨的疾病中使用的控制血管新生的組合物、以及控制血管新生的方法。
背景技術(shù)：
血管新生(angiogenesis)是指以來(lái)自組織的成熟血管的內(nèi)皮細(xì)胞增殖以及遷移、重塑作為基本的新的分支血管的形成。近年來(lái)，從對(duì)于血管新生的細(xì)胞生物學(xué)的研究途徑出發(fā)，關(guān)于其機(jī)理進(jìn)行了飛躍的闡明。血管新生通過(guò)與基于缺血狀態(tài)的低氧應(yīng)答，使轉(zhuǎn)錄因子HIF (缺氧誘導(dǎo)因子，hypoxia-inducible factor)活化，誘導(dǎo)表達(dá)VEGF (血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，vascular endothelial growth factor)mRNA而開(kāi)始。產(chǎn)生的血管內(nèi)皮增殖因子 VEGF與在血管內(nèi)皮細(xì)胞中局部存在的VEGF受體(VEGFR)結(jié)合，使細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)活化。結(jié)果，引起細(xì)胞外基底膜的分解，經(jīng)過(guò)血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移、增殖、血管內(nèi)皮細(xì)胞的管腔形成、基底膜的形成和周細(xì)胞的包圍這樣的階段，新生出血管。IHiS Murohara T “ Nitric oxide and angiogenesis in cardiovascular disease"，Antioxid Redox Signal.，Vol. 4，p. 825-831 Q002)(非專(zhuān)利文獻(xiàn) 1)，作為與血管新生有關(guān)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)，已知從磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)開(kāi)始的路徑。 PII路徑中，確認(rèn)了內(nèi)皮型-氧化氮合成酶(endothelial NO synthase :eN0S)的活化、 基于其的內(nèi)因性NO產(chǎn)生增加，根據(jù)Noiri E等，“Podokinesis in endothelial cell migration :role of nitric oxide" , The American Physiological Society, Vol. 274, p. 236-244(1998)(非專(zhuān)利文獻(xiàn) 2)、Ziche M 等，"Nitric Oxide Promotes Proliferation and Plasminogen Activator Production by Coronary Venular Endothelium Through Endogenous bFGF"，Circulation Research, Vol. 80, p. 845-852 (1997)(非專(zhuān)利文獻(xiàn) 3)、 Dimmeler S等，"Upregulation of Superoxide Dismutase and Nitric Oxide Synthase Mediates the Apoptosis-Suppressive Effects of Shear Stress on Endothelial Cells"，Arterioscler. Thromb. Vase. Biol.，Vol. 19. p. 656-664(1999)(非專(zhuān)利文獻(xiàn) 4)， 目前，可以認(rèn)為，內(nèi)因性一氧化氮通過(guò)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移促進(jìn)作用、細(xì)胞凋亡抑制作用，對(duì)血管新生發(fā)揮促進(jìn)作用。臨床醫(yī)學(xué)中，已知血管新生對(duì)于創(chuàng)傷治療以及大量的疾病的進(jìn)展帶來(lái)很大影響。 作為血管新生相關(guān)的疾病，已知早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病、糖尿病視網(wǎng)膜病、老年性黃斑變性、新生血管性青光眼等眼科疾病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等炎癥性疾病、實(shí)體瘤等惡性新生物等，在這些疾病中，出現(xiàn)缺乏控制機(jī)制的病態(tài)的血管新生。眼科疾病中的病態(tài)的血管新生的治療戰(zhàn)略一貫是血管新生的抑制、阻礙，如日本特開(kāi)2002-284685號(hào)公報(bào)(專(zhuān)利文獻(xiàn)1)、日本特開(kāi) 2008-110950號(hào)公報(bào)(專(zhuān)利文獻(xiàn)2、所公開(kāi)，大致分為外科的治療法和藥物治療法。作為外科的治療法的代表，廣泛使用激光凝固，該方法是對(duì)于發(fā)展的病態(tài)不得已進(jìn)行代償?shù)慕M織破壞的方法，有時(shí)引起周邊視力的下降、夜間視力的下降、以及色覺(jué)的變化。
藥物治療中，從血管新生機(jī)制的分子生物學(xué)的闡明出發(fā)，對(duì)阻礙與血管新生相關(guān)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)的各種階段的抑制藥進(jìn)行研究、開(kāi)發(fā)。作為VEGF抑制藥，發(fā)明、開(kāi)發(fā)了 VEGF抗體(貝伐單抗，Bevacizumab)、如日本特開(kāi)2008-280356號(hào)公報(bào)(專(zhuān)利文獻(xiàn)3)中所記載VEGF特異的結(jié)合性核酸(哌加他尼鈉，Pegaptanib sodium)。這些對(duì)于視網(wǎng)膜病中的病態(tài)的血管新生的抑制和糖尿病黃斑浮腫有效，但報(bào)道了由VEGF抗體引起的正常血管的新生抑制、全身的創(chuàng)傷治療延遲、腦出血、腦血管意外、心筋梗塞以及心絞痛等重大的副作用。另外，根據(jù) Eyal B 等，“T2_TrpRS Inhibits Preretinal Neovascularization and Enhances Physiological Vascular Regrowth in OIR as Assessed by a New Method of Quantification " , Investigative Ophthalmology & Visual Science, Vol. 47, p. 2125-2134 (2006)(非專(zhuān)利文獻(xiàn)幻，嘗試進(jìn)行通過(guò)使用了一氧化氮合成酶抑制藥的內(nèi)因性一氧化氮的產(chǎn)生抑制而帶來(lái)的病態(tài)血管新生的抑制，然而，通過(guò)強(qiáng)力地抑制一氧化氮這樣的在生理上發(fā)揮重要作用的分子，預(yù)測(cè)到作為視網(wǎng)膜病的原疾病的糖尿病的惡化、血壓上升、心筋梗塞以及心絞痛等各種全身的副作用出現(xiàn)。另外，對(duì)于VEGF抑制藥等眼血管治療藥而言，為了減輕全身的副作用而通過(guò)玻璃體內(nèi)注射給藥，因此，對(duì)患者的負(fù)擔(dān)也大，不用說(shuō)注射時(shí)的眼組織損傷，連晶狀體以及視網(wǎng)膜組織也通常具有細(xì)菌感染的風(fēng)險(xiǎn)。以往技術(shù)文獻(xiàn)專(zhuān)利文獻(xiàn)1 日本特開(kāi)2002-284685號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)2 日本特開(kāi)2008-110950號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)3 日本特開(kāi)2008-280356號(hào)公報(bào)__ 專(zhuān)禾Il 文 1 :Murohara T 等， “Nitric oxide and angiogenesis in cardiovascular disease" , Antioxid Redox Signal. , Vol. 4,p.825-831 (2002)非專(zhuān)利文獻(xiàn)2:Noiri E 等，“Podokinesis in endothelial cell migration role of nitric oxide " , The American Physiological Society, Vol.274, p.236-244(1998)非專(zhuān)禾O(píng) 文獻(xiàn) 3 :Ziche M 等，“Nitric Oxide Promotes Proliferation and Plasminogen Activator Production by Coronary Venular Endothelium Through EndogenousbFGF" , Circulation Research, Vol. 80,p.845-852(1997)非專(zhuān)利文獻(xiàn) 4 :Dimmeler S 等，"Upregulation of Superoxide Dismutase and Nitric Oxide Synthase Mediates the Apoptosis-Suppressive Effects of Shear Stress on Endothelial Cells " , Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. , Vol. 19. p.656-664(1999)非專(zhuān)禾O(píng)文獻(xiàn) 5 =Eyal B 等， 〃 T2_TrpRS Inhibits Preretinal Neovascularization and Enhances Physiological Vascular Regrowth in OIR as Assessed by a New Method of Quantification " , Investigative Ophthalmology & Visual Science, Vol. 47，p.2125-2134(2006)非專(zhuān)利文獻(xiàn)6 :Katsumi Y 等，“Metabolic Fate of Nitric Oxide"，Int ArchOccup Environ Health, Vol. 46，p.71-77 (1980)
非專(zhuān)利文獻(xiàn) 7 :Zhi H 等，“Enzymatic function of hemoglobin as a nitrite reductase that produces NO under allosteric control“ ， The Journal of Clinical Investigation, Vol. 115，p.2099-2107(2005)8 =Lois E. H. Smith φ, “ Oxygen-Induced Retinopathy in the Mouse" , Invest Ophthalmol Vis Sci. Vol. 35, p.101-111(1994)

發(fā)明內(nèi)容
如上所述，與血管新生相伴隨的眼科疾病的以往的治療法的主流是伴隨補(bǔ)償?shù)慕M織破壞的外科的治療、或者正常血管新生的抑制、嚴(yán)重的全身性副作用、以及細(xì)菌感染的風(fēng)險(xiǎn)高的玻璃體內(nèi)藥物治療，無(wú)法確立令人滿(mǎn)意的外科的治療法以及內(nèi)科的治療法。本發(fā)明是為了解決上述課題而進(jìn)行的，其目的在于提供在內(nèi)科上控制與血管新生相伴隨的疾病特別是眼科疾病中的血管新生、能夠在不抑制正常的血管新生的情況下進(jìn)行治療的副作用少、安全性高的對(duì)血管新生疾病的治療、預(yù)防有效的組合物，以及使用其的控制血管新生的方法。為了解決上述課題，本發(fā)明人進(jìn)行了深入的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)硝酸鹽、亞硝酸鹽在醫(yī)藥上允許的安全的給藥量下，具有控制血管新生過(guò)程的作用?？芍刂铺貏e是眼科疾病中的血管新生，在不抑制正常的血管新生的情況下抑制病態(tài)的血管新生，這些化合物作為早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病、糖尿病視網(wǎng)膜病(特別是增殖糖尿病視網(wǎng)膜病)、老年性黃斑變性、新生血管性青光眼等眼科疾病治療、預(yù)防藥劑有用，從而完成了本發(fā)明。即，本發(fā)明如下。本發(fā)明為一種控制血管新生的組合物，用于治療、預(yù)防被檢體中的與血管新生相伴隨的疾病，其特征在于，含有有效量的硝酸鹽、亞硝酸鹽、以及被吸收到被檢體中且能夠轉(zhuǎn)換成硝酸鹽或亞硝酸鹽的化合物中的至少一種。本發(fā)明的組合物，優(yōu)選是通過(guò)將被檢體中的硝酸根離子濃度維持在有效濃度范圍內(nèi)來(lái)控制血管新生的組合物。本發(fā)明的組合物，優(yōu)選以向被檢體給藥時(shí)提供8 μ mol/L 1000 μ mol/L的范圍內(nèi)的血漿中硝酸根離子濃度的量，含有硝酸鹽、亞硝酸鹽以及上述化合物中的至少一種。本發(fā)明中，與血管新生相伴隨的疾病優(yōu)選為選自早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病、糖尿病視網(wǎng)膜病、老年性黃斑變性、新生血管性青光眼中的至少任一種眼科疾病。本發(fā)明的組合物，優(yōu)選為醫(yī)藥用組合物，或選自健康食品、功能性食品、特定保健用食品以及營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)助食品中的至少任一種。本發(fā)明還提供一種控制血管新生的方法，其中，向被檢體給予組合物，所述組合物含有硝酸鹽、亞硝酸鹽以及被吸收到被檢體中且能夠轉(zhuǎn)換成硝酸鹽或亞硝酸鹽的化合物中的至少一種作為有效成分。本發(fā)明的方法，優(yōu)選通過(guò)將被檢體中的硝酸根離子濃度維持在有效濃度范圍內(nèi)來(lái)控制血管新生。本發(fā)明的方法，優(yōu)選使被檢體中的血漿中硝酸根離子濃度在8 μ mol/L 1000 μ mol/L的范圍內(nèi)。根據(jù)本發(fā)明，提供在內(nèi)科上控制與血管新生相伴隨的疾病特別是眼科疾病中的血管新生、能夠在不抑制正常的血管新生的情況下進(jìn)行治療的副作用少、安全性高的對(duì)血管新生疾病的治療、預(yù)防有效的組合物，以及使用其的控制血管新生的方法。


圖1是由實(shí)驗(yàn)例1的結(jié)果得到的視網(wǎng)膜血管的熒光造影照片，圖1(a)表示給予 15 μ mol/kg的亞硝酸鈉的情況，圖1 (b)表示給予75 μ mol/kg的亞硝酸鈉的情況，圖1 (c) 表示給予75 μ mol/kg的硝酸鈉給藥的情況，圖1 (d)表示給予生理鹽水的情況。圖2是比較在給予生理鹽水、15 μ mol/kg硝酸鈉、15 μ mol/kg亞硝酸鈉、75 μ mol/ kg亞硝酸鈉的情況時(shí)進(jìn)入玻璃體的異常血管數(shù)而示出的圖，縱軸為異常血管數(shù)(個(gè))。圖3是表示作為對(duì)照給予生理鹽水時(shí)的視網(wǎng)膜斷面的照片。圖4是由實(shí)驗(yàn)例3的結(jié)果得到的視網(wǎng)膜血管的熒光造影照片，圖4(a)表示給予 15 μ mol/kg的硝酸鈉的情況，圖4(b)表示給予15 μ mol/kg的亞硝酸鈉的情況，圖4(c)表示給予生理鹽水的情況。圖5是由實(shí)驗(yàn)例4的結(jié)果得到的視網(wǎng)膜血管的熒光造影照片，圖5 (a)表示給予硝普鈉(SNP)的情況，圖5 (b)表示給予硝酸甘油(NTG)的情況，圖5 (c)表示給予15 μ mol/kg 的亞硝酸鈉的情況。圖6是由實(shí)驗(yàn)例5的結(jié)果得到的視網(wǎng)膜血管的熒光造影照片，圖6(a)表示給予 VEGF抗體的情況，圖6 (b)表示給予15 μ mol/kg的亞硝酸鈉的情況。圖7表示由實(shí)驗(yàn)例6的結(jié)果得到的將15 μ mol/kg的亞硝酸鈉在小鼠的頸部皮下給藥的情況下的血漿中硝酸根離子濃度的時(shí)間推移。
具體實(shí)施例方式一直以來(lái)，硝酸鹽在包括土壤的自然界中廣泛分布，主要是通過(guò)綠葉蔬菜的攝取而吸收到人體中。硝酸鹽被消化管良好地吸收，進(jìn)入體循環(huán)的硝酸鹽的約25%被分泌到唾液中。唾液中的硝酸鹽的一部分(約30%)通過(guò)口腔內(nèi)細(xì)菌而被還原成亞硝酸鹽，而后直接被消化管再吸收，或者通過(guò)胃酸還原至一氧化氮，再被消化管再吸收。有報(bào)道稱(chēng)，健康成人的血漿中硝酸根離子濃度為10 μ mol/L 71 μ mol/L,血漿中亞硝酸根離子濃度為 0. 15 μ mol/L ~ 1 μ mol/L。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，早產(chǎn)兒、接受高濃度氧治療的被檢體、糖尿病患者以及高血壓癥患者等均同樣出現(xiàn)血漿中硝酸根離子濃度以及亞硝酸根離子濃度下降，在這些血漿中通過(guò)使離子濃度恢復(fù)至正常值、或者提高至治療有效濃度，能夠控制血管新生。即，本發(fā)明的組合物是為了維持血管新生的恒常性而原本應(yīng)該處于體內(nèi)補(bǔ)充硝酸根離子以及亞硝酸根離子的組合物，因此，即使對(duì)于新生兒也能夠極其安全地應(yīng)用。本發(fā)明的組合物為一種控制血管新生的組合物，其用于治療、預(yù)防被檢體中的與血管新生相伴隨的疾病，其中，以在與血管新生相伴隨的疾病的治療、預(yù)防中有效的量，含有硝酸鹽、亞硝酸鹽以及被吸收到被檢體中且能夠轉(zhuǎn)換成硝酸鹽或亞硝酸鹽的化合物中的至少一種(以下，將這些總稱(chēng)為“有效成分”)。本發(fā)明中的硝酸鹽、亞硝酸鹽只要是由無(wú)機(jī)陰離子(硝酸根離子N03-、亞硝酸根離子=NO2-)和陽(yáng)離子形成的醫(yī)藥上允許的鹽即可，例如，作為陽(yáng)離子，可以使用堿金屬、堿土金屬或者有機(jī)堿。例如，作為堿金屬，優(yōu)選為鈉、鉀，作為堿土金屬，優(yōu)選為鈣、鎂，作為有機(jī)堿，優(yōu)選為精氨酸、賴(lài)氨酸。另外，本發(fā)明中的被吸收到被檢體中且能夠轉(zhuǎn)換成硝酸鹽或亞硝酸鹽的化合物是指通過(guò)口服給藥、非口服給藥被吸收，迅速地進(jìn)行代謝，以硝酸鹽或亞硝酸鹽的形式循環(huán)全身的化合物。作為這樣的化合物，如Katsumi Y等，〃 Metabolic Fate of Nitric Oxide"， Int ArchOccup Environ Health, Vol. 46，p. 71-77 (1980)(非專(zhuān)利文獻(xiàn) 6)中所記載，可以
列舉一氧化氮等氮氧化物。需要說(shuō)明的是，關(guān)于本發(fā)明的組合物，對(duì)于硝酸鹽，報(bào)道了特別嚴(yán)重的副作用，對(duì)于亞硝酸鹽，報(bào)道了作為急性以及亞急性毒性的高鐵血紅蛋白血癥。但是，發(fā)揮本發(fā)明的效果的亞硝酸鹽給藥量，為與嚙齒類(lèi)中報(bào)道的高鐵血紅蛋白血癥相關(guān)的最大無(wú)作用量(亞硝酸鈉為8%ig/kg/天)的約1/8以下，即使對(duì)于新生兒也能夠提供安全的治療法。本發(fā)明中的利用硝酸鹽以及亞硝酸鹽的血管新生控制機(jī)制，如上所述，內(nèi)因性一氧化氮具有血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移促進(jìn)作用，對(duì)血管新生發(fā)揮重要的作用，因此，可以推測(cè)例如 Zhi H等，“Enzymatic function of hemoglobin as a nitrite reductase that produces NO under allosteric control“ ， The Journal of Clinical Investigation, Vol. 115,p. 2099-2107(2005)(非專(zhuān)利文獻(xiàn)7)所記載的與在組織缺血狀態(tài)下進(jìn)行的從亞硝酸根離子向一氧化氮的轉(zhuǎn)換機(jī)制相關(guān)。但是，如后述的實(shí)驗(yàn)例4所證明，在硝普鈉(SNP)和硝酸甘油(NTG)等常用一氧化氮供體藥中，沒(méi)有觀察到視網(wǎng)膜病的惡化、或者血管新生控制效果，因此，本發(fā)明的該效果是限定于硝酸鹽以及亞硝酸鹽的極其特異的藥理作用。艮口， 本發(fā)明的利用硝酸鹽以及亞硝酸鹽的血管新生控制效果，并不是簡(jiǎn)單地通過(guò)一氧化氮的供給量增加引起的效果，可以推測(cè)，與由本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)的利用硝酸鹽的生體內(nèi)一氧化氮的產(chǎn)生控制以及血管內(nèi)皮增殖因子(VEGF)的表達(dá)控制機(jī)制相關(guān)。本發(fā)明的組合物，優(yōu)選為通過(guò)將被檢體中的硝酸根離子濃度維持在有效濃度范圍內(nèi)來(lái)控制血管新生。由此，能夠控制眼科疾病、炎癥性疾病以及惡性新生物中的血管新生， 特別是對(duì)于選自早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病、糖尿病視網(wǎng)膜病、老年性黃斑變性、新生血管性青光眼中的至少任一種眼科疾病中的血管新生的控制有效。根據(jù)這樣的本發(fā)明的組合物，能夠在不抑制正常的血管新生的情況下抑制病態(tài)的血管新生，抑制視網(wǎng)膜中的無(wú)血管區(qū)的減少、在玻璃體內(nèi)中的病態(tài)的血管新生。在此考慮到亞硝酸鹽被血紅蛋白迅速氧化，大部分以硝酸鹽的形式在血液中存在(亞硝酸根離子為硝酸根離子的5%以下)，以及如上所述兩鹽腸-唾液腺循環(huán)等能夠在被檢體內(nèi)相互地轉(zhuǎn)換，因此例如，本發(fā)明的組合物的治療有效濃度在血漿中能夠以硝酸根離子濃度進(jìn)行規(guī)定。即，本發(fā)明的組合物優(yōu)選，以向被檢體給藥時(shí)提供在8 μ mol/L 1000 μ mol/L的范圍內(nèi)(優(yōu)選16 μ mol/L 400 μ mol/L的范圍內(nèi)、更優(yōu)選32 μ mol/L 200 μ mol/L的范圍內(nèi))的血漿中硝酸根離子濃度的量，含有有效成分。在向被檢體給藥時(shí)， 血漿中硝酸根離子濃度低于8 μ mol/L的情況下，無(wú)法充分地發(fā)揮血管新生的控制效果，有可能導(dǎo)致疾病的治療、預(yù)防變得不充分，相反在向被檢體給藥時(shí)血漿中硝酸根離子濃度超過(guò)1000 μ mol/L的情況下，有時(shí)偶爾造成在視網(wǎng)膜病等中出血傾向上升。需要說(shuō)明的是，關(guān)于該血漿中硝酸根離子濃度，可以通過(guò)使用高效液相與血漿中夾雜成分分離，直接通過(guò)吸光光度測(cè)定法、或應(yīng)用格里斯法等來(lái)確定。本發(fā)明的組合物作為醫(yī)藥用組合物，可以是作為醫(yī)藥的制劑，另外，可以應(yīng)用作為選自健康食品、功能性食品、特定保健用食品以及營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)助食品中的至少任一種的所謂的輔助品等。本發(fā)明的組合物由于硝酸鹽、亞硝酸鹽容易在水中溶解，從消化管的吸收性良好， 因此，不論非口服、口服，均能夠使用多種的給藥形式。作為非口服的給藥路徑，能夠通過(guò)包含例如靜脈內(nèi)、腹腔內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、肺內(nèi)、鼻腔內(nèi)、外用局部的多種路徑進(jìn)行給藥，作為劑型，可以列舉注射劑、吸入劑等。另一方面，作為口服給藥劑型，可以列舉片劑、膠囊劑、顆粒齊U、散劑、內(nèi)用液劑等，通過(guò)將這些制劑制備為胃崩解劑、腸溶劑、或者釋放控制型，能夠在消化管的期望部位釋放硝酸鹽以及亞硝酸鹽。這些制劑，可以使用廣泛使用的制劑技術(shù)，注意配合變化，使用醫(yī)藥上允許的醫(yī)藥品添加物形成制劑。需要說(shuō)明的是，硝酸鹽、亞硝酸鹽的生物學(xué)的半衰期短，為3小時(shí) 5小時(shí)，因此，進(jìn)行釋放控制的制劑是使用發(fā)揮本發(fā)明的效果的劑型。本發(fā)明的組合物的給藥量，根據(jù)年齡、體重、疾病的程度、給藥形式或給藥路徑而不同，但只要能夠發(fā)揮上述藥理作用、并且所產(chǎn)生的副作用在能夠允許的范圍內(nèi)，則沒(méi)有特別的限定。作為具體的給藥量，例如，在小鼠高氧負(fù)荷視網(wǎng)膜血管新生模型中皮下注射亞硝酸鈉15 μ mol/kg/天時(shí)，最大血漿中硝酸根離子濃度達(dá)到100 μ mol/L上下，能夠在不抑制正常的視網(wǎng)膜血管新生的情況下抑制病態(tài)的血管新生。另外，本發(fā)明的組合物的給藥期間沒(méi)有特別的限定，如后述的實(shí)驗(yàn)例3中所證明， 本發(fā)明的組合物，能夠控制血管新生過(guò)程，在不抑制正常的血管新生的情況下抑制病態(tài)的血管新生，因此，優(yōu)選在病態(tài)的血管新生產(chǎn)生后盡可能早地給藥。例如，對(duì)于為了治療、預(yù)防而應(yīng)用本發(fā)明的組合物的與血管新生相伴隨的疾病為選自早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病、糖尿病視網(wǎng)膜病、老年性黃斑變性、新生血管性青光眼中的至少任一種眼科疾病的情況而言，優(yōu)選從觀察到伴隨眼科疾病的病態(tài)的血管新生的癥候的時(shí)間點(diǎn)開(kāi)始，進(jìn)行給藥直至正常血管的新生充分進(jìn)行、組織缺血狀態(tài)緩和。另外，將本發(fā)明的組合物用于預(yù)防也是有效的，在早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病的情況下，從氧治療中開(kāi)始給予本藥劑，另外，在糖尿病視網(wǎng)膜病的情況下，從觀察到視網(wǎng)膜血管的出血、 浮腫的時(shí)間點(diǎn)開(kāi)始給藥本藥劑，由此，能夠防止癥狀的惡化。本發(fā)明還提供一種控制血管新生的方法，其中，向被檢體給予將含有硝酸鹽、亞硝酸鹽、以及被吸收到被檢體中且能夠轉(zhuǎn)換成硝酸鹽或亞硝酸鹽的化合物中的至少一種作為有效成分的組合物。本發(fā)明的方法中的細(xì)節(jié)，關(guān)于本發(fā)明的組合物與上述同樣。本發(fā)明的方法中，關(guān)于本發(fā)明的組合物與上述同樣，優(yōu)選通過(guò)將被檢體中的硝酸根離子濃度維持在有效濃度范圍內(nèi)來(lái)控制血管新生，優(yōu)選使被檢體中的血漿中硝酸根離子濃度為8 μ mol/L 1000 μ mol/L的范圍內(nèi)。另外，本發(fā)明的方法可以期待對(duì)與血管新生相伴隨的疾病的治療以及創(chuàng)傷的治療，特別是與血管新生相伴隨的疾病，優(yōu)選為選自早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病、糖尿病視網(wǎng)膜病、老年性黃斑變性、新生血管性青光眼中的至少任一種眼科疾病，此時(shí)，本發(fā)明的組合物向被檢體的給藥，優(yōu)選從眼底檢查中觀察到病態(tài)的血管新生的癥候的時(shí)間點(diǎn)開(kāi)始，進(jìn)行給藥直至正常血管的新生充分進(jìn)行、組織缺血狀態(tài)緩和。以下，列舉實(shí)驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更加詳細(xì)地說(shuō)明，但本發(fā)明并不限定于這些。<實(shí)驗(yàn)例1 硝酸鹽、亞硝酸鹽的視網(wǎng)膜無(wú)血管區(qū)改善效果的評(píng)價(jià)>
通過(guò)作為在體內(nèi)的視網(wǎng)膜血管新生疾病的病態(tài)模型廣泛使用的小鼠高氧負(fù)荷視網(wǎng)膜血管新生模型，評(píng)價(jià)硝酸鈉或者亞硝酸鈉的視網(wǎng)膜無(wú)血管區(qū)改善效果。(被試化合物注射液的制備)將作為被試化合物的硝酸鈉或亞硝酸鈉溶解在注射用生理鹽水中，制備3 μ mol/ L 15 μ mol/L的被試化合物注射液。(實(shí)驗(yàn)方法)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用C57BL/6J小鼠(SLC)。小鼠高氧負(fù)荷視網(wǎng)膜血管新生模型基于 Smith 等的方法(例如，參照 Lois E. H. Smith 等，“Oxygen-Induced Retinopathy in the Mouse" ,Invest Ophthalmol Vis Sci. Vol. 35,p. 101-111 (1994)(非專(zhuān)利文獻(xiàn) 8))進(jìn)行。將新生仔鼠從出生后第7日(P7)至第12日(PU)與母小鼠一起在通過(guò)氧控制裝置 (PR0-0X110、Reming Bioinstruments Co 制)控制為高氧(75士 O2)狀態(tài)的籠內(nèi)飼養(yǎng)。 在出生后第12日(PU)將新生仔鼠放回至大氣壓條件下(21% O2)，飼養(yǎng)至出生后第17日 (P17)，由此，引起視網(wǎng)膜血管新生。在出生后第7日(P7) 第16日(P16)的10日期間，1 日1次頸部皮下注射硝酸鈉或者亞硝酸鈉15 μ mol/kg或75 μ mol/kg。另外，作為對(duì)照，代替被試化合物同樣地皮下注射注射用生理鹽水。在出生后第17日(P17)通過(guò)給予苯巴比妥使小鼠深度麻醉，從左心室將分子量 2 X IO6的熒光素結(jié)合右旋糖苷(FITC-dextran =Sigma制)以50mg/animal進(jìn)行全身灌流。 灌流后，摘下眼球，在4%多聚甲醛磷酸緩沖液中固定4小時(shí) 12小時(shí)。固定后，從眼球中切除角膜以及晶狀體，用微型鉗子除去殘存的玻璃體動(dòng)脈。將視網(wǎng)膜在顯微鏡下剝離后，形成扁平狀態(tài)，用VECTASHIELD (Vector Laboratories Inc制)包埋，制作視網(wǎng)膜伸展標(biāo)本。(視網(wǎng)膜無(wú)血管區(qū)的評(píng)價(jià)法)視網(wǎng)膜平置(7，7卜7々 > 卜)標(biāo)本在熒光倒置顯微鏡下(才·」、乂)、、1X71) 使用高感光度C⑶照相機(jī)進(jìn)行拍攝。對(duì)于獲得的圖像，使用Wiotoshop CS4 extended計(jì)算出視網(wǎng)膜總面積以及視網(wǎng)膜無(wú)血管區(qū)面積，通過(guò)下式計(jì)算出視網(wǎng)膜無(wú)血管區(qū)面積比。視網(wǎng)膜無(wú)血管區(qū)面積比=視網(wǎng)膜無(wú)血管區(qū)面積(Pm2)+視網(wǎng)膜總面積 (μ m2) X 100(結(jié)果以及效果)圖1是由實(shí)驗(yàn)例1的結(jié)果得到的視網(wǎng)膜血管的熒光造影照片，圖1(a)表示 15 μ mol/kg的亞硝酸鈉給藥的情況，圖1 (b)表示75 μ mol/kg的亞硝酸鈉給藥的情況，圖 1(c)表示75 μ mol/kg的硝酸鈉給藥的情況，圖1(d)表示生理鹽水給藥的情況。另外，將各種情況下的視網(wǎng)膜無(wú)血管區(qū)面積、視網(wǎng)膜總面積以及計(jì)算出的視網(wǎng)膜無(wú)血管區(qū)面積比的平均值示于表1。
權(quán)利要求
1.一種控制血管新生的組合物，其用于治療、預(yù)防被檢體中的與血管新生相伴隨的疾病，其中，以有效量含有硝酸鹽、亞硝酸鹽以及被吸收到被檢體中且能夠轉(zhuǎn)換成硝酸鹽或亞硝酸鹽的化合物中的至少一種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，通過(guò)將被檢體中的硝酸根離子濃度維持在有效濃度范圍內(nèi)，來(lái)控制血管新生。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，以向被檢體給藥時(shí)提供8ymol/L 1000 μ mol/L的范圍內(nèi)的血漿中硝酸根離子濃度的量，含有硝酸鹽、亞硝酸鹽以及上述化合物中的至少一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，與血管新生相伴隨的疾病為選自早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病、糖尿病視網(wǎng)膜病、老年性黃斑變性、新生血管性青光眼中的至少任一種眼科疾病。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其為醫(yī)藥組合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其為選自健康食品、功能性食品、特定保健用食品以及營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)助食品中的至少一種。
7.—種控制血管新生的方法，其中，向被檢體給予組合物，所述組合物含有硝酸鹽、亞硝酸鹽以及被吸收到被檢體中且能夠轉(zhuǎn)換成硝酸鹽或亞硝酸鹽的化合物中的至少一種作為有效成分。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中，通過(guò)將被檢體中的硝酸根離子濃度維持在有效濃度范圍內(nèi)，來(lái)控制血管新生。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中，使被檢體中的血漿中硝酸根離子濃度在8μ mol/ L 1000 μ mol/L的范圍內(nèi)。
全文摘要
提供一種控制血管新生的組合物，其用于治療、預(yù)防被檢體中的與血管新生相伴隨的疾病，其中，以有效量含有硝酸鹽、亞硝酸鹽以及被吸收到被檢體中且能夠轉(zhuǎn)換成硝酸鹽或亞硝酸鹽的化合物中的至少一種。還通過(guò)如下控制血管新生的方法，提供在內(nèi)科上控制與血管新生相伴隨的疾病特別是眼科疾病中的血管新生、而在不抑制正常的血管新生的情況下能夠進(jìn)行治療的副作用少、安全性高的對(duì)血管新生疾病的治療、預(yù)防有效的組合物、以及使用其的控制血管新生的方法，其中，上述控制血管新生的方法中，將含有有效量的硝酸鹽、亞硝酸鹽、以及吸收到被檢體中且能夠轉(zhuǎn)換成硝酸鹽或亞硝酸鹽的化合物中的至少一種的組合物向被檢體給藥。
文檔編號(hào)A61P27/02GK102470146SQ201080032449
公開(kāi)日2012年5月23日 申請(qǐng)日期2010年7月12日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月17日
發(fā)明者村田敏規(guī), 藤森順也, 馬場(chǎng)秀運(yùn) 申請(qǐng)人:愛(ài)沃特株式會(huì)社