專利名稱：納米顆?？驳厣程刮黪ソM合物、其制備方法和包含它們的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及納米結(jié)構(gòu)的(納米顆粒的)坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶組合物、其制備方法和包含它們的藥物組合物。本發(fā)明的坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯、或共結(jié)晶的納米顆粒具有小于500nm的平均粒度?？驳厣程刮黪榍绑w藥物，通過胃腸道的吸收水解為坎地沙坦。坎地沙坦是一種選擇性ATl亞型血管緊張素II受體拮抗劑。
背景技術(shù)：
A.關(guān)于納米顆粒形成/產(chǎn)生的背景用于制藥應(yīng)用的納米顆粒的開發(fā)涉及用于開發(fā)遞藥系統(tǒng)專用溶液的新技術(shù)的出現(xiàn)。遞藥系統(tǒng)應(yīng)積極地影響藥物或其他有關(guān)化學物質(zhì)在體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄的速率。另外，遞藥系統(tǒng)應(yīng)使藥物結(jié)合其靶標受體并且影響該受體的信號傳導和活性。藥物遞藥材料應(yīng)與特定的藥物相容、易于結(jié)合并且能夠在使用后降解成通過正常排泄途徑代謝或排出的部分。不同的方法在于生產(chǎn)納米顆粒形式的活性成分(API)。例如在US 20080058399,WO 2008030161 和 US 20060165806 中描述的納米顆粒和
微米級顆粒組合物。例如，正如本領(lǐng)域公知的，可以使用研磨、勻化、沉淀技術(shù)或超臨界流體技術(shù)制備 API 納米顆粒。還在 US 5，718，388、US 5，862，999、US 5，665，331、US 5，543，133、US5，534，270中描述了納米顆粒組合物的制備方法。B.有關(guān)坎地沙坦西酯的背景坎地沙坦西酯為非肽，在化學上描述為(±)-1_羥乙基-2-乙氧基-1-[對_(鄰IH-四唑基-5-基苯基)芐基]-7-苯并咪唑羧酸酯、碳酸環(huán)己酯(酯)。其化學式為C33H34N6O6,其結(jié)構(gòu)式為
C—"00 H
酯水解位置坎地沙坦西酯是分子量為610. 67的白色至灰白色粉末。它實際上不溶于水且微溶于甲醇?？驳厣程刮黪榘诃h(huán)己氧基羰基氧基乙酯基上的一個手性中心的外消旋混合物。口服施用后，坎地沙坦西酯經(jīng)過在酯鍵上的水解形成活性藥物，即非手性的坎地沙坦。
例如在TO/2008/035360、TO/2007/147514、TO/2008/062047 中描述了它的制備方法?？驳厣程刮黪プ鳛榭诜┯闷瑒┑玫?其包含4mg、8mg、16mg或32mg的坎地沙坦西酯，并且包含如下非活性成分羥丙基纖維素、聚乙二醇、乳糖、玉米淀粉、羧甲基纖維素鈣和硬脂酸鎂。氧化鐵(紅褐色)作為著色劑加入到8-mg、16-mg和32_mg片劑中。藥理學性質(zhì)坎地沙坦西酯經(jīng)胃腸道吸收通過酯水解迅速和完全地成為具有生物活性的坎地沙坦，一種選擇性ATl亞型血管緊張素II受體拮抗劑?？驳厣程怪饕?經(jīng)由膽汁)未改變地排泄于尿和糞便中。它較少地經(jīng)由肝臟代謝通過O-脫乙基作用成為沒有活性的代謝物?？驳厣程沟南胨テ诩s為9小時。經(jīng)過單次和重復施用后，坎地沙坦西酯口服劑量多達
32mg的坎地沙坦的藥代動力學為線性?？驳厣程购推錄]有活性的代謝物在每日I次重復給藥時在血清中沒有蓄積?？驳厣程刮黪ナ┯煤螅驳厣程沟慕^對生物利用度估計為15%。在攝入片劑后3-4小時達到血清峰濃度(Cmax)?？驳厣程刮黪ナ┯煤缶哂懈咧竞康氖澄锊挥绊懣驳厣程沟纳锢枚取４x和排泄坎地沙坦的總血漿清除率為O. 37mL/min/kg,腎清除率為O. 19mL/min/kg。當口服施用坎地沙坦時，大約有26%的劑量未改變地排泄于尿中?？诜o予I4C-標記的坎地沙坦西酯后，在尿中恢復大約33%的放射活性和在糞便中恢復大約67%。靜脈內(nèi)給予14C-標記的坎地沙坦后,在尿中恢復大約59%的放射活性和在糞便中恢復大約36%。膽汁排泄有助于消除坎地沙坦。分布坎地沙坦的分布容量為O. 13L/kg?？驳厣程垢叨冉Y(jié)合血漿蛋白(> 99% )并且沒有滲入血紅細胞?？驳厣程寡獫{濃度在推薦劑量達到的范圍內(nèi)該蛋白結(jié)合是恒定的。在大鼠中，已經(jīng)證明坎地沙坦即使有也是很少越過血腦屏障。還證明對于大鼠，坎地沙坦穿越胎盤屏障并分布于胎兒中。副作用在病人(共7510)的所有試驗中由不良事件引起的退出，用坎地沙坦西酯作為單一療法治療的病人的比率為3.3% (即，3260中的108)和用安慰劑治療的病人的比率為3. 5% (即，1106 中的 39)。在坎地沙坦西酯治療中停藥的最普遍的原因是頭疼(O. 6% )和眩暈(O. 3% )。在安慰劑-對照臨床試驗中發(fā)生的不良事件中至少為I %的病人用坎地沙坦西酯治療，坎地沙坦西酯病人(η = 2350)比安慰劑病人(η = 1027)有更高的發(fā)病率，包括背痛(3%對2% )、眩暈(4%對3% )、上呼吸道感染(6%對4% )、咽炎(2%對1% )和鼻炎(2%對 1% )。由于坎地沙坦和坎地沙坦西酯在水中的不溶解性和低生物利用度，在本領(lǐng)域中需要提高親脂性/生物利用度/增加吸收/減少副作用/減少劑量/更快開始作用，以便克服與現(xiàn)有常規(guī)的坎地沙坦西酯制劑相關(guān)的問題。此外，可以通過表面修飾以減少首過效應(yīng)或改變坎地沙坦西酯代謝來解決這些問題。除坎地沙坦西酯傳統(tǒng)制劑外，透皮應(yīng)用也可以縮短達到坎地沙坦西酯期望效果所需的時間。本發(fā)明滿足了這一需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明描述了具有提高的親脂性/生物利用度/增加的吸收和溶出速率/減少的副作用/降低的劑量的納米顆?？驳厣程?、其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯和共結(jié)晶組合物。正如如下實施例中所例示，并非每一穩(wěn)定劑的組合都會導致穩(wěn)定的納米顆粒形成。發(fā)現(xiàn)可以通過基于微流體的連續(xù)流動法、使用選擇的穩(wěn)定劑來制備穩(wěn)定的坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶納米顆粒。本發(fā)明包含穩(wěn)定的納米顆粒組合物，其包含(a)具有小于約500nm平均粒度的納米顆?？驳厣程够蚱渌帉W可接受的酯、優(yōu)選
坎地沙坦西酯或共結(jié)晶；和(b)至少一種穩(wěn)定劑。其中，在連續(xù)流動反應(yīng)器中制備組合物。本發(fā)明的組合物在連續(xù)流動反應(yīng)器中制備，優(yōu)選在基于微流體的連續(xù)流動反應(yīng)器中制備。在本發(fā)明的組合物中，坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶的平均粒度為500nm-50nm。在本發(fā)明的組合物中(a)坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶的存在量選自約99. 5% -約O. 001 %、約95% -約O. I %和約90% -約O. 5%重量，以坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶和至少一種穩(wěn)定劑的總合并重量為基準，不包括其他賦形劑；(b)穩(wěn)定劑的存在量選自約0.5% -約99. 999%重量、約5. 0% -約99. 9%重量和約10% -約99. 5%重量，以坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶和至少一種穩(wěn)定劑的總合并干重為基準，不包括其他賦形劑；或(C)
(a)和(b)的組合。在本發(fā)明的組合物中，坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶可以以結(jié)晶相、無定形相、半結(jié)晶相、半無定形相和共結(jié)晶及其任意多晶型的混合物形式使用。為了制備本發(fā)明的組合物，可以使用穩(wěn)定劑，包括非離子型、陰離子型、陽離子型、離子型和兩性離子表面活性劑。本發(fā)明中還可以使用一種以上穩(wěn)定劑的組合，可以用于本發(fā)明的有用的穩(wěn)定劑包括、但不限于已知的有機和無機藥物賦形劑。該賦形劑包括各種聚合物、低分子量寡聚體、天然產(chǎn)物和表面活性劑。穩(wěn)定劑的有代表性的實例包括羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、聚(乙烯吡咯烷酮)、十二烷基硫酸鈉、明膠、葡聚糖、硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、十八醇十六醇混合物、山梨坦酯、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯類(例如商購的Tween 產(chǎn)品，例如 Tween 20 和 Tween 80 (ICI Speciality Chemicals);聚乙二醇類(例如Carbowax 3550和934 (Union Carbide)、基于聚(甲基)丙烯酸酯的聚合物和共聚物(Eudargit: )、與I-乙烯基-2-卩比咯烷酮的乙酸乙烯基酯聚合物(PVP/VA共聚物)、十二烷基苯磺酸鈉、生育酚聚乙二醇琥珀酸酯類、聚乙氧基化蓖麻油及其衍生物、聚氧乙烯硬脂酸酯類、甲基纖維素、羥乙基纖維素、醋酸鄰苯二甲酸纖維素、聚乙烯醇(PVA)、與環(huán)氧乙烷和甲醛的4-(1，1，3，3_四甲基丁基)-苯酚聚合物(也稱作泰洛沙泊、四丁酚醛(superione)和曲拉通)、泊洛沙姆類(例如Pluronics，其為環(huán)氧乙烷和環(huán)氧丙烷的嵌段共聚物)；聚胺類(例如Tetixmic，也稱作聚胺，其為衍生自連續(xù)加成環(huán)氧丙烷和環(huán)氧乙烷至乙二胺的四官能嵌段共聚物(BASF Wyandotte Corporation, Parsippany, nj.) ;PEG-憐脂、PEG-膽固醇、PEG-膽固醇衍生物、PEG-維生素A、PEG-維生素E、溶菌酶、聚(2-乙基-2-噁唑啉)、聚(甲基乙烯基醚)、乙烯基吡咯烷酮和乙烯基乙酸酯的隨機共聚物，例如Plasdone S630
坐寸O有用的離子型穩(wěn)定劑的實例包括、但不限于聚合物、生物聚合物、多糖類、纖維素制品、藻酸鹽、磷脂類和非聚合物的化合物，例如兩性離子穩(wěn)定劑、聚-η-甲基吡啶鎗、氯化
蒽基吡啶鎗、陽離子型磷脂類、殼聚糖、聚賴氨酸、聚乙烯咪唑、聚凝胺、聚甲基丙烯酸甲酯、溴化三甲銨(PMMTMABr)、苯扎氯銨、十六烷基三甲基銨溴化物、溴化己基二苯乙酮基三鉀銨(HDMAB)和聚(乙烯吡咯烷酮)-2-二甲氨基乙基甲基丙烯酸酯二甲基硫酸酯。本發(fā)明組合物的優(yōu)點包括、但不限于(I)較小的片劑或其他固體劑型大小和有益的透皮/局部應(yīng)用；(2)與常規(guī)坎地沙坦西酯劑型相比得到相同藥理學效果所需的較低劑量藥物；(3)與常規(guī)坎地沙坦西酯劑型相比增加的生物利用度；(4)改進的藥代動力學特性；(5)與相同活性化合物的常規(guī)劑型相比增加的坎地沙坦或坎地沙坦西酯納米顆粒溶出率；(6)坎地沙坦或坎地沙坦西酯納米顆粒的改進的代謝。為了制備本發(fā)明的組合物，可以使用這樣的方法，包括使用一種或多種穩(wěn)定劑的連續(xù)溶劑-抗溶劑沉淀或連續(xù)化學沉淀以形成納米顆粒。本發(fā)明的另一個方面在于納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶的制備方法，包括在連續(xù)流動反應(yīng)器中、在藥學可接受的酸或堿的存在下(如果需要)從包含一種或多種穩(wěn)定劑的可適當溶解坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯溶液中，沉淀納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶。作為連續(xù)流動反應(yīng)器，可以使用基于微流體的連續(xù)流動反應(yīng)器。所用的基于微流體的連續(xù)流動反應(yīng)器描述在公開文獻I. Hornyak, B. Borcsek和F. Darvas 的 Microfluid nanofluid D0I10. 1007/sl0404-008-0257_9 中。優(yōu)選通過下列步驟進行該方法(I)將坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯和任選的一種或多種穩(wěn)定劑溶于適合的溶劑；(2)將來自步驟(I)的制劑加入到包含一種或多種穩(wěn)定劑和如果需要藥學可接受的酸或堿的溶液中；和(3)沉淀來自步驟
(2)的制劑?；蛘呖赏ㄟ^下列步驟進行(I)將坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯和一種或多種穩(wěn)定劑溶于適合的溶劑；(2)將來自步驟(I)的制劑加入到包含一種或多種穩(wěn)定劑和如果需要藥學可接受的酸或堿的溶液中；和(3)沉淀來自步驟(2)的制劑。作為溶劑，可以使用(a)彼此易溶混的兩種不同溶劑，其中坎地沙坦僅溶于所用溶劑中之一；或(b)在兩個步驟中使用相同的溶劑，其中坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯納米結(jié)構(gòu)的顆粒，實際上，限制在于所應(yīng)用的穩(wěn)定劑溶于所用的溶劑。這種溶劑可以是二甲亞砜、乙醇、異丙醇、四氫呋喃、丙酮、甲醇，優(yōu)選吡啶。
納米顆?？驳厣程够蚱渌帉W可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶的粒度可以受所用溶劑、流速、坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶-穩(wěn)定劑比
率的影響。本發(fā)明的另一個方面涉及固體納米大小形式的坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶在生物相關(guān)介質(zhì)例如生理鹽水溶液、pH = 2. 5HC1溶液中的良好/瞬時再分散性。本發(fā)明的另一個方面在于包含穩(wěn)定的納米顆?？驳厣程够蚱渌帉W可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶組合物和任選的藥學可接受的輔助材料的藥物組合物。可以將本發(fā)明的藥物組合物配制成(a)用于選自口服、肺、直腸、結(jié)腸、胃腸外、腦池內(nèi)、陰道內(nèi)、腹膜內(nèi)、眼、耳、局部、口含、鼻和局部施用的施用；(b)選自液體分散體、凝膠、氣霧劑、軟膏劑、霜劑、凍干制劑、片劑、膠囊的劑型；(C)選自控釋制劑、速熔制劑、延時
釋放制劑、延長釋放制劑、脈沖式釋放制劑和混合的速釋和控釋制劑的劑型；或(d) (a)、
(b)和(C)的任意組合?？梢酝ㄟ^添加不同類型的賦形劑來配制用于以固體、液體、陰道、直腸、局部(粉末、軟膏劑或滴劑)或局部施用等的組合物。本發(fā)明的優(yōu)選劑型是固體或液體(霜劑/軟膏劑)劑型，不過，也可以使用任意藥學可接受的劑型。為了口服遞送入人體，還可以將納米顆粒作為其最終劑型的水性分散體施用。這是在納米顆粒形成后不進行進一步加工的遞送方式。然而，藥物或聚合物在水性環(huán)境中的穩(wěn)定性差或藥物的味道差可能需要將膠體顆粒摻入固體劑型，即摻入膠囊和片劑?；蛘?，可以將膠體顆粒的水性分散體作為液體摻入固體劑型，例如通過用膠體分散體將適合的填充劑制粒，形成顆粒。然后可以將這種顆粒填充入膠囊或壓制成片劑。或者，通過在流化床中使分散體在例如作為載體的糖丸上分層，可以形成納米顆粒的固體形式。這些生產(chǎn)片芯或顆?；蛲枇５姆绞胶罂蛇M行包衣步驟，以展示作為最終劑型的薄膜包衣片或膠囊中的薄膜包衣顆粒。適合于胃腸外注射的組合物可以包含生理學可接受的無菌水或非水溶液、分散液、混懸液或乳劑和再溶解成無菌可注射溶液或分散液的無菌粉末。適合的水和非水載體的實例為稀釋劑、溶劑或媒介物，包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)、其適合的混合物、植物油(例如橄欖油)和可注射的有機酯類,例如油酸乙酯。例如,可以通過使用包衣衣料例如卵磷脂、就分散體而言通過維持所需的粒度和通過使用表面活性劑維持適合的流動性。用于口服施用的固體劑型包括、但不限于膠囊、片劑、丸劑、粉末和顆粒。在這種固體劑型中，將活性劑與以下至少一種成分混合(a) —種或多種惰性賦形劑(或載體)，例如檸檬酸鈉或磷酸二鈣；(b)填充劑或增充劑，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；(C)粘合劑，例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠；(d)保濕劑，例如甘油；(e)崩解劑，例如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、藻酸、一些復合硅酸鹽和碳酸鈉；⑴溶出阻滯劑，例如石蠟；(g)吸收促進劑，例如季胺類化合物；(h)濕潤劑，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；(i)吸收劑，例如高嶺土和膨潤土 ；和j)潤滑劑，例如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉或其混合物。就膠囊、片劑和丸劑而言，劑型還可以包含緩沖劑。用于口服施用的液體劑型包括藥學可接受的乳劑、溶液、混懸液、糖漿劑和酏劑。除坎地沙坦或坎地沙坦西酯外，液體劑型還可以包含通常用于本領(lǐng)域的惰性稀釋劑，例如水或其他溶劑、增溶劑和乳化劑。典型的乳化劑是乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油例如棉籽油、花生油、玉米胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇、脫水山梨糖醇的脂肪酸酯類或這些物質(zhì)的混合物等。除了這種惰性稀釋劑外，組合物還可以包括輔劑，例如濕潤劑、乳化劑和助懸劑、甜味劑、矯味劑和芳香劑。與常規(guī)的坎地沙坦西酯劑型相比，本發(fā)明的藥物組合物顯示提高的親脂性/生物利用度/增加的吸收和溶出速率/減少的副作用/減小的劑量/快速的起效。本發(fā)明還涉及在此公開的新的坎地沙坦和坎地沙坦西酯納米顆?？捎米髦委煾哐獕旱姆椒?。A.本發(fā)明的坎地沙坦和坎地沙坦西酯納米顆粒的優(yōu)選特征I.增加的生物利用度提出本發(fā)明的納米顆粒坎地沙坦西酯組合物，顯示出比常規(guī)的坎地沙坦西酯制劑增加的生物利用度且需要比現(xiàn)有已知的少的劑量。實施例I :雄性Sprague-Dawley大鼠在禁食條件下的體內(nèi)藥代動力學試驗參比活性藥物成分和納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦西酯的比較實驗方案在禁食條件下的雄性Sprague-Dawley大鼠中的比較體內(nèi)藥代動力學試驗參比坎地沙坦西酯的單口服劑量為10mg/kg，和納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦西酯制劑的單口服劑量為53. 3mg/kg,相當于10mg/kg活性劑。兩個試樣都是通過胃管以5ml/kg的給藥體積給予。測試項目的媒介物為無菌O. 9% naCl溶液，并通過在治療過程中連續(xù)攪拌使混懸液保持均勻以便將因沉淀導致的誤差降至最低。動物在溫度和光照受控的條件下給雄性Wistar大鼠(購自Laboratory AnimalCenter, University of Szeged)維持標準丸粒樣卩齒齒動物膳食(Bioplan Ltd, Isaszeg,Hungary)，動物可隨意得到自來水。適應(yīng)期至少為4天。將大鼠隨機分成6只動物的組，每組用于在坎地沙坦西酯治療后的不同時間期限時采血樣。在口服治療前將全部動物禁食16小時。用氟烷麻醉動物，坎地沙坦西酯治療后15、30、45、60、120和360分鐘通過心臟穿刺取血。治療后使全部動物即刻得到水。最后組中的大鼠(在360min處死)在治療后120分鐘得到標準卩齒齒動物膳食。在60分鐘內(nèi)通過離心制備凝血的血清樣品(7000rpm, IOmin,4°C )，并貯存于_20°C直到分析為止。樣品制備將200 μ I血清的等分部分與20 μ I內(nèi)標操作溶液和I. 2ml甲醇合并用于蛋白質(zhì)沉淀。將該混合物蝸旋Imin,并在4°C以12000rpm離心lOmin。在40°C在氮氣流中蒸發(fā)上清液至干，用200 μ I水-甲醇(50 50ν/ν)再溶解，將20 μ I注入HPLC系統(tǒng)。使用由坎地沙坦西酯通過酶水解制備坎地沙坦所建立的的標準曲線來確定血清坎地沙坦?jié)舛?。統(tǒng)計學分析使用GraphPad Prism 4. O (GraphPad Software, San Diego, USA)進行統(tǒng)計學分析和圖不。結(jié)果參比活性藥物和納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦西酯治療導致口服施用10mg/kg活性試樣后15-360min間隔中都顯示雙相特性的可檢測血清濃度?？驳厣程刮黪募{米結(jié)構(gòu)的制劑中吸收顯然比施用參比物質(zhì)后更快并且更完全。在納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦西酯治療后，坎地沙坦最大血清濃度(Cmax)為7·071±1· 152yg/ml，而參比制劑為1.612±0.248yg/ml。此
夕卜，在較早時間點觀察到Cmax(參比制劑和納米結(jié)構(gòu)的制劑分別為tmax= 120min和30min)。計算15_360min之間血清濃度曲線下的面積(AUC15_36Qmin)以表征吸收測試項目的吸收程度。由于納米大小制劑非常迅速的吸收，在15-120min之間(AUC15_12(lmin)計算的相同參數(shù)來表征早期暴露量。參比化合物和納米結(jié)構(gòu)的制劑的AUC15_36(lmin分別為420. 2 μ g*min/ml 和 677. 3 μ g*min/ml、AUC15_120min 為 120. 8 μ g*min/ml 和 495. 2 μ g*min/ml。整個研究期間的兩個AUC值的比率(AUC15_36Qmin(納米粒徑)/AUC15_36Qmin(參比制劑))為I. 6，而治療開始的2小時(AUC15_120min(納米粒徑)/AUC15_120min (參比制劑) )為 4. I (圖 I)。圖I : 口服施用10mg/kg納米結(jié)構(gòu)的和參比試樣后的坎地沙坦西酯的血清濃度2.本發(fā)明的納米顆粒坎地沙坦西酯組合物的溶出特性本發(fā)明的納米顆?？驳厣程购涂驳厣程刮黪ソM合物因減小的粒度和獨特的納米結(jié)構(gòu)的顆粒形成而具有增加的溶解度和溶出特性。施用的活性劑的快速溶出是優(yōu)選的，因為溶出越快，一般導致起效越快且生物利用度越高。實施例2 實驗方案溶解度測定(Cmax)在254nm波長和室溫下通過UV-VIS測定(Agilent 8453)來確定與參比API相比納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦西酯在蒸餾水中的溶解度。通過O. 20 μ m —次性注射過濾器過濾再分散的樣品。為了檢查溶液中存在的納米顆粒，用在670nm波長下操作的紅光激光指示器照射。如果未觀察到散射，則過濾是成功的，該溶液不含納米顆粒。溶出試驗通過將5mg參比坎地沙坦西酯和包含5mg坎地沙坦西酯的26. 6mg納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦西酯粉末再分散于IOmL蒸餾水中進行溶出試驗。將該混懸液攪拌1、5、10、15、20和30分鐘，然后將其用O. 2 μ m —次性注射過濾器過濾。用UV-VIS分光光度計(Agilent8453)測定坎地沙坦西酯濃度。結(jié)果Cmax 的測定進行再分散性試驗以測定納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦西酯的溶解度。再分散的納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦西酯的粒度在基于強度的平均值為479nm、在數(shù)字平均值時為422nm?；趶姸鹊暮蛿?shù)字平均值分別為d(90)值為627和547nm。納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦西酯的溶解度為O. 4836mg/mL (圖 2)。
圖2.:坎地沙坦西酯的溶解度增強對比溶出試驗由于實施例6的納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦西酯的瞬時再分散性，所以25%以上的組合物的坎地沙坦西酯含量在再分散時即刻溶解。在10分鐘內(nèi)，包含再分散的納米結(jié)構(gòu)的顆粒的溶液達到其飽和狀態(tài)，溶解的坎地沙坦西酯含量為O. 4836mg/mL,其與納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦西酯的溶解度具有良好相關(guān)性(圖3.)。不能通過UV-VIS方法檢測蒸餾水中的參比坎地沙坦西酯含量。圖3 :參比坎地沙坦西酯和納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦西酯的對比溶出試驗3.通過本發(fā)明的納米顆?？驳厣程刮黪ソM合物的無定形/部分結(jié)晶/結(jié)晶/多晶型/共結(jié)晶形態(tài)增加
的溶解度藥物的結(jié)晶形態(tài)影響固體藥物的化學穩(wěn)定性。很多藥物物質(zhì)顯示多態(tài)現(xiàn)象。每種結(jié)晶形態(tài)具有不同的化學反應(yīng)性。藥物在其無定形形態(tài)下的穩(wěn)定性一般低于藥物在其結(jié)晶形態(tài)下的穩(wěn)定性，這歸因于無定形狀態(tài)的較高的自由能水平。用機械應(yīng)力可以帶來固體藥物的化學穩(wěn)定劑降低，例如研磨以改變結(jié)晶形態(tài)。固體藥物的化學穩(wěn)定性還受到藥物的由表面積差異產(chǎn)生的結(jié)晶形態(tài)影響。就在藥物固體表面上進行反應(yīng)而言，表面積的增加可以增加參與反應(yīng)的藥物的量。實施例3 晶體結(jié)構(gòu)測定本發(fā)明穩(wěn)定的部分結(jié)晶、結(jié)晶、多晶型或無定形納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦西酯組合物在與結(jié)晶參比物比較時因其表面積增加而顯示明顯增強的溶解度。通過X-射線衍射分析(Philips PW1050/1870RTG粉末衍射計)研究通過恒流納米沉淀法制備的坎地沙坦西酯納米顆粒結(jié)構(gòu)。測定顯示納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦西酯組合物是部分結(jié)晶或無定形(參見圖4中)。結(jié)晶坎地沙坦西酯的特征反映可以在納米大小的坎地沙坦西酯的XRD衍射圖中找到,但具有較低的強度(圖4a)。圖4 :參比坎地沙坦西酯和納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦西酯組合物的X-射線衍射圖4.本發(fā)明的納米顆?？驳厣程刮黪ソM合物的再分散特性本發(fā)明的納米顆?？驳厣程刮黪ソM合物的另一個特征是可以通過瞬時或使用傳統(tǒng)再分散劑例如甘露糖醇、蔗糖再分散的表面活性劑/聚合物穩(wěn)定干燥納米顆粒。實施例4:通過將5mg納米粒徑的坎地沙坦西酯粉末分散于5mL蒸餾水中完成納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦西酯粉末的再分散。將蒸餾水添加于固體納米結(jié)構(gòu)的粉末中后，用手輕輕振搖小瓶，產(chǎn)生納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦西酯顆粒的膠體分散體，正如圖5中所示。再分散顆粒的粒度和粒徑分布可以在圖6中看出。圖5 :納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦西酯在蒸餾水中的瞬時再分散性圖6 :再分散前后的坎地沙坦西酯納米顆粒的粒度和粒徑分布5.增加本發(fā)明的納米顆?；目驳厣程刮黪ソM合物的吸收和滲透特性的增強的親脂性由于細胞膜的磷脂性質(zhì)，所以一定程度的親脂性通常是藥物化合物的要求，不僅是通過口服施用后的腸壁吸收，而且能夠在靶組織中發(fā)揮其藥理學作用(F. Kesisoglou等人 /Advanced Drug Delivery Reviews 59(2007)631-644)。
可以通過使用親脂性穩(wěn)定劑或/和在聚合物主鏈上具有親脂性側(cè)基的穩(wěn)定劑和/或納米沉淀過程中的兩親穩(wěn)定劑增加坎地沙坦和坎地沙坦西酯的親脂性。由于所應(yīng)用的穩(wěn)定劑的親脂性或親脂性側(cè)基，所以本發(fā)明的坎地沙坦和坎地沙坦西酯納米顆粒不僅在親脂性、而且吸收和滲透性方面都可以得到增加。例如，使用殼聚糖，可以增加腸上皮細胞旁滲透性，這歸因于跨膜吸收增強。用于遞藥目的的大部分兩親共聚物包含聚酯或聚(氨基酸)_衍生物作為疏水性節(jié)段。藥物關(guān)注的大部分聚醚類屬于伯洛沙姆家族，即聚丙二醇和聚乙二醇的嵌段共聚物。6.本發(fā)明的納米顆?？驳厣程刮黪ソM合物的較快表面濕潤特性為了使坎地沙坦和坎地沙坦西酯溶解，其表面首先必須被環(huán)境流體濕潤。納米大小的無定形/結(jié)晶/多晶型形態(tài)具有化學隨機表面，其表示因穩(wěn)定劑和活性藥物成分性質(zhì)導致的疏水和親水相互作用，可以導致濕潤性改善。如果本發(fā)明的坎地沙坦和坎地沙坦西
酯納米顆粒表面被親水性基團/穩(wěn)定劑官能化，則較高程度的親水性導致與原始晶型相比表面濕潤較快且溶出較快。本發(fā)明的坎地沙坦和坎地沙坦西酯納米顆粒的這種先進特性得到再分散性試驗結(jié)果支持(參見圖4)。由于納米顆粒的較大的表面積、多晶型性質(zhì)和穩(wěn)定劑(例如伯洛沙姆-Pluronic PE10500)的親水性基團，所以表面濕潤比晶型快。B.組合物本發(fā)明提供了納米大小的坎地沙坦和坎地沙坦西酯納米結(jié)構(gòu)的顆粒形成，其包含至少一種穩(wěn)定劑，以使它們在空間和/或靜電方面穩(wěn)定。穩(wěn)定劑優(yōu)選與坎地沙坦和坎地沙坦西酯締合或與之發(fā)生相互作用，但不與坎地沙坦和坎地沙坦西酯或自身發(fā)生化學反應(yīng)?？梢酝ㄟ^溶劑-抗溶劑沉淀法、使用穩(wěn)定劑來形成本發(fā)明坎地沙坦和坎地沙坦西酯的納米顆粒?？梢酝ㄟ^合并另外的穩(wěn)定劑來增加所制備的納米大小的坎地沙坦和坎地沙坦西酯的膠體溶液穩(wěn)定性，所述的另外的穩(wěn)定劑可以作為第二種空間或靜電穩(wěn)定劑起作用。此外，使用另外的穩(wěn)定劑可以減小和控制本發(fā)明的坎地沙坦和坎地沙坦西酯的粒度?？驳厣程刮黪ゼ{米顆粒的粒度本發(fā)明包含坎地沙坦西酯納米顆粒，其具有小于約500nm的通過動態(tài)光散射法測定的平均粒度。所謂“小于約500nm的平均粒度”意指在通過上述技術(shù)測定時，至少90%的坎地沙坦西酯納米顆粒具有小于數(shù)字/強度平均值的粒度，即小于約500nm等。實施例5:在實驗過程中，用基于微流體的連續(xù)流動反應(yīng)器制備坎地沙坦西酯納米顆粒。作為起始溶液，使用溶于90mL DMSO和IOmL蒸餾水的混合溶劑的200mg坎地沙坦西酯和IgPluronic PE10500。使用進料部件使制備的溶液以lmL/min的流速通過反應(yīng)器部件。同時，使用第二個進料部件，使蒸懼水以I. 5mL/min的流速通過混合部件,其中使其與來源于第一個反應(yīng)部件的包含坎地沙坦西酯的溶液混合。因通過混合部件的水產(chǎn)生的化學沉淀導致在大氣壓下連續(xù)產(chǎn)生納米顆粒。所產(chǎn)生的膠體溶液被驅(qū)動通過第二個反應(yīng)部件，開始接觸與該裝置集成一體的動態(tài)光散射部件(Nanotrac)，這可以連續(xù)檢測得到的納米顆粒的粒度。可以通過改變流速、壓力和穩(wěn)定劑類型在寬范圍內(nèi)控制納米顆粒大小(參見圖7)?？梢酝ㄟ^流速來精確控制坎地沙坦西酯顆粒的粒度和粒徑分布，如圖8中所示。坎地沙坦西酯顆粒的粒度在最佳情況下為162nm。圖7 :使用不同穩(wěn)定劑的坎地沙坦西酯納米顆粒的粒度和粒徑分布。圖8 :流速對坎地沙坦西酯納米顆粒的粒度和粒徑分布的影響。實施例6:在實驗過程中，用基于微流體的連續(xù)流動反應(yīng)器制備坎地沙坦西酯納米顆粒。作為起始溶液，使用溶于IOOmL乙醇的200mg坎地沙坦西酯和600mg聚(乙烯吡咯烷酮)PVP10。使用進料部件使制備的溶液以2mL/min的流速通過反應(yīng)器部件。同時，使用第二個進料部件，使溶于蒸餾水中的O. 05%乙酸鈉以8mL/min的流速通過混合部件，其中使其與來源于第一個反應(yīng)部件的包含坎地沙坦西酯的溶液混合。因通過混合部件的水產(chǎn)生的化學沉淀導致在大氣壓下連續(xù)產(chǎn)生納米顆粒。所產(chǎn)生的膠體溶液被驅(qū)動通過第二個反應(yīng)部件，
到達與該裝置集成一體的動態(tài)光散射部件(Nanotrac)，這可以連續(xù)檢測得到的納米顆粒的粒度?？梢酝ㄟ^改變流速和穩(wěn)定劑的類型在寬范圍內(nèi)控制納米顆粒大小?？梢酝ㄟ^流速控制坎地沙坦西酯顆粒的粒度和粒徑分布，如圖9中所示。在最佳情況下坎地沙坦西酯顆粒的粒度為406nm(見表I)。圖9 :流速對坎地沙坦西酯納米顆粒的粒度和粒徑分布的影響表I :流速對坎地沙坦西酯粒度的影響實施例7:荷載坎地沙坦西酯納米顆粒的霜劑為了制備包含坎地沙坦西酯納米顆粒的IOOmL凝膠，將I. 3g卡波普971在室溫在劇烈攪拌下溶于如通過實施例6中所述方法合成的IOOmL坎地沙坦西酯膠體溶液中。
權(quán)利要求
1.納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦、其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯和共結(jié)晶，其具有小于約500nm的平均粒度。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦、其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯和共結(jié)晶，其中所述的平均粒度為500nm-50nm。
3.根據(jù)權(quán)利要求I的納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦,其中所述的平均粒度為500nm-50nm。
4.根據(jù)權(quán)利要求I的納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯，其中所述的平均粒度為 500nm-50nm。
5.穩(wěn)定的納米結(jié)構(gòu)的組合物，其包含 (a)具有小于約500nm的平均粒度的納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶；和 (b)至少一種穩(wěn)定劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求3的穩(wěn)定的納米結(jié)構(gòu)的組合物，其包含 (a)具有小于約500nm的平均粒度的納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶；和 (b)至少一種穩(wěn)定劑， 其中在連續(xù)流動反應(yīng)器中制備組合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求4的穩(wěn)定的納米結(jié)構(gòu)的組合物，其包含 (a)具有小于約500nm的平均粒度的納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶；和 (b)至少一種穩(wěn)定劑， 其中在基于微流體的反應(yīng)器中制備組合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求6-8的組合物，其包含具有平均粒度為500nm-50nm的納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦。
9.根據(jù)權(quán)利要求6-8的組合物，其包含具有平均粒度為500nm-50nm的納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦西酯。
10.根據(jù)權(quán)利要求6-10的組合物，其中(a)坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶的存在量選自約99. 5% -約0. 001 %、約95% -約0. I %和約90% -約0.5%重量，以坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶和至少一種穩(wěn)定劑的總合并重量為基準，不包括其他賦形劑；(b)穩(wěn)定劑的存在量選自約0. 5 % -約99. 999%重量、約5. 0% -約99. 9%重量和約10% -約99. 5%重量，以坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶和至少一種穩(wěn)定劑的總合并干重為基準，不包括其他賦形劑；或(c) (a)和(b)的組合。
11.根據(jù)權(quán)利要求6-12的組合物，其中，坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶選自結(jié)晶相、無定形相、半結(jié)晶相、半無定形相、共結(jié)晶及其任何多晶型的混合物。
12.權(quán)利要求1-12的組合物，包含作為穩(wěn)定劑的羥丙基甲基纖維素、醋酸鄰苯二甲酸纖維素、羥丙基纖維素、聚(乙烯吡咯烷酮)、十二烷基硫酸鈉、明膠、葡聚糖、硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、十八醇十六醇混合物、山梨坦酯、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、基于聚(甲基)丙烯酸酯的聚合物和共聚物、與I-乙烯基-2-吡咯烷酮的乙酸乙烯基酯聚合物(PVP/VA共聚物)、十二烷基苯磺酸鈉、生育酚聚乙二醇琥珀酸酯類、聚乙氧基化蓖麻油及其衍生物、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯；聚乙二醇類、聚氧乙烯硬脂酸酯類、甲基纖維素、羥乙基纖維素、聚乙烯醇、與環(huán)氧乙烷和甲醛的4-(1，1，3，3_四甲基丁基)-苯酚聚合物類、泊洛沙姆、聚胺類，其為衍生自連續(xù)加成環(huán)氧丙烷和環(huán)氧乙烷至乙二胺的四官能嵌段共聚物；PEG-磷脂、PEG-膽固醇、PEG-膽固醇衍生物、PEG-維生素A、PEG-維生素E、溶菌酶、聚(2-乙基-2-噁唑啉)、聚(甲基乙烯基醚)、乙烯基吡咯烷酮和乙烯基乙酸酯的隨機共聚物。
13.權(quán)利要求1-13的組合物，其包含作為另外的穩(wěn)定劑的羥丙基纖維素衍生物、任意其他的穩(wěn)定劑，優(yōu)選權(quán)利要求9的兩種穩(wěn)定劑和/或氯化十二烷基三甲基銨、氯化烷基芐基甲基銨、溴化烷基芐基二甲基銨、溴化芐基三甲基銨、苯扎氯銨、十六烷基三甲基溴化銨。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-14的納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶的制備方法，包括如果需要在藥學可接受的酸或堿的存在下在連續(xù)流動反應(yīng)器中從包含一種或多種穩(wěn)定劑的坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯的適合溶液中沉淀納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯。
15.根據(jù)權(quán)利要求15的方法，使用基于微流體的連續(xù)流動反應(yīng)器作為連續(xù)流動反應(yīng)器。
16.根據(jù)權(quán)利要求15-16的方法，包括(I)將坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯和任選的一種或多種穩(wěn)定劑溶于適合的溶劑； (2)將來自步驟(I)的制劑加入到包含一種或多種穩(wěn)定劑和如果需要藥 學可接受的酸或堿的溶液中；和(3)沉淀來自步驟(2)的制劑。
17.根據(jù)權(quán)利要求15-16的方法，包括(I)將坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯和一種或多種穩(wěn)定劑溶于適合的溶劑；(2)將來自步驟(I)的制劑加入到包含任選的一種或多種穩(wěn)定劑和如果需要藥學可接受的酸或堿的溶液中；和(3)沉淀來自步驟(2)的制劑。
18.根據(jù)權(quán)利要求15-18的方法，包括(a)使用彼此易混溶的兩種不同溶劑，其中坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯僅溶于它們之一；或(b)在兩個步驟中使用相同的溶劑，其中坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶形成納米結(jié)構(gòu)的顆粒，實際上，限制為所應(yīng)用的穩(wěn)定劑溶于所用的溶劑。
19.藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-19的納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶和任選的藥學可接受的輔助材料。
20.權(quán)利要求20的藥物組合物，其中將該組合物配制成(a)用于選自口服、肺、直腸、結(jié)腸、胃腸外、腦池內(nèi)、陰道內(nèi)、腹膜內(nèi)、眼、耳、局部、口含、鼻和局部施用的施用；(b)選自液體分散體、凝膠、氣霧劑、軟膏劑、霜劑、凍干制劑、片劑、膠囊的劑型；(C)選自控釋制劑、速熔制劑、延時釋放制劑、延長釋放制劑、脈沖式釋放制劑和混合的速釋和控釋制劑的劑型；或(d) (a)、(b)和(C)的任意組合。
21.對需要的個體的治療方法，通過對其施用有效量的權(quán)利要求1-19的納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶來進行。
22.權(quán)利要求1-19的納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶用于制備藥物中的用途。
23.權(quán)利要求1-19的在水中具有至少約0.4836mg/ml的溶解度的納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶在降低用于治療高血壓的劑量中的用途。
24.權(quán)利要求1-19的在生理介質(zhì)中具有瞬時再分散性的納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶在治療高血壓中的用途。
25.權(quán)利要求1-19的在降低的劑量下具有減少的食物和副作用的納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶在治療高血壓中的用途。
26.權(quán)利要求1-19的在人胃腸道中具有增加的吸收的納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶在降低用于治療高血壓的劑量中的用途。
27.權(quán)利要求1-19的在降低的劑量下具有更快速起效的納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶在治療高血壓中的用途。
28.權(quán)利要求1-19的在降低的劑量下具有減少的變異性的納米結(jié)構(gòu)的坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶在治療高血壓中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及納米結(jié)構(gòu)的(納米顆粒的)坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯、或共結(jié)晶組合物、其制備方法和包含它們的藥物組合物。本發(fā)明的坎地沙坦或其藥學可接受的酯、優(yōu)選坎地沙坦西酯或共結(jié)晶的納米顆粒具有小于500nm的平均粒度?？驳厣程刮黪榍绑w藥物，其通過胃腸道的吸收水解為坎地沙坦。坎地沙坦是一種選擇性AT1亞型血管緊張素II受體拮抗劑。
文檔編號A61K9/00GK102791256SQ201080036296
公開日2012年11月21日 申請日期2010年6月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月19日
發(fā)明者F·達爾瓦, G·菲利普切塞, K·蓬格拉茨, Z·厄特沃斯 申請人:成藥技術(shù)Ip控股(澤西)有限公司