專利名稱：納米乳劑疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了用于免疫應(yīng)答刺激的方法和組合物。具體而言，本發(fā)明提供了免疫原性組合物和使用其誘導(dǎo)針對副粘病毒科ijmramyxo viridae )的致病性病毒(例如副粘病毒亞科(.Paramyxovirinae)病毒(例如副粘病毒屬iFaramyxovirus、、腮腺炎病毒屬UMmlavirus)和/或麻疹病毒屬iMorbillivirus))和/或肺炎病毒亞科(J^neurnwirinaem毒(例如呼吸道合胞病毒)))的免疫應(yīng)答(例如免疫(例如保護(hù)性免疫))的方法。本發(fā)明的組合物和方法尤其在臨床(例如治療和預(yù)防醫(yī)學(xué)(例如接種疫苗))和研究應(yīng)用中有用。
背景技術(shù)：
免疫接種是用于改善人們健康的主要特征。盡管針對許多常見病的多種成功疫苗的可利用性，傳染病仍是健康問題和死亡的主因。在現(xiàn)有疫苗中固有的顯著問題包括關(guān)于反復(fù)免疫接種的需要，和目前疫苗遞送系統(tǒng)對于廣譜疾病的無效。為了開發(fā)針對已抗拒疫苗發(fā)展的病原體的疫苗和/或克服商購可得疫苗的缺點(例如由于不利結(jié)果、費用、復(fù)雜性和/或利用不足(underutilization))，必須開發(fā)抗原呈遞的新方法，其允許更少的免疫接種、更有效的使用和/或?qū)τ谝呙绲母俑弊饔?。發(fā)明概述
本發(fā)明提供了用于免疫應(yīng)答刺激的方法和組合物。具體而言，本發(fā)明提供了免疫原性組合物和使用其誘導(dǎo)針對副粘病毒科的致病性病毒(例如副粘病毒亞科病毒(例如副粘病毒屬、腮腺炎病毒屬和/或麻疹病毒屬)和/或肺炎病毒亞科病毒(例如呼吸道合胞病毒)))的免疫應(yīng)答(例如免疫(例如保護(hù)性免疫))的方法。本發(fā)明的組合物和方法尤其在臨床(例如治療和預(yù)防醫(yī)學(xué)(例如接種疫苗))和研究應(yīng)用中有用。在一些實施方案中，本發(fā)明提供了包含納米乳劑(nanoemulsion)滅活的免疫原(例如副粘病毒科的致病性病毒(例如副粘病毒亞科病毒(例如副粘病毒屬、腮腺炎病毒屬和/或麻疹病毒屬)和/或肺炎病毒亞科病毒(例如呼吸道合胞病毒)))的免疫原性組合物，所述納米乳劑包含水相、油相和溶劑。在一些實施方案中，免疫原包含副粘病毒科的致病性病毒(例如滅活的RSV (例如使用本發(fā)明的乳劑或通過其他方式滅活的)。在一些實施方案中，RNA病毒是副粘病毒科的病毒。例如，在一些實施方案中，病毒是副粘病毒亞科病毒(例如副粘病毒屬、腮腺炎病毒屬和/或麻疹病毒屬)。在一些實施方案中，病毒是肺炎病毒亞科病毒。在優(yōu)選實施方案中，病毒是呼吸道合胞病毒(RSV)。在一些實施方案中，免疫原性組合物包含納米乳劑滅活的RSV。在一些實施方案中，納米乳劑是W8(I5EC，盡管本發(fā)明并不限于其。例如，在一些實施方案中，納米乳劑選自本文描述的納米乳劑制劑之一。在一些實施方案中，組合物包含1-50%納米乳劑溶液，盡管更多和更少的量也在本發(fā)明中有用。例如，在一些實施方案中，免疫原性組合物包含約1.0% - 10%、約10%-20%、約20% - 30%,
3約30%-40%、約40% - 50%、約50%-60%或更多納米乳劑溶液。在一些實施方案中，免疫原性組合物包含約10%納米乳劑溶液。在一些實施方案中，免疫原性組合物包含約15%納米乳劑溶液。在一些實施方案中，免疫原性組合物包含約20%納米乳劑溶液。在一些實施方案中，免疫原性組合物包含約12%納米乳劑溶液。在一些實施方案中，免疫原性組合物包含約8%納米乳劑溶液。在一些實施方案中，免疫原性組合物包含約5%納米乳劑溶液。在一些實施方案中，免疫原性組合物包含約2%納米乳劑溶液。在一些實施方案中，免疫原性組合物包含約納米乳劑溶液。在一些實施方案中，免疫原性組合物(例如施用于受試者以在受試者中生成免疫應(yīng)答)包含MlO6噬斑形成單位(PFU)的副粘病毒科的滅活致病性病毒(例如RSV)，盡管也可以利用更多(例如約乜106 PFU,8x106 PFUUxIO7 PFUJxIO7 PFU、4xl07 PFU、8xl07 PFU、IxlO8 PFU、IxlO9 PFU或更多PFU的通過納米乳劑滅活的RSV)和更少(例如約 IxlO6 PFU、5xl05 PFUUxIO5 PFU,5x1 O4 PFUUxIO4 PFU、5x103 PFUUxIO3 PFU或更少PFU的通過納米乳劑滅活的副粘病毒科的病毒(例如RSV))量。在一些實施方案中，組合物是穩(wěn)定的(例如在室溫(例如達(dá)12小時、1天、2天、3天、4天、1周、2周、3周、1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、9個月、1年或更多)。在一些實施方案中，免疫原性組合物包含藥學(xué)可接受的載體。本發(fā)明并不限于任何具體藥學(xué)可接受的載體。實際上，可以利用任何合適的載體，包括但不限于本文描述的那些。在一些實施方案中，免疫原性組合物進(jìn)一步包含佐劑。本發(fā)明并不限于任何具體佐劑，并且本文描述的任何一種或多種佐劑在本發(fā)明的組合物中有用，包括但不限于偏向Thl免疫應(yīng)答的佐劑。在一些實施方案中，免疫原包含病原體產(chǎn)物(例如包括但不限于衍生自病原體的蛋白質(zhì)、肽、多肽、核酸、多糖或膜組分)。在一些實施方案中，免疫原和納米乳劑在單一容器中組合。 在一些實施方案中，本發(fā)明提供了在受試者中誘導(dǎo)針對副粘病毒科的致病性病毒(例如呼吸道合胞病毒(RSV))的免疫應(yīng)答的方法，其包括提供包含納米乳劑和免疫原的免疫原性組合物，其中所述免疫原包含通過納米乳劑滅活的副粘病毒科的病毒(例如副粘病毒亞科病毒(例如副粘病毒屬、腮腺炎病毒屬和/或麻疹病毒屬)和/或肺炎病毒亞科病毒(例如呼吸道合胞病毒)));和在這樣的條件下給受試者施用組合物，從而使得受試者生成針對病毒的免疫應(yīng)答。本發(fā)明并不受選擇用于施用本發(fā)明的組合物的途徑的限制。在一些實施方案中，施用免疫原性組合物包含使受試者的粘膜表面與組合物接觸。在一些實施方案中，粘膜表面包含鼻粘膜。在一些實施方案中，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答在受試者中誘導(dǎo)針對副粘病毒科的病毒(例如RSV)的免疫。在一些實施方案中，免疫包含全身免疫。在一些實施方案中，免疫包含粘膜免疫。在一些實施方案中，免疫應(yīng)答包含在受試者中增加的IFN-Y表達(dá)。在一些實施方案中，免疫應(yīng)答包含在受試者中增加的IL-17表達(dá)。在一些實施方案中，免疫應(yīng)答包含增加的Th2型細(xì)胞因子(例如IL-4、IL-5和IL-13)表達(dá)的不存在。在一些實施方案中，免疫應(yīng)答包含針對副粘病毒科的滅活的病毒(例如RSV)的全身IgG應(yīng)答。在一些實施方案中，通過納米乳劑滅活的副粘病毒科的病毒(例如RSV)在這樣的條件下施用于受試者，從而使得10 - IO3噬斑形成單位(PFU)的滅活的病毒存在于施用于受試者的劑量中，盡管也可以利用更多(例如約104、105、106、IO7UO8或更多)和更少(例如約1-10或更少)PFU的通過納米乳劑滅活的副粘病毒科的病毒(例如RSV)。在一些實施方案中，15%納米乳劑溶液用于滅活病毒。在一些實施方案中，納米乳劑包含W8(I5EC。在一些實施方案中，免疫保護(hù)受試者免于展示出通過副粘病毒科的病毒(例如RSV)引起的疾病的病征或癥狀。在一些實施方案中，免疫保護(hù)受試者免于由后續(xù)暴露于副粘病毒科的活病毒(例如RSV)的攻擊。在一些實施方案中，組合物進(jìn)一步包含佐劑。在一些實施方案中，受試者是人。在一些實施方案中，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答在受試者中誘導(dǎo)針對副粘病毒科的病毒(例如副粘病毒亞科病毒(例如副粘病毒屬、腮腺炎病毒屬和/或麻疹病毒屬)和/或肺炎病毒亞科病毒(例如呼吸道合胞病毒)))的免疫。在一些實施方案中，誘導(dǎo)針對副粘病毒科的病毒(例如RSV)的免疫包含全身免疫。在一些實施方案中，免疫包含粘膜免疫。在一些實施方案中，免疫應(yīng)答包含受試者中增加的IFN-Y表達(dá)。在一些實施方案中，免疫應(yīng)答包含受試者中增加的IL-17或其他類型Thl細(xì)胞因子表達(dá)。在一些實施方案中，免疫應(yīng)答包含針對免疫原的全身IgG應(yīng)答。在一些實施方案中，免疫應(yīng)答包含針對免疫原的粘膜IgA應(yīng)答。在一些實施方案中，每個劑量包含副粘病毒科的納米乳劑滅活的病毒(例如RSV)的量，其足以生成針對病毒的免疫應(yīng)答。副粘病毒科的病毒(例如RSV)的有效量是無需進(jìn)行定量的劑量，只要當(dāng)施用于受試者時，副粘病毒科的病毒(例如RSV)的量在受試者中生成免疫應(yīng)答。在一些實施方案中，當(dāng)本發(fā)明的納米乳劑用于滅活副粘病毒科的活病毒(例如RSV)時，預(yù)期每個劑量(例如施用于受試者以誘導(dǎo)免疫應(yīng)答))包含10 - IO10 pfu病毒/劑量；在一些實施方案中，每個劑量包含IO5 - IO8 pfu病毒/劑量；在一些實施方案中，每個劑量包含IO3 -IO5 pfu病毒/劑量；在一些實施方案中，每個劑量包含IO2 - IO4 pfu病毒/劑量；在一些實施方案中，每個劑量包含10 pfu病毒/劑量；在一些實施方案中，每個劑量包含IO2 pfu病毒/劑量；并且在一些實施方案中，每個劑量包含IO4 Pfu病毒/劑量。在一些實施方案中，每個劑量包含超過101° pfu病毒/劑量。在一些優(yōu)選實施方案中，每個劑量包含IO3 pfu病毒/劑量。本發(fā)明并不限于任何具體納米乳劑組合物。實際上，本文描述了在本發(fā)明中有用的多種納米乳劑組合物。類似地，本發(fā)明并不限于納米乳劑中存在的具體油。預(yù)期了多種油，包括但不限于大豆、鱷梨、角鯊烯、橄欖、低芥酸菜子、玉米、油菜籽、紅花、向日葵、魚、香料和水不溶性維生素。本發(fā)明也不限于具體溶劑。預(yù)期了多種溶劑，包括但不限于醇(例如包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇和辛醇)、甘油、聚乙二醇和基于有機(jī)磷酸酯的溶劑。包括油、溶劑及其他的納米乳劑組分在下文進(jìn)一步詳細(xì)描述。在一些實施方案中，乳劑進(jìn)一步包含表面活性劑。本發(fā)明并不限于具體表面活性劑。預(yù)期了多種表面活性劑，包括但不限于非離子和離子型表面活性劑(例如TRITONX-100 ；TffEEN 20 ；禾口 TYL0XAP0L)。在某些實施方案中，乳劑進(jìn)一步包括陽離子含鹵素化合物。本發(fā)明并不限于具體陽離子含鹵素化合物。預(yù)期了多種陽離子含鹵素化合物，包括但不限于十六烷基鹵化吡啶 、十六烷基三甲基鹵化銨、十六烷基二甲基乙基鹵化銨、十六烷基二甲基芐基鹵化銨、十六烷基三丁基鹵化If、十二烷基三甲基鹵化銨和十四烷基三甲基鹵化銨。本發(fā)明并不限于具體鹵化物。預(yù)期了多種鹵化物，包括但不限于選自氯化物、氟化物、溴化物和碘化物的鹵化物。在再進(jìn)一步的實施方案中，乳劑進(jìn)一步包括含季銨化合物。本發(fā)明并不限于具體含季銨化合物。預(yù)期了多種含季銨化合物，包括但不限于烷基二甲基芐基氯化銨、二烷基二甲基芐基氯化銨、η-烷基二甲基芐基氯化銨、η-烷基二甲基乙基芐基氯化銨、二烷基二甲基氯化銨和η-烷基二甲基芐基氯化銨。
在一些實施方案中，本發(fā)明提供了包含免疫原性組合物的疫苗，所述免疫原性組合物包含通過納米乳劑滅活的副粘病毒科的病毒(例如RSV)。在一些實施方案中，本發(fā)明提供了包含疫苗的試劑盒，所述疫苗包含乳劑和包含通過納米乳劑滅活的副粘病毒科的病毒(例如RSV)的免疫原性組合物，所述乳劑包含水相、油相和溶劑。在一些實施方案中，試劑盒進(jìn)一步包含關(guān)于使用試劑盒用于針對副粘病毒科的病毒(例如RSV)給受試者接種疫苗的說明書。在再進(jìn)一步的實施方案中，本發(fā)明提供了誘導(dǎo)針對副粘病毒科的一種或多種病毒(例如RSV)的免疫的方法，其包括提供包含水相、油相和溶劑的乳劑；和副粘病毒科的一種或多種病毒(例如RSV)；組合乳劑與副粘病毒科的一種或多種病毒(例如RSV)，以生成疫苗組合物；和給受試者施用疫苗組合物。在一些實施方案中，施用包含使疫苗組合物與受試者的粘膜表面接觸。例如，在一些實施方案中，施用包含鼻內(nèi)施用。在一些優(yōu)選實施方案中，施用在這樣的條件下發(fā)生，從而使得受試者生成針對副粘病毒科的一種或多種病毒(例如RSV)的免疫(例如經(jīng)由生成針對一種或多種免疫原的體液免疫應(yīng)答)。本發(fā)明并不受生成的免疫應(yīng)答的性質(zhì)的限制(例如包含通過納米乳劑滅活的副粘病毒科的病毒(例如RSV)的免疫原性組合物的施用后。實際上，多種免疫應(yīng)答可以在施用組合物的受試者中生成且測量，所述組合物包含納米乳劑和通過本發(fā)明的納米乳劑滅活的副粘病毒科的病毒(例如RSV)，包括但不限于免疫系統(tǒng)的細(xì)胞(例如B細(xì)胞、T細(xì)胞、樹突細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞(APCs)、巨噬細(xì)胞、天然殺傷(NK)細(xì)胞等)的活化、增殖或分化；標(biāo)記和細(xì)胞因子的上調(diào)或下調(diào)的表達(dá)；IgA、IgM和/或IgG滴度的刺激；脾大(例如增加的脾細(xì)胞構(gòu)成)；各種器官中的增生、混合細(xì)胞浸潤、和/或免疫系統(tǒng)的其他應(yīng)答(例如細(xì)胞的)，其可以就本領(lǐng)域已知的免疫刺激而言進(jìn)行評估。在一些實施方案中，施用包含使受試者的粘膜表面與組合物接觸。本發(fā)明并不受接觸的粘膜表面的限制。在一些優(yōu)選實施方案中，粘膜表面包含鼻粘膜。在一些實施方案中，粘膜表面包含陰道粘膜。在一些實施方案中，施用包含腸胃外施用。本發(fā)明并不受選擇用于施用本發(fā)明的組合物的途徑的限制。在一些實施方案中，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答在受試者中誘導(dǎo)針對副粘病毒科的一種或多種病毒(例如RSV)的免疫。在一些實施方案中，免疫包含全身免疫。在一些實施方案中，免疫包含粘膜免疫。在一些實施方案中，免疫應(yīng)答包含受試者中增加的IFN-Y和/或IL-17表達(dá)。在一些實施方案中，免疫應(yīng)答包含全身IgG應(yīng)答。在一些實施方案中，免疫應(yīng)答包含粘膜IgA應(yīng)答。在一些實施方案中，組合物包含15%納米乳劑溶液。然而，本發(fā)明并不限于納米乳劑的這個量(例如百分比)。例如，在一些實施方案中，組合物包含小于10%納米乳劑(例如9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%)。在一些實施方案中，組合物包含超過10%納米乳劑(例如12%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%或更多)。在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物包含本文描述的任何納米乳劑。在一些實施方案中，納米乳劑包含W2(i5EC。在一些優(yōu)選實施方案中，納米乳劑包含W8(i5EC。在一些實施方案中，納米乳劑是X8P。在一些實施方案中，免疫保護(hù)受試者免于展示出通過副粘病毒科的病毒(例如RSV)引起的疾病的病征或癥狀。在一些實施方案中，免疫保護(hù)受試者免于由后續(xù)暴露于副粘病毒科的活病毒(例如RSV)的攻擊。在一些實施方案中，組合物進(jìn)一步包含佐劑。本發(fā)明并不受利用的佐劑類型的限制。在一些實施方案中，佐劑是CpG寡核苷酸。在一些實施方案中，佐劑是單磷酰脂質(zhì)A。在本發(fā)明中有用的許多其他佐劑在本文中描述。在一些實施方案中，受試者是人。在一些實施方案中，免疫保護(hù)受試者免于展示出由副粘病毒科的病毒(例如RSV)的感染的病征或癥狀。在一些實施方案中，免疫減少在一次或多次暴露于副粘病毒科的病毒(例如RSV)時的感染危險。附圖描述
下述附圖構(gòu)成本說明書的部分并且包括以進(jìn)一步證實本發(fā)明的某些方面和實施方案。通過參考與本文呈現(xiàn)的具體實施方案的描述組合的這些附圖中的一個或多個，本發(fā)明可以得到更好理解。

圖1顯示通過納米乳劑殺死呼吸道合胞病毒(RSV)。圖2顯示在用納米乳劑滅活的RSV (NE-RSV)免疫接種后RSV特異性抗體的誘導(dǎo)。圖3顯示給受試者施用NE-RSV導(dǎo)致增強(qiáng)的RSV特異性⑶8 T細(xì)胞應(yīng)答。圖4顯示給受試者施用NE-RSV增強(qiáng)來自RSV攻擊的小鼠的氣道的BAL流體中的抗病毒細(xì)胞因子。圖5顯示用NE-RSV給小鼠接種疫苗增強(qiáng)在用活RSV攻擊后在肺中的IL-17生產(chǎn)。圖6顯示給受試者施用NE-RSV提供改善的清除且在后續(xù)活病毒攻擊時誘導(dǎo)保護(hù)性應(yīng)答。圖7顯示在施用NE-RSV與對照比較的小鼠中各種基因的表達(dá)。圖8顯示在施用NE-RSV與對照比較的小鼠中肺組織學(xué)切片的過碘酸-希夫氏(PAS)染色。圖9顯示在施用NE-RSV與對照比較的小鼠中的細(xì)胞因子表達(dá)。圖10顯示顯著的RSV特異性抗體應(yīng)答在用NE-RSV接種疫苗后在小鼠中全身生成(A)和在用活病毒攻擊后2天時接種疫苗的小鼠的支氣管肺泡灌洗液中的總Ig。發(fā)明總體描述
本發(fā)明提供了用于免疫應(yīng)答刺激的方法和組合物。具體而言，本發(fā)明提供了免疫原性組合物和使用其誘導(dǎo)針對副粘病毒科的致病性病毒(例如副粘病毒亞科病毒(例如副粘病毒屬、腮腺炎病毒屬和/或麻疹病毒屬)和/或肺炎病毒亞科病毒(例如呼吸道合胞病毒)))的免疫應(yīng)答(例如免疫(例如保護(hù)性免疫))的方法。本發(fā)明的組合物和方法尤其在臨床(例如治療和預(yù)防醫(yī)學(xué)(例如接種疫苗))和研究應(yīng)用中有用。盡管機(jī)制的理解不是實踐本發(fā)明必需的，并且本發(fā)明并不限于任何具體作用機(jī)制，但在一些實施方案中，用本發(fā)明的NE的NE處理(例如中和副粘病毒科的病毒(例如副粘病毒亞科病毒(例如副粘病毒屬、腮腺炎病毒屬和/或麻疹病毒屬)和/或肺炎病毒亞科病毒(例如呼吸道合胞病毒)))保存病毒的重要抗原表位(例如可通過受試者的免疫系統(tǒng)識別)(例如同時中和和/或根除病毒的感染性潛力)，從而穩(wěn)定其在乳劑的油和水界面中的疏水和親水組分(例如從而提供受試者可以針對其產(chǎn)生免疫應(yīng)答的一種或多種免疫原(例如穩(wěn)定抗原))。在其他實施方案中，因為NE制劑通過孔穿透粘膜，所以它們可以將免疫原攜帶至樹突細(xì)胞的粘膜下位置(例如從而起始和/或刺激免疫應(yīng)答)。盡管機(jī)制的理解不是實踐本發(fā)明必需的，并且本發(fā)明并不限于任何具體作用機(jī)制，但在一些實施方案中，組合NE和副粘病毒科的病毒(例如副粘病毒亞科病毒(例如副粘病毒屬、腮腺炎病毒屬和/或麻疹病毒屬)和/或肺炎病毒亞科病毒(例如呼吸道合胞病毒)))穩(wěn)定病毒免疫原，且提供正確的免疫原性材料用于生成免疫應(yīng)答。樹突細(xì)胞貪婪地吞噬納米乳劑(NE)油滴，并且這可以提供中和病毒免疫原的方式 (例如用納米乳劑的副粘病毒科的病毒(例如副粘病毒亞科病毒(例如副粘病毒屬、腮腺炎病毒屬和/或麻疹病毒屬)和/或肺炎病毒亞科病毒(例如呼吸道合胞病毒)))的滅活后生成的抗原蛋白質(zhì)或其肽片段)用于抗原呈遞。雖然其他疫苗依賴于炎癥毒素或其他免疫刺激用于佐劑活性(參見例如，Holmgren 和 Czerkinsky，Nature Med. 2005,11 ；45-53)，但當(dāng)在動物和人中的研究中置于皮膚或粘膜上時，NEs未顯示是炎癥的。因此，盡管機(jī)制的理解不是實踐本發(fā)明必需的，并且本發(fā)明并不限于任何具體作用機(jī)制，但在一些實施方案中，本發(fā)明的包含NE的組合物(例如包含NE和副粘病毒科的一種或多種病毒(例如副粘病毒亞科病毒(例如副粘病毒屬、腮腺炎病毒屬和/或麻疹病毒屬)和/或肺炎病毒亞科病毒(例如呼吸道合胞病毒))的組合物)可以充當(dāng)對于免疫系統(tǒng)的“物理”佐劑(例如轉(zhuǎn)運和/或呈遞免疫原性組合物(例如副粘病毒科病毒的肽和/或抗原)。在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物的粘膜施用生成粘膜(例如粘膜免疫的征兆(例如IgA抗體滴度的生成))以及全身免疫。細(xì)胞和體液免疫在針對多重病原體的保護(hù)中起作用，并且兩者都可以由本發(fā)明的 NE制劑誘導(dǎo)。在一些實施方案中，給受試者施用(例如粘膜施用)本發(fā)明的組合物(例如肺炎病毒亞科病毒(例如RSV)的NE滅活)導(dǎo)致體液(例如特異性抗體的發(fā)展)和細(xì)胞(例如細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞)免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)(例如針對肺炎病毒亞科病毒(例如RSV))。在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物(例如NE滅活的肺炎病毒亞科病毒(例如RSV))用作疫苗(例如 RSV疫苗)。此外，在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物(例如包含NE和副粘病毒科的病毒(例如副粘病毒亞科病毒(例如副粘病毒屬、腮腺炎病毒屬和/或麻疹病毒屬)和/或肺炎病毒亞科病毒(例如呼吸道合胞病毒))的組合物)誘導(dǎo)(例如當(dāng)施用于受試者時)全身和粘膜免疫。因此，在一些優(yōu)選實施方案中，給受試者施用本發(fā)明的組合物導(dǎo)致針對暴露(例如致死性粘膜暴露)于副粘病毒科的病毒(例如副粘病毒亞科病毒(例如副粘病毒屬、腮腺炎病毒屬和/或麻疹病毒屬)和/或肺炎病毒亞科病毒(例如呼吸道合胞病毒)))的保護(hù)。盡管機(jī)制的理解不是實踐本發(fā)明必需的，并且本發(fā)明并不限于任何具體作用機(jī)制，但粘膜施用(例如接種疫苗)提供針對病毒感染(例如在粘膜表面起始的那種)的保護(hù)。盡管迄今已證明難以刺激針對在粘膜表面侵入的病原體的分泌性IgA應(yīng)答和保護(hù)(參見例如，Mestecky等人， Mucosal Immunology. 3ed edn. (Academic Press, San Diego, 2005)),但本發(fā)明提供了用于刺激針對副粘病毒科的病毒(例如副粘病毒亞科病毒(例如副粘病毒屬、腮腺炎病毒屬和/或麻疹病毒屬)和/或肺炎病毒亞科病毒(例如呼吸道合胞病毒)))的粘膜免疫(例如保護(hù)性IgA應(yīng)答)的組合物和方法。定義
為了促進(jìn)本發(fā)明的理解，下文定義了許多術(shù)語和短語。如本文使用的，術(shù)語“微生物”指微生物的任何物種或類型，包括但不限于細(xì)菌、病毒、古細(xì)菌、真菌、原生動物、支原體、朊病毒和寄生生物。術(shù)語微生物包含本身且自發(fā)地對于另一種生物(例如動物，包括人和植物)是致病性的那些生物，和產(chǎn)生對于另一種生物致病性的試劑的那些生物，雖然生物自身并非直接對于其他生物是致病性的或傳染性的。如本文使用的，術(shù)語“病原體”和語法等價物指通過直接感染其他生物或通過產(chǎn)生在另一種生物中引起疾病的試劑(例如產(chǎn)生致病性毒素的細(xì)菌等)，在另一種生物(例如動物和植物)中引起疾病狀況(例如感染、病理學(xué)狀況、疾病等)的生物(例如生物學(xué)試劑)包括微生物?！安≡w”包括但不限于病毒、細(xì)菌、古細(xì)菌、真菌、原生動物、支原體、朊病毒和寄生生物。術(shù)語“細(xì)菌”指所有原核生物，包括在原核生物界中的所有門內(nèi)的那些。預(yù)期該術(shù)語包含視為細(xì)菌的所有微生物，包括枝原體屬(i^co/^asma)、衣原體屬Q(mào)Chlamydia、、職菌屬Uciiflofflj^es)、鏈霉菌屬Q(mào)Str印tomyces、和立克次氏體屬(Mckettsia\所有形式的細(xì)菌包括在這個定義內(nèi)，包括球菌、桿菌、螺旋體、原生質(zhì)球、原生質(zhì)體等。如本文使用的，術(shù)語“真菌”關(guān)于真核生物使用，例如霉菌和酵母，包括雙態(tài)性真菌。如本文使用的，除非本文另有說明，術(shù)語“疾病”和“病理學(xué)狀況”可互換使用，以描述自對于物種或組(例如人)的成員視為正常或平均的狀況的偏離，并且其在對于那個物種或組的大多數(shù)個體并非有害的條件下對于受累個體是有害的。此種偏離可以表現(xiàn)為與受試者或任何其器官或組織的正常狀態(tài)的任何損害相關(guān)的狀態(tài)、病征和/或癥狀(例如腹瀉、 惡心、發(fā)熱、疼痛、水皰、癤、疹、免疫抑制、炎癥等)，這中斷或改變正常功能的實現(xiàn)。疾病或病理狀況可以由微生物(例如病原體或其他傳染物(例如病毒或細(xì)菌))引起或起因于與所述微生物的接觸，可以響應(yīng)環(huán)境因素(例如營養(yǎng)不良、工業(yè)危害和/或氣候)，可以響應(yīng)生物的先天不足(例如遺傳異常)或這些及其他因素的組合。如本文使用的，術(shù)語“宿主”或“受試者”指待通過本發(fā)明的組合物和方法治療(例如施用)的個體。受試者包括但不限于哺乳動物(例如鼠、猿猴、馬科動物、?？苿游?、豬科動物、犬科動物、貓科動物等)，且最優(yōu)選包括人。在本發(fā)明的背景中，術(shù)語“受試者”一般指將被施用或已被施用本發(fā)明的一種或多種組合物(例如用于誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的組合物)的個體。如本文使用的，當(dāng)關(guān)于微生物(例如病原體(例如病毒))使用時，術(shù)語“滅活”和語法等價物指微生物(例如病原體(例如病毒))的殺死、消除、中和和/或感染和/或引起宿主中的病理學(xué)應(yīng)答和/或疾病的能力的減少。例如，在一些實施方案中，本發(fā)明提供了包含納米乳劑(NE)滅活的呼吸道合胞病毒(RSV)的組合物。因此，如本文提及的，包含“NE滅活的RSV”、“NE殺死的RSV”、NE中和的RSV”、“NE_RSV”或語法等價物的組合物指這樣的組合物，當(dāng)施用于受試者時，其特征在于在宿主內(nèi)RSV復(fù)制的不存在或顯著減少的存在(例如在一段時間內(nèi)(例如在數(shù)天、數(shù)周、數(shù)月或更久的時間段內(nèi))。如本文使用的，術(shù)語“融合(fusigenic)”意指能夠與微生物試劑(例如細(xì)菌、細(xì)菌孢子或病毒衣殼)的膜融合的乳劑。融合乳劑的具體例子在本文中描述。如本文使用的，術(shù)語“溶原的”指能夠破裂微生物試劑(例如病毒(例如病毒包膜) 或細(xì)菌或細(xì)菌孢子)的膜的乳劑(例如納米乳劑)。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，與單獨的任一試劑相比較，溶原和融合試劑在相同組合物中的存在產(chǎn)生增強(qiáng)的滅活作用。使用這種改良的抗微生物組合物的方法和組合物(例如用于誘導(dǎo)免疫應(yīng)答(例如用作疫苗)在本文中詳細(xì)描述。如本文使用的，術(shù)語“乳劑，，包括典型水包油或油包水分散體或小滴，以及可以由于疏水性力形成的其他脂質(zhì)結(jié)構(gòu)，當(dāng)水不能混合的油相與水相混合時，所述疏水性力驅(qū)動非極性殘基(例如長烴鏈)遠(yuǎn)離水且驅(qū)動極性首基朝向水。這些其他脂質(zhì)結(jié)構(gòu)包括但不限于單層、少層(paucilamellar)和多層脂質(zhì)小泡、微團(tuán)和層狀相。類似地，如本文使用的，術(shù)語 “納米乳劑”指包含小脂質(zhì)結(jié)構(gòu)的水包油分散體。例如，在優(yōu)選實施方案中，納米乳劑包含具有約0.1 - 5微米(例如直徑150 +/-25 nm)的平均粒子大小的小滴的油相，盡管預(yù)期了更小和更大的粒子大小。術(shù)語“乳劑”和“納米乳劑”在本文中經(jīng)?？苫Q使用，以指本發(fā)明的納米乳劑。如本文使用的，當(dāng)關(guān)于納米乳劑和活微生物使用時，術(shù)語“接觸”、“接觸的”、“暴露”和“暴露的”指使一種或多種納米乳劑與微生物(例如病原體)達(dá)到接觸，從而使得納米乳劑滅活微生物或致病性試劑，如果存在的話。本發(fā)明并不受用于微生物滅活的納米乳劑的量或類型的限制。在本發(fā)明中有用的多種納米乳劑在本文中和其他地方描述(例如美國專利申請 20020045667 和 20040043041,以及美國專利號 6，015，832,6, 506，803,6, 635，676 和6，559，189中描述的納米乳劑，所述文件各自為了所有目的整體引入本文作為參考)。在本發(fā)明中預(yù)期了納米乳劑(例如足以滅活微生物(例如病毒滅活))和微生物(例如足以提供抗原組合物(例如能夠誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的組合物))的比和量，包括但不限于本文描述的那些。術(shù)語“表面活性劑”指具有有力地偏好通過水溶劑化的極性首基和通過水并非良好溶劑化的疏水尾的任何分子。術(shù)語“陽離子型表面活性劑”指具有陽離子首基的表面活性劑。術(shù)語“陰離子型表面活性劑”指具有陰離子首基的表面活性劑。術(shù)語“親水-親油平衡指數(shù)”和“HLB指數(shù)”指用于關(guān)聯(lián)表面活性劑分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)與其表面活性的指數(shù)。HLB指數(shù)可以通過多種經(jīng)驗公式進(jìn)行計算，如例如由引入本文作為參考的 Meyers 描述的(參見例如，Meyers，Sar/aciafli Science and Technology, VCH Publishers Inc.，New York，第幻1_對5頁(1992))。如適當(dāng)時在本文中使用的，表面活性劑的 HLB 指數(shù)是在 McCutcheon 的第 1 卷 Emulsifiers and Detergents North American Edition, 1996 (引入本文作為參考)中對那種表面活性劑指定的HLB指數(shù)。HLB指數(shù)對于商業(yè)表面活性劑范圍為0 -約70或更多。具有在水中的高可溶性和增溶性質(zhì)的親水表面活性劑在標(biāo)度的高末端，而其為水在油中的良好增溶劑的在水中具有低可溶性的表面活性劑在標(biāo)度的低末端。如本文使用的，術(shù)語“相互作用增強(qiáng)劑”指作用于增強(qiáng)乳劑與微生物(例如與細(xì)菌 (例如革蘭氏陰性細(xì)菌)的細(xì)胞壁或病毒包膜的相互作用的化合物。預(yù)期的相互作用增強(qiáng)劑包括但不限于螯合試劑(例如乙二胺四乙酸(EDTA)、亞乙基雙(氧亞乙基次氮基)四乙酸 (EGTA)等)和某些生物學(xué)試劑(例如牛血清清蛋白(abulmin) (BSA)等)。術(shù)語“緩沖劑”或“緩沖試劑”指當(dāng)添加到溶液中時，促使溶液抵抗pH中的改變的材料。術(shù)語“還原劑”和“電子供體”指對第二種材料貢獻(xiàn)電子以還原一種或多種第二種材料的原子的氧化狀態(tài)的材料。術(shù)語“單價鹽”指其中金屬(例如Na、K或Li)在溶液中具有凈1+電荷的任何鹽(即比電子多一個質(zhì)子)。術(shù)語“二價鹽”指其中金屬(例如Mg、Ca或Sr)在溶液中具有凈2+電荷的任何鹽。術(shù)語“螯合劑”或“螯合試劑”指具有可用于與金屬離子鍵合的含非孤對電子的超過一種原子的任何材料。術(shù)語“溶液”指水性或非水性混合物。
如本文使用的，術(shù)語“用于誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的組合物”、“免疫原性組合物，，或語法等價物指這樣的組合物，一旦施用于受試者(例如1次、2次、3次或更多(例如通過數(shù)周、數(shù)月或數(shù)年分開))，其在受試者中刺激、生成和/或引發(fā)免疫應(yīng)答(例如導(dǎo)致針對能夠引起疾病的微生物(例如病原體)的總體或部分免疫)。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，組合物包含納米乳劑和免疫原。在進(jìn)一步優(yōu)選的實施方案中，包含納米乳劑和免疫原的組合物包含一種或多種其他化合物或試劑，包括但不限于治療劑、生理學(xué)可耐受的液體、凝膠、載體、稀釋劑、佐劑、賦形劑、水楊酸鹽、類固醇、免疫抑制劑、免疫刺激劑、抗體、細(xì)胞因子、抗生素、粘合劑、填充劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、乳化劑和/或緩沖劑。免疫應(yīng)答可以是先天性(例如非特異性)免疫應(yīng)答或習(xí)得性(例如獲得性)免疫應(yīng)答(例如減少受試者中的感染性、發(fā)病或發(fā)病開始的那種(例如通過暴露于致病性微生物引起的)或預(yù)防受試者中的感染性、發(fā)病或發(fā)病開始的那種(例如通過暴露于致病性微生物引起的))。因此，在一些優(yōu)選實施方案中，包含納米乳劑和免疫原的組合物作為疫苗施用于受試者(例如以預(yù)防或減弱疾病(例如通過給受試者提供針對疾病的總體或部分免疫或疾病病征、癥狀或狀況的總體或部分減弱(例如抑制)。如本文使用的，術(shù)語“佐劑”指可以刺激免疫應(yīng)答(例如粘膜免疫應(yīng)答)的任何物質(zhì)。一些佐劑可以引起免疫系統(tǒng)的細(xì)胞活化(例如佐劑可以引起免疫細(xì)胞產(chǎn)生且分泌細(xì)胞因子)?？梢砸鹈庖呦到y(tǒng)的細(xì)胞活化的佐劑的例子包括但不限于由皂樹(Q. saponaria) 的樹皮純化的皂苷，例如QS21 (由HPLC分級分離在第21個峰中洗脫的糖脂；Aquila Biopharmaceuticals, Inc.，Worcester, Mass.)；聚二(羧基苯氧基)磷腈(PCPP 聚合物； Virus Research hstitute，USA)；脂多糖例如單磷酰脂質(zhì) A (MPL ;Ribi ImmunoChem Research, Inc.，Hamilton, Mont.)、胞壁酰二肽(MDP ；Ribi)和蘇氨酰胞壁酰二肽(t_MDP ； Ribi)的衍生物；0M-174(與脂質(zhì)A相關(guān)的葡糖胺二糖；OM Pharma SA，Meyrin，瑞士);和利什曼蟲屬(Leishmania)延伸因子(純化的利什曼蟲屬蛋白質(zhì)；Corixa Corporation, Seattle, Wash.)。傳統(tǒng)佐劑是本領(lǐng)域眾所周知的，并且包括例如磷酸鋁或氫氧化物鹽(“明礬”)。在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物(例如包含納米乳劑滅活的RSV)與一種或多種佐劑(例如以使免疫應(yīng)答偏向Thl或Th2型應(yīng)答)一起施用。如本文使用的，術(shù)語“有效誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的量”(例如用于誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的組合物) 指在受試者中刺激、生成和/或引發(fā)免疫應(yīng)答所需的劑量水平(例如當(dāng)施用于受試者時)。有效量可以在一次或多次施用(例如經(jīng)由相同或不同途徑)、應(yīng)用或劑量中施用，并且不預(yù)期限制于具體制劑或施用途徑。如本文使用的，術(shù)語“在這樣的條件下，從而使得所述受試者生成免疫應(yīng)答”指免疫應(yīng)答(例如先天性或獲得性)的任何定性或定量誘導(dǎo)、生成和/或刺激。如本文使用的，術(shù)語“免疫應(yīng)答”指通過受試者的免疫系統(tǒng)的應(yīng)答。例如，免疫應(yīng)答包括但不限于Toll受體活化、淋巴因子(例如細(xì)胞因子(例如Thl或Th2型細(xì)胞因子)或趨化因子)表達(dá)和/或分泌、巨噬細(xì)胞活化、樹突細(xì)胞活化、T細(xì)胞活化(例如⑶4+或⑶8+ T 細(xì)胞)、NK細(xì)胞活化和/或B細(xì)胞活化(例如抗體生成和/或分泌)中的可檢測改變(例如增加)。免疫應(yīng)答的另外例子包括免疫原(例如抗原(例如免疫原性多肽))與MHC分子的結(jié)合和誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(“CTL”)應(yīng)答，誘導(dǎo)針對免疫原性多肽由其衍生的抗原的B細(xì)胞應(yīng)答(例如抗體產(chǎn)生)和/或T輔助淋巴細(xì)胞應(yīng)答、和/或遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)應(yīng)答，免
11疫系統(tǒng)的細(xì)胞(例如T細(xì)胞、B細(xì)胞(例如任何發(fā)育階段(例如漿細(xì)胞)的擴(kuò)增(例如細(xì)胞群體的生長)，和抗原通過抗原呈遞細(xì)胞的增加的加工和呈遞。免疫應(yīng)答可以針對受試者的免疫系統(tǒng)識別為外來的免疫原(例如來自微生物(例如病原體)的非自身抗原)，或識別為外來的自身抗原)。因此，應(yīng)當(dāng)理解，如本文使用的，“免疫應(yīng)答”指任何類型的免疫應(yīng)答，包括但不限于先天性免疫應(yīng)答(例如Toll受體信號級聯(lián)放大的活化)、細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答(例如由免疫系統(tǒng)的T細(xì)胞(例如抗原特異性T細(xì)胞)和非特異性細(xì)胞介導(dǎo)的應(yīng)答)和體液免疫應(yīng)答 (例如由B細(xì)胞介導(dǎo)的應(yīng)答(例如經(jīng)由抗體生成和分泌到血漿、淋巴和/或組織液內(nèi))。術(shù)語 “免疫應(yīng)答”意欲包括受試者的免疫系統(tǒng)響應(yīng)抗原和/或免疫原(例如對于免疫原(例如病原體)的起始應(yīng)答以及作為適應(yīng)性免疫應(yīng)答的結(jié)果的獲得性(例如記憶)應(yīng)答)的能力的所有方面。如本文使用的，術(shù)語“免疫”指在暴露于能夠引起疾病的微生物(例如病原體)時， 免于疾病的保護(hù)(例如預(yù)防或減弱(例如抑制)疾病的病征、癥狀或狀況)。免疫可以是先天性的(例如在不存在先前暴露于抗原的情況下存在的非適應(yīng)性(例如非獲得性)免疫應(yīng)答)， 和/或獲得性的(例如在先前暴露于抗原后由B和T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答(例如其顯示出對于抗原增加的特異性和反應(yīng)性))。如本文使用的，術(shù)語“免疫原，，指在受試者中能夠弓I發(fā)免疫應(yīng)答的試劑(例如微生物(例如細(xì)菌、病毒或真菌)和/或其部分或組分(例如蛋白質(zhì)抗原))。在優(yōu)選實施方案中， 當(dāng)與本發(fā)明的納米乳劑組合施用時，免疫原引發(fā)針對免疫原(例如微生物(例如病原體或病原體產(chǎn)物))的免疫。如本文使用的，術(shù)語“病原體產(chǎn)物”指衍生自病原體的任何組分或產(chǎn)物，包括但不限于多肽、肽、蛋白質(zhì)、核酸、膜級分和多糖。如本文使用的，術(shù)語“增強(qiáng)的免疫”指相對于尚未施用組合物(例如用于誘導(dǎo)本發(fā)明的免疫應(yīng)答的組合物)的受試者中的適應(yīng)性和/或獲得性免疫水平，在組合物(例如用于誘導(dǎo)本發(fā)明的免疫應(yīng)答的組合物)施用后，在受試者中針對給定免疫原(例如微生物(例如病原體))的適應(yīng)性和/或獲得性免疫水平中的增加。如本文使用的，術(shù)語“純化的”或“待純化”指從樣品或組合物中去除污染物或不需要的化合物。如本文使用的，術(shù)語“基本上純化的”指從樣品或組合物中去除約70 - 90 %、最高到100%污染物或不需要的化合物。如本文使用的，術(shù)語“施用，，指對受試者給予本發(fā)明的組合物(例如用于誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的組合物(例如包含納米乳劑和免疫原的組合物))的動作。對于人體的示例性施用途徑包括但不限于通過眼(眼的)、口(經(jīng)口)、皮膚(經(jīng)皮)、鼻(鼻的)、肺(吸入的)、口腔粘膜(口腔含化)、耳、直腸、通過注射(例如靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)等)、局部等。如本文使用的，術(shù)語“共施用”指至少2種試劑(例如包含納米乳劑和免疫原的組合物和一種或多種其他試劑-例如佐劑)或治療對于受試者的施用。在一些實施方案中， 2種或更多試劑或治療的共施用是并發(fā)的。在其他實施方案中，第一種試劑/治療在第二種試劑/治療之前施用。在一些實施方案中，共施用可以經(jīng)由相同或不同施用途徑。本領(lǐng)域技術(shù)人員理解使用的各種試劑或治療的制劑和/或施用途徑可以改變。對于共施用的合適劑量可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地決定。在一些實施方案中，當(dāng)試劑或治療共施用時，各自的試劑或治療以低于對于其單獨施用合適的劑量施用。因此，共施用在其中試劑或治療的共施用降低一種或多種潛在有害的(例如毒性)試劑的必需劑量的實施方案中，和/或當(dāng) 2種或更多試劑的共施用導(dǎo)致經(jīng)由其他試劑的共施用受試者對試劑之一的有利作用的致敏時是尤其希望的。在其他實施方案中，共施用是優(yōu)選的，以同時或接近同時(例如，當(dāng)受試者不太可能可用于第二種、第三種或更多組合物的后續(xù)施用用于誘導(dǎo)免疫應(yīng)答時)引發(fā)受試者中針對2種或更多不同免疫原(例如微生物(例如病原體))的免疫應(yīng)答。如本文使用的，術(shù)語“局部地”指本發(fā)明的組合物(例如包含納米乳劑和免疫原的組合物)應(yīng)用于皮膚和/或粘膜細(xì)胞和組織(例如肺泡、口腔、舌、咀嚼、陰道或鼻粘膜，以及給中空器官或體腔做襯里的其他組織和細(xì)胞)的表面。在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物以局部乳劑、可注射組合物、可攝食溶液等的形式施用。當(dāng)途徑是局部的時，形式可以是例如噴霧劑(例如鼻噴霧劑)、乳膏或其他粘性溶液(例如包含在聚乙二醇中的納米乳劑和免疫原的組合物)。如本文使用的，術(shù)語“藥學(xué)可接受的”或“藥理學(xué)可接受的”指當(dāng)施用于受試者時， 基本上不產(chǎn)生不利反應(yīng)(例如毒性、變應(yīng)性或免疫反應(yīng))的組合物。如本文使用的，術(shù)語“藥學(xué)可接受的載體”指任何標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)載體，包括但不限于磷酸緩沖鹽水溶液、水和各種類型的潤濕劑(例如月桂基硫酸鈉)、任何和所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣、月桂基硫酸鈉、等滲和吸收延遲劑、崩解劑(例如馬鈴薯淀粉或羥基乙酸淀粉鈉)、 聚乙二醇等。組合物還可以包括穩(wěn)定劑和防腐劑。載體、穩(wěn)定劑和佐劑的例子已得到描述且是本領(lǐng)域已知的(參見例如，引入本文作為參考的Martin，Remington’ s Pharmaceutical Sciences，第 15 片反，Mack Publ. Co. , Easton, Pa. (1975))。如本文使用的，術(shù)語“藥學(xué)可接受的鹽”指在靶受試者中生理學(xué)耐受的本發(fā)明的組合物的任何鹽(例如通過與酸或堿反應(yīng)獲得的)。本發(fā)明的組合物的“鹽”可以衍生自無機(jī)或有機(jī)酸和堿。酸的例子包括但不限于鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、延胡索酸、馬來酸、 磷酸、羥基乙酸、乳酸、水楊酸、琥珀酸、對甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、 甲酸、苯甲酸、丙二酸、磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸等。其他酸例如草酸雖然本身不是藥學(xué)可接受的，但可以用于制備在獲得本發(fā)明的組合物及其藥學(xué)可接受的酸加成鹽中作為中間體有用的鹽。堿的例子包括但不限于堿金屬(例如鈉)氫氧化物、堿土金屬(例如鎂)氫氧化物、 氨和式NW4+的化合物，其中W是CV4烷基等。鹽的例子包括但不限于乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、 十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、延胡索酸鹽、葡庚糖酸鹽(flucoh印tanoate)、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽(palmoate)、果膠酸鹽、過硫酸鹽、苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一酸鹽等。鹽的其他例子包括與合適陽離子例如Na+、NH4+和NW4+ (其中W是Ch烷基)等化合的本發(fā)明的化合物的陰離子。對于治療用途，預(yù)期本發(fā)明的化合物的鹽為藥學(xué)可接受的。然而， 并非藥學(xué)可接受的酸和堿的鹽也可以例如在藥學(xué)可接受的化合物的制備或純化中有用。對于治療用途，預(yù)期本發(fā)明的組合物的鹽為藥學(xué)可接受的。然而，并非藥學(xué)可接受的酸和堿的鹽也可以例如在藥學(xué)可接受的組合物的制備或純化中有用。
如本文使用的，術(shù)語“處于疾病的危險中，，指傾向于經(jīng)歷特定疾病的受試者。這種素因可以是遺傳的(例如經(jīng)歷疾病例如遺傳病的特定遺傳傾向)，或由于其他因素(例如年齡、環(huán)境條件、暴露于環(huán)境中存在的有害化合物等)。因此，不預(yù)期本發(fā)明限制于任何具體危險(例如受試者可以僅僅通過暴露于其他人和與其他人相互作用而“處于疾病的危險中”)， 也不預(yù)期本發(fā)明限制于任何具體疾病。如本文使用的，“鼻應(yīng)用，，意指通過鼻應(yīng)用到鼻或竇通道或兩者內(nèi)。應(yīng)用可以例如通過應(yīng)用于鼻和竇通道的滴劑、噴霧劑、霧、包衣或其混合物來完成。如本文使用的，術(shù)語“試劑盒”指用于遞送材料的任何遞送系統(tǒng)。在免疫原性試劑 (例如包含納米乳劑和免疫原的組合物)的背景中，此種遞送系統(tǒng)包括允許免疫原性試劑和 /或支持材料(例如關(guān)于使用材料的書面說明書等)從一個位置到另一個的貯存、轉(zhuǎn)運或遞送的系統(tǒng)。例如，試劑盒包括含有相關(guān)免疫原性試劑(例如納米乳劑)和/或支持材料的一個或多個外殼(例如盒)。如本文使用的，術(shù)語“分割的(fragmented)試劑盒”指包含2個或更多分開容器的遞送系統(tǒng)，所述容器各自含有總試劑盒組分的亞部分。容器可以一起或分開地遞送給預(yù)期接受者。例如，第一個容器可以含有用于特定用途的包含納米乳劑和免疫原的組合物，而第二個容器含有第二種試劑(例如抗生素或噴霧劑施用器)。實際上，包含各自含有總試劑盒組分的亞部分的2個或更多分開容器的任何遞送系統(tǒng)包括在術(shù)語“分割的試劑盒”內(nèi)。相比之下，“組合試劑盒”指含有在單一容器中(例如在容納所需組分中的每一種的單個盒中)對于特定用途所需的免疫原性試劑的所有組分的遞送系統(tǒng)。術(shù)語“試劑盒” 包括分割的和組合試劑盒。發(fā)明詳述
呼吸道合胞病毒(RSV)感染2歲前的幾乎所有嬰兒并且是全世界兒童中的細(xì)支氣管炎的主因。由CDC估計在美國每年最高達(dá)125，000例兒科住院治療是由于RSV，每年費用超過$300，000，000 (I)0盡管RSV特異性適應(yīng)性免疫應(yīng)答的生成，但RSV不賦予保護(hù)性免疫并且一生自始至終的復(fù)發(fā)性感染是常見的(2，3)。雖然RSV在其氣道小且容易堵塞的非常幼小的嬰兒中是尤其有害的，但RSV也廣泛變得公認(rèn)為是移植接受者、具有慢性阻塞性肺病(COPD)的患者、老年人、以及具有慢性肺病尤其是哮喘的其他患者中的重要病原體。近期數(shù)據(jù)暗示來自1990-2000的關(guān)于所有年齡組合的死亡率已是約30/100，000，其中在美國每年平均死亡率超過17，000 (4，5)。這些數(shù)目可能是嚴(yán)重低估的，因為它仍未在成年人中以一致方式徹底檢查。因此，RSV不僅在年輕和年老的人中引起嚴(yán)重惡化的肺病，還與顯著量的死亡率直接相關(guān)。盡管抗RSV抗體是可獲得的且看起來減輕嚴(yán)重疾病，但它們僅在預(yù)防地(propholactically)給予時執(zhí)行，并且存在很少其他選項用于對抗易感患者群體中的 RSV 感染(6-10)。在二十世紀(jì)六十年代晚期，用明礬沉淀的福爾馬林滅活的RSV疫苗制劑給兒童接種疫苗的嘗試失敗，且在用活RSV再感染時引起嚴(yán)重惡化的疾病。臨床表現(xiàn)看起來是增強(qiáng)的Th2疾病、粘液產(chǎn)生和嗜曙紅細(xì)胞增多的結(jié)果，這在未接種疫苗的兒童中未觀察到。這些相同癥狀可以在嚴(yán)重感染的嬰兒亞群中出現(xiàn)。幾項流行病學(xué)研究將嚴(yán)重RSV應(yīng)答與甚至在感染已消除后數(shù)年的反應(yīng)過度氣道疾病的以后發(fā)展聯(lián)系起來(3)。Sigurs等人發(fā)現(xiàn)與健康對照相比較，由于RSV細(xì)支氣管炎住院治療的嬰兒在1、3和7歲時處于發(fā)展哮喘和喘鳴發(fā)作的更高危險中(11-13)。RSV也已與哮喘惡化相關(guān)且可以引起病的延長發(fā)作(14)。一項有趣研究暗示因果聯(lián)系，這是因為用 RSV免疫球蛋白治療具有嚴(yán)重RSV疾病的嬰兒顯著減少其發(fā)展兒童期哮喘和肺功能障礙的以后危險(15)?？梢允箖和统扇藘A向于慢性疾病的RSV疾病的一個臨床相關(guān)特征是由于改變的免疫應(yīng)答，不能獲得保護(hù)性免疫。更近期的研究已暗示具有受損的肺功能的患者群體(尤其是患者)也處于由于RSV感染的嚴(yán)重并發(fā)癥的危險中，所述嚴(yán)重并發(fā)癥幾乎與和流感感染相關(guān)的那些一樣流行(16-20)。這些并發(fā)癥可以通過即使在急性疾病已消除后RSV 也具有在肺中持續(xù)長時間段的能力的可能性混合。這已假定與較不有效地清除病毒的改變的免疫環(huán)境的發(fā)展相關(guān)。因此，可以用于兒童和成人中的有效疫苗具有用于跨越群體廣泛應(yīng)用的潛力，且可以提供免于慢性肺病的起始和惡化的顯著保護(hù)。因此，在一些實施方案中，本發(fā)明提供了用于特異性免疫應(yīng)答刺激的方法和組合物。特別地，本發(fā)明提供了免疫原性納米乳劑組合物和使用其誘導(dǎo)針對副粘病毒科的致病性病毒(例如副粘病毒亞科病毒(例如副粘病毒屬、腮腺炎病毒屬和/或麻疹病毒屬)和/或肺炎病毒亞科病毒(例如呼吸道合胞病毒)))的免疫應(yīng)答(例如免疫(例如保護(hù)性免疫))的方法。本發(fā)明的組合物和方法尤其在臨床(例如治療和預(yù)防醫(yī)學(xué)(例如接種疫苗))和研究應(yīng)用中有用。示例性免疫原性組合物(例如疫苗組合物)和施用組合物的方法在下文更詳細(xì)地描述。在一些實施方案中，本發(fā)明提供了用于誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的組合物，其包含納米乳劑和一種或多種免疫原(例如滅活的病原體或病原體產(chǎn)物(例如滅活的病毒(例如滅活的呼吸道合胞病毒)))。本發(fā)明并不限于任何具體納米乳劑。實際上，多種納米乳劑在本發(fā)明中有用，包括但不限于在本文中描述的那些和在其他地方描述的那些(例如美國專利申請 20020045667 和 20040043041,以及美國專利號 6，015，832,6, 506，803,6, 635，676 和 6，559，189中描述的納米乳劑，所述文件各自為了所有目的整體引入本文作為參考)。本發(fā)明的免疫原(例如病原體或病原體產(chǎn)物(例如滅活的病原體或病原體產(chǎn)物(例如滅活的病毒(例如滅活的呼吸道合胞病毒))))和納米乳劑可以以任何合適量組合，且利用多種遞送法遞送給受試者?？梢岳萌魏魏线m的藥物制劑，包括但不限于本文公開的那些。合適的制劑可以使用任何合適的方法就免疫原性進(jìn)行測試。例如，在一些實施方案中， 免疫原性通過定量抗體滴度和特異性T細(xì)胞應(yīng)答進(jìn)行研究。本發(fā)明的納米乳劑組合物還可以在傳染病狀態(tài)的動物模型中進(jìn)行測試。用于免疫原性的合適動物模型、病原體和測定包括但不限于下文描述的那些。在一些實施方案中，本發(fā)明提供了在本發(fā)明的開發(fā)過程中鑒定且表征的包含納米乳劑(NE)滅活的副粘病毒科的病毒(例如RSV)的組合物的粘膜施用(例如粘膜接種疫苗) 后，在受試者中免疫(例如針對副粘病毒科的病毒(例如副粘病毒亞科病毒(例如副粘病毒屬、腮腺炎病毒屬和/或麻疹病毒屬)和/或肺炎病毒亞科病毒(例如呼吸道合胞病毒)))的免疫)的發(fā)展。如實施例1-2中所述，將NE與RSV混合，從而導(dǎo)致這樣的制劑(例如NE殺死的RSV組合物)，其在室溫穩(wěn)定(例如在一些實施方案中，達(dá)超過2周、更優(yōu)選超過3周、甚至更優(yōu)選超過4周、且最優(yōu)選超過5周)，且可以用于在受試者中誘導(dǎo)針對RSV的免疫應(yīng)答(例如可以單獨或作為佐劑使用用于誘導(dǎo)抗RSV免疫應(yīng)答)。包含NE和RSV (例如NE殺死的RSV)的組合物對受試者的粘膜施用導(dǎo)致高滴度抗體應(yīng)答和特異性Thl細(xì)胞免疫(參見例如，實施例1-4)。進(jìn)一步地，使動物被保護(hù)免于用RSV的后續(xù)攻擊(參見例如，實施例4)。此外，與明礬沉淀的福爾馬林滅活的RSV疫苗制劑 (例如上文描述的)形成鮮明對比，本發(fā)明的NE滅活的RSV導(dǎo)致強(qiáng)Thl免疫(例如如通過增強(qiáng)的IFN- γ和IL-17表達(dá)證明的(參見例如，實施例4)應(yīng)答，且不增強(qiáng)和/或升高與Th2 型應(yīng)答相關(guān)的Th2細(xì)胞因子(例如IL-4、IL-5或IL-13)的表達(dá)。在施用后4周，施用即使單劑的包含NE殺死的RSV的組合物的小鼠也發(fā)展抗RSV IgG的血清濃度，其在施用后8周時繼續(xù)增加并且在加強(qiáng)施用后顯著升高(參見例如，實施例2-4)。因此，在一些實施方案中， 本發(fā)明提供了包含NE殺死的RSV的組合物的單次施用(例如粘膜施用)足以在受試者中誘導(dǎo)保護(hù)性免疫應(yīng)答(例如保護(hù)性免疫(例如粘膜和全身免疫))。在一些實施方案中，對受試者的后續(xù)施用(例如初次施用后的一次或多次加強(qiáng)施用)提供針對受試者中的RSV的增強(qiáng)的免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)。因此，本發(fā)明證實包含NE殺死的RSV的組合物對受試者的施用提供針對 RSV感染的保護(hù)性免疫。細(xì)胞和體液免疫都可能在針對RSV的保護(hù)中起作用，并且兩者由NE制劑誘導(dǎo)(參見例如，實施例1-4)。RSV特異性抗體滴度被視為對于人受試者和接種疫苗的動物模型中的保護(hù)性免疫估計是重要的。在本發(fā)明的實施方案的開發(fā)過程中生成的數(shù)據(jù)證明NE有效殺死RSV且生成適合于用于在受試者中誘導(dǎo)針對RSV的免疫應(yīng)答的非傳染性免疫接種組合物(例如用于用作疫苗)。在施用于受試者后，免疫原性組合物誘導(dǎo)特異性抗RSV血清抗體滴度，且起始重要的抗病毒細(xì)胞免疫應(yīng)答(例如誘導(dǎo)增加的抗病毒細(xì)胞因子生產(chǎn)和RSV特異性CD8+細(xì)胞毒性T 細(xì)胞的發(fā)展)。本發(fā)明的免疫原性組合物還提供了在活RSV攻擊時改善的病毒清除。因此， 在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物和方法提供了生成合適的先天性免疫應(yīng)答的能力(例如起因于暴露于以可識別形式維持于NE中的抗原，其模擬通過主動感染提供的抗原)，從而提供更合適的疫苗策略(例如與福爾馬林殺死的RSV相比較)。因此，在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物(例如NE殺死的RSV)對受試者的施用 (例如粘膜施用)提供了體液(例如特異性抗體的發(fā)展)和細(xì)胞(例如細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞)免疫應(yīng)答(例如針對RSV)的誘導(dǎo)。在一些優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的組合物(例如NE殺死的 RSV)用作疫苗?？贵w的生成
包含納米乳劑(NE)滅活的副粘病毒科的病毒(例如副粘病毒亞科病毒(例如副粘病毒屬、腮腺炎病毒屬和/或麻疹病毒屬)和/或肺炎病毒亞科病毒(例如呼吸道合胞病毒)))的免疫原性組合物可以用于免疫接種動物，例如小鼠、大鼠、兔、豚鼠、猴或人，以產(chǎn)生多克隆抗體。若需要，則肺炎病毒亞科病毒(例如呼吸道合胞病毒)抗原可以與載體蛋白質(zhì)綴合，所述載體蛋白質(zhì)例如牛血清清蛋白、甲狀腺球蛋白、匙孔皇戚血藍(lán)蛋白或本文描述的其他載體。 取決于宿主物種，各種佐劑可以用于增加免疫應(yīng)答。此種佐劑包括但不限于弗氏佐劑、礦物凝膠(例如氫氧化鋁)和表面活性物質(zhì)(例如溶血卵磷脂、多聚醇、聚陰離子、肽、本文描述的納米乳劑、匙孔 血藍(lán)蛋白和二硝基苯酚)。在人中使用的佐劑中，BCG (卡介苗)和短小棒 ^fM (Corynebacterium parvum)是；fc其有用白勺。與肺炎病毒亞科病毒(例如呼吸道合胞病毒)抗原特異性結(jié)合的單克隆抗體可以使用任何技術(shù)進(jìn)行制備，所述技術(shù)提供通過在培養(yǎng)中的連續(xù)細(xì)胞系的抗體分子產(chǎn)生。這些技術(shù)包括但不限于雜交瘤技術(shù)、人B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)、和EBV雜交瘤技術(shù)(參見例如，Kohler等人，Nature 256,495 497，1985 ;Kozbor等人，J. Immunol. Methods 81,3142,1985 ；Cote 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. 80，2026 2030，1983 ;Cole 等人，Mol. Cell. Biol. 62， 109 120,1984)。此外，可以使用為了產(chǎn)生“嵌合抗體”開發(fā)的技術(shù)，小鼠抗體基因與人抗體基因的剪接，以獲得具有合適抗原特異性和生物學(xué)活性的分子(參見例如，Morrison等人，Proc. Natl. Acad. Sci. 81，68516855，1984 ;Neuberger 等人，Nature 312,604 608,1984 ； Takeda等人，Nature 314,452 454，1985)。單克隆及其他抗體也可以是“人源化的”，以阻止當(dāng)它在治療上使用時，患者產(chǎn)生針對抗體的免疫應(yīng)答。此種抗體可以與待直接用于治療中的人抗體在序列中足夠類似，或可能需要少數(shù)關(guān)鍵殘基的改變。通過經(jīng)由個別殘基的位點定向誘變或通過嫁接整個互補(bǔ)性決定區(qū)替換與人序列中的那些不同的殘基，在嚙齒類動物抗體和人序列之間的序列差異可以降到最低?？商娲?，人源化抗體可以使用重組法產(chǎn)生，如下文描述的。與特定抗原特異性結(jié)合的抗體可以含有部分或全部人源化的抗原結(jié)合部位，如美國專利號5，565，332中公開的。可替代地，對于單鏈抗體產(chǎn)生描述的技術(shù)可以使用本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行修改， 以產(chǎn)生與特定抗原特異性結(jié)合的單鏈抗體。具有相關(guān)特異性但具有不同獨特型組成的抗體可以通過鏈改組由隨機(jī)組合免疫球蛋白文庫生成(參見例如，Burton，Natl. Acad. Sci. 88,11120 23,1991)。單鏈抗體還可以使用DNA擴(kuò)增法例如PCR進(jìn)行構(gòu)建，其中使用雜交瘤cDNA作為模板(參見例如,Thirion等人，1996，Eur. J. Cancer Prev. 5，507_11)。單鏈抗體可以是單或雙特異性的，并且可以是二價或四價的。四價、雙特異性單鏈抗體的構(gòu)建例如在Coloma & Morrison, 1997,Nat. Biotechnol. 15，159-63中教導(dǎo)。二價、雙特異性單鏈抗體的構(gòu)建例如在 Mallender & Voss，1994，J. Biol. Chem. 269，199-206 中教導(dǎo)。編碼單鏈抗體的核苷酸序列可以使用手動或自動化核苷酸合成進(jìn)行構(gòu)建，使用標(biāo)準(zhǔn)重組DNA法克隆到表達(dá)構(gòu)建體內(nèi)，并且引入細(xì)胞內(nèi)以表達(dá)編碼序列，如下文描述的。可替代地，單鏈抗體可以使用例如絲狀噬菌體技術(shù)直接產(chǎn)生(參見例如，Verhaar等人，1995， Int. J. Cancer 61,497-501 ;Nicholls 等人，1993，J. Immunol. Meth. 165，81_91)。如文獻(xiàn)中公開的，通過在淋巴細(xì)胞群體中誘導(dǎo)體內(nèi)產(chǎn)生或通過篩選高度特異性結(jié)合試劑的免疫球蛋白文庫或?qū)嶒瀸ο蠼M，也可以產(chǎn)生與特定抗原特異性結(jié)合的抗體(參見例如，Orlandi 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. 86,3833 3837，1989 ;Winter 等人，Nature 349,293 299，1991)。嵌合抗體可以如WO 93/03151中公開的進(jìn)行構(gòu)建。還可以制備衍生自免疫球蛋白且是多價和多特異性的結(jié)合蛋白，例如WO 94/13804中描述的“雙抗體”?？贵w可以通過本領(lǐng)域眾所周知的方法進(jìn)行純化。例如，抗體可以通過經(jīng)過相關(guān)抗原與之結(jié)合的柱進(jìn)行親和純化。結(jié)合的抗體隨后可以使用具有高鹽濃度的緩沖劑從柱中洗脫。納米乳劑
本發(fā)明的納米乳劑疫苗組合物并不限于任何具體納米乳劑。任何數(shù)目的合適納米乳劑組合物都可以用于本發(fā)明的疫苗組合物中，包括但不限于Hamouda等人，J. Infect Dis.， 180:1939 (1999);Hamouda 和 Baker，J. Appl. Microbiol. ,89:397 (2000);和 Donovan 等人，Antivir. Chem. Chemother.，11:41 (2000)中公開的那些，以及表1和2以及圖4和 9中顯示的那些。本發(fā)明的優(yōu)選納米乳劑是在殺死或滅活病原體中有效且對于動物無毒的那些。因此，優(yōu)選乳劑制劑利用無毒溶劑，例如乙醇，且在更低濃度的乳劑時達(dá)到更有效的殺死。在優(yōu)選實施方案中，在本發(fā)明的方法中利用的納米乳劑是穩(wěn)定的，并且即使在長貯存時間段(例如一年或多年)后也不分解。另外，優(yōu)選乳劑即使暴露于高溫和冷凍后也維持穩(wěn)定性。如果它們待在極端條件中(例如在戰(zhàn)場上)應(yīng)用，那么這是尤其有用的。在一些實施方案中，利用表1中描述的納米乳劑之一。在一些優(yōu)選實施方案中，乳劑包含(i )水相；(ii )油相；和至少一種另外化合物。 在本發(fā)明的一些實施方案中，這些另外化合物混合到組合物的水或油相內(nèi)。在其他實施方案中，這些另外化合物混合到先前乳化的油和水相的組合物內(nèi)。在這些實施方案的某些中， 一種或多種另外化合物緊接在其使用前混合到現(xiàn)有乳劑組合物內(nèi)。在其他實施方案中，一種或多種另外化合物在組合物立即使用前混合到現(xiàn)有乳劑組合物內(nèi)。適合于在本發(fā)明的組合物中使用的另外化合物包括但不限于一種或多種有機(jī)物和更具體而言基于有機(jī)磷酸酯的溶劑、表面活性劑和去污劑、含季銨化合物、陽離子含鹵素化合物、萌發(fā)增強(qiáng)劑、相互作用增強(qiáng)劑和藥學(xué)可接受的化合物。預(yù)期用于本發(fā)明的組合物中的各種化合物的一些示例性實施方案在下文呈現(xiàn)。
權(quán)利要求
1.一種免疫原性組合物，其包含納米乳劑滅活的呼吸道合胞病毒(RSV)。
2.權(quán)利要求1的免疫原性組合物，其中所述納米乳劑是W8(i5EC。
3.權(quán)利要求1的免疫原性組合物，其中所述組合物包含1-50%納米乳劑溶液。
4.權(quán)利要求1的免疫原性組合物，其中所述組合物包含5-15%納米乳劑溶液。
5.權(quán)利要求1的免疫原性組合物，其中所述組合物包含15%納米乳劑溶液。
6.權(quán)利要求1的免疫原性組合物，其中所述組合物包含104PFU滅活的呼吸道合胞病毒。
7.權(quán)利要求1的免疫原性組合物，其中所述組合物是耐熱的。
8.權(quán)利要求1的免疫原性組合物，其進(jìn)一步包含藥學(xué)可接受的載體。
9.權(quán)利要求1的免疫原性組合物,其進(jìn)一步包含佐劑。
10.權(quán)利要求9的免疫原性組合物，其中所述佐劑偏向Thl型免疫應(yīng)答。
11.一種在受試者中誘導(dǎo)針對呼吸道合胞病毒(RSV)的免疫應(yīng)答的方法，其包括a)提供包含納米乳劑和免疫原的免疫原性組合物，其中所述免疫原包含通過所述納米 乳劑滅活的RSV ;和b)在這樣的條件下給所述受試者施用所述組合物，從而使得所述受試者生成針對所述 RSV的免疫應(yīng)答。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述施用包含使所述受試者的粘膜表面與所述組合物接觸。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所述粘膜表面包含鼻粘膜。
14.權(quán)利要求11的方法，其中所述誘導(dǎo)免疫應(yīng)答在所述受試者中誘導(dǎo)針對所述RSV的 免疫。
15.權(quán)利要求14的方法，其中所述免疫包含全身免疫。
16.權(quán)利要求14的方法，其中所述免疫包含粘膜免疫。
17.權(quán)利要求11的方法，其中所述免疫應(yīng)答包含在所述受試者中增加的IFN-y表達(dá)。
18.權(quán)利要求11的方法，其中所述免疫應(yīng)答包含在所述受試者中增加的IL-17表達(dá)。
19.權(quán)利要求11的方法，其中所述免疫應(yīng)答包含增加的IL-4、IL-5和IL-13表達(dá)的不存在。
20.權(quán)利要求11的方法，其中所述免疫應(yīng)答包含針對所述滅活的RSV的全身IgG應(yīng)答。
21.權(quán)利要求11的方法，其中通過所述納米乳劑滅活的所述RSV在這樣的條件下施用 于所述受試者，從而使得10 - 103 pfu的所述滅活的病毒存在于施用于所述受試者的劑量 中。
22.權(quán)利要求11的方法，其中15%納米乳劑溶液用于滅活所述RSV。
23.權(quán)利要求11的方法，其中所述納米乳劑包含W8(i5EC。
24.權(quán)利要求11的方法，其中所述免疫保護(hù)所述受試者免于展示出通過RSV引起的疾 病的病征或癥狀。
25.權(quán)利要求11的方法，其中所述免疫保護(hù)所述受試者免于由后續(xù)暴露于活RSV的攻擊。
26.權(quán)利要求11的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包含佐劑。
27.權(quán)利要求11的方法，其中所述受試者是人。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于免疫應(yīng)答刺激的方法和組合物。具體而言，本發(fā)明提供了免疫原性納米乳劑組合物和使用其誘導(dǎo)針對副粘病毒科的致病性病毒(例如副粘病毒亞科病毒(例如副粘病毒屬、腮腺炎病毒屬和/或麻疹病毒屬)和/或肺炎病毒亞科病毒(例如呼吸道合胞病毒)))的免疫應(yīng)答(例如免疫(例如保護(hù)性免疫))的方法。本發(fā)明的組合物和方法尤其在臨床(例如治療和預(yù)防醫(yī)學(xué)(例如接種疫苗))和研究應(yīng)用中有用。
文檔編號A61K39/155GK102596243SQ201080036364
公開日2012年7月18日 申請日期2010年6月16日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月16日
發(fā)明者D.M.林德爾, J.R.小巴克, N.W.盧卡茨 申請人:密執(zhí)安大學(xué)評議會