專利名稱：對抗藍(lán)舌病毒的異源性引發(fā)-加強(qiáng)免疫療法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及異源性引發(fā)-加強(qiáng)(prime-boost)免疫療法。具體而言，本發(fā)明涉及對藍(lán)舌病毒(BTV)產(chǎn)生抗原特異性免疫應(yīng)答的異源性引發(fā)-加強(qiáng)免疫。
背景技術(shù)：
藍(lán)舌病是一種節(jié)肢動物傳播的病毒性疾病，發(fā)病于牛、綿羊、山羊和野生反芻動物中。受感染動物中的藍(lán)舌病損傷類似于傳染性牛病毒性腹瀉、水泡性口膜炎病毒、惡性卡他熱、真菌性口炎、牛疫、光敏作用和口蹄疫。藍(lán)舌病毒(BTV)被認(rèn)為是引起牛積水性無腦以及引起牛羊不育、流產(chǎn)以及出生缺陷的罪魁禍?zhǔn)?。文獻(xiàn)中報(bào)道了引起從隱性感染到急性爆發(fā)性感染的問題的二十四個血清型。也發(fā)現(xiàn)了牛的慢性、持續(xù)性病毒脫落。由于BTV會產(chǎn)生顯著的身體狀況下降，使得宰殺動物的銷售被推遲。在被BTV感染的羊中，羊毛破壞的發(fā)展使得羊毛的生長受損，這使得羊毛有缺陷或羊毛產(chǎn)率低。BTV感染帶來的明顯的虛弱會導(dǎo)致對繼發(fā)的細(xì)菌或衣原體感染及其它捕食性因素的抵抗力下降。受感染動物的生殖功能也會受到不良的影響。在南非和以色列，仍在常規(guī)地進(jìn)行早期的疫苗診療方案，該方案使用含一定數(shù)量的藍(lán)舌病毒株的蛋胚胎減毒的(egg-atterumted)多價(jià)活病毒疫苗。在美國使用的Cutter Laboratories生產(chǎn)的蛋胚胎馴化(egg-adapted)的疫苗，由于在被接種的羊中出現(xiàn)嚴(yán)重的反應(yīng)已經(jīng)退出了市場。其后，Kemeny和Drehle，22AJVR 921 (1961)，從蛋胚胎向牛腎細(xì)胞培養(yǎng)物馴化了國際10型BTV病毒。Colorado Serum Company生產(chǎn)的該改良的活病毒疫苗，在美國用于羊的治療。本發(fā)明滿足了本領(lǐng)域中對于能夠?qū)σ环N或多種抗原產(chǎn)生穩(wěn)健的細(xì)胞應(yīng)答的給藥療法的需要。在此前以加強(qiáng)免疫原性組合物的效能進(jìn)行的努力之中，已報(bào)道了多種免疫原性組合物和使用蛋白組合物、基于質(zhì)粒的組合物和編碼抗原的重組病毒結(jié)構(gòu)作為免疫原性組合物的方法。此前的引發(fā)-加強(qiáng)療法已用于檢測異源性病毒載體和質(zhì)粒DNA載體的不同組合。 通常，激發(fā)的所得細(xì)胞免疫應(yīng)答高于同源性引發(fā)-加強(qiáng)策略誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答(Egan 等人，2000J. Virol. ,74 :7485-95 ；Rose 等人，2001 Cell, 106 :539-49)，盡管在攻擊模型 (challenge model)中對任何相關(guān)的保護(hù)增強(qiáng)作用并不總是清楚的(Amara等人，2002， J. Virol. ,76 :7625-31)。已經(jīng)運(yùn)用多種方法增強(qiáng)免疫原性組合物激發(fā)由HIV-I蛋白特異地產(chǎn)生免疫應(yīng)答的有效性，所述方法通過給藥表達(dá)一種或多種HIV-I蛋白的減毒重組病毒進(jìn)行。這些減毒重組病毒在引發(fā)-加強(qiáng)療法中給藥，其中一種編碼抗原的重組病毒先于第二種編碼相同抗原的重組病毒給藥。因此本領(lǐng)域需要對藍(lán)舌病毒疫苗增強(qiáng)免疫應(yīng)答的方法。發(fā)明概述在一個方面中，本發(fā)明提供了在受試者中產(chǎn)生抗原特異性免疫應(yīng)答的方法，該方法包括向所述受試者給藥至少一劑包含藍(lán)舌病毒的第一免疫原性組合物和包含藍(lán)舌病毒的第二免疫原性組合物，其中第一免疫原性組合物和第二免疫原性組合物是不同的，且其中第二免疫原性組合物在給藥第一免疫原性組合物之后給藥。在本發(fā)明的一些方面中，產(chǎn)生抗原特異性免疫應(yīng)答的藍(lán)舌病毒為血清型8。在本發(fā)明的一些方面中，產(chǎn)生抗原特異性免疫應(yīng)答的方法中的第一免疫原性組合物和第二免疫原性組合物選自BOVILIS BTV-8和 ZULVAC 8 B0VIS。在本發(fā)明的一些方面中，在產(chǎn)生抗原特異性免疫應(yīng)答的方法中，免疫應(yīng)答包含了對于抗原的抗體應(yīng)答增加，所述應(yīng)答高于單獨(dú)給藥第一或第二免疫原性組合物所達(dá)到的應(yīng)答。在本發(fā)明的一些方面中，在產(chǎn)生抗原特異性免疫應(yīng)答的方法中，至少一種所述免疫原性組合物通過選自以下的途徑給藥靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、口服、直腸內(nèi)、 鼻內(nèi)、含服和陰道內(nèi)。在本發(fā)明的具體方面中，在產(chǎn)生免疫應(yīng)答的方法中，第一免疫原性組合物使用肌內(nèi)或皮下途徑給藥。在本發(fā)明的具體方面中，在產(chǎn)生免疫應(yīng)答的方法中，第二免疫原性組合物使用肌內(nèi)或皮下途徑給藥。在本發(fā)明的一些方面中，在產(chǎn)生抗原特異性免疫應(yīng)答的方法中，第二免疫原性組合物在給藥第一免疫原性組合物后不超過約10周時給藥。 在本發(fā)明的一些方面中，產(chǎn)生抗原特異性免疫應(yīng)答的方法中，第二免疫原性組合物在給藥第一免疫原性組合物后約7周時給藥。在一個方面中，本發(fā)明提供一種治療受試者的病毒感染的方法，該方法包括向所述受試者給藥至少一劑包含藍(lán)舌病毒的第一免疫原性組合物；然后向所述受試者給藥至少一劑包含藍(lán)舌病毒的第二免疫原性組合物，其中第一免疫原性組合物和第二免疫原性組合物是不同的，且其中第二免疫原性組合物在給藥第一免疫原性組合物之后給藥。在本發(fā)明的一些方面中，在治療受試者的病毒感染的方法中，該藍(lán)舌病毒為血清型8。在本發(fā)明的一些方面中，在治療受試者病毒感染的方法中，所述免疫原性組合物選自BOVILIS BTV-8和 ZULVAC 8 BOVISo在一個方面中，本發(fā)明提供在受試者中產(chǎn)生抗原特異性免疫應(yīng)答的免疫原性組合物，其包括包含藍(lán)舌病毒的第一免疫原性組合物；和在第一免疫原性組合物之后給藥的第二免疫原性組合物，所述第二組合物包含藍(lán)舌病毒。在本發(fā)明的一些方面中，所述產(chǎn)生抗原特異性免疫應(yīng)答的免疫原性組合物選自ZULVAC 8 BOVIS和BOVILIS BTV-8。在本發(fā)明的一些方面中，第二免疫原性組合物在給藥第一免疫原性組合物后不超過約10周時給藥。在一個方面中，本發(fā)明提供在受試者中產(chǎn)生抗原特異性應(yīng)答的試劑盒，其包括包含藍(lán)舌病毒的第一免疫原性組合物，和在第一免疫原性組合物給藥后給藥的包含藍(lán)舌病毒的第二免疫原性組合物，其中第一免疫原性組合物與第二免疫原性組合物不同。在本發(fā)明的一些方面中，所述試劑盒中第一免疫原性組合物和第二免疫原性組合物選自ZULVAC 8 BOVIS和 BOVILIS BTV-8。發(fā)明詳述本發(fā)明提供通過使用免疫原性組合物的組合在受試者中誘導(dǎo)抗原特異性免疫應(yīng)答的方法。通常，所述方法包括向所述受試者給藥有效量的兩種不同的免疫原性組合物，其中兩者都包含藍(lán)舌病毒。已發(fā)現(xiàn)先后將引發(fā)劑量的一種藍(lán)舌病毒免疫原性組合物和加強(qiáng)劑量的不同種藍(lán)舌病毒免疫原性組合物給藥，可在受試者中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，包括使CD8+T細(xì)胞對抗原應(yīng)答增加，所述應(yīng)答高于單獨(dú)給藥第一或第二免疫原性組合物所達(dá)到的應(yīng)答。所述增強(qiáng)的免疫應(yīng)答表現(xiàn)為與對抗原的細(xì)胞應(yīng)答協(xié)同增加。所述免疫原性組合物與藍(lán)舌病毒的組合以及給藥順序，與單獨(dú)給藥或以不同順序給藥組合物相比，產(chǎn)生了增強(qiáng)的免疫應(yīng)答。本發(fā)明滿足了本領(lǐng)域?qū)τ趯σ环N或多種抗原產(chǎn)生穩(wěn)健的細(xì)胞應(yīng)答的給藥療法的需要。目前，尚無經(jīng)確證的方法在藍(lán)舌病毒(BTV)免疫原性組合物中誘導(dǎo)廣泛的中和抗體，因此增加免疫原性組合物誘導(dǎo)的對BTV蛋白的峰細(xì)胞免疫應(yīng)答的一個方法是，給藥所述異源性引發(fā)-加強(qiáng)組合物。使用了兩種用藍(lán)舌病毒(BTV)血清型8制備的市售可得的疫苗。其中一種疫苗是 Bovilis BTV8，另一種疫苗是^ilvac 8 Bovis (可購自Fort Dodge (南安普敦，英國))。用單一劑量的Bovilis BTV8疫苗免疫動物激發(fā)了可測定的BTV特異性IgG應(yīng)答，該應(yīng)答在接種^ilvac 8 Bovis后顯著加強(qiáng)。在這兩種待順序給藥的免疫原性組合物中，第一種是指引發(fā)組合物，第二種是指加強(qiáng)組合物。在一些實(shí)施方案中，所述引發(fā)組合物先于所述加強(qiáng)組合物向所述受試者給藥至少一次或多次。其后，在給藥至少一次所述引發(fā)組合物之后向所述受試者給藥至少一次或多次所述加強(qiáng)組合物。另外，本發(fā)明涵蓋了多次給藥所述引發(fā)組合物然后多次給藥所述加強(qiáng)組合物的情況。術(shù)語“加強(qiáng)對抗原的免疫應(yīng)答”是指在給藥所述引發(fā)免疫原性組合物后，向受試者給藥第二、加強(qiáng)免疫原性組合物。所述加強(qiáng)免疫原性組合物的給藥，可在給藥所述引發(fā)免疫原性組合物之后立即進(jìn)行或之后任何時間進(jìn)行?；蛘?，所述加強(qiáng)免疫原性組合物的給藥可在給藥所述引發(fā)免疫原性組合物之后約2至27周時進(jìn)行。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述加強(qiáng)免疫原性組合物的給藥可在給藥所述引發(fā)免疫原性組合物之后約7周時進(jìn)行。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及如下方法在異源性引發(fā)-加強(qiáng)組合中給藥包含市售藍(lán)舌病毒血清型8疫苗(Bovilis BTV8)的免疫原性組合物，然后給藥Zulvae 8 Bovis0與單獨(dú)給藥或以不同順序給藥組合物相比，本方法給藥的所述組合和順序產(chǎn)生了加強(qiáng)的免疫應(yīng)答。在一些實(shí)施方案中，所述免疫原性組合物能夠在人或家畜或?qū)櫸镏屑ぐl(fā)免疫應(yīng)答，這些動物例如豬、牛、綿羊、山羊、馬、鹿、駱馬(vicufla)、犬或貓。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述激發(fā)的免疫應(yīng)答是保護(hù)性免疫應(yīng)答。將免疫原性有效量的本發(fā)明的疫苗給藥于需要防止藍(lán)舌病毒(BTV)感染的動物。 接種于動物的免疫原性有效量或免疫原性量可容易地通過常規(guī)測試確定或滴定。有效量是獲得對疫苗充分的免疫應(yīng)答以保護(hù)暴露于病毒的動物的量。優(yōu)選地，所述動物受到以下程度的保護(hù)該病毒疾病的一種或全部所述不良生理癥狀或作用顯著地減少、改善或完全預(yù)防。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的療法包括預(yù)防和/或治療由BTV抗原的存在而確定的疾病的療法。接種于動物以對抗BTV的功能性效果，可通過合適的測定監(jiān)測細(xì)胞或體液免疫或 T細(xì)胞活性的誘導(dǎo)而評價(jià)。這些測定是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，但可包括使用例如鉻釋放測定法測定胞溶性T細(xì)胞活性?；蛘?，T細(xì)胞增殖測定可用作免疫反應(yīng)性或缺乏免疫反應(yīng)性的指征。此外，可進(jìn)行體內(nèi)研究以評價(jià)在接種疫苗以對抗病原體的動物中使用本發(fā)明的方法得到保護(hù)的水平。典型的體內(nèi)測定可包括用抗原接種動物，所述抗原例如本文所述的病毒。在等待足以誘導(dǎo)抗體或T細(xì)胞應(yīng)答的時間(通常為注射后約一至二周)之后，所述動物將受到抗原(例如病毒)攻擊(Challenged)，并監(jiān)測與病毒感染相關(guān)的一種或多種癥狀的改善或所述動物的存活。與未接種疫苗的對照相比，成功對抗BTV的疫苗療法將使得與病毒感染相關(guān)的一種或多種癥狀顯著減少，或病毒血癥降低，或與病毒感染相關(guān)的損傷在數(shù)量上或嚴(yán)重程度上有所降低，或存活。也可收集血清以監(jiān)測在應(yīng)答疫苗注射中產(chǎn)生的抗體水平，其由本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法所測定。在本申請的另一方面中，有效組合物的免疫原性成分還可包含一種或多種病毒免疫原。病毒免疫原可為完整的、減毒的病毒免疫原，其已被傳代或預(yù)處理，使之不具傳染性且基本無癥狀。組合物生產(chǎn)中所用的免疫原(包括本文中所述的免疫原性組合物)可以是活的、減毒的(例如CD、CAV-2、CPIjn CPV)或被殺死的(滅活的)病毒體(例如CCV)。 若被減毒，可推薦使用已有技術(shù)進(jìn)行病毒連續(xù)傳代以減少其毒力同時保持其免疫原性?？赏ㄟ^常規(guī)手段將整體或亞單位的流感病毒體滅活，所述常規(guī)手段例如通過使用一種或多種化學(xué)滅活劑(包括但不限于二乙烯亞胺、丙內(nèi)酯、福爾馬林、戊二醛和/或十二烷基硫酸鈉中的一種或多種)進(jìn)行化學(xué)滅活。病毒體還可通過加熱或補(bǔ)骨脂素在紫外光的存在下滅活。減毒這些病毒的有毒株的方法和制備滅活病毒制劑的方法為本領(lǐng)域已知，并公開于例如美國專利4，567，042和4，567，043中。從這些病原體得到的用于本發(fā)明疫苗組合物中的抗原，可以為改良的活病毒制劑或滅活病毒制劑的形式。在其它優(yōu)選實(shí)施方案中，所述免疫原性組合物能夠在牛(例如奶牛)中激發(fā)免疫應(yīng)答，且更優(yōu)選激發(fā)保護(hù)性免疫應(yīng)答。本申請公開的任一所述免疫原性組合物實(shí)施方案還可具有一種或多種藥學(xué)上或獸醫(yī)學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。在其它實(shí)施方案中，所述免疫原性組合物還可包含至少一種佐劑或至少一種防腐劑或其任意組合。優(yōu)選地，根據(jù)這些實(shí)施方案的免疫原性組合物為疫苗制劑。如本文所述，本申請?zhí)峁┻m合給藥于受試者(例如犬，豬，或牛)的免疫原性組合物以激發(fā)免疫應(yīng)答。本文所用的"藥學(xué)上可接受的或獸醫(yī)學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑"包括任一和所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗菌劑和抗真菌劑、等張劑和吸收延遲劑等。所述介質(zhì)和物質(zhì)在藥學(xué)活性物質(zhì)中的用途為本領(lǐng)域公知。補(bǔ)充性活性成分，例如抗微生物劑，也可合并入所述組合物中。所述載體可為溶劑或分散介質(zhì)，其包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)、其合適的混合物和植物油。例如通過使用包衣(例如卵磷脂)，在分散劑的情況下通過維持需要的粒徑，以及通過使用表面活性劑，可維持適當(dāng)?shù)牧鲃有?。微生物作用的預(yù)防可受到多種抗菌劑和抗真菌劑的影響，所述抗菌劑和抗真菌劑例如對羥基苯甲酸酯類、三氯叔丁醇(chlorobutanol)、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。在很多情況下，其優(yōu)選包括等張劑，例如糖或氯化鈉?？勺⑸浣M合物的延遲吸收，可通過在所述組合物中使用延遲吸收劑來實(shí)現(xiàn)，所述延遲吸收劑例如單硬脂酸鋁和明膠。可注射無菌溶液可通過以下制備需要時，在所需量的溶劑中將本申請的多價(jià)免疫原性組合物與多種其它本文列舉的成分混合，然后通過加熱滅菌、輻射或其它合適的滅菌手段處理。通常，通過將多種無菌活性成分與含堿性分散介質(zhì)和上面所列成分之中的其它所需成分的無菌載體混合，制備所述分散劑。在用于制備可注射無菌溶液的無菌粉末的情況下，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和凍干技術(shù)，這些方法從其預(yù)先無菌-過濾的溶液中得到活性成分以及任何其它所需成分的粉末。尤其有利的是，為了易于給藥以及保證劑量的一致性而制備劑量單元形式的腸胃外組合物。本文所用的劑量單元形式是指物理分離的單元，其適于作為劑量單元用于所治療的哺乳動物受試者；各單元含預(yù)先確定量的活性物質(zhì)(所述量經(jīng)計(jì)算以產(chǎn)生所需治療效果)以及所需的藥學(xué)上或獸醫(yī)學(xué)上可接受的載體。包含本文公開的免疫原的藥物組合物，可通過以下手段制備常規(guī)混合、溶解、制粒、糖衣包衣、研磨、乳化、裝膠囊、包封(entrapping)或凍干方法。藥物組合物可以以常規(guī)方式制劑，使用一種或多種促進(jìn)將活性抗微生物脂肽衍生物制成藥學(xué)上可用制劑的生理學(xué)可接受的載體、稀釋劑、賦形劑或輔料進(jìn)行。用于治療用途的藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑在藥物領(lǐng)域中是公知的， 且在本文以及例如以下文獻(xiàn)中公開Remington ‘ s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro,第 18 版，1990)禾口 CRC Handbook of Food, Drug, and Cosmetic Excipients, CRC Press LLC(S. C. Smolinski，1992 版)。在一些實(shí)施方案中，用藥學(xué)上或獸醫(yī)學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑制備的免疫原性組合物是親水的，例如水或甘露醇溶液(例如約至約20% )；或疏水的(例如油或脂質(zhì))；或其組合(例如油和水的乳劑)。在一些實(shí)施方案中，本文所述的任一藥物組合物具有防腐劑或穩(wěn)定劑(例如抗生素)或是無菌的。本申請的藥物組合物可進(jìn)行制劑，以在將組合物給藥于受試者時，其中所含的免疫原可生物利用。給藥后血清和其它組織中免疫原的水平可通過多種充分建立的技術(shù)監(jiān)測，例如基于色譜或抗體(例如ELISA)的測定。在其它實(shí)施方案中，將免疫原性組合物制成腸胃外給藥制劑以用于需要其的受試者(例如受革蘭陽性細(xì)菌感染者)，所述受試者例如動物或人。給藥的優(yōu)選途徑包括皮下和肌內(nèi)給藥。適當(dāng)?shù)闹苿┤Q于所選的給藥途徑，如本領(lǐng)域所知。例如全身制劑是包括如下的實(shí)施方案設(shè)計(jì)為注射給藥的制劑(例如皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、鞘內(nèi)或腹膜內(nèi)注射)以及設(shè)計(jì)為經(jīng)皮、透粘膜、口服、鼻內(nèi)或肺部給藥的制劑。在一個實(shí)施方案中，所述全身制劑為無菌的。在注射的實(shí)施方案中，本文公開的所述免疫原性組合物可制成水溶液，優(yōu)選地以生理學(xué)相容的溶液或緩沖液(例如漢克斯氏溶液、林格氏溶液、甘露醇溶液或生理鹽水緩沖液)。在一些實(shí)施方案中，本文所述的任一免疫原性組合物可包含配方劑，例如混懸齊U、穩(wěn)定劑或分散劑。或者，所述免疫原性組合物可為固體(例如粉末)形式，在使用前與合適的載體(例如無菌無熱原的水)組合。在透粘膜給藥的實(shí)施方案中，可在制劑中使用適于穿透屏障的穿透劑、增溶劑或潤滑劑。例如，本文公開的任一組合物中可以使用 1-十二烷基六氫-2H-氮雜輩-2-酮(Azone )、油酸、丙二醇、薄荷醇、二乙二醇單乙基醚 (diethyleneglycol ethoxyglycol monoethyl ether) (Transcutol )、聚氧乙烯山梨醇酐單月桂酸酉旨(polysorbate polyethylenesorbitan monolaurate)(吐溫 -20),以及藥物 7-氯-1-甲基-5-苯基-3H-1，4-苯二氮雜$ -2-酮(地西泮)、肉豆蔻酸異丙酯和其它通常為本領(lǐng)域已知的穿透劑、增溶劑或潤滑劑。使用各種途徑的組合來完成給藥，例如先使用腸胃外途徑給藥，然后使用粘膜途徑給藥。根據(jù)本申請公開，所述免疫原性組合物通常包括獸醫(yī)學(xué)上可接受的載體。如本文所述，獸醫(yī)學(xué)上可接受的載體包括以下的任一種或全部溶劑、分散介質(zhì)、包衣、佐劑、穩(wěn)定齊 、稀釋劑、防腐劑、抗菌劑和抗真菌劑、等張劑、吸收延遲劑等。稀釋劑可包括水、鹽水、右旋糖、乙醇、甘油等。等張劑可包括氯化鈉、右旋糖、甘露醇、山梨糖醇、和乳糖等等。穩(wěn)定劑包括白蛋白等等。在另一方面中，本申請公開提供一種藥用試劑盒，其包括本文所限定的免疫原性組合物。所述試劑盒還可包含治療動物疾病(例如BTV，如本文所述)的使用說明書。所述免疫原性組合物的活性成分可被共同包裝入劑量單元形式中。當(dāng)作為液體給藥時，疫苗可以以水溶液、糖漿劑、酏劑、酊劑等形式制備。所述制劑是本領(lǐng)域已知，通常通過將抗原和其它典型的添加劑溶解于合適的載體或溶劑系統(tǒng)中而制備所述制劑。合適的“生理學(xué)可接受的”載體或溶劑包括但不限于水、鹽水、乙醇、乙二醇、甘油等。典型的添加劑為例如合格的染料、香料、甜味劑和抗微生物防腐劑(例如硫柳汞(乙基汞硫代水楊酸鈉)。所述溶液可例如通過加入部分水解的明膠、山梨糖醇或細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)而穩(wěn)定化，且可使用本領(lǐng)域已知的試劑(例如磷酸氫鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫鉀、磷酸二氫鉀、其混合物等)通過常規(guī)方法緩沖。液體制劑還可包括混懸劑和乳劑，其含有助懸劑或乳化劑以及其它標(biāo)準(zhǔn)的共配方齊U。這些類型的液體制劑可通過常規(guī)方法制備?；鞈覄├缈墒褂媚z體磨制備。乳劑例如可使用勻漿機(jī)制備。設(shè)計(jì)為注射入體液系統(tǒng)的腸胃外制劑，需要適當(dāng)?shù)牡葟埿院挺薛Ь彌_，以與豬的體液相適應(yīng)。等張性可通過氯化鈉和其它需要的鹽調(diào)節(jié)?？墒褂煤线m的溶劑(例如乙醇或丙二醇)以增加所述成分在制劑中的溶解度以及液體制劑的穩(wěn)定性?？捎糜诒景l(fā)明的疫苗中的其它添加劑包括但不限于右旋糖、常規(guī)抗氧化劑和常規(guī)螯合劑(例如乙二胺四乙酸 (EDTA))。腸胃外劑型在使用前同樣必須先進(jìn)行滅菌。定義在此處和附帶的權(quán)利要求中，單數(shù)形式“一”、“一個”和“一種”包括復(fù)數(shù)形式，除非上下文中另有明確地指出。因此，例如，“一種方法”包括一種或多種方法，和/或本文公開的該類的步驟和/或本領(lǐng)域技術(shù)人員閱讀本申請公開之后能夠顯而易見的方法，等等。因此，本申請中可在本領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)使用常規(guī)的分子生物學(xué)、微生物學(xué)和重組 DNA技術(shù)。這些技術(shù)在文獻(xiàn)中充分地公開。參見例如Sambrook，F(xiàn)ritsch & Maniatis， Molecular Cloning :A Laboratory Manual, Second Edition(1989)Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New York(本文中作"Sambrook等人，1989")； DNA Cloning :A Practical Approach, Volumes I and II(D. N. Glover ed. 1985)； Oligonucleotide Synthesis(M. J. Gait ed. 1984) ；Nucleic Acid Hybridization(B. D·Hames & S. J. Higgins eds. (1985)) ；Transcription And Translation(B. D. Hames & S.J.Higgins， eds. (1984)) ；Animal Cell Culture (R. I. Freshney, ed. (1986))； Immobilized Cells And Enzymes(IRL Press, (1986)) ；B.Perbal, Practical Guide To Molecular Cloning (1984) ；F. M. Ausubel 等人，(eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley &Sons，Inc. (1994)。盡管與本文公開的相同或等同的任何方法和物質(zhì)都可以用來實(shí)踐或檢驗(yàn)本發(fā)明， 下面公開優(yōu)選的方法和物質(zhì)。所有提及的文獻(xiàn)均在本文中以其整體引入并作參考。
本文所用的術(shù)語具有本領(lǐng)域技術(shù)人員公認(rèn)或公知的含義，但為了方便和完整，下面列出具體的術(shù)語及其含義。術(shù)語“約”或“大約”指落在有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的范圍內(nèi)的值。所述范圍可在同一數(shù)量級之內(nèi)，在給定值的或范圍的通常50 %、更通常20 %、更通常10 %、且更通常5 %的范圍內(nèi)。 術(shù)語“約”或“大約”涵蓋的可允許的變化取決于具體的研究系統(tǒng)，并且可容易地被本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解?！白魟敝冈鰪?qiáng)組合物中抗原的免疫原性的一種或多種物質(zhì)組成的組合物，通常指疫苗組合物。佐劑可作為組織貯藏所，緩慢地釋放抗原；也可作為淋巴樣系統(tǒng)活化劑，非特異性地增強(qiáng)免疫應(yīng)答(Hood 等人，Immunology，Second Ed.，Menlo Park, CA =Benjamin/ Cummings, 1984. p. 384)。通常，僅含抗原而無佐劑的引發(fā)疫苗將不能激發(fā)體液或細(xì)胞免疫應(yīng)答。佐劑包括但不限于弗氏完全佐劑、弗氏不完全佐劑、無機(jī)凝膠(例如氫氧化鋁)、表面活性物質(zhì)(例如溶血卵磷脂、普朗尼克多元醇、多聚陰離子、肽、油或碳?xì)浠衔锶閯?、 鑰孔戚血蘭素(keyhole limpet hemocyanins)，和可能用于人的佐劑例如N-乙?；?胞壁?；?L-蘇氨?；?D-異谷氨酰胺(thr-MDP)、N-乙?；?去甲-胞壁?；?L-丙氨酰基-D-異谷氨酰胺、N-乙?；邗；?L-丙氨酰基-D-異谷氨酰胺基-L-丙氨酸-2-(1’ -2’ - 二棕櫚?；?sn-甘油-3-羥基磷?；趸?-乙基胺、BCG(卡介苗)和短小棒狀桿菌。優(yōu)選地，所述佐劑為生物學(xué)上可接受的。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，所述組合物與兩種佐劑組合給藥氫氧化鋁和皂苷。本文所述的組合物中所用的佐劑通常為“生物學(xué)上可接受的佐劑”，且因此其可與滅活的BTV組合使用，使得所得組合物可以以體內(nèi)方式給予動物而不伴有毒性。例如包括兩種滅活的BTV與一種或多種生物學(xué)上可接受的佐劑組合的組合物，所述佐劑選自氫氧化鋁、皂苷、SP-0il、SL-⑶或聚羧乙烯。在一些實(shí)施方案中，使用兩種佐劑以激發(fā)對BTV優(yōu)選的免疫應(yīng)答。在其它實(shí)施方案中，可考慮使用可代謝油(例如一種或多種不飽和萜烴)的混合物，例如角鯊烯或角鯊?fù)?，和聚氧乙?聚丙烯嵌段共聚物例如普朗尼克 。當(dāng)其能夠特異地與免疫系統(tǒng)的抗原識別分子(例如免疫球蛋白(抗體)或T細(xì)胞抗原受體)相互作用時，從其中得到的BTV滅活株或分子為“抗原性”的。通常，抗原性分子為多肽或其變型，其含有至少約5個且通常至少約10個氨基酸的“抗原表位”。多肽的抗原性部分，本文中也稱為“抗原表位”，可為對抗體或T細(xì)胞受體識別具免疫顯性的部分，或其可為用于通過將抗原性部分結(jié)合至用于免疫的載體多肽而對分子產(chǎn)生抗體的部分?？乖苑肿颖旧聿恍枰敲庖咴缘?，即能夠不借助載體激發(fā)免疫應(yīng)答。應(yīng)注意，在本申請公開中例如〃包含〃、“含〃、“含有〃、“包括〃、“包括在內(nèi)"等術(shù)語可具有美國專利法規(guī)定的含義；例如它們可指"包括"，“包含"，“含有"
等。例如"基本上包含"和"基本上由......組成"等術(shù)語具有美國專利法規(guī)定的含義，
例如它們允許將其它不損害本發(fā)明新穎性和基本特征的成分或步驟包括在內(nèi)，即它們排除了損害本發(fā)明新穎性和基本特征的未列舉成分或步驟，且它們排除了現(xiàn)有技術(shù)的成分或步驟，例如本文引用或引入并作參考的本領(lǐng)域文獻(xiàn)，這尤其因?yàn)楸疚牡哪康氖窍薅ň哂锌墒谟鑼＠麢?quán)的實(shí)施方案，例如限定與現(xiàn)有技術(shù)相比(例如與本文引用或引入并作參考的文獻(xiàn)
相比)具有新穎性、非顯而易見性、創(chuàng)造性的實(shí)施方案。并且，術(shù)語"由......組成"具有
美國專利法規(guī)定的含義；即這些術(shù)語是封閉式的。
對疫苗或免疫原性組合物的"免疫應(yīng)答"是指在受試者中，對在感興趣的抗原或疫苗組合物中存在的分子產(chǎn)生體液和/或細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的進(jìn)展。對于本發(fā)明的目的，“體液免疫應(yīng)答”是抗體介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，并包括產(chǎn)生對本發(fā)明的抗原/疫苗有親和力的抗體，而“細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答”是由T-淋巴細(xì)胞和/或其它白細(xì)胞介導(dǎo)的。“細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答”通過抗原性抗原表位與主要組織相容性復(fù)合物(MHC)的I類或II類分子聯(lián)合呈遞激發(fā)。這激活了抗原特異性⑶4+T輔助細(xì)胞或⑶8+細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞("CTL")。 CTL對于與由主要組織相容性復(fù)合物(MHC)編碼并且表達(dá)于細(xì)胞表面的蛋白聯(lián)合呈遞的肽抗原具有特異性。CTL幫助誘導(dǎo)和促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)破壞細(xì)胞內(nèi)微生物，或溶解所述微生物感染的細(xì)胞。細(xì)胞免疫性的另一方面涉及輔助T-細(xì)胞介導(dǎo)的抗原特異性應(yīng)答。輔助T-細(xì)胞幫助刺激該功能，并且集中非特異性效應(yīng)器細(xì)胞的活性對抗那些展示在其表面結(jié)合MHC分子的肽抗原的細(xì)胞?！凹?xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答"也指產(chǎn)生細(xì)胞因子、趨化因子和其它由活化的T-細(xì)胞和/或其它白細(xì)胞產(chǎn)生的分子，包括那些來自CD4+和CD8+T細(xì)胞的分子。具體的抗原或組合物刺激細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的能力，可通過多種測定法來確定，所述測定法例如淋巴組織增生(淋巴細(xì)胞活化)測定、CTL細(xì)胞毒性細(xì)胞測定、測定在致敏的患者中對抗原特異的T-淋巴細(xì)胞、或測量T細(xì)胞應(yīng)答抗原再刺激而產(chǎn)生的細(xì)胞因子。所述測定為本領(lǐng)域公知。參見例如 Erickson 等人，J. Immunol. (1993) 151 :4189-4199 ；Doe 等人，Eur. J. Immunol. (1994)24 :2369_2376。所述“免疫原性有效量”是指激發(fā)動物免疫應(yīng)答的全部滅活的BTV的量。所述量取決于受試動物的物種、品種、年齡、體型、健康狀況，且將受到所述動物此前在一種或多種 BTV株中暴露情況的影響，無論所述一種或多種株是有毒株還是無毒株。當(dāng)與一種或多種合適的佐劑一起使用時，本文中所用的全部滅活的BTV的“免疫原性有效量”，是足以增強(qiáng) BTV的免疫原性且因此提供保護(hù)性免疫以對抗致病性或有毒BTV株或血清型的攻擊的BTV 的量。術(shù)語“免疫原性”是指抗原或疫苗激發(fā)免疫應(yīng)答(體液和/或細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答)的能力。本文中所用的術(shù)語“免疫原性”指BTV能夠激發(fā)體液和/或細(xì)胞免疫應(yīng)答。免疫原性株也是抗原性株。免疫原性組合物是指當(dāng)給藥于動物時激發(fā)體液和/或細(xì)胞免疫應(yīng)答的組合物。術(shù)語“免疫原性組合物”是指任何含有抗原(例如微生物)的藥物組合物，所述組合物可用于激發(fā)動物的免疫應(yīng)答。所述免疫應(yīng)答可包括T細(xì)胞應(yīng)答、B細(xì)胞應(yīng)答，或T細(xì)胞和B細(xì)胞應(yīng)答兩者兼有。所述組合物可用于通過在細(xì)胞表面將抗原與MHC分子聯(lián)合呈遞而使所述動物致敏。此外，可產(chǎn)生抗原特異性T-淋巴細(xì)胞或抗體，以在未來保護(hù)免疫的宿主。 “免疫原性組合物”可包含活的、減毒的或被殺死的/滅活的疫苗，所述疫苗包括整個微生物或從整個微生物中得到免疫原性部分，所述整個微生物或免疫原性部分誘導(dǎo)細(xì)胞介導(dǎo)的(T 細(xì)胞)免疫應(yīng)答和/或抗體介導(dǎo)的(B細(xì)胞)免疫應(yīng)答，且可保護(hù)所述動物免受與所述微生物感染相關(guān)的一種或多種癥狀，或可保護(hù)所述的動物因感染所述微生物而死亡。術(shù)語“滅活的”是指本發(fā)明的疫苗或免疫原性組合物中的微生物不具感染性的性質(zhì)。尤其是，本領(lǐng)域技術(shù)人員知道用于使微生物出于疫苗的目的變?yōu)椴痪吒腥拘缘奈镔|(zhì)，例如BEI。在本發(fā)明中也研發(fā)了具體的方法以使藍(lán)舌病毒變得不具感染性，但這些方法的研發(fā)也具體強(qiáng)調(diào)了保持疫苗制劑免疫原性的同時使病毒制劑完全滅活。
本文中所用的術(shù)語“離體的”指所提及的物質(zhì)從其天然環(huán)境中取出。因此，離體的生物學(xué)物質(zhì)可以不含一些或全部的細(xì)胞成分，即天然存在的細(xì)胞成分(例如細(xì)胞質(zhì)或膜成分)。若存在于細(xì)胞提取液或上清液中，該物質(zhì)就是離體的。離體的蛋白可以與其在細(xì)胞中結(jié)合的其它蛋白和/或核苷酸結(jié)合，或當(dāng)該蛋白為膜結(jié)合蛋白時與細(xì)胞膜結(jié)合。離體的細(xì)胞器、細(xì)胞或組織從發(fā)現(xiàn)它們的生物體解剖學(xué)位點(diǎn)取出。離體的物質(zhì)可以但不必須被純化。本文所用的術(shù)語“腸胃外給藥”指給藥通過一些經(jīng)胃腸道之外的其它途徑給藥，尤其是指通過靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)或髓內(nèi)注射而向生物體引入物質(zhì)，此外還指其它非口服和非鼻內(nèi)途徑的給藥，例如腹膜內(nèi)注射或局部應(yīng)用。術(shù)語“致病性”是指任何感染物質(zhì)(例如細(xì)菌或病毒)引起疾病的能力。在本發(fā)明中，術(shù)語“致病性”是指藍(lán)舌病毒(BTV)引起反芻動物(尤其是綿羊或羔羊)生病的能力。 “非致病性”微生物是指缺少BTV “致病性”株的上述特征的微生物。BTV引起的疾病，其特征通常在于受感染動物的損傷，其類似感染性牛病毒性腹瀉、水泡性口膜炎病毒、惡性卡他熱、真菌性口炎、牛疫、光敏作用和口蹄疫。藍(lán)舌病毒(BTV)被認(rèn)為是引起牛積水性無腦以及引起牛羊不育、流產(chǎn)以及出生缺陷的罪魁禍?zhǔn)住Ｐg(shù)語"藥學(xué)上可接受的載體"指美國聯(lián)邦管理機(jī)構(gòu)、州政府或其它管理機(jī)構(gòu)所批準(zhǔn)的載體，或列于美國藥典或其它對動物(包括人以及其它動物)使用所公認(rèn)的藥典之中的載體。術(shù)語"載體"是指與藥物組合物一起給藥的稀釋劑、佐劑、賦形劑或載劑。所述藥學(xué)載體可為無菌液體，例如水和油，所述油包括石油、動物油、植物油或合成的油，例如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。當(dāng)藥物組合物由靜脈內(nèi)給藥時，水是優(yōu)選的載體。鹽水溶液以及右旋糖和甘油水溶液也可用作液體載體，尤其是用作可注射溶液。合適的藥學(xué)賦形劑包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、大米、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙二醇、水、乙醇等。若需要，所述組合物還可包含少量的潤濕劑或乳化劑或PH緩沖劑。這些組合物的形式可以是溶液、混懸劑、乳劑、片劑、丸齊 、膠囊劑、粉末劑、緩釋制劑等。使用傳統(tǒng)的粘合劑和載體(例如甘油三酯)，所述組合物可制成栓劑?？诜苿┛砂?biāo)準(zhǔn)載體，例如藥物級的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。合適的藥學(xué)載體的實(shí)例公開于E.W.Martin所作的"Remington' s Pharmaceutical Sciences"中。所述制劑應(yīng)適于給藥的模式。術(shù)語“保護(hù)”是指通過對具體的抗原(例如藍(lán)舌病毒)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答來保護(hù)動物 (尤其是哺乳動物，例如綿羊、羔羊、山羊或奶牛)免于感染或疾病。通常通過用本文公開的疫苗組合物治療動物來實(shí)現(xiàn)所述保護(hù)。本文所用的術(shù)語“純化的”是指在使無關(guān)物質(zhì)減少或消除的條件下分離而得到的物質(zhì)，所述無關(guān)物質(zhì)即污染物，包括從中獲得所述物質(zhì)的天然物質(zhì)。例如，純化的細(xì)菌或蛋白通?；旧喜缓拗骷?xì)胞或培養(yǎng)成分(包括組織培養(yǎng)或卵蛋白、非特異性病原體等)。 本文中所用的術(shù)語“基本上不含”在操作上用于上下文中物質(zhì)的分析檢測。通常，基本上不含污染物的純化的物質(zhì)純度至少為50% ；更通常純度至少為90%，且更通常純度至少為 99%。純度可通過色譜、凝膠電泳、免疫測定法、組合物分析、生物學(xué)測定和其它本領(lǐng)域已知的方法來評價(jià)。純化的方法為本領(lǐng)域公知。術(shù)語“基本上純”是指最高等級的純度，其可通過使用本領(lǐng)域已知的常規(guī)純化技術(shù)達(dá)到?！霸碥铡苯虒?dǎo)于Lacaille-Dubois，M 禾口 Wagner H. (1996. A review of thebiological and pharmacological activities of saponins. Phytomedicine vol 2 PP363-386)。皂苷為留體或三萜苷類，廣泛分布于植物界和海洋動物界中。皂苷的特點(diǎn)是在水中形成膠體溶液，其經(jīng)振搖會產(chǎn)生氣泡，并且可以使膽固醇沉淀。當(dāng)皂苷接近細(xì)胞膜時，其在膜中產(chǎn)生孔狀結(jié)構(gòu)，使膜破裂。紅細(xì)胞溶血是該現(xiàn)象的實(shí)例之一，這是一些(而不是所有)皂苷的特性。已知將皂苷作為全身疫苗的佐劑。本領(lǐng)域中，對各個皂苷的佐劑性和溶血活性進(jìn)行了深入的研究(前述Lacai lle-Duboi s和Wagner)。例如“Quil Α”(源自南美皂皮樹(Quillaja Saponaria Molina)的樹皮)及其級分公開于美國專利5，057，MO 禾口〃 Saponins as vaccine adjuvants“ , Kensil, C. R. , Crit Rev Ther Drug Carrier Syst，1996，12(l-2) :1_55，和EP O 362 279B1。包含Quil A的級分的微粒結(jié)構(gòu)(術(shù)語為免疫刺激復(fù)合物(ISCOMS))具有溶血性，并且用于疫苗的生產(chǎn)(M0rein，B.，EP O 109942B1)。 已報(bào)道這些結(jié)構(gòu)具有佐劑活性(EP O 109 942B1 ；WO 96/11711)。已報(bào)道溶血皂苷QS21 和QS17(經(jīng)HPLC純化的Quil A級分)為強(qiáng)效的全身佐劑，且它們的制備方法公開于美國專利5，057，540和EP O 362 279B1中。這些參考文獻(xiàn)中還公開了 QS7 (Quil-A的非溶血性級分)的用途，其用作全身疫苗的強(qiáng)效佐劑。QS21的用途還由Kensil等人公開(1991， J. Immunology vol 146，431-437)。QS21和聚山梨糖醇酯或環(huán)糊精的組合也是已知的(W0 99/10008)。包含Quil A的級分(例如QS21和QS7)的微粒佐劑系統(tǒng)公開于WO 96/33739 和TO 96/11711中。其它已用于全身疫苗研究的皂苷包括那些來自其它植物物種的皂苷， 例如石頭花屬和肥皂草屬植物(Bomford等人，Vaccine，10 (9) :572-577,1992) 還已知將皂苷用于粘膜給藥疫苗的研究中，這在免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)中取得了各種成功。此前研究已顯示，當(dāng)抗原經(jīng)鼻內(nèi)給藥時，Quil-A皂苷對免疫應(yīng)答沒有誘導(dǎo)效果(Gizurarson等人， 1994 Vaccine Research3，23-29)。同時，其它作者也成功地使用了該佐劑(Maharaj等人，Can. J. Microbiol,1986,32(5) :414-20,Chavali 和 Campbell,Immunobiology，174(3) 347-59)。包含Quil A皂苷的ISCOM已用于胃內(nèi)和鼻內(nèi)疫苗制劑中，并顯示了佐劑活性(McI Mowat 等人，1991, Immunology, 72, 317-322 ；McI Mowat 禾口 Donachie, Immunology Today, 12,383-385)。Quil A的非毒性級分QS21，也已公開作為口服或鼻內(nèi)佐劑(Sumino等人， J.Virol. ,1998,72(6) :4931-9, WO 98/56415)。其它皂苷在鼻內(nèi)疫苗研究中的使用也已公開。例如奎奴亞藜(Chenopodium quinoa)皂苷已用于鼻內(nèi)和胃內(nèi)疫苗中(Estrada等人， Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. , 1998, 21 (3) :225-36)。術(shù)語“SL-CD”是指硫脂-環(huán)糊精(sulpholipo-cyclodextrin)，其屬于美國專利 6，610，310和6，165，995公開的環(huán)糊精佐劑的家族。通常，SL-⑶與可代謝油并且優(yōu)選與非離子型表面活性劑混合制劑，所述可代謝油例如一種或多種不飽和萜烴(例如角鯊?fù)?，所述非離子型表面活性劑例如聚氧乙烯去水山梨糖醇單油酸酯。術(shù)語“SP-0il”是指一種佐劑，其為包括以下的油乳劑至3%體積/體積的聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物；2%至6%體積/體積的角鯊?fù)椋?. 至0. 5%體積/體積的聚氧乙烯去水山梨糖醇單油酸酯；和緩沖鹽溶液。術(shù)語"哺乳動物"包括單孔類動物(例如鴨嘴獸)、有袋類動物(例如袋鼠)和胎生動物，包括家畜(用于食物、乳品或纖維的馴養(yǎng)動物，例如豬、綿羊、牛和馬)和寵物(例如狗、貓)。"有蹄動物"包括但不限于牛(牛屬動物)、水牛、野牛、綿羊、豬、鹿、象和牦牛。 以上動物均包括成年與發(fā)育狀態(tài)(例如小牛、小豬、羊羔等)。本發(fā)明的免疫原性組合物可給藥于成年與發(fā)育狀態(tài)的動物，優(yōu)選給藥于家畜。術(shù)語“反芻動物”是指任何種類的特征為胃通常分為四部分的有蹄(甚至有腳)動物，包括奶牛、綿羊、長頸鹿、山羊和鹿。本文中所用的"治療"是指以下的任一種或多種(i)防止感染或再感染，如傳統(tǒng)疫苗的作用，(ii)降低癥狀的嚴(yán)重程度或消除癥狀，和(iii)基本上或完全消除病原體或所述病癥。因此，治療可以是預(yù)防性的(感染前)或治療性的(感染后)。在本發(fā)明中， 預(yù)防性治療是優(yōu)選的模式。根據(jù)本發(fā)明的具體的實(shí)施方案，提供治療(包括預(yù)防性和/或治療性免疫)宿主動物對抗病毒感染的組合物和方法。本發(fā)明的方法可用于使動物預(yù)防和 /或治療免疫，所述動物優(yōu)選為哺乳動物，例如綿羊、羔羊、奶?；蛏窖颉１景l(fā)明的方法還可對哺乳動物實(shí)施以進(jìn)行生物醫(yī)學(xué)研究。可互換使用的術(shù)語"疫苗"或“疫苗組合物”是指包含至少一種誘導(dǎo)動物免疫應(yīng)答的免疫原性組合物的藥物組合物。疫苗或疫苗組合物可保護(hù)所述動物免于因感染引起的疾病或可能死亡，且可能包含也可能不包含一種或多種增強(qiáng)活性成分的免疫活性的附加成分。疫苗或疫苗組合物還可包含其它對于藥物組合物而言典型的成分。疫苗或疫苗組合物還可包含對于疫苗或疫苗組合物而言典型的成分，包括例如佐劑或免疫調(diào)節(jié)劑。疫苗的免疫原性活性成分可包含完全活的生物體，其既可為原始形式或可為改良的活疫苗中減毒的生物體，或者可為在被殺死或滅活的疫苗中通過適當(dāng)方法滅活的生物體，或包含一種或多種病毒免疫原性成分的亞單位疫苗，或通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備的遺傳工程疫苗、突變疫苗或克隆疫苗。疫苗或疫苗組合物可包含一種或同時包含一種以上的上述物質(zhì)。
實(shí)施例實(shí)施例1為評價(jià)經(jīng)市售BTV-8疫苗(BOVILIS BTV-8/ “疫苗A” )(滅活前含有彡500抗原單位/ml)引發(fā)的牛對單一加強(qiáng)劑量的Zulvae 8 Bovis (Fort Dodge)的中和抗體應(yīng)答，三種市售滅活的BTV-8疫苗經(jīng)授權(quán)用于英國的牛中。將7個月前經(jīng)兩劑量的BOVILIS BTV-8引發(fā)的M頭肉用小公牛分為三組，各組的 BTV-8血清中和試驗(yàn)(SNT)抗體效價(jià)近似。BTV-8 RT-PCR全部為陰性。第1組(n = 4)作為對照不進(jìn)行處理。第2組(n = 10)接受一劑量的BOVILIS BTV-8。第3組(η = 10)接受一劑量的^ilvac 8 Bovis0接種疫苗后每周收集血樣一次，收集8周，并在第16周再收集一次，并且將樣品送到位于英國的獨(dú)立國際標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行SNT試驗(yàn)。BOVILIS BTV8為市售可得的BTV疫苗。Iml劑量的該疫苗包含滅活前至少500抗原單位/ml的藍(lán)舌病毒血清型8。每劑量的佐劑16. 7mg的100%氫氧化鋁；0. 31mg皂苷。所述組合物還包含氨丁三醇；氯化鈉、馬來酸、消泡劑、注射用水。ZULVAC 8 BOVIS 為 BTV BOVILIS BTV-8，可購自 Fort Dodge。2ml 劑量包含滅活的藍(lán)舌病毒、血清型8、BTV-8/BEL2006/02株(效價(jià)彡IO6-7TCID50*) (*滅活前測定)。每劑量的佐劑385. 2mg(4mg Al3+)的3%氫氧化鋁凝膠和0. 4mg皂苷。所述組合物還包含氫氧化鋁凝膠皂苷
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硫柳汞氯化鉀磷酸二氫鉀磷酸氫二鈉十二水合物氯化鈉注射用水結(jié)果SNT抗體效價(jià)以最高陽性血清稀釋的Iogltl倒數(shù)來表示。曲線下面積(AUC)用作重復(fù)測量的綜合指標(biāo)。平均AUC在第1至3組中顯著不同(單側(cè)4而￥々，？ = 0.023)，分別為173. 0、191. 8和272. 5單位2。因此LSD檢驗(yàn)顯示第2組和第3組之間(p = 0. 017)、第 1組和第3組之間(ρ = 0. 025)有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異，但第1組和第2組之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異(ρ = 0.651)。在邦弗朗尼校正(Bongrrroni afjustment)之后配對差異并不顯著。結(jié)論在經(jīng)BOVILIS BTV-8引發(fā)之后的牛中，加強(qiáng)劑量的^ilvac 8 Bovis產(chǎn)生的中和抗體應(yīng)答比加強(qiáng)劑量的BOVILIS BTV-8高5倍。需要攻擊研究以確定在防止感染方面的不同。
權(quán)利要求
1.一種在受試者中產(chǎn)生抗原特異性免疫應(yīng)答的方法，其包括向所述受試者給藥至少一劑包含藍(lán)舌病毒的第一免疫原性組合物；向所述受試者給藥至少一劑包含藍(lán)舌病毒的第二免疫原性組合物，其中所述第一免疫原性組合物和第二免疫原性組合物是不同的，且其中所述第二免疫原性組合物在給藥所述第一免疫原性組合物之后給藥。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述藍(lán)舌病毒為血清型8。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述第一免疫原性組合物為BOVILISBTV-8，且所述第二免疫原性組合物為ZULVAC 8 B0VIS。
4.權(quán)利要求2的方法，其中所述第一免疫原性組合物為ZULVAC 8B0VIS，且所述第二免疫原性組合物為BOVILIS BTV-8。
5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的方法，其中所述第一免疫原性組合物和第二免疫原性組合物中的至少一種通過選自以下的途徑給藥靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、口服、直腸內(nèi)、鼻內(nèi)、含服和陰道內(nèi)。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述第一免疫原性組合物使用肌內(nèi)或皮下途徑給藥。
7.權(quán)利要求6的方法，其中所述第二免疫原性組合物使用肌內(nèi)或皮下途徑給藥。
8.權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的方法，其中所述第二免疫原性組合物在給藥所述第一免疫原性組合物后不超過約10周時給藥。
9.權(quán)利要求8的方法，其中所述第二免疫原性組合物在所述第一免疫原性組合物給藥后約7周時給藥。
10.一種治療受試者的病毒感染的方法，其包括向所述受試者給藥至少一劑包含藍(lán)舌病毒的第一免疫原性組合物；向所述受試者給藥至少一劑包含藍(lán)舌病毒的第二免疫原性組合物，其中所述第一免疫原性組合物和第二免疫原性組合物是不同的，且其中所述第二免疫原性組合物在給藥所述第一免疫原性組合物之后給藥。
11.權(quán)利要求10的方法，其中所述藍(lán)舌病毒為血清型8。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述第一免疫原性組合物為BOVILISBTV-8，且所述第二免疫原性組合物為ZULVAC 8 B0VIS。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所述第一免疫原性組合物為ZULVAC 8B0VIS，且所述第二免疫原性組合物為BOVILIS BTV-8。
14.在受試者中產(chǎn)生抗原特異性免疫應(yīng)答的免疫原性組合物，其包含第一免疫原性組合物，其包含藍(lán)舌病毒；和第二免疫原性組合物，其在第一免疫原性組合物之后給藥，所述第二組合物包含藍(lán)舌病毒。
15.權(quán)利要求14的免疫原性組合物，其中所述第一免疫原性組合物和第二免疫原性組合物選自ZULVAC 8 BOVIS 和 BOVILIS BTV-8。
16.在受試者中產(chǎn)生抗原特異性應(yīng)答的試劑盒，其包括第一免疫原性組合物，其包含藍(lán)舌病毒，和第二免疫原性組合物，其在第一免疫原性組合物之后給藥且包含藍(lán)舌病毒，其中所述第一免疫原性組合物與第二免疫原性組合物不同。
17.權(quán)利要求16的試劑盒，其中所述第一免疫原性組合物和第二免疫原性組合物選自 ZULVAC 8 BOVIS 和 BOVILIS BTV-8。
全文摘要
本發(fā)明提供通過使用免疫原性組合物的組合，在受試者中誘導(dǎo)抗原特異性免疫應(yīng)答的方法。通常，所述方法涉及向所述受試者給藥有效量的兩種不同的免疫原性組合物，兩者都包含藍(lán)舌病毒血清型8。
文檔編號A61K39/15GK102481358SQ201080039049
公開日2012年5月30日 申請日期2010年8月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月2日
發(fā)明者D.J.巴特拉姆 申請人:惠氏有限責(zé)任公司