專利名稱：神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白在治療外周神經(jīng)損傷中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及神經(jīng)外傷或者傷害。更具體的，本發(fā)明涉及神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者其功能性片段在預(yù)防、治療或者改善外周神經(jīng)損傷方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
外周神經(jīng)通常由于外傷受損，所述外傷包括車禍、摩托車事故、外科手術(shù)、刀和發(fā)射物創(chuàng)口和生育對孩子和母親的創(chuàng)傷。神經(jīng)創(chuàng)傷常見的外科手術(shù)原因包括前列腺切除術(shù)和乳房切除術(shù)。在外科手術(shù)過程中其他常見的損傷是長期的肢體位置或者不可避免的神經(jīng)壓縮或者偶然發(fā)生的神經(jīng)擠壓的結(jié)果。神經(jīng)損傷之后，由受損傷的神經(jīng)支配身體區(qū)域會(huì)喪失感覺和/或功能。例如，在前列腺切除術(shù)中收到神經(jīng)創(chuàng)傷之后，通常會(huì)導(dǎo)致勃起功能失調(diào)。 在乳房切除術(shù)之后，常常會(huì)發(fā)生上肢和/或肩胛骨的正常功能損失。此外，在分娩創(chuàng)傷或者其他會(huì)破壞臂叢的外傷產(chǎn)生之后，同側(cè)肢體會(huì)發(fā)生功能失調(diào)。在一種神經(jīng)創(chuàng)傷發(fā)生之后，任意可以預(yù)防或者限制功能失調(diào)程度的治療會(huì)顯著的影響現(xiàn)有的用于治療外周神經(jīng)創(chuàng)傷的治療策略。這里對其他的外周神經(jīng)創(chuàng)傷治療法和治療劑存在需要。

發(fā)明內(nèi)容
在多種多樣的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病和中樞神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷的動(dòng)物模型中，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白已經(jīng)顯示出具有神經(jīng)保護(hù)作用和神經(jīng)恢復(fù)作用。然而，在本發(fā)明之前，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白從來沒有被認(rèn)為能夠預(yù)防和/或治療外周神經(jīng)損傷。因此，本發(fā)明的某些實(shí)施方案涉及通過對患有外周神經(jīng)損傷或者有患有外周神經(jīng)損傷風(fēng)險(xiǎn)的主體給藥神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白(例如，GGF2) 或者它的一種功能性片段來治療或者改善外周神經(jīng)損傷的方法。本發(fā)明表明，使用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白治療外周神經(jīng)損傷能夠減少外周神經(jīng)功能的損傷，當(dāng)在收到神經(jīng)損傷之前或者之后給藥神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白能夠改善或者減少外周神經(jīng)功能損傷，并且在某些情況下修復(fù)外周神經(jīng)功能。在某些實(shí)施方案中，外周神經(jīng)損傷被避免。在某些實(shí)施方案中，一種存在的外周神經(jīng)損傷被消除。在某些實(shí)施方案中，外周神經(jīng)損傷不能完全避免。在某些實(shí)施方案中，一種已經(jīng)存在的外周神經(jīng)損傷不能被完全消除。使用大鼠勃起功能失調(diào)模型作為活體內(nèi)系統(tǒng)，用于表明神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白在治療外周神經(jīng)損傷中的有效性。在某些方面，本發(fā)明涉及治療由外周神經(jīng)損傷引起的勃起功能失調(diào)， 但是，本發(fā)明不只局限于勃起功能失調(diào)。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以有效作為單一治療劑用于治療任意一種外周神經(jīng)損傷，并且不需要與天然神經(jīng)管或者人造神經(jīng)管共同使用進(jìn)行治療，也不需要與其他細(xì)胞治療劑(例如，雪旺氏(Schwann)細(xì)胞)共同使用治療。
某些實(shí)施方案涉及治療外周神經(jīng)損傷的方法，本方法包括對患有外周神經(jīng)損傷的主體或者對具有患上外周神經(jīng)損傷風(fēng)險(xiǎn)的主體給藥有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。某些實(shí)施方案涉及propylaxing或者預(yù)防外周神經(jīng)損傷的方法,本方法包括對患有外周神經(jīng)損傷的主體給藥有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。術(shù)語主體包括哺乳動(dòng)物，并且尤其是人類主體。在某些實(shí)施方案中，外周神經(jīng)通常由于外傷受損的結(jié)果，所述外傷包括但是不局限于車禍、摩托車事故、外科手術(shù)、刀和發(fā)射物創(chuàng)口和分娩創(chuàng)傷。在某些實(shí)施方案中，一種外周神經(jīng)損傷是外科手術(shù)的結(jié)果，比如一種前列腺切除術(shù)，乳房切除術(shù)等等。在基本上任意一種外科手術(shù)中，外周神經(jīng)損傷可能是組織切割作用的直接結(jié)果、組織切除術(shù)的直接結(jié)果和/ 或四肢位置或者四肢擠壓的副作用。在一種具體的實(shí)施方案中，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白被用來治療或者預(yù)防那些會(huì)導(dǎo)致勃起功能失調(diào)的外周神經(jīng)損傷。進(jìn)一步的實(shí)施方案涉及勃起功能失調(diào)的治療，所述勃起功能失調(diào)是由于外科手術(shù)對與勃起功能有關(guān)的外周神經(jīng)(例如，海綿體神經(jīng)和/或陰莖神經(jīng))創(chuàng)傷引起的。海綿體神經(jīng)創(chuàng)傷常常作為前列腺癌癥切除術(shù)的結(jié)果；這種創(chuàng)傷會(huì)產(chǎn)生勃起功能失調(diào)(ED)。目前的藥物干預(yù)能夠治療創(chuàng)傷之后造成的功能性缺陷，所述創(chuàng)傷是由于向海綿體增加血液流動(dòng)促進(jìn)陰莖勃起而導(dǎo)致的創(chuàng)傷。目前存在的醫(yī)療器械干預(yù)能夠治療由創(chuàng)傷引起的功能性缺陷，所述創(chuàng)傷是由于增加陰莖體積導(dǎo)致一種類似于正常陰莖勃起的狀態(tài)而引起的。目前存在的用于治療勃起功能失調(diào)(ED)的所有干預(yù)都是由缺陷的。本發(fā)明主要在創(chuàng)傷發(fā)生的時(shí)候保護(hù)神經(jīng)，和/或通過減少任意功能性缺陷的嚴(yán)重程度增加病人機(jī)能性恢復(fù)。通過在大鼠中進(jìn)行雙邊粉碎模型檢驗(yàn)神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白I肽(GGF2)，大鼠中的雙邊粉碎模型是一種廣泛接受的海綿體神經(jīng)創(chuàng)傷模型；這種模型已經(jīng)被用于檢驗(yàn)西地那非 (sildenifil)及其他勃起功能失調(diào)(ED)藥物。如這里所闡述的,在創(chuàng)傷之后5周對神經(jīng)進(jìn)行電刺激得到GGF2改善的功能性結(jié)果，并且測定睪丸內(nèi)壓力(ICP)。某些實(shí)施方案是指使用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白治療乳房切除術(shù)之后的神經(jīng)創(chuàng)傷。長胸廓?jiǎng)?chuàng)傷、肋間臂神經(jīng)創(chuàng)傷和胸背神經(jīng)創(chuàng)傷在乳房切除術(shù)中是常見的，盡管其他神經(jīng)也可以被損傷，并且，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以被用于預(yù)防或者治療這種創(chuàng)傷。可以在乳房切除術(shù)之前和/或之后遞送神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白，從而保護(hù)并修復(fù)神經(jīng)功能。這里存在很多常用的上肢功能的測定方法，包括力量、感覺、關(guān)節(jié)活動(dòng)范圍和反應(yīng)能力-所有測定方法或者任意一種測定方法都適合于確定神經(jīng)功能保護(hù)作用或者恢復(fù)能力。本發(fā)明同樣可以應(yīng)用于任一醫(yī)療過程或者手術(shù)過程中的任意神經(jīng)損害。進(jìn)一步實(shí)施方案包括在臂叢外傷之后使用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白對神經(jīng)創(chuàng)傷進(jìn)行的治療。 臂叢創(chuàng)傷是鈍力外傷、分娩外傷、交通事故和運(yùn)動(dòng)損傷后導(dǎo)致受損傷的肢體發(fā)力不足和感覺缺陷的常見結(jié)果。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以向患有臂叢損傷的人給藥，從而減少肢體功能的損傷并修復(fù)肢體功能。在可以預(yù)見的位置，例如，分娩時(shí)，本發(fā)明的組合物可以預(yù)防性的被給藥。肢體功能還可以通過許多被廣泛承認(rèn)的神經(jīng)學(xué)測量方法來測定運(yùn)動(dòng)機(jī)能、力量、感覺、 關(guān)節(jié)活動(dòng)范圍和/或反應(yīng)能力。根據(jù)使用的具體神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的性質(zhì)和藥物環(huán)境，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以理解本發(fā)明的某些方面包括給藥大約I微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，2微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，3微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，4微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，5微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，6微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，7微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，8微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，9微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，10微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，1-10微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，1-20 微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，10-20微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，1-30微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，1-40微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，1-50微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，10-20微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，10-30微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，10微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，15微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，20微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，25微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，30微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，35微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，40微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，50微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，15-25微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，15-40微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽， 15-35微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，15-50微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，20-50微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，20-40微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，20-40微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，25-35微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，30-50微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，30-60微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，50-75微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽， 50-100微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，100微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，1-100微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，100-150微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，150-200微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，200微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽，1-200微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽本發(fā)明的某些方面包括在外科手術(shù)之前和/或之后給藥神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。在某些方面，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以是NRG1、2、3或者4基因編碼的任意全長神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。在一種進(jìn)一步的方面，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以是神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽的任一功能性片段。 在某些實(shí)施方案中，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的功能性片段含有EGF-樣區(qū)域。在某些實(shí)施方案中，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以是任一來自NRG1、2、3或者4基因的肽，這種肽能夠結(jié)合并活化erbB受體。 在某些實(shí)施方案中，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以是任何一種由NRG1、2、3或者4基因編碼的野生型肽修飾所得的肽，所述修飾所得的肽結(jié)合并活化erbB受體。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白和含有神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白EGF-樣區(qū)域的多肽可以與一種藥學(xué)上可接受的稀釋劑、載體、或者賦形劑一起，以單位劑量形式對主體給藥。常用的藥物習(xí)慣可以被利用從而提供適當(dāng)?shù)闹苿┗蛘呓M合物，并對病人或者試驗(yàn)動(dòng)物給藥這種組合物。靜脈內(nèi)給藥是優(yōu)選的，盡管如此，也可以使用其他任何適當(dāng)?shù)慕o藥途徑，例如，非腸道給藥、皮下給藥、 肌肉注射給藥、顱內(nèi)給藥、眶內(nèi)給藥、眼藥、心室內(nèi)給藥、中央囊內(nèi)給藥、脊柱內(nèi)給藥、腦池內(nèi)給藥、腹膜內(nèi)給藥、產(chǎn)期內(nèi)給藥、煙霧劑、口服給藥或者透皮給藥或者局部給藥(例如，通過使用一種裝置或者粘性貼片，其中攜帶能夠穿過真皮進(jìn)入血流的制劑)。治療性制劑可以處于液體溶液或者懸浮液的形式；為了進(jìn)行口服，制劑可以處于片劑或者膠囊劑的形式；并且對于經(jīng)鼻給藥制劑，可以處于粉末、滴鼻劑或者煙霧劑的形式。“神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-l”、“NRG-r’、“heregulin”指的是一種多肽，這種多肽能夠結(jié)合ErbB受體l、ErbB受體3或者ErbB受體4,并且通過受體配對作用(二聚作用)還結(jié)合ErbB 受體2。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過美國專利第5，530，109號(hào)、美國專利第5，716，930號(hào)、和美國專利第7，037，888號(hào)中提到的pl85erbB2配位體基因編碼神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白，這里提到的每個(gè)申請的全部內(nèi)容通過引證在此全部并入本文。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2或者其任何一種子序列、或者任何一種分子，包括GGF2整個(gè)序列或者GGF2序列的活性部分。術(shù)語“治療有效量”或者“有效量”指的是能夠引起組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或者人類發(fā)生科研工作者、獸醫(yī)、醫(yī)生或者其他臨床醫(yī)師尋找的生物反應(yīng)或者醫(yī)藥反應(yīng)的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的量。治療性改變是指在測量的生物化學(xué)特性或者生理特性方面向著減輕疾病(例如， 外周神經(jīng)損傷)或者解決問題的方向發(fā)生的改變。更為具體的，“有效量”是足夠減少與醫(yī)學(xué)條件或者虛弱有關(guān)的癥狀的量，從而使在疾病或者紊亂中導(dǎo)致某些身體功能損傷的身體功能正?；蛘邚亩纳萍膊』蛘卟r的一種或者一種以上的臨床測量參數(shù)。除非明確表明其指的是其他選項(xiàng)，或者當(dāng)選項(xiàng)是相互排斥的時(shí)，在權(quán)利要求書中使用術(shù)語“或者”指的是“和/或”。還可以預(yù)計(jì)的是，任意列出的使用術(shù)語“或”的地方還可以專門與所闡述的其他選項(xiàng)相獨(dú)立。在本申請上下文中使用的術(shù)語“大約”指的是所使用的裝置或者方法產(chǎn)生的數(shù)值與確定的數(shù)值相比在85%、90%、95%>或者誤差標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍內(nèi)。按照長期存在的專利法，在權(quán)利要求書或者說明書中使用的單詞“一種(a)”和 “一種(an) ”表示一種或者一種以上，除非另有明確指出。在某些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明，預(yù)防性的使用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白從而預(yù)防或者減輕潛在的損傷。在某些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明，預(yù)后應(yīng)用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白，從而表明主體的未來狀態(tài)。在某些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明，診斷性的應(yīng)用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白，從而確定一種情況或者狀態(tài)的存在或者可能存在。在某些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明，治療性的應(yīng)用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白，從而以某些減少或者除去被治療的病況或者疾病的癥狀或者病征的方式影響一種病況。通過下面的詳細(xì)描述，本發(fā)明的其他目標(biāo)、特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)會(huì)變得顯而易見。然而，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)該理解，下面的詳細(xì)說明和具體的實(shí)施例盡管表明了本發(fā)明具體的實(shí)施方案，但只是以起到示意的作用而給出，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通過這里的詳細(xì)說明可以理解，在本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，各種各樣的改變和變化會(huì)變得顯而易見。


下面的附圖形成了本發(fā)明說明書的一部分，并且被包括用于說明本發(fā)明所公開的某些必然方面。通過這些附圖中的一個(gè)與這里所描述的具體實(shí)施方案的詳細(xì)說明，本發(fā)明可以被更好的理解。圖I :睪丸內(nèi)壓力(ICP)平均改變數(shù)據(jù)。圖2 :動(dòng)脈血壓正?；瘮?shù)據(jù)。圖3 :來自每個(gè)治療組((組A)正常的、(組B)壓碎的、(組C)壓碎+GGF2)的3 個(gè)動(dòng)物的代表性的熒光金標(biāo)記的主盆神經(jīng)節(jié)(MPG)。將被注入到陰莖組織中的熒光金向后運(yùn)輸穿過整個(gè)神經(jīng)，到主盆神經(jīng)節(jié)(MPG)的細(xì)胞體。組A :正常動(dòng)物顯示了不存在神經(jīng)損傷的情況下觀察到的退行性標(biāo)記的數(shù)值。組B :壓碎的動(dòng)物顯示，損傷后完整神經(jīng)纖維的急劇減少，由于熒光金標(biāo)記物不能被輸送到主盆神經(jīng)節(jié)(MPG)。組C:壓碎+GGF2動(dòng)物顯示了增加的熒光金標(biāo)記主盆神經(jīng)節(jié)(MPG)細(xì)胞數(shù)目的增加，這表明在創(chuàng)傷后，作為GGF2的治療結(jié)果存在保存的更好的神經(jīng)纖維。圖4 :在主盆神經(jīng)節(jié)(MPG)中定量熒光金標(biāo)記物。結(jié)果顯示正常動(dòng)物具有大量的細(xì)胞體標(biāo)記在主盆神經(jīng)節(jié)(MPG)中。在擠壓損傷之后，標(biāo)記的細(xì)胞的數(shù)量急劇減少，在神經(jīng)纖維被損害之后，所得結(jié)果不能將標(biāo)記物向后傳遞回主盆神經(jīng)節(jié)(MPG)。然而，GGF2治療改善了能夠以后退方式將熒光金從陰莖組織運(yùn)輸?shù)街髋枭窠?jīng)節(jié)(MPG)的完整的神經(jīng)纖維的數(shù)目，導(dǎo)致大量的被標(biāo)記的細(xì)胞。圖5 :代表性的nNos著色水平。海綿體nNOS是一種大家公認(rèn)的海綿體神經(jīng)維持標(biāo)記物。這些工作的結(jié)果包括正常的組織染色(組A)。通過比較，在海綿體神經(jīng)擠壓損傷之后(組B)存在顯著的nNOS著色損失。在陰莖體中，海綿體神經(jīng)末梢保藏的nNOS著色顯示使用GGF2治療擠壓損傷之后，海綿體神經(jīng)的存活率增加。著色密度表明了使用GGF2治療之后nNOS著色的保存。圖6 :代表性的酪氨酸羥化酶(TH)著色水平。本圖的結(jié)果顯示在組A中有正常的組織染色，在組B中，海綿體神經(jīng)擠壓損傷之后存在顯著減少的酪氨酸羥化酶(TH)著色。組 C顯示了陰莖體中的海綿體神經(jīng)末梢保藏的酪氨酸羥化酶(TH)著色；這一發(fā)現(xiàn)與擠壓損傷之后接受GGF2治療產(chǎn)生的陰莖神經(jīng)分布的一般保藏或者重建相符合。因此，著色密度表明了使用GGF2治療之后酪氨酸羥化酶(TH)著色的保存。圖7 :代表性的泡狀乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(VaChT)著色。結(jié)果顯示正常的組織著色 (組A)，和海綿體神經(jīng)擠壓損傷之后泡狀乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(VaChT)著色的顯著損失(組 B)。相反，在陰莖體中，海綿體神經(jīng)末梢保藏的泡狀乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(VaChT)著色顯示使用GGF2治療(C)擠壓損傷之后，海綿體神經(jīng)的存活率增加(組C)。著色密度顯示使用GGF2治療之后泡狀乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(VaChT)著色的保存傾向。
具體實(shí)施例方式外周神經(jīng)創(chuàng)傷是許多不同情況、擠壓、挫傷、相互碰撞、壓扁或者抻傷的常見結(jié)果， 例如，由外傷、事故或者外科手術(shù)產(chǎn)生的。盡管外部因素導(dǎo)致的神經(jīng)創(chuàng)傷是變化的，但是在神經(jīng)水平上的表現(xiàn)具有共同的特征(參見，例如，Lee and Wolfe, J Am Acad Orthop Surg, 8(4), p. 243, 2008)。在各個(gè)病理學(xué)中，外傷性損傷常常造成髓鞘形成損傷、神經(jīng)外膜損傷、 神經(jīng)束膜損傷、神經(jīng)內(nèi)膜損傷和軸損傷。在最溫和的病例中，損傷主要是針對髓鞘質(zhì)和神經(jīng)外膜，然后在幾天或者幾周之后自然完全恢復(fù)。然而，許多神經(jīng)創(chuàng)傷會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)內(nèi)膜破環(huán)和軸破環(huán)，并因此導(dǎo)致不能完全恢復(fù)或者需要持續(xù)很長一段時(shí)間才能恢復(fù)的機(jī)能破環(huán)。此外，在包括軸突損傷的外周神經(jīng)損傷中，在損傷后幾個(gè)小時(shí)時(shí)間內(nèi)，軸突發(fā)生局部退化。在隨后幾天的時(shí)間內(nèi)，最接近的神經(jīng)元細(xì)胞體和軸突經(jīng)歷一種過程，這種過程叫做華勒氏變性。在軸突退化之后，髓鞘質(zhì)產(chǎn)生的雪旺氏(Schwann)細(xì)胞死亡，留下碎片并發(fā)炎。雪旺氏(Schwann)細(xì)胞的細(xì)胞死亡和相關(guān)發(fā)炎加重神經(jīng)損傷。與中樞神經(jīng)系統(tǒng)不同，在外周神經(jīng)中可以發(fā)生顯著數(shù)量的再生。軸突沿著神經(jīng)束膜管生長并重新刺激末梢的祀分子，并且雪旺氏(Schwann)細(xì)胞remyelinate軸突。雖然外周神經(jīng)可以再生，但不幸的是，這一步驟并不理想；許多經(jīng)歷了退化的神經(jīng)元不在重新生成或者不能識(shí)別它們原有的靶分子并造成永久的機(jī)能失調(diào)的結(jié)果。這些機(jī)能失調(diào)可以包括運(yùn)動(dòng)機(jī)能損失、感覺功能損失、癱瘓、反應(yīng)能力損失、僵硬、攣縮或者關(guān)節(jié)活動(dòng)范圍減少。。在一種神經(jīng)創(chuàng)傷發(fā)生之后，任意可以限制功能失調(diào)程度的治療會(huì)顯著的影響現(xiàn)有的用于治療外周神經(jīng)創(chuàng)傷的治療策略。大量文獻(xiàn)顯示，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白能夠增加神經(jīng)元通過人造管再生的能力，并且可以增加其作為細(xì)胞治療劑(例如雪旺氏(Schwann)細(xì)胞移植物)的附屬治療法的作用。在本發(fā)明之前，人們并不知道神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以單獨(dú)被使用，例如，用于保護(hù)和/或修復(fù)外周神經(jīng)創(chuàng)傷功能。在這些研究中使用的模型(大鼠勃起功能失調(diào)模型)是一種標(biāo)準(zhǔn)的、廣泛承認(rèn)的并很好公布的外周神經(jīng)創(chuàng)傷模型。在這種特異性方法中，通過鉗子擠壓使海綿體神經(jīng)受損。 在其他周圍神經(jīng)的模型中，也可以使用相同的擠壓或者碰撞損傷。在海綿體神經(jīng)傷害模型中，功能性缺陷發(fā)生在勃起功能上。由于外傷性神經(jīng)損傷病理生理學(xué)的常見性和一致性，這種海綿體神經(jīng)傷害是一種優(yōu)秀的前列腺切除術(shù)-導(dǎo)致的傷害模型，并且，是所有外傷性周圍神經(jīng)損傷的一種一般模式。對周圍神經(jīng)的損傷會(huì)導(dǎo)致位于脊神經(jīng)后根神經(jīng)節(jié)(DRG)中的感覺神經(jīng)元細(xì)胞體內(nèi)部的改變；這些改變能夠促進(jìn)存活和軸突再生。在適宜條件下，舉例來說，在擠壓損傷之后，絕大多數(shù)的神經(jīng)纖維成功的再生。然而，在許多臨床上相應(yīng)環(huán)境中，外傷導(dǎo)致的神經(jīng)損傷或者疾病導(dǎo)致的神經(jīng)損傷結(jié)果往往不好，只有有限的功能恢復(fù)，并且通常被延誤。在此情況下，會(huì)產(chǎn)生神經(jīng)性疼痛或者慢性疼痛。疼痛通常與感覺神經(jīng)損傷或者感覺神經(jīng)損害有關(guān)，并使受影響的地方收到重視和固定。因此，傷害感受(神經(jīng)元信號(hào)支撐疼痛的感覺)是促進(jìn)愈合機(jī)制的伴隨物，雖然這回引發(fā)令人不愉快的感覺和感情經(jīng)驗(yàn)。然而，在許多病理情況下，感受傷寒的入侵可以導(dǎo)致功能性變化，所述功能性變化會(huì)對肌體產(chǎn)生傷害。神經(jīng)損傷會(huì)導(dǎo)致原始傳入神經(jīng)元的性質(zhì)以及它們同脊髓的中樞關(guān)聯(lián)性發(fā)生多種變化，產(chǎn)生異常性疼痛(allodynia)(受到正常無害刺激時(shí)的疼痛感覺)、痛覺過敏(一種對給定的疼痛刺激的夸大反應(yīng))和感受領(lǐng)域(即，使用刺激物時(shí)感覺“疼痛”的范圍)的擴(kuò)張。大多數(shù)慢性疼痛的病況都是中樞神經(jīng)組織或者外周神經(jīng)組織收到破壞的結(jié)果。勃起功能失調(diào)陽痿，此外還可以被稱為勃起功能失調(diào)(ED)，是一種常見的問題，僅在美國，就有 2千萬的男性面臨這一問題。陰莖勃起是一種神經(jīng)血管現(xiàn)象，這種神經(jīng)血管現(xiàn)象取決于神經(jīng)完整性和功能性血管的完整性。在收到性刺激之后,海綿體神經(jīng)末梢和內(nèi)皮細(xì)胞釋放神經(jīng)傳遞素(尤其是一氧化氮)。動(dòng)脈平滑肌和小動(dòng)脈的平滑肌的松弛增加動(dòng)脈流動(dòng)。海綿體內(nèi)部獲得的血液使陰莖處于勃起狀態(tài)。在盆腔根治手術(shù)(例如，為了前列腺癌、膀胱癌或者直腸癌進(jìn)行的手術(shù))中損傷的海綿體神經(jīng)是本國因醫(yī)生的治療而引起的勃起功能失調(diào)(ED)的最為常見的原因中的一種。勃起功能失調(diào)(ED)是根治性前列腺切除術(shù)之后的主要病態(tài)來源。例如，即使引入神經(jīng)-從外科手術(shù)技術(shù)，在使用兩面海綿體神經(jīng)從治療患有器官-限制性前列腺癌的男性之后，手術(shù)后效力在 30%到 80%范圍內(nèi)(Wang, J Sex Med,4 =1085-97,2007) 到目前為止，已經(jīng)調(diào)查了多種不同的神經(jīng)調(diào)節(jié)策略；然而，目前沒有可使用的既能夠在損傷發(fā)生之前對海綿體神經(jīng)進(jìn)行神經(jīng)保護(hù)，又能夠在損傷發(fā)生之后刺激神經(jīng)再生的治療法(Michl et al.，J Urol 176 :227-31，2006 ；Burnett and Lue, J Urol 176 :882-7, 2006)。即使同時(shí)對骨盆惡性腫瘤的外科手術(shù)治療和放射治療進(jìn)行神經(jīng)叢改良，這里仍然需要一種新型的在治療后能夠保持并恢復(fù)勃起功能的方法?？梢杂^察到定義明確的末梢到損害位點(diǎn)的細(xì)胞改變模型，從軸突和髓鞘退化開始，巨噬細(xì)胞侵入、細(xì)胞吞噬作用、和雪旺氏(Schwann)細(xì)胞反分化作用，最后形成邦氏帶。 這會(huì)改變受損傷的神經(jīng)環(huán)境和其使軸突再生的能力。當(dāng)軸突從“傳播”模式變化為生長模式時(shí)，營養(yǎng)因子、表達(dá)蛋白質(zhì)(GAP-43、微管蛋白、肌動(dòng)蛋白)、新型的神經(jīng)肽和細(xì)胞因子會(huì)促進(jìn)神經(jīng)元的存活。由于末梢神經(jīng)肢體支撐能力和再生的神經(jīng)元能力是不確定的(Fu and Gordon, Mol Neurobiol. 14 :67-116，1997)，因此需要新的能夠增強(qiáng)生長能力的方法。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白“神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白”、“神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-l”、“NRG-r’、“heregulin”指的是一種多肽，這種多肽能夠結(jié)合ErbBl受體、ErbB3受體或者ErbB 4受體,并且通過配對(二聚作用)作用結(jié)合ErbB2受體。例如，如美國專利第5，530，109號(hào)、美國專利第5，716，930號(hào)、和美國專利第7，037，888號(hào)所描述的，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以由pl85erbB2配位體基因編碼，這里提到的每個(gè)申請的全部內(nèi)容通過引證在此全部并入本文；神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白還可以由NRG-2基因、 NRG-3基因和NRG-4基因編碼。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以是GGF2或者其任何一種活性片段；神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白還可能是GGF2的一種保守變體，或者包括GGF2的分子。在本技術(shù)的一些用法中， 術(shù)語“神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白”是用來表明全神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白分子的EGF-樣區(qū)域；這也被叫做“神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-樣”蛋白質(zhì)、肽或者多肽?！吧窠?jīng)調(diào)節(jié)蛋白-樣”蛋白質(zhì)、肽或者多肽指的是具有EGF-樣區(qū)域的多肽，這種多肽是由一種神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白基因編碼的。在一個(gè)實(shí)施方案中，“神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-樣”蛋白質(zhì)、肽或者多肽對患有外周神經(jīng)創(chuàng)傷的主體或者有風(fēng)險(xiǎn)患有外周神經(jīng)創(chuàng)傷的主體(例如，預(yù)約外科手術(shù)的病人或者即將分娩的病人，都有發(fā)生相關(guān)外周神經(jīng)創(chuàng)傷的風(fēng)險(xiǎn))有治療作用。GGF2氨基酸序列(在包括EGF-樣區(qū)域的部分加了下劃線)是MRWRRAPRRSGRPGPRAQRPGSAARSSPPLPLLPLLLLLGTAALAPGAAAGNEAAPAGASVCYSSPPS VGSVQELAQRAAWIEGKVHPQRRQQGALDRKAAAAAGEAGAWG⑶REPPAAGPRALGPPAEEPLLAANGTVPSWP TAPVPSAGEPGEEAPYLVKVHQVWAVKAGGLKKDSLLTVRLGTWGHPAFPSCGRLKEDSRYIFFMEPDANSTSRAP AAFRASFPPLETGRNLKKEVSRVLCKRCALPPQLKEMKSQESAAGSKLVLRCETSSEYSSLRFKWFKNGNELNRKNK PQNIKIQKKPGKSELRINKASLADSGEYMCKVISKLGNDSASANITIVESNATSTSTTGTSHLVKCAEKEKTFCVN GGECFMVKDLSNPSRYLCKCPNEFTCDRCQNYVMASFYSTSTPFLSLPE(SEQ ID NO : I) (GenBank 編錄號(hào) AAB59622，通過弓I證在此全部并入本文)。在本發(fā)明的某些方面，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者其部分與 GGF2 的氨基酸序列具有 75，80，85，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99，或者 100% 的一致性或者與GGF2的氨基酸序列相同。在本發(fā)明的某些方面，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-樣多肽與 GGF2 的 EGF-樣區(qū)域的氨基酸序列具有 75，80，85，86，97，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99，或者100%的一致性或者與GGF2的EGF-樣區(qū)域的氨基酸序列相同。如這里所使用的，“蛋白質(zhì)”或者“多肽”指的是包括至少十個(gè)氨基酸殘基的分子。 在某些實(shí)施方案中，所述蛋白質(zhì)包括GGF2多肽的全部或者GGF2多肽的一部分。在一些實(shí)施方案中，使用野生型的蛋白質(zhì)或者多肽治療外周神經(jīng)創(chuàng)傷，但是，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，使用修飾的蛋白質(zhì)或者多肽治療外周神經(jīng)創(chuàng)傷。在這里，術(shù)語“肽”、“蛋白質(zhì)”或者“多肽”可以互換使用。為了方便起見，這里使用的術(shù)語肽指的是任意長度的氨基酸序列。“修飾的肽”指的是一種肽，這種肽的化學(xué)結(jié)構(gòu)，尤其是它的氨基酸序列是可以根據(jù)其各自的野生型肽發(fā)生變化的。在一些實(shí)施方案中，一種修飾的肽具有至少一個(gè)修飾的氨基酸。在一些實(shí)施方案中，一種修飾的肽具有至少一個(gè)d-氨基酸。在一些實(shí)施方案中， 一種修飾的肽具有至少一個(gè)非天然存在地氨基酸。不作為任何限制，在某些實(shí)施方案中，肽(野生型肽或者修飾的肽)的大小可以包括 5,6,7,8,9,10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30， 31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47，48，49，50，51，52，53，54，55， 56，57，58，59，60，61，62，63，64，65，66，67，68，69，70，71，72，73，74，75，76，77，78，79，80， 81，82，83，84，85，86，87，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99，100，110，120，130，140， 150，160，170，180，190，200，210，220，230，240，250，275，300，325，350，375，400，422 個(gè)或者更多的氨基分子，或者由其衍生的任意范圍的相應(yīng)氨基序列或者這里涉及的序列；在一個(gè)實(shí)施方案中，這些蛋白質(zhì)、多肽或者大小范圍以GGF2為準(zhǔn)?？梢灶A(yù)計(jì)，通過在氨基末端或者羧基末端截?cái)嗍惯@些多肽比它們相應(yīng)的野生型形式更短，進(jìn)行多肽突變，而且還可以通過使多肽與具有特定功能的異源蛋白質(zhì)(例如，用于靶定或者定位，用于純化，等到)融合或者共軛，進(jìn)行多肽突變。如這里所使用的，一種“氨基酸分子”指的是任意一種氨基酸、氨基酸衍生物、或者本領(lǐng)域內(nèi)已知的氨基酸模擬物。在某些實(shí)施方案中，所述肽分子的殘基是連續(xù)的，在氨基酸分子殘基中不存在任意氨基酸分子間斷。在其他的實(shí)施方案中，本序列可以包括一種或一種以上非氨基酸分子基團(tuán)。在具體的實(shí)施方案中，所述肽分子的殘基序列可以被一種或者一種以上非氨基酸分子基團(tuán)所間斷。因此，術(shù)語“肽”組合物包括氨基酸序列；這些氨基酸可以是任意具有20個(gè)共有氨基酸的天然合成的蛋白質(zhì)或者任意修飾的氨基酸或者罕見的氨基酸。使用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的任意一種技術(shù)制備肽組合物，包括(i)通過標(biāo)準(zhǔn)分子生物技術(shù)進(jìn)行肽表達(dá)，(2)從天然來源中分離肽化合物，或者(iii)化學(xué)合成。之前以及公開了某些神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白基因的核苷酸以及肽序列，并且這些神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白基因的核苷酸以及肽序列可以在受到認(rèn)可的計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)庫中發(fā)現(xiàn)。這種數(shù)據(jù)庫之一是國家生物技術(shù)信息中心的Genbank和GenPept數(shù)據(jù)庫(在世界寬帶網(wǎng)的ncbi. nlm. nih. gov上)。使用這里公開的技術(shù)或者本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的技術(shù)可以放大和/或表達(dá)這些基因的編碼區(qū)域。修飾的肽可以包括取代的變體、插入的變體或者缺失變體。缺失變體一般缺失天然分子或者野生型分子中的一種或者一種以上的殘基?？梢猿为?dú)的殘基，也可以除去一定數(shù)量的連續(xù)的氨基酸?？梢韵蚓幋a核苷酸序列中引入(通過取代作用或者插入作用) 終止密碼子，從而產(chǎn)生一種平截蛋白質(zhì)。插入性變體一般包括在肽的非末端位置加入材料。這可以包括插入一種或者一種以上的殘基。還可以產(chǎn)生末端添加，通常叫做融合蛋白質(zhì)或者融合肽。取代性變體通常包括肽內(nèi)部的一個(gè)或者一個(gè)以上位點(diǎn)上一個(gè)氨基酸與另一個(gè)氨基酸的交換，并且可能被設(shè)計(jì)從而調(diào)節(jié)肽的一種或者一種以上的性質(zhì)，同時(shí)發(fā)生或者不發(fā)生其他功能或者性質(zhì)損失，所述功能或者性質(zhì)例如，結(jié)合神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白受體和神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白受體的活化作用。取代作用可以是保守性的，也就是說，一個(gè)氨基酸被另一個(gè)具有相似形狀和電荷的氨基酸替換。做為選擇，取代作用可以是非保守性的，因此，肽的功能或者活性也受到影響。非保守性改變一般包括使用化學(xué)性質(zhì)不同的殘基取代一種殘基，例如，使用一種非極性的氨基酸或者不帶電的氨基酸取代極性氨基酸或者帶電荷的氨基酸，反之亦然。本領(lǐng)域內(nèi)已知的“保存性取代作用”包括，但是不局限于，例如，如下改變丙氨酸被絲氨酸所取代；精氨酸被賴氨酸所取代；天門冬酰胺被谷氨酰胺或者組氨酸所取代； 天冬氨酸被谷氨酸所取代；半胱氨酸被絲氨酸所取代；谷氨酰胺被天門冬酰胺所取代；谷氨酸被天冬氨酸所取代；甘氨酸被脯氨酸所取代；組氨酸被天門冬酰胺或者谷氨酰胺所取代；異亮氨酸被亮氨酸或者纈氨酸所取代；亮氨酸被纈氨酸或者異亮氨酸所取代；賴氨酸被精氨酸所取代；甲硫氨酸被亮氨酸或者異亮氨酸所取代；苯基丙氨酸被酪氨酸或者亮氨酸或者甲硫氨酸所取代；絲氨酸被蘇氨酸所取代；蘇氨酸被絲氨酸所取代；色氨酸被酪氨酸所取代；酪氨酸被色氨酸或者苯基丙氨酸所取代；以及纈氨酸被異亮氨酸或者亮氨酸所取代。應(yīng)該理解的是，氨基酸序列和核苷酸序列可以分別包括其他的殘基，例如其他的 N-末端氨基酸或者C-末端氨基酸、或者Y序列或者:V序列，前提是這些序列能夠滿足這里所闡述的功能性標(biāo)準(zhǔn)，例如，維持生物活性。末端序列的加成作用尤其適合于某些氨基酸序列，例如，在編碼區(qū)域的5'部分或者3'部分包括不同的非編碼序列側(cè)鏈的氨基酸序列。藥物制劑本發(fā)明的藥物制劑包括有效量的肽，這種肽溶化在或者分散在一種藥學(xué)上可接受的載體中。短語“藥學(xué)上可接受的或者藥理學(xué)上可接受的”指的是當(dāng)對主體給藥時(shí)，例如， 當(dāng)對人給藥時(shí)，通常不會(huì)產(chǎn)生不利反應(yīng)、過敏反應(yīng)或者其他不良反應(yīng)的組合物。根據(jù)本發(fā)明的公開，以及雷鳴氏藥物科學(xué)(第18版，Mack印刷公司，1990，通過引證在此全部并入本文)的例證，本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知這種藥物組合物的制備方法。此外，為了實(shí)現(xiàn)對人類給藥的目的，應(yīng)該理解的是，這些制備方法應(yīng)該滿足一些規(guī)定的無菌、致熱反應(yīng)、普遍安全性和純度標(biāo)準(zhǔn)，例如，美國食品藥物管理局生物標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定的。此外，如這里所使用的“藥學(xué)上可接受的載體”包括一些材料，例如，溶劑、分散介質(zhì)、包衣、表面活性劑、抗氧化劑、防腐劑(例如，抗細(xì)菌劑、抗真菌劑)、等滲試劑、吸收延遲試劑、鹽類、防腐劑、藥物、藥物穩(wěn)定劑、凝膠劑、粘合劑、賦形劑、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、調(diào)味劑、著色劑、這些類似的材料及其結(jié)合，如本發(fā)明所述領(lǐng)域普通技術(shù)人員參照本發(fā)明的公開所知。除去與活性成分不相容的常用載體之外，載體在治療組合物或者藥物組合物中的應(yīng)用是可以預(yù)計(jì)的。根據(jù)是否需要以固體、液體或者煙霧劑的形式給藥，以及是否需要被滅菌某種給藥途徑(例如，注射)，本發(fā)明的藥物可以包括不同類型的載體。本發(fā)明可以被靜脈內(nèi)給藥、皮內(nèi)給藥、動(dòng)脈內(nèi)給藥、腹膜內(nèi)給藥、病灶內(nèi)給藥、顱內(nèi)給藥、關(guān)節(jié)腔內(nèi)給藥、前列腺內(nèi)(intraprostaticaly)給藥、胸膜內(nèi)給藥、氣管內(nèi)給藥、經(jīng)鼻給藥、玻璃體內(nèi)給藥、陰道內(nèi)給藥、直腸內(nèi)給藥、腫瘤內(nèi)給藥、肌內(nèi)給藥、皮下給藥、結(jié)膜下給藥、氣囊內(nèi)給藥、粘膜給藥、心包內(nèi)給藥、臍內(nèi)給藥、intraocularally給藥、口服給藥、局部給藥、部分給藥、吸入給藥(例如，通過煙霧劑)。此外，本發(fā)明還可以通過注射給藥、輸液給藥、連續(xù)輸液給藥、直接局部灌注靶細(xì)胞給藥、通過導(dǎo)管給藥、通過洗胃給藥、或者通過其他方法或者前述的結(jié)合給藥，如本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的。本發(fā)明組合物向主體給藥的實(shí)際劑量可以通過物理因素和生理因素來確定，例如，體重、疾病的嚴(yán)重程度、被治療的疾病類型、之前發(fā)生的治療性干預(yù)或者并發(fā)性治療性干預(yù)、病人的并發(fā)癥以及給藥途徑。在任意情況下，負(fù)責(zé)給藥的醫(yī)生可以確定活性成分在組合物中的濃度和對單獨(dú)的個(gè)體給藥的適當(dāng)劑量。在某些實(shí)施方案中，藥物組合物可以包括，例如，至少大約O. 1%的活性化合物。在其他的實(shí)施方案中，一種活性化合物可以以大約2%到大約75%的重量單位被包括，或者在大約25%到大約60%的范圍內(nèi)被包括，例如，在其中的任意范圍內(nèi)。在其他非限制性的實(shí)施例中，一種劑量還可能包括每次給藥從大約I微克/千克/體重、大約5微克/千克/ 體重、大約10微克/千克體重、大約50微克/千克體重、大約100微克/千克體重、大約200 微克/千克體重、大約350微克/千克體重、大約500微克/千克體重、大約I毫克/千克體重、大約5毫克/千克體重、大約10毫克/千克體重、大約50毫克/千克體重、大約100 毫克千克體重、大約200毫克千克體重、大約350毫克千克體重、大約500毫克千克體重、到大約1000毫克/千克體重或更多，以及其中任意一種范圍。衍生自上述范圍的一種非限制性實(shí)施例中，根據(jù)上面所述的數(shù)量，可以給藥大約5毫克/千克/體重到大約100毫克/千克/體重、大約5微克千克/體重到大約500毫克/千克/體重、等等。在任意情況下，本發(fā)明組合物可以包括不同的抗氧化劑從而延遲一種或者一種以上組分的氧化過程。另外，通過添加防腐劑可以預(yù)防微生物的作用，所述防腐劑例如，不同的抗菌劑和抗真菌劑，包括，但是不局限于對羥苯甲酸(例如，對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯)、氯代丁醇、石炭酸、山梨酸、乙基汞硫代水楊酸鈉或者他們的混合物。該藥物可以被配制成一種組合物，以游離堿形式、中性形式或者鹽的形式存在。藥學(xué)上可接受的鹽包括酸加成鹽，例如，與肽組合物的游離氨基基團(tuán)形成的那些酸加成鹽，或者與無機(jī)酸形成的酸加成鹽，所述無機(jī)酸例如，鹽酸、磷酸，或者與有機(jī)酸(例如，醋酸、草酸、酒石酸或者苯乙醇酸)形成的酸加成鹽。與自由羧基基團(tuán)形成的鹽類還可以來源于無機(jī)堿，例如，比方說，鈉、鉀、銨、鈣或者氫氧化鐵；或者來源于有機(jī)堿，例如，異丙胺、三甲胺、 組氨酸或者普魯卡因。在組合物處于液體形式的實(shí)施方案中，載體可以是一種溶劑或者分散介質(zhì)，包括， 但是不局限于，水、醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液態(tài)的聚乙二醇，等等)、脂類(例如， 甘油三酯、植物油、脂質(zhì)體)和這些的組合。例如，通過使用包衣，例如卵磷脂，可以保持合適的流動(dòng)性；或者通過保持分散在載體中的必須的顆粒尺寸，也可以保持合適的流動(dòng)性，這里所述的載體例如，比方說，液態(tài)的多元醇或者脂類；通過使用表明活性劑，例如羥基丙基纖維素也可以保持合適的流動(dòng)性，或者這些方法的結(jié)合。在許多情況下，優(yōu)選地包括等滲試劑，例如，比方說，糖、氯化鈉或者其組合。在某些實(shí)施方案中，制備所述組合物用于口服給藥。在這些實(shí)施方案中，所述固體組合物可以包括，例如，溶液、懸浮液、乳化液、片劑、丸劑、膠囊劑(例如，硬殼明膠膠囊或者軟殼明膠膠囊)、持續(xù)釋放的試劑、口腔組合物、錠劑、酏劑、懸浮液、糖漿、圓片或者這些的結(jié)合?？诜M合物可以直接被整合到日常飲食的食品中。優(yōu)選的用于口服給藥的載體包括惰性稀釋劑，可吸收的食用載體或者這些的組合。在本發(fā)明的其他方面，所述口服的組合物可以被制備成一種糖漿或者酏劑。糖漿或者酏劑可以包括，例如，至少一種活性成分、一種甜味劑、一種防腐劑、一種調(diào)味劑、一種著色劑、一種防腐劑或者這些的組合。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，一種口服組合物可以包括一種或一種以上的粘合劑、 賦形劑、崩解試劑、潤滑劑、調(diào)味劑和這些的組合。在某些實(shí)施方案中，組合物可以包括一種或者一種以上的下列物質(zhì)一種粘合劑，例如，舉例來說，黃芪膠、阿拉伯樹膠、玉米淀粉、明膠或者這些的組合；一種賦形劑，例如，舉例來說，磷酸氫鈣、甘露糖醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂或者這些的組合；一種崩解劑，例如，舉例來說，玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、海藻酸或者這些的組合；一種潤滑劑，例如，舉例來說，硬脂酸鎂；一種甜味劑，例如,舉例來說,鹿糖、乳糖、糖精或者這些的組合；一種調(diào)味劑，例如，舉例來說，薄荷香精、水楊酸甲酯、櫻桃香料、橙子香料，等等；或者上述這些的組合。當(dāng)所述劑量單位形式是一種膠囊劑時(shí),她可以含有除了上述類型的材料之外的其他載體,例如,一種液態(tài)載體。各種各樣的其他材料可以當(dāng)作包衣存在，或者用于修飾所述劑量單元的外觀形態(tài)。舉例來說，片劑， 丸劑，或者膠囊劑可以包覆有蟲膠、糖或者兩個(gè)都有。通過將必需量的本發(fā)明的活性化合物混合在適當(dāng)?shù)娜軇┲?，以及選擇性與其他另外一種上面列舉的成分相混合，隨后進(jìn)行過濾滅菌，就可以制備無菌的可注射溶液。通常， 通過將各種滅菌活性成分與含有基本分散介質(zhì)和/或其他成分的無菌媒介物相混合來制備分散體系。對于用于制備無菌可注射溶液、懸浮液或者乳化液的無菌粉末來說，優(yōu)選的制備方法是真空干燥或者冷凍干燥技術(shù)，這些技術(shù)產(chǎn)生活性成分加上任何一種其他的理想成分的粉末，所述其他的理想成分選自之前的無菌過濾后的液體介質(zhì)。如果需要的話，應(yīng)該將液體介質(zhì)進(jìn)行適當(dāng)?shù)木彌_，并且在與足夠的鹽水或者葡萄糖一起注射之前，首先將液體稀釋劑變得等滲。本發(fā)明還包括能夠用于直接注射的高鹽度組合物的制備，其中，可以預(yù)見， 使用二甲亞砜作為溶劑會(huì)產(chǎn)生非?？斓拇┩噶Γ谛∶娣e內(nèi)傳遞高濃度的活性試劑。優(yōu)選的，本發(fā)明組合物在標(biāo)準(zhǔn)制造和存儲(chǔ)條件下是穩(wěn)定的，并且，被保藏免受微生物(例如，細(xì)菌和真菌)污染。應(yīng)當(dāng)理解，內(nèi)毒素污染應(yīng)該被保持在安全水平的最低限度， 例如，少于O. 5納克/毫克蛋白質(zhì)。在具體的實(shí)施方案中，通過加入含有延遲吸收試劑的本發(fā)明組合物的方法會(huì)延長可注射組合物的吸收，所述延遲吸收試劑例如，舉例來說，單硬脂酸鋁、明膠或者這些的組
口 ο
實(shí)施例實(shí)施例I :海綿體神經(jīng)損傷的大鼠樽型海綿體神經(jīng)損傷的大鼠模型通常使用下列工藝。使用異氟烷麻痹大鼠。將動(dòng)物放置于加熱地毯上，維持動(dòng)物體溫在37°C。將腹部刮干凈并使用防腐的Clinidin溶液(聚乙烯吡酮碘)擦凈。隔開腹膜腔的中下腹部，使海綿體神經(jīng)和主要的盆神經(jīng)節(jié)(MPGs)暴露出來。通過使用止血?jiǎng)浩坪＞d體神經(jīng)兩分鐘，導(dǎo)致海綿體神經(jīng)損傷。在與神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白有關(guān)的研究中，在損傷發(fā)生之前，對兩個(gè)神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白組進(jìn)行48小時(shí)的治療。大鼠壓破模型提供了一種簡單的、可再生的并且非常穩(wěn)妥的勃起功能減小。本技術(shù)被廣泛的應(yīng)用并且已經(jīng)有一些使用這些技術(shù)的研究被公布。在擠壓損傷之后，不需要檢查勃起功能，勃起功能的減小是可以預(yù)計(jì)的，并且通常，在擠壓損傷大約5周之后進(jìn)行功能性測試。在對海綿體神經(jīng)進(jìn)行損傷之后，通過2-3間斷縫合術(shù)，將腹腔與腹肌的 reapproximation和筋膜分兩層縫合在一起(吸收性縫線)。使用一種皮下(包埋)連續(xù)縫合術(shù)縫合皮膚，將皮膚與非油繩(PDS或者包覆的vicryl)縫合材料縫合起來。先給藥丁丙諾啡止痛劑(在過程完成之前10分鐘)，并在手術(shù)后48小時(shí)內(nèi)每6-12小時(shí)給藥來控制疼痛。手術(shù)后大約5周后，使用氯胺酮(100毫克/千克腹內(nèi)給藥)和甲苯噻嗪(5毫克/ 千克)麻痹大鼠。通過相同的切割法切開陰莖腳，使用23G針插入右邊的腳然后與一種軟件程序相連進(jìn)行功能性研究，所述軟件程序?qū)ｉT被設(shè)計(jì)用于測定陰莖海綿體內(nèi)壓力。在進(jìn)行測量之前，用一種電極在I. 5毫安下刺激海綿體神經(jīng)。測定過程的時(shí)間大約是15分鐘。在麻醉恢復(fù)之前，對心肌內(nèi)注射治安樂死試劑使大鼠安樂死，并收集組織(海綿體神經(jīng)、MPG、 陰莖、前列腺)進(jìn)行光學(xué)顯微鏡檢查法，同時(shí)評(píng)價(jià)分子和組織。如圖I中顯示的存在于陰莖海綿體內(nèi)壓力(ICP)內(nèi)的數(shù)據(jù)，在損傷后5周對海綿體神經(jīng)的電刺激法顯示，在神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-治療組中，神經(jīng)和末端器官功能都被明顯的保存，這一結(jié)果在更高的劑量條件下更為明顯。首先通過非重復(fù)的二因素方差分析測定法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，其Bonfeironi t_測驗(yàn)和顯著性假定為p < O. 05。所有的結(jié)果以平均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差來表示。如圖2所示，當(dāng)主動(dòng)脈壓正?；瘯r(shí)，這個(gè)改變還會(huì)被顯著改善。從組織學(xué)觀點(diǎn)來看，根據(jù)在MPG中使用熒光金向后運(yùn)輸標(biāo)記物獲得的數(shù)據(jù)表明， NRG治療增加了完整神經(jīng)纖維的數(shù)目，并改善了神經(jīng)元一氧化氮合成酶和來自陰莖神經(jīng)和平滑肌組織的泡狀乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(VaChT)的改善的保存能力，這個(gè)現(xiàn)象說明這里存在著神經(jīng)保護(hù)和/或神經(jīng)再生作用機(jī)制。與沒有受到任何一種神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的擠壓損傷動(dòng)物相比，平滑肌凋亡被減少。實(shí)施例2 :費(fèi)光金組織學(xué)方法為了進(jìn)行這個(gè)方案，肋內(nèi)注射4%的熒光金，并在一周之后收獲主要的盆神經(jīng)節(jié) (MPG)組織，并固定在4%的多聚甲醛、O. IM磷酸鹽緩沖液中，固定整夜，然后被放置于20% 的蔗糖中。低溫切割機(jī)的厚度為20微米。使用超位數(shù)照相機(jī)和成像系統(tǒng)攝像，隨后分析熒光金增強(qiáng)的細(xì)胞計(jì)數(shù)。其后，隨機(jī)選擇主要的盆神經(jīng)節(jié)(MPG)樣本幻燈片(每種動(dòng)物選擇10個(gè))并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，從而確定完整的神經(jīng)元的數(shù)目。(參見，例如，Dail，W.G.， Trujillo，D.，de la Rosa，D.and Walton, G. Autonomic innervation of reproductive organs analysis of the neurons whose axons project in the main penile nerve in the pelvic plexus of the rat (生殖器官的自發(fā)神經(jīng)分布大鼠骨盆叢中主要陰莖神經(jīng)上的軸突計(jì)劃的神經(jīng)元分析)· Anat Rec, 224 :94,1989 ；Laurikainen A，Hiltunen JO, Vanhatalo S，Klinge E，Saarma M Glial cell line-derived neurotrophic factor is expressed in penis of adult rat and retrogradely transported in penile parasympathetic and sensory nerves (膠質(zhì)細(xì)胞系衍生的神經(jīng)營養(yǎng)性因子在成年大鼠的陰莖中的表達(dá)和在陰莖副交感神經(jīng)和感覺神經(jīng)中膠質(zhì)細(xì)胞系衍生的神經(jīng)營養(yǎng)性因子的向后運(yùn)輸)· (Cell Tissue Res 2000 (細(xì)胞組織研究，2000)，302 :321-9.)因此，這是使用熒光金的一種退行性的痕量方案。這些方案產(chǎn)生的結(jié)果提供的信息表明，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白治療法幫助海綿體神經(jīng)再生并再投影到其靶分子(陰莖的海綿體) 上和/或海綿體神經(jīng)的神經(jīng)保護(hù)。因此，將熒光金注射到靶器官中，在本發(fā)明情況下，注射到陰莖體中。其后，被末端器官神經(jīng)末梢吸收。這種吸收表明神經(jīng)纖維被保存和/或再生進(jìn)入注射區(qū)域。一旦熒光金被吸收，熒光金以一種退行性方式被運(yùn)輸?shù)缴窠?jīng)軸突中，并且，該標(biāo)記物被累積入主要的盆神經(jīng)節(jié)(MPG)的原始神經(jīng)元中。圖3顯示了來自每個(gè)治療組((組A)正常組、(組B)擠壓組、(組C)擠壓+GGF2) 的三種動(dòng)物的代表性的主要的盆神經(jīng)節(jié)(MPG)熒光金標(biāo)記物。正常的動(dòng)物(組A)表示在不存在神經(jīng)損傷的情況下觀察到的退行性標(biāo)記數(shù)值。擠壓動(dòng)物(組B)說明損傷后的完整神經(jīng)纖維急劇減少，因此，熒光金標(biāo)記物不能被運(yùn)輸回到主要的盆神經(jīng)節(jié)(MPG)。擠壓+GGF2 動(dòng)物(組C)顯示熒光金標(biāo)記的主要的盆神經(jīng)節(jié)(MPG)細(xì)胞的增加，這說明在損傷之后，作為GGF2治療的結(jié)果，神經(jīng)纖維存在更好的保藏。圖4提供了在所述主要的盆神經(jīng)節(jié)(MPG)中的熒光金標(biāo)記物的量。正常動(dòng)物在主要的盆神經(jīng)節(jié)(MPG)中具有大量標(biāo)記的細(xì)胞體。在擠壓損傷之后，標(biāo)記的細(xì)胞數(shù)目急劇減少，由于神經(jīng)纖維損害，標(biāo)記物不能向后運(yùn)輸回到主要的盆神經(jīng)節(jié)(MPG)。GGF2治療法改良的完整的神經(jīng)纖維數(shù)目使熒光劑能夠從陰莖組織以一種推行性方式運(yùn)輸?shù)街饕呐枭窠?jīng)節(jié)(MPG)，導(dǎo)致更大數(shù)目的標(biāo)記細(xì)胞。實(shí)施例3 :免疫組織化學(xué)對陰莖體的最接近縱向低溫切割面進(jìn)行nNos、泡狀乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(VaChT)染色。使用含有I1^triton-X的三羥甲基氨基甲烷緩沖液進(jìn)行洗滌。使用5%的正常山羊血清阻斷組織I小時(shí)，然后在4攝氏度條件下培養(yǎng)整夜a) nNOs (Sigma ； I/1000)或者b) VaChT (Abeam ； 1/150)或者c) TH (Mi 11 ipore ； 1/5000)。在沖洗幾次之后，在山羊-抗-兔子HRP和驢抗山羊(1/1000)中培養(yǎng)片段I小時(shí)， 然后在含有O. 2%的硫酸鎳銨和O. 03%過氧化氫的DAB溶液中培養(yǎng)10分鐘。在最后洗滌之后，對片段進(jìn)行脫水，在二甲苯中純化，并裝在Permount (Fisher科學(xué)技術(shù)公司)上。nNos 著色在陰莖海綿體內(nèi)的海綿體神經(jīng)軸突端板中釋放一氧化氮(NO)，這種一氧化氮與內(nèi)皮一氧化碳一起造成平滑肌的松弛，引發(fā)陰莖勃起的血液動(dòng)力學(xué)改變，同時(shí)促進(jìn)腫大維持。 目前普遍的理解是，海棉體神經(jīng)在損傷之后的效力恢復(fù)依賴于，或者至少部分地依賴于軸突在維持神經(jīng)組織中的再生以及末端器官的成功的功能性神經(jīng)再分布。在海綿體神經(jīng)損害后的陰莖動(dòng)物模型研究中，可以觀察到明確定義的病理學(xué)改變。這些病理學(xué)改變可以在神經(jīng)失用到致命的軸突損害范圍內(nèi)變化，并且會(huì)包括平滑肌凋亡、內(nèi)皮凋亡、一氧化氮合成酶 (NOS)神經(jīng)密度的減少、纖維增值性細(xì)胞因子(例如，轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)的上調(diào)節(jié)、 平滑肌纖維癥或者損失、或者病理學(xué)信號(hào)反應(yīng)(例如改變的音猬因子蛋白質(zhì))。
另外，由海綿體神經(jīng)的神經(jīng)失用次生出勃起的慢性喪失。在延長的恢復(fù)期間，由于正常睪丸不能正常的在松馳和勃起狀態(tài)之間轉(zhuǎn)換，這一狀態(tài)被認(rèn)為加重了睪丸平滑肌進(jìn)一步結(jié)構(gòu)損壞的效力(Bella AJ, Lin G, Fandel TM, Hickling DR, Morash C, Lue TF. Nerve growth factor modulation of the cavernous nerve response to injury (海綿體神經(jīng)對損傷的反應(yīng)的神經(jīng)生長因子調(diào)節(jié))· J Sex Med 6 Suppl 3 :347-352,2009.)。海綿狀的nNOS是一種大家公認(rèn)的海綿體神經(jīng)保藏標(biāo)記物。(參見，例如，http:// onlinelibrary. wiley. eom/doi/10. 1111/j. 1464-410X. 2010. 09364. x/full)這一方案的結(jié)果顯示了根據(jù)實(shí)施例I的方案產(chǎn)生的大鼠海綿體神經(jīng)兩面損傷之后的神經(jīng)保護(hù)和/或神經(jīng)再生作用。密度著色結(jié)果(代表性的鄰近軀干部分，5個(gè)隨機(jī)選擇的幻燈片，觀察著未知-每個(gè)實(shí)驗(yàn)組5個(gè)動(dòng)物)表明對使用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白治療的主體進(jìn)行的nNOS著色保藏。圖5提供了 nNos水平代表性的染色水平。染色密度表明nNOS的存在。這些工作的結(jié)果包括正常組織染色(組A)。比較起來，在海綿體神經(jīng)擠壓損傷(組B)之后，存在顯著的nNOS著色損失。陰莖體中海綿體神經(jīng)末梢的保藏的nNOS著色表明，在使用GGF2治療擠壓損傷之后(組C)，海綿體神經(jīng)存活和/或再生速率增加。著色密度表明使用GGF2治療后nNOS著色的保減作用。泡狀乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(VaChT)著色盆神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元刺激陰莖表達(dá)nNOS和膽堿能標(biāo)記物，并且刺激陰莖的交感去甲腎上腺素激活的神經(jīng)分布，這種盆神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元通過交感神經(jīng)干大量增多，并不截?cái)嚓幥o神經(jīng)或者盆神經(jīng)節(jié)。這些方案產(chǎn)生的結(jié)果提供的信息表明，根據(jù)泡狀乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 (VaChT)的肋內(nèi)著色，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白治療法幫助海綿體神經(jīng)再生并再投影到其靶分子(陰莖的海綿體)上和/或海綿體神經(jīng)的神經(jīng)保護(hù)。雖然外科手術(shù)后勃起功能失調(diào)(ED)的原始病因是神經(jīng)原性的，在嚙齒動(dòng)物中進(jìn)行的研究揭示了在陰莖神經(jīng)損傷之后，勃起組織內(nèi)部也存在形態(tài)學(xué)變化和功能性變化。((參見，例如，Keast JR-Plasticity of pelvic autonomic ganglia and urogenital innervation(骨盆自主神經(jīng)節(jié)的柔軟性和泌尿生殖器的神經(jīng)分布).Int Rev Cytol 2006 ;248 :141-208 ;Andersson KE, Hedlund P, Aim P. Sympathetic pathways and adrenergic innervation of the penis (陰莖腎上腺素神經(jīng)分布和合成途徑).Int J Impot Res 2000 ；12 S5-12 ；Mulhall JM, Bella AJ, Briganti A,McCullough A,Brock G. Erectile Function Rehabilitation in the Radical Prostatectomy Patient (根治性前列腺切除術(shù)病人中的勃起功能康復(fù)治療).J Sex Med 7(4)，1687-1698,2010)。密度著色結(jié)果(代表性的鄰近軀干部分，5個(gè)隨機(jī)選擇的幻燈片，觀察著未知-每個(gè)實(shí)驗(yàn)組5個(gè)動(dòng)物)表明對使用GGF2治療的主體進(jìn)行的泡狀乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(VaChT)
著色保藏。圖7提供了代表性的泡狀乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(VaChT)的免疫組織化學(xué)著色。著色密度表明泡狀乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(VaChT)的存在。結(jié)果包括正常組織染色(組A)、以及海綿體神經(jīng)擠壓損傷(組B)之后泡狀乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(VaChT)著色的明顯減少。相反，組 C中顯示的陰莖體中海綿體神經(jīng)末梢的保藏的泡狀乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(VaChT)著色說明，在使用GGF2治療擠壓損傷之后(組C)，海綿體神經(jīng)存活和/或再生速率增加。著色密度表明使用GGF2治療后泡狀乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(VaChT)著色的保藏作用。TH 著色TH是一種腎上腺素能纖維的標(biāo)記物，并且可以被用于支持神經(jīng)在睪丸體中的保藏。睪丸體的臨近部分被縱向低溫切割，并使用一元抗體染色，所述一元抗體是由鄰苯二酚胺合成的標(biāo)記物，酪氨酸羥化酶產(chǎn)生的(在大鼠陰莖神經(jīng)損傷之后被損壞的海綿體神經(jīng)移植術(shù)，具有新陳代謝綜合癥的特點(diǎn)，Matthew R. Nangle, BSc, PhD, Joseph Proietto, MBBS, PhD, and Janet R. Keast, BSc, PhD J Sex Med 2009 ；6 :3032-3044)。著色密度結(jié)果表明TH的存在。實(shí)際上實(shí)現(xiàn)的著色密度結(jié)果(代表性的鄰近軀干部分，5個(gè)隨機(jī)選擇的幻燈片，觀察著未知-每個(gè)實(shí)驗(yàn)組5個(gè)動(dòng)物)表明對使用ggf2治療的動(dòng)物進(jìn)行的TH著色保藏。圖6提供了代表性的酪氨酸羥化酶(TH)著色水平。結(jié)果包括正常組織染色(組A)、以及海綿體神經(jīng)擠壓損傷(組B)之后酪氨酸羥化酶(TH)著色的明顯減少。組C顯示了，相對于使用GGF2治療擠壓損傷之后(組C)陰莖神經(jīng)分布保藏的一般性增加，陰莖體中海綿體神經(jīng)末梢的保藏的酪氨酸羥化酶(TH)著色更好。著色密度顯示使用GGF2治療后酪氨酸羥化酶(TH)著色的保藏作用。圖6提供了代表性的酪氨酸羥化酶(TH)著色水平。結(jié)果包括正常組織染色(組 A)、以及海綿體神經(jīng)擠壓損傷(組B)之后酪氨酸羥化酶(TH)著色的明顯減少。組C顯示了，相對于使用GGF2治療擠壓損傷之后(組C)陰莖神經(jīng)分布保藏的一般性增加，陰莖體中海綿體神經(jīng)末梢的保藏的酪氨酸羥化酶(TH)著色更好。著色密度顯示使用GGF2治療后酪氨酸羥化酶(TH)著色的保藏作用。實(shí)施例4 :作為替換的實(shí)施方案在任何一種外科手術(shù)過程中幾乎都會(huì)發(fā)生外周神經(jīng)創(chuàng)傷。神經(jīng)損傷的可能性與外科手術(shù)中組織解剖的位置和程度有關(guān)。例如，外科乳房切除術(shù)常常發(fā)生由外周神經(jīng)創(chuàng)傷引起的并發(fā)癥，包括腋窩和手臂的麻痹(例如，損傷到肋間臂神經(jīng))、翼狀肩胛的麻痹的(損傷到胸長神經(jīng))、背闊肌的麻痹(損傷到胸背神經(jīng))。(參見，Watt-Boolsen et al. , 1988 ；Aitken and Minton, 1983)。因此，無論在乳房切除術(shù)之前使用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白、在乳房切除術(shù)之后使用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白還是在乳房切除術(shù)之前和之后都使用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白，都會(huì)限制神經(jīng)損傷和/或增強(qiáng)周圍神經(jīng)功能的恢復(fù)。在手術(shù)之前24小時(shí)時(shí)，對計(jì)劃進(jìn)行乳房切除術(shù)的病人進(jìn)行適當(dāng)量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白治療。選擇性地，在手術(shù)之后，病人也可以繼續(xù)治療長達(dá)6周的時(shí)間，從而加速神經(jīng)恢復(fù)。在作為選擇的實(shí)施方案中，病人只在手術(shù)之前或者只在手術(shù)之后被治療。如這里提到的，進(jìn)行腫瘤外科切除術(shù)(前列腺切除術(shù)、乳房切除術(shù)、甲狀腺切除術(shù)，等等)之后使用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白預(yù)防神經(jīng)損傷。應(yīng)當(dāng)注意到，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白已經(jīng)被用作啟動(dòng)子并且可以作用抑制因子，抑制腫瘤細(xì)胞形成和生長(Atlas et al.，2003 ；Chua et al. , 2009) 神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白治療可以或者不可以對患有某些腫瘤的病人使用。只有當(dāng)足夠安全時(shí)才使用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白治療患有erbB陽性腫瘤的病人，研究表明神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白不會(huì)增加腫瘤的生長。而且，外科造成的神經(jīng)損傷的治療不局限于乳房切除術(shù)和前列腺切除術(shù)。神經(jīng)損傷常常發(fā)生在包括明顯的解剖和/或切除術(shù)的外科手術(shù)中。這些外科手術(shù)包括，但是不局限于，上肢科手術(shù)、手部外科手術(shù)、膝外科手術(shù)/置換、臀部外科手術(shù)/替換、肘外科手術(shù)/替換、頸部動(dòng)脈和靜脈外科手術(shù)解剖、甲狀腺外科手術(shù)、扁桃體切除術(shù)、手腳外科手術(shù)。外周神經(jīng)創(chuàng)傷常見于骨盆外科手術(shù)、腹部外科手術(shù)和結(jié)腸直腸外科手術(shù)。神經(jīng)損傷也發(fā)生在口部和臉部的外科手術(shù)中。除了外科手術(shù)中的解剖和切除對神經(jīng)的直接損傷之外，神經(jīng)損傷還常常由于外科手術(shù)過程中給病人移位、擠壓接觸點(diǎn)或者擠壓或者拉伸神經(jīng)造成、由于褶裥、限制、剪、絞或者其他任意一種會(huì)擠壓組織的行為造成。這是外科手術(shù)不可避免的結(jié)果或者不適當(dāng)手術(shù)的結(jié)果。無論外周神經(jīng)創(chuàng)傷的起因或者病理如何，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白都能夠預(yù)防和/或治療這種損傷。對于人類而言，臨床試驗(yàn)顯示了 NRG預(yù)防并且治療外周神經(jīng)創(chuàng)傷的效果，在所述臨床試驗(yàn)中，評(píng)價(jià)使用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白治療的病人與使用安慰劑治療病人的常見受影響的神經(jīng)區(qū)域中感覺功能和/或運(yùn)動(dòng)機(jī)能的數(shù)據(jù)。舉例來說，通過標(biāo)準(zhǔn)神經(jīng)病學(xué)感覺功能方法可以檢查腋窩麻痹程度，所述方法包括異常性疼痛(allodynia)檢驗(yàn)、痛覺過敏檢驗(yàn)、感覺閾檢驗(yàn)或者敏銳度檢驗(yàn)(二點(diǎn)辨別覺)。這些方法在本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)是標(biāo)準(zhǔn)的。手術(shù)后，對病人進(jìn)行一段時(shí)間的治療，并對使用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白治療的病人和使用參照物治療的病人之間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。根據(jù)這些試驗(yàn)，在外科手術(shù)之前和/或之后進(jìn)行NRG治療可以預(yù)防和/或治療外周神經(jīng)創(chuàng)傷。類似于上述試驗(yàn)的方法也可以被用于與相似的方式評(píng)價(jià)驅(qū)動(dòng)力量、活動(dòng)范圍和協(xié)調(diào)性。依照這些試驗(yàn)，在手術(shù)之前或者之后進(jìn)行NRG治療以及被發(fā)現(xiàn)能夠預(yù)防和/或治療外周神經(jīng)創(chuàng)傷(所述外周神經(jīng)創(chuàng)傷會(huì)導(dǎo)致發(fā)力、關(guān)節(jié)活動(dòng)范圍或者協(xié)調(diào)性中一種或者一種以上的損傷)。
權(quán)利要求
1.一種預(yù)防或者治療外周神經(jīng)創(chuàng)傷的方法，包括對具有患上外周神經(jīng)損傷風(fēng)險(xiǎn)的主體或者以及患有外周神經(jīng)創(chuàng)傷的主體給藥有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中，在一種外科手術(shù)過程之前，給藥神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中，所述外科手術(shù)過程是一種前列腺癌癥外科手術(shù)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述外科手術(shù)過程是一種前列腺切除術(shù)。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中，在嬰兒降生之前對待產(chǎn)婦給藥神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中，在治療乳腺癌之前，對病人給藥神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述乳腺癌的治療是乳房完全切除術(shù)或者乳房部分切除術(shù)。
8.一種治療或者prophylaxing由外周神經(jīng)創(chuàng)傷引起的勃起功能失調(diào)的方法,包括對患有外周神經(jīng)損傷導(dǎo)致的勃起功能失調(diào)的主體或者對有風(fēng)險(xiǎn)患有這種外周神經(jīng)創(chuàng)傷的風(fēng)險(xiǎn)的主體分別給藥治療有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。
9.一種診斷病人勃起功能失調(diào)病因?qū)W的方法，所述方法包括以下步驟對患有勃起損傷的病人給藥有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白；并且此后，識(shí)別所述勃起功能失調(diào)是否減輕；因此， 如果給藥之后勃起功能失調(diào)被減輕了，則該病人被診斷為患有外周神經(jīng)損害后的勃起功能失調(diào)。
全文摘要
本發(fā)明的實(shí)施方案指的是使用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白預(yù)防或者治療外周神經(jīng)損傷，從而減少、緩解、或者避免外周神經(jīng)功能損失。
文檔編號(hào)A61P25/02GK102596225SQ201080046238
公開日2012年7月18日 申請日期2010年10月14日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月14日
發(fā)明者A·J·貝拉, A·O·卡賈諾, J·F·亞奇 申請人:阿寇達(dá)醫(yī)療有限公司