專利名稱：多環(huán)化合物作為抗aids劑的制藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明總體涉及多環(huán)化合物，即巨大戟二萜醇(ingenol)和羊毛甾_8，24-二烯-3-醇化合物及其混合物作為抗-AIDS劑的制藥用途。
背景技術(shù)：
獲得性免疫缺陷綜合癥(又稱艾滋病)是由人類免疫缺陷病毒(HIV)引起的人體免疫系統(tǒng)(HIV)的一種疾病。該綜合征漸進(jìn)地降低免疫系統(tǒng)的效力，并使個(gè)體易受機(jī)會(huì)性感染和腫瘤影響。HIV通過(guò)粘膜的直接接觸或包含病毒的體液如血液、精液、陰道液、尿道液和乳汁傳播。 AIDS如今普遍流行。根據(jù)衛(wèi)生組織的數(shù)據(jù)，在2007年，估計(jì)全球有33. 2百萬(wàn)人具有該病，AIDS使估計(jì)2. I百萬(wàn)人喪命，包括330，000名兒童。AIDS的病理生理學(xué)較復(fù)雜，通常伴隨所有的綜合癥。HIV是首先感染人類免疫系統(tǒng)重要器官如CD4+ T細(xì)胞(T細(xì)胞的亞組)、巨噬細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)錄病毒。它直接和間接地破壞CD4+ T細(xì)胞。T淋巴細(xì)胞對(duì)免疫反應(yīng)很關(guān)鍵，沒(méi)有他們，機(jī)體不能對(duì)抗感染或殺死癌細(xì)胞。這削弱免疫系統(tǒng)并允許機(jī)會(huì)性感染。盡管有可以減緩病程的AIDS治療方法，目前還沒(méi)有公開(kāi)可用的HIV疫苗或HIV或AIDS的治療方法。已知唯一的預(yù)防方法是避免暴露于病毒，或者做不到這一點(diǎn)，在高度危險(xiǎn)暴露后直接進(jìn)行抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療，被稱為暴露后預(yù)防(PEP)。抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療降低HIV感染的死亡率和發(fā)病率，但這些藥物昂貴并且抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物的常規(guī)應(yīng)用不是適用于所有國(guó)家。它還有非常不適的副作用，包括腹瀉、不適、惡心和疲勞。在缺乏抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療的情況下，從HIV感染到AIDS進(jìn)展的平均時(shí)間是幾乎十年，根據(jù)HIV亞型，發(fā)生AIDS后的平均存活時(shí)間只有幾個(gè)月。當(dāng)前HIV感染的治療由高活性抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法組成，通常，包括由屬于至少有兩個(gè)類型的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物的至少三種藥物組成的組合(或“雞尾酒”)。治療的不依從與不持久是為什么有些人未從抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法受益的主要原因。不依從與不持久的原因是多種多樣的。主要社會(huì)心理問(wèn)題包括難以獲得醫(yī)療保健、社會(huì)支持不足、精神疾病和濫用藥物?？鼓孓D(zhuǎn)錄病毒療法也可以是復(fù)雜的，因此很難依從頻繁服用大量藥丸。副作用也可以阻止人們堅(jiān)持抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療，這些包括脂肪代謝障礙、血脂異常、腹瀉、胰島素抵抗、心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)的增加和出生缺陷。自1987年以來(lái)，AZT和類似的核苷類似物的長(zhǎng)期給藥已經(jīng)作為最常用的治療開(kāi)給AIDS患者以抑制人類免疫缺陷病毒(HIV)。自1990年以來(lái)，AZT也已經(jīng)被開(kāi)藥給健康的HIV抗體陽(yáng)性者以預(yù)防AIDS。原理在于以不抑制細(xì)胞DNA合成的劑量抑制HIV DNA合成(Chiu等The toxicity of azi do thymidine (AZT) on human and animal cells in culture atconcentrations used for antiviral therapy, Genetica 95:103-109,1995)。然而，鑒于其固有的毒性和血液學(xué)毒性，AZT作為一種可接受的抗HIV藥物已受到質(zhì)疑(上面提到的 Chiu 等和 Clotet 等:Toxicity of Zidovudine (AZT) in patientswith AIDS. Int Conf AIDS 4-9; 5:338 1989)。
一些獨(dú)立的研究報(bào)道，AZT對(duì)培養(yǎng)的人體細(xì)胞有毒性，即半數(shù)抑制劑量(ID 50)范圍為l-50nM。根據(jù)這些結(jié)果，在20-60 nM AZT治療的人類中記錄到威脅生命的毒性包括貧血、白細(xì)胞減少、惡心、肌肉萎縮、癡呆癥、肝炎和死亡率，即AZT作為抗HIV藥物的可取性可以重新考慮(上面提到的Chiu等)。
改善目前的治療的研究包括降低現(xiàn)有藥物的副作用、進(jìn)一步簡(jiǎn)化藥物方案以改善依從性以及確定治療方案的最佳順序以管理耐藥性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及巨大戟二萜醇(ingenol)和羊毛留_8，24-二烯_3_醇化合物及其混合物或包含它們的組合物在無(wú)目前已知的缺點(diǎn)即毒性相關(guān)的情況下用于顯著有效治療AIDS的用途。不排除任何其他的，適宜的巨大戟二萜醇化合物是3_(2，4，6 -十二碳三烯?；?巨大戟二萜醇、3_(2，4，6，8-十四碳四烯酰基)-巨大戟二萜醇、其藥學(xué)可接受的鹽、異構(gòu)體、多晶型物、溶劑化物或水合物、前藥或其代謝物中的一種或多種。巨大戟二萜醇化合物可以例如從大戟科植物或通過(guò)化學(xué)合成獲得，該途徑與本發(fā)明無(wú)關(guān)。例如，可能根據(jù)國(guó)際專利公開(kāi)WO 2007000618作為大戟科植物乳膠的極性溶劑提取物的級(jí)份提供足量的巨大戟二萜醇化合物。不排除任何其他的，適宜的羊毛甾-8，24- 二烯-3-醇是大戟二烯醇(euphol) (RN514-47-6)、甘遂醇(tirucallol) (RN 514-46-5)和羊毛甾醇(Ianosterol) (RN 79-63-0)、其藥學(xué)可接受的鹽、異構(gòu)體、晶體和多晶型物、溶劑化物或水合物、前藥或其代謝物中的一種或多種。羊毛留_8，24- 二烯-3-醇可以例如從大戟科植物或通過(guò)化學(xué)合成獲得，該途徑與本發(fā)明無(wú)關(guān)。適宜的巨大戟二萜醇和羊毛甾_8，24- 二烯-3-醇的混合物的范圍為1:100-100:1，尤其是 1:50-50:1，更尤其是 1:10-10:1，更尤其是 1:4-4: I。因此，在第一個(gè)方面，本發(fā)明涉及巨大戟二萜醇(ingenol)和/或羊毛留_8，24- 二烯-3-醇化合物在制備用于抑制人類免疫缺陷病毒復(fù)制，即用于治療HIV感染，AIDS的藥物組合物的用途。本發(fā)明的巨大戟二萜醇和羊毛留-8，24- 二烯-3-醇化合物、它們的混合物和本發(fā)明的包含它們的組合物，可以以任何適宜途徑、腸內(nèi)或腸胃外給藥于需要治療的受試者，包括口服、外用、透皮、皮下、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、通過(guò)滲透、通過(guò)吸入、經(jīng)皮、經(jīng)粘膜、肌肉內(nèi)、肺內(nèi)、陰道、直腸、眼內(nèi)和舌下。本發(fā)明的適宜的給藥途徑是局部和全身的(滲透、口服、噴霧吸入、經(jīng)皮)。本發(fā)明的巨大戟二萜醇化合物可以包含在緩釋或控釋組合物中。已知的佐劑和賦形劑可以應(yīng)用于包含巨大戟二萜醇化合物的組合物-用于本發(fā)明相關(guān)的組合物的藥物劑量形式的參考可見(jiàn)出版物 Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing,1965-1990。本發(fā)明的組合物可以以固體、液體或半液體、片劑、膠囊、丸劑、粉劑、顆粒劑、混懸
齊U、乳劑、分散劑和任何其他有用的已知藥學(xué)可接受的形式給藥于患者。該組合物可能根據(jù)期望的效果進(jìn)一步包含活性試劑，例如抗生素。對(duì)于作為片劑或膠囊劑(軟和硬膠囊)口服，巨大戟二萜醇化合物可以結(jié)合接受藥學(xué)可接受的惰性媒介，如乳糖、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、磷酸氫鈣、磷酸鈣、甘露醇、山梨醇和類似物；對(duì)于液態(tài)形式的口服，巨大戟二萜醇化合物以及結(jié)合乙醇、甘油、水和類似物。當(dāng)期望或必要時(shí)，可以將凝結(jié)劑、潤(rùn)滑齊U、崩解劑、色素和香料加入混合物。常見(jiàn)的凝結(jié)劑是葡萄糖、3 -乳糖、玉米甜味劑、天然或合成樹(shù)膠如阿拉比卡膠、黃蓍膠或海藻酸鈉、羧甲基纖維素、聚乙二醇、蠟及類似物。潤(rùn)滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、醋酸鈉、氯化鈉。崩解包括淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤(rùn)土、黃原膠及類似物。本發(fā)明涉及的組合物也可以作為脂質(zhì)體或與可溶性聚合物載體偶聯(lián)給藥。用于口服的液體劑型可能包括著色劑和甜味劑以增加患者的接受度。用于水劑型的可接受的載體為水、適宜的油、生理鹽水溶液、葡萄糖水、其它糖溶液和二醇類如丙二醇或聚乙二醇、磷酸緩沖液。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及抑制人類免疫缺陷病毒的復(fù)制，即用于治療人類免疫缺陷病毒感染如AIDS的方法，所述方法包括將藥學(xué)可接受的載體中的藥理學(xué)有效量 的本發(fā)明的化合物給藥于患者。足量的一種或多種巨大戟二萜醇或一種或多種羊毛甾-8，24- 二烯-3-醇或它們的混合物的例子對(duì)應(yīng)于每天一次或多次給藥于這種患者的每kg患者重量0. 001-2000 mg的一種或多種巨大戟二萜醇或一種或多種羊毛甾_8，24- 二烯-3-醇或它們的混合物的劑量。
實(shí)施例盡管下列實(shí)施例是本發(fā)明的具體實(shí)施方式
，它們不是以任何方式對(duì)其進(jìn)行限制，而是權(quán)利要求中進(jìn)一步表述的內(nèi)容。在下列文本中，將經(jīng)常提到化合物大戟二烯醇，羊毛甾-8，24-二烯-3-醇家族中的一個(gè)成員，可以理解的是，這么做僅僅為了引用方便，因此，本發(fā)明并不排除任何其它羊毛甾_8，24- 二烯-3-醇。病毒和細(xì)胞
用 Ficol-Hipaque 密度梯度方法(Hystopaque, Chem Sigma. Co. , USA)從健康獻(xiàn)血者獲得外周血單核細(xì)胞(MCPB)。這些細(xì)胞被重新懸浮于添加10%滅活胎牛血清(來(lái)源HyClone, USA)、青霉素(100 U / ml)、鏈霉素(100 iig/ml)、2 mM 谷氨酰胺的 RPMI 1640培養(yǎng)基(來(lái)源Sigma_Aldrich, USA),以 5 ii g/ml 植物凝集素(PHA，來(lái)源Sigma_Aldrich，USA)刺激2-3天，洗滌，再保持包含5U/ml重組人白介素(來(lái)源Sigma Aldrich, USA)的培養(yǎng)基中。MCPB (3 X IO6)在48孔板中被分布于無(wú)血清的RPMI培養(yǎng)基中并在5% CO2空氣下37°C培養(yǎng)I小時(shí)。使用分離的對(duì)趨化因子受體具有獨(dú)特趨化性即CCR5-趨化性(R5-趨化性)的初始HIV-I。細(xì)胞存活率試驗(yàn)(XTT法和臺(tái)盼藍(lán)法)
通過(guò)XTT法(2，3- 二 [2-甲氧基-4-硝基-5-磺基苯基]2H-四唑輸-甲酰苯胺，來(lái)源=Sigma)評(píng)估分離物的對(duì)細(xì)胞活力的效果。為了測(cè)試化合物對(duì)線粒體活性的效果，正常個(gè)體的MCPB(2X IO5細(xì)胞/200 u I/孔)，在96孔板中，37°C,5% C02)在3至7天期間以不同濃度的物質(zhì)處理(0. 5 V- g/mL>5 u g/mL>20 u g/mL>40 u g/mL>80 u g/mL、160 V- g/mL>320 iig/mL和640 u g/mL)0在該期間結(jié)束時(shí)，通過(guò)加入50ml XTT溶液用比色法測(cè)定細(xì)胞活性，通過(guò)在450nm處閱讀吸光度分析結(jié)果(根據(jù)Scudiero等，1988，Cancer Res. 48:4827-4833)。
抗HIV-I抑制活性 MCPB
用5-10 ng/ml AG p24 HIV-I以R5分離物感染MCPB 2_3小時(shí)。洗滌細(xì)胞3次，重懸于添加5 u /ml IL-2的培養(yǎng)基中并鋪于96孔板中(2 X IO5細(xì)胞/200 U I，一式三份)，以指定濃度的被測(cè)試的化合物處理(0. 5 u g/mL, I. 0 u g /mL, 5. 0 u g /mL, 10 u g /mL, 20U g /mL和40 u g /mL)。培養(yǎng)物在5% CO2空氣及37°C保持7天，用ELISA (酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定信息)通過(guò)P24的劑量測(cè)定病毒響應(yīng)。物質(zhì)試驗(yàn)的結(jié)果
細(xì)胞毒性和抗逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測(cè)
對(duì)外周血單核細(xì)胞(MCPB)進(jìn)行了分析，其中以XTT評(píng)價(jià)細(xì)胞毒性測(cè)試，用ELISA評(píng)價(jià)病毒響應(yīng)的抑制測(cè)試。CC50 (50%細(xì)胞毒性濃度)表示被測(cè)試物質(zhì)能夠保持細(xì)胞50%存活的濃度。EC50值(50%有效濃度)是物質(zhì)能夠抑制50%的病毒粒子產(chǎn)生的濃度。實(shí)施例I-巨大戟二萜醇的細(xì)胞毒性
下面表I的結(jié)果，也在圖I所示涉及如國(guó)際專利公開(kāi)WO 2007000618所示來(lái)自大戟科植物乳膠的極性溶劑提取物的級(jí)份的3-(2，4，6-十二碳三烯?；?巨大戟二萜醇和3-(2，4，6，8-十四碳四烯酰基)-巨大戟二萜醇的1:1混合物。實(shí)驗(yàn)室編號(hào)4SII
表權(quán)利要求
1.選自巨大戟二萜醇、羊毛留-8，24-二烯-3-醇和它們的混合物的多環(huán)化合物在制備用于預(yù)防或治療HIV感染的藥物組合物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的用途，其中所述巨大戟二萜醇化合物是3-(2，4，6-十二碳三烯?；?巨大戟二萜醇、3_(2，4，6，8-十四碳四烯?；?-巨大戟二萜醇、其藥學(xué)可接受的鹽、異構(gòu)體、多晶型物、溶劑化物或水合物、前藥或其代謝物中的一種或多種。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的用途，其中所述羊毛留_8，24-二烯-3-醇是大戟二烯醇、甘遂醇和羊毛留醇、其藥學(xué)可接受的鹽、異構(gòu)體、晶體和多晶型物、溶劑化物和水合物、前藥或其代謝物中的一種或多種。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的用途，所述巨大戟二萜醇和羊毛留_8，24-二烯-3-醇的混合物的范圍為I :100-100 :1，尤其是I :50-50 :1，更尤其是I :10-10 :1，更尤其是I :4-4 :1。
5.治療HIV感染的方法，其中所述方法包括將藥學(xué)可接受的載體中的藥理學(xué)有效量的巨大戟二萜醇化合物給藥于患者。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述巨大戟二萜醇化合物是3-(2，4，6-十二碳三烯酰基)巨大戟二萜醇、3_(2，4，6，8-十四碳四烯?；?-巨大戟二萜醇、其藥學(xué)可接受的鹽、異構(gòu)體、晶體和多晶型物、溶劑化物和水合物、前藥或其代謝物中的一種或多種。
7.治療HIV感染的方法，其中所述方法包括將藥學(xué)可接受的載體中的藥理學(xué)有效量的羊毛留-8，24- 二烯-3-醇化合物給藥于患者。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述羊毛留-8，24-二烯-3-醇是大戟二烯醇、甘遂醇和羊毛留醇、其藥學(xué)可接受的鹽、異構(gòu)體、多晶型物、溶劑化物和水合物、前藥或其代謝物中的一種或多種。
9.治療HIV感染的方法，其中所述方法包括將藥學(xué)可接受的載體中的藥理學(xué)有效量的巨大戟二萜醇和羊毛留-8，24- 二烯-3-醇化合物的混合物給藥于患者。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中一種或多種巨大戟二萜醇和羊毛留-8，24-二烯-3-醇化合物的混合物包括(A) 3-(2，4，6_十二碳三烯?；?巨大戟二萜醇、3-(2，4，6，8-十四碳四烯?；?-巨大戟二萜醇、其藥學(xué)可接受的鹽、異構(gòu)體、晶體和多晶型物、溶劑化物和水合物、前藥和其代謝物中的一種或多種；(B)大戟二烯醇、甘遂醇和羊毛甾醇、其藥學(xué)可接受的鹽、異構(gòu)體、多晶型物、溶劑化物和水合物、前藥和其代謝物中的一種或多種；以及A和B之間的比例范圍為I :100-100 :1，尤其是I :50-50 :1，更尤其是I :10-10 : I，更尤其是 I 4~4 I o
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述混合物包括約70%重量大戟二烯醇、10%重量甘遂醇、10%重量3-(2，4，6-十二碳三烯?；?巨大戟二萜醇和10%重量3-(2, 4，6，8-十四碳四烯?；?_巨大戟二萜醇。
12.根據(jù)權(quán)利要求5-11中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述一種或多種巨大戟二萜醇、羊毛甾-8，24- 二烯-3-醇或它們的混合物的有效量是每天一次或多次給藥于這種患者的每kg 患者重量 0.001-2000 mg。
全文摘要
本發(fā)明涉及選自巨大戟二萜醇、羊毛甾-8,24-二烯-3-醇化合物及其混合物的多環(huán)化合物作為抗-AIDS劑的制藥用途。
文檔編號(hào)A61K31/575GK102711750SQ201080061558
公開(kāi)日2012年10月3日 申請(qǐng)日期2010年1月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月15日
發(fā)明者C.P.查維斯, J.B.卡里西托, L.F.皮亞諾維斯基 申請(qǐng)人:阿馬佐尼亞菲托藥品有限公司