專利名稱：用于由積雪草制備高純度積雪草苷組合物的方法及其應(yīng)用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及來自積雪草(Centella Asiatica)的積雪草苷(積雪草阜苷，asiaticoside)提取物，并且更具體地涉及其在用于處理炎性腸病、治療幽門螺桿菌(Helicobacter Pylori)、預(yù)防胃病和胃癌中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
從積雪草中提取的積雪草苷是各公司商業(yè)上可獲得的分析參照標(biāo)準(zhǔn)材料，諸如，例如，Yick-Vic公司已通過HPLC確定積雪草苷的純度為92.8%，Tauto生物技術(shù)公司已通過HPLC確定積雪草苷的純度為約97%，寶雞(Baoji)草本植物生物技術(shù)公司的積雪草苷測定高于98%。然而，這些產(chǎn)品特別適合于用作參考標(biāo)準(zhǔn)在研究實(shí)驗(yàn)室中用于研究目的，而沒有找到植物積雪草的提取物。這些積雪草苷產(chǎn)品在商業(yè)上不能用作藥物組合物?，F(xiàn)有技術(shù)中適合用于由積雪草制備積雪草苷的方法要求純度范圍在50%_97%之間。例如，美國公開號2008/0194499教導(dǎo)了包括范圍在15%_50%之間的積雪草苷組合物的藥物五環(huán)萜類苷。而且，美國公開號2006/0177516公開了具有約40%積雪草苷組合物的萜烯混合物。此外，美國專利號6，417，349提供了具有4:6到6:4的范圍以構(gòu)成97%或更多提取物的積雪草提取物。此外，中國專利號CN1520824披露了用于純度為92.8%的積雪草苷的提取和分離方法。然而，現(xiàn)有技術(shù)中沒有一個嘗試由積雪草專用地提取高純度積雪草苷。積雪草或積雪草苷的傳統(tǒng)用途包括促進(jìn)傷口愈合、治療皮膚疾病(skindisease)、皮膚病(皮膚失調(diào)，skin disorder)和慢性炎性疾病。例如，中國專利號CN101129393披露了積雪草苷液體在傷口愈合中的應(yīng)用。此外，美國公開號2009/0060985教導(dǎo)了積雪草都市提取物作為藥品物質(zhì)用于治療皮膚病的應(yīng)用?？梢钥吹浆F(xiàn)有技術(shù)中有其中將積雪草苷或積雪草用于非傳統(tǒng)`用途的少數(shù)嘗試。例如，美國公開號2008/0194499教導(dǎo)了萜類苷優(yōu)選積雪草苷和羥基積雪草苷可選地連同賦形劑用于控制抑郁癥的應(yīng)用。此外，美國公開號2006/0177516提供了食品補(bǔ)充劑，其顯示出積雪草苷用于治療貧血癥的應(yīng)用。然而，積雪草苷或積雪草用于處理與胃腸道相關(guān)的疾病諸如炎性腸病和幽門螺桿菌的應(yīng)用，相對而言是未知的?？梢钥吹浆F(xiàn)有技術(shù)中有其中將積雪草苷用于治療肝病的少數(shù)嘗試。例如，中國專利號CN1439376和CN1520824披露了積雪草苷用于預(yù)防和治療肝纖維化的應(yīng)用。此外，美國公開號2004/0097463披露了積雪草苷用于治療與肝、結(jié)腸和胰腺相關(guān)的癌癥的應(yīng)用。此外，Cheng等人在2004年(“The healing effects of Centellaextract and asiaticoside on acetic acid induced gastric ulcers in rats，，，LifeSciences, vol.74，pp.2237-2249)討論了積雪草水提取物對大鼠中的乙酸誘導(dǎo)的胃潰瘍的愈合作用。而且，Cheng 等人在 2000 年(“Effects ofCentella asiatica on ethanolinduced gastric mucosal lesions in rats，，,Life Sciences, vol.67,pp.2647-2653)教導(dǎo)了積雪草水提取物對乙醇誘導(dǎo)的胃粘膜病變的離體實(shí)驗(yàn)的預(yù)防作用。然而，現(xiàn)有技術(shù)所述的胃潰瘍局限于化學(xué)制品或藥物誘導(dǎo)的潰瘍模型。此外，這些模型通過在胃部局部應(yīng)用刺激物(乙酸)而造成特定的病變，這未必能處理結(jié)腸疾病如炎性腸病。此外，現(xiàn)有技術(shù)中聲稱積雪草苷產(chǎn)品用于治療潰瘍，但是沒有說明積雪草苷用于預(yù)防潰瘍的用途。炎性腸病的特征是頑固的慢性炎癥性病癥如潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩氏病(Crohn’s Disease)，其表現(xiàn)出例如使人痛苦的癥狀，腹痛、腹瀉、嘔吐、便血(糞便帶血)、食欲降低、體重減輕、發(fā)燒和各種相關(guān)并發(fā)癥如肛裂、瘺(瘺管，fistulas)、直腸周膿腫、痔瘡。潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩氏病通常通過疾病活性指數(shù)評價，其包括排便次數(shù)、存在便血、內(nèi)窺鏡表現(xiàn)以及內(nèi)科醫(yī)師的整體評價。上面病癥的持續(xù)會導(dǎo)致慢性炎癥，隨后變成發(fā)展為結(jié)腸癌的誘發(fā)因素。現(xiàn)有的用于治療炎性腸病的方法包括減輕腹痛、腹瀉、疲勞、貧血、營養(yǎng)不足、粘膜炎癥、腸外表現(xiàn)、住院治療、手術(shù)和并發(fā)癥如膿腫、瘺、感染和惡性腫瘤。炎性腸病的治療由柳氮磺胺吡啶、免疫抑制劑和皮質(zhì)類固醇的口服給予組成。通常，優(yōu)選柳氮磺胺吡啶用于輕度至中度潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩氏病的第一線治療。然而，副作用如藥物不耐性、削弱葉酸攝取、腎臟的不良影響使得柳氮磺胺吡啶不期望用于炎性腸病治療。此外，柳氮磺胺吡啶對于結(jié)腸的有效性是有限的，因?yàn)樗晃覆课?，隨后在小便中排出。急性病癥中的潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩氏病，需要用皮質(zhì)類固醇治療，但是這些藥物不能預(yù)防緩解。長期使用皮質(zhì)類固醇會造成皮膚變薄、對裂傷的敏感性、體重增加、血壓升高、糖尿病及相關(guān)的有害病癥。在潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩氏病的長期治療中，免疫抑制劑是有效的。這些藥物也有嚴(yán)重的副作用，如骨髓抑制、淋巴瘤(在腎移植病人中)、皮膚癌和胰腺炎。在嚴(yán)重情況下炎性腸病需要外科手術(shù)，如腸切除術(shù)、狹窄整形術(shù)或臨時性或永久性的結(jié)腸造口術(shù)或回腸造口術(shù)，其涉及使用全身麻醉以及術(shù)后恢復(fù)的并發(fā)癥。由粘膜損害的胃腸道潰瘍是炎性腸病的相關(guān)并發(fā)癥。炎性腸病和相關(guān)炎性疾病的慢性的特性需要長期的控制治療。當(dāng)前炎性腸病的治療方法對于該疾病的持續(xù)性治療和高危險性緩解具有有害副作用的局限性。由病原菌如幽門螺桿菌誘導(dǎo)的炎癥助長了炎性腸病癥狀的惡化。此外，環(huán)境因素如壓力、食物和飲酒增強(qiáng)了幽門螺桿菌的活性。世界衛(wèi)生組織(WHO)已經(jīng)把幽門螺桿菌分類為促進(jìn)胃癌的I組致癌物。幽門螺桿菌感染引發(fā)損害上皮細(xì)胞的慢性炎癥反應(yīng)，接著誘導(dǎo)胃萎縮，其最終導(dǎo)致胃癌。胃惡性腫瘤(胃癌，gastric carcinoma)或胃癌(gastriccancer)的治療具有高度致命的治療選擇，諸如，例如，通過胃切除術(shù)手術(shù)切除癌性組織、部分/完全切除胃、化學(xué)療法、放射療法和化學(xué)放射療法。然而，這些治療具有極其嚴(yán)重的副作用，其導(dǎo)致患者生命質(zhì)量下降。而且，由于存在較高的惡性腫瘤復(fù)發(fā)概率，所以這些治療也不能保證完全恢復(fù)。為了從感染的胃粘膜中根除幽門螺桿菌，及時的診斷和治療可能大大地降低胃癌的風(fēng)險。使用者可以領(lǐng)會用于根除幽門螺桿菌感染的有效手段可以間接輔助預(yù)防幽門螺桿菌感染誘導(dǎo)的胃癌。需要一種用于從積雪草提取積雪草苷的商業(yè)上可行的方法，積雪草苷要具有非常高的純度以有效地用作藥物組 合物。進(jìn)一步需要這樣的積雪草苷組合物，其提供更有益(更容易處理，kinder)和更溫和的方法，用于有效長期處理伴隨幽門螺桿菌的炎性腸病。進(jìn)一步需要積雪草苷組合物，其預(yù)防由于炎性腸病誘導(dǎo)的胃病和結(jié)腸癌。進(jìn)一步需要積雪草苷組合物用于有效根除幽門螺桿菌感染，其預(yù)防胃癌。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的是提供一種來源于積雪草的具有至少99%純度的積雪草苷的藥物組合物的制備方法或過程(方法，process)。本發(fā)明的另一個目的是提供積雪草苷可選地連同可接受的藥物賦形劑的藥物組合物，用于治療炎性腸病如潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病。本發(fā)明的又一個目的是提供積雪草苷可選地連同可接受的藥物賦形劑的藥物組合物，用于治療炎性腸病相關(guān)的并發(fā)癥，例如但不限于痔瘡、肛裂、瘺。本發(fā)明的又一個目的是提供積雪草苷可選地連同可接受的藥物賦形劑的藥物組合物，用于預(yù)防結(jié)腸癌。本發(fā)明的又一個目的是使用積雪草苷可選地連同可接受的藥物賦形劑的藥物組合物，用于治療幽門螺桿菌。本發(fā)明的又一個目的是使用積雪草苷可選地連同可接受的藥物賦形劑的藥物組合物，用于預(yù)防胃病和胃癌。發(fā)明綜述本發(fā)明披露了從植物材料積雪草提取的具有至少99%純度的商業(yè)上可行的藥物等級的積雪草苷組合物。本發(fā)明披露了在人和動物中的體內(nèi)治療方法，其中該治療方法包括口服給予適合于治療炎性腸病，治療痔瘡、肛裂和瘺，預(yù)防結(jié)腸潰瘍和結(jié)腸癌，根除治療幽門螺桿菌感染，預(yù)防胃病和預(yù)防胃癌的積雪草苷組合物。
具體實(shí)施例方式在本發(fā)明的范圍內(nèi)，本文所披露的積雪草苷化合物具有以下結(jié)構(gòu):積雪草苷:
權(quán)利要求
1.一種從植物材料積雪草中提取的具有至少99%純度的藥物等級積雪草苷組合物，所述積雪草苷組合物具有分子式C48H78O19，所述積雪草苷組合物適合用于治療以下幽門螺桿菌、胃病、胃癌、炎性腸病以及與炎性腸病相關(guān)的并發(fā)癥中的一種或多種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的積雪草苷組合物，其中，所述提取適合于在約20°C至30° C的溫度范圍和約8h至24h的時間段下進(jìn)行。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的積雪草苷組合物，其中，所述提取適合于通過第一溶劑進(jìn)行，以除去脂肪物質(zhì)、葉綠素以及其他色素。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的積雪草苷組合物，其中，所述提取適合于通過第二溶劑進(jìn)行，以提取生物活性分子并獲得基本上澄清的提取物或?yàn)V液。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的積雪草苷組合物，其中，所述第一溶劑選自脂肪族化合物、酮類、醇類、亞硝酸鹽/酯類、酯類、醚類以及它們中一種或多種的混合物的組。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的 積雪草苷組合物，其中，所述第一溶劑是石油醚或甲基異丁基酮。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的積雪草苷組合物，其中，所述第二溶劑是單獨(dú)或以60%至99%范圍的比率與水組合的選自甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇的脂肪醇。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的積雪草苷組合物，其中，所述基本上澄清的提取物適合于在減壓下蒸餾以形成糊劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的積雪草苷組合物，其中，所述糊劑適合于溶解在軟化水中，以獲得基本上澄清的水層。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的積雪草苷組合物，其中，所述基本上澄清的水層適合于用第三溶劑提取，以除去酸性物質(zhì)。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的積雪草苷組合物，其中，所述第三溶劑是甲基異丁基酮。
12.根據(jù)權(quán)利要求9所述的積雪草苷組合物，其中，所述基本上澄清的水層適合于經(jīng)受樹脂床處理，接著用醇溶劑洗脫，以獲得溶劑洗脫液。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的積雪草苷組合物，其中，所述溶劑洗脫液適合于在約50° C-60° C的溫度范圍下在真空下濃縮。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的積雪草苷組合物，其中，濃縮的所述溶劑洗脫液適合于再溶解在含水醇中，接著進(jìn)行冷卻結(jié)晶。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的積雪草苷組合物，其中，所述冷卻結(jié)晶適合于在約0°C至-15° C的溫度范圍下進(jìn)行。
16.一種配制用于在人類和動物中治療的劑型，包括治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1所述的積雪草苷組合物的口服給予。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的積雪草苷組合物，其中，所述劑型適合于選自片劑、含片、錠劑、水性或油性懸液、軟膏劑、貼片、凝膠劑、洗劑、潔齒劑、膠囊劑、乳劑、乳膏劑、噴霧劑、滴劑、可分散性粉劑或粒劑、處于硬或軟膠囊中的乳劑、糖漿劑、酏劑、植物性物質(zhì)、營養(yǎng)制品和食品的組。
18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的積雪草苷組合物，其中，所述劑型適合于連同藥物等級的賦形劑一起口服給予，所述藥物等級的賦形劑選自成粒劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、甜味齊U、助流劑、抗粘劑、抗靜電劑、表面活性劑、抗氧化劑、樹膠、涂布劑、著色劑、調(diào)味劑、增塑齊U、防腐劑、懸浮劑、乳化劑和滾圓劑的組。
19.根據(jù)權(quán)利要求16所述的積雪草苷組合物，其中，動物中的劑量范圍基本上是l_360mg/kg。
20.根據(jù)權(quán)利要求16所述的積雪草苷組合物，其中，人類中的劑量范圍基本上是l_60mg/kg。
21.一種在人類和動物中的體內(nèi)治療方法，所述方法包括以下步驟: 口服給予有效量的至少99%純度的積雪草苷組合物作為用于有效治療患病部位的治療或預(yù)防劑量。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的治療方法，其中，所述方法適合于治療以下炎性腸病、痔、肛裂、瘺中的一種或多種，以及根除幽門螺桿菌感染。
23.根據(jù)權(quán)利要求21所述的治療方法，其中，所述方法適合于預(yù)防以下結(jié)腸潰瘍、結(jié)腸癌、胃病和胃癌中的一種或多種。
24.根據(jù)權(quán)利要求22所述的治療方法，其中，所述炎性腸病是以下三硝基苯磺酸誘導(dǎo)的炎性腸病、乙酸誘導(dǎo)的炎性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩氏病中的一種或多種。
25.根據(jù)權(quán)利要求 23所述的治療方法，其中，所述胃病是以下應(yīng)激誘導(dǎo)的潰瘍、組胺誘導(dǎo)的潰瘍和乙醇誘導(dǎo)的潰瘍中的一種或多種。
26.根據(jù)權(quán)利要求22所述的治療方法，其中，所述幽門螺桿菌感染是通過潰瘍面積中的劑量依賴性和時間依賴性降低確定的非留體抗炎藥誘導(dǎo)的幽門螺桿菌感染。
27.根據(jù)權(quán)利要求23所述的治療方法，其中，通過根除幽門螺桿菌感染預(yù)防所述胃癌。
28.根據(jù)權(quán)利要求21所述的治療方法，其中，所述積雪草苷組合物適合于促進(jìn)針對藥物致潰瘍作用的預(yù)防作用。
29.—種來自植物材料積雪草的至少99%純度的積雪草苷組合物的制備方法，所述方法包括以下步驟: a)在提取器中用第一溶劑提取磨成粉狀的積雪草植物材料； b)用第二溶劑提取生物活性分子，以獲得澄清的提取物或?yàn)V液； c)蒸餾并用第三溶劑提取所述澄清的提取物，以獲得澄清的水層； d)通過樹脂床處理所述澄清的水層，接著用醇溶劑洗脫，以獲得溶劑洗脫液； e)在真空下濃縮所述溶劑洗脫液，接著將所述溶劑洗脫液再溶解在含水醇中，以形成溶液；以及 f )將所述溶液冷卻結(jié)晶，以獲得至少99%純度的積雪草苷組合物。
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的制備方法，其中，所述提取適合于在約20°C至30° C的溫度范圍和約8h至24h的時間段下進(jìn)行。
31.根據(jù)權(quán)利要求29所述的制備方法，其中，所述溶劑洗脫液適合于在約50° C-60° C的溫度范圍下在真空下濃縮。
32.根據(jù)權(quán)利要求29所述的制備方法，其中，所述冷卻結(jié)晶適合于在約0°C至-15° C的溫度范圍下進(jìn)行。
33.根據(jù)權(quán)利要求29所述的制備方法，其中，冷卻結(jié)晶之后獲得的所述積雪草苷組合物適合于過濾并用冷水洗滌。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的制備方法，其中，過濾之后獲得的積雪草苷晶體適合于在高溫下干燥以形成具有 至少99%HPLC純度的積雪草苷組合物的自由流動性粉末。
全文摘要
本發(fā)明公開了商業(yè)上可行的具有至少99%純度的來源于植物積雪草的積雪草苷組合物及其制造方法。本發(fā)明進(jìn)一步教導(dǎo)了用于口服給予治療有效量的積雪草苷的方法和模型，用于口服給予治療有效量的積雪草苷組合物用于治療炎性腸病，如潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病以及炎性腸病相關(guān)的并發(fā)癥如痔瘡、肛裂、瘺的模型。本發(fā)明進(jìn)一步提供了用于口服給予治療有效量的積雪草苷組合物用于治療幽門螺桿菌的方法和模型。本發(fā)明進(jìn)一步提供了用于口服給予治療有效量的積雪草苷組合物用于預(yù)防結(jié)腸癌、胃病和胃癌的方法和模型。
文檔編號A61K31/704GK103079573SQ201080068596
公開日2013年5月1日 申請日期2010年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月10日
發(fā)明者布哈斯卡拉恩·蘇尼爾, 維什瓦拉曼·莫漢 申請人:梧桐生物技術(shù)私人有限公司