專利名稱：去氫木香內(nèi)酯在制備抑制血管生成藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中草藥單體的應(yīng)用，具體地說，是一種中草藥單體去氫木香內(nèi)酯 在制備抑制血管生成藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
血管生成是一個(gè)涉及多種細(xì)胞的多種分子的復(fù)雜過程，包括內(nèi)皮細(xì)胞分泌蛋白酶 降解基底膜、內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移、新生毛細(xì)血管官腔結(jié)構(gòu)的形成，募集周細(xì)胞以穩(wěn)定新 形成的毛細(xì)血管網(wǎng)、通過原始血管的重塑和擴(kuò)展形成成熟的血管網(wǎng)。抑制血管生成分子和促進(jìn)血管生成分子間的動(dòng)態(tài)平衡被認(rèn)為是調(diào)控血管生成的 “開關(guān)”。大多數(shù)情況下，兩者處于平衡，血管生成機(jī)制關(guān)閉；而當(dāng)二者的平衡被破壞時(shí)，血管 生成機(jī)制被開啟，從而導(dǎo)致疾病的發(fā)生與發(fā)展。血管生成也在胚胎發(fā)育、生殖、創(chuàng)傷修復(fù)以 及女性的生理周期等機(jī)體正常生理過程中發(fā)揮著重要作用。一些疾病如各種原因引起的腫 瘤、眼部新血管形成、關(guān)節(jié)炎、皮膚疾患、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病的發(fā)生與發(fā)展，都與血管生成 有關(guān)。惡性腫瘤是嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病，腫瘤血管為腫瘤的生長(zhǎng)提供必須的營(yíng) 養(yǎng)成分并幫助排出代謝廢物，腫瘤血管形成與腫瘤生長(zhǎng)、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的密切關(guān)系被認(rèn)為是上 世紀(jì)腫瘤學(xué)理論的重大突破之一，而腫瘤抗血管生成治療被認(rèn)為是治療惡性腫瘤具有重大 醫(yī)學(xué)價(jià)值的策略之一。去氫木香內(nèi)酯(Dehydrocostus lactone)是一種植物倍半萜類化合物，來自于云 木香(Saussurea lappa)的干燥根。其分子式為C15H18O2，分子量為230. 30。對(duì)去氫木香內(nèi)酯 藥理學(xué)活性的研究表明去氫木香內(nèi)酯具有抗分支桿菌活性，也是細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的 有效抑制劑。該化合物還具有抗腫瘤作用，能誘導(dǎo)人前列腺癌細(xì)胞DU145凋亡，增強(qiáng)TNF- α 誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞HL60凋亡等藥理學(xué)活性。但目前還沒有去氫木香內(nèi)酯抑制新生血管形 成并作為血管形成抑制劑使用的報(bào)道。中國(guó)專利文獻(xiàn)CN:100577180C公開了一種藤黃酸在制備抑制血管生成藥物中的 應(yīng)用。該發(fā)明提供了藤黃酸在制備抑制血管生成藥物中的應(yīng)用，特別是在制備抑制腫瘤、 關(guān)節(jié)炎、視網(wǎng)膜病、血管瘤、銀屑病等疾病的病變組織血管生成的藥物中的應(yīng)用。中國(guó)專利 文獻(xiàn)CN :1511531A公開了高三尖杉酯堿和三尖杉酯堿在抑制血管生成中的應(yīng)用。該發(fā)明 公開了高三尖杉酯堿和三尖杉酯堿在抑制血管生成中的新用途，研究表明，高三尖杉酯堿 和三尖杉酯堿具有抑制血管生成的作用，同時(shí)具有特異性、劑量小、療效高、副作用小和不 易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)。中國(guó)專利文獻(xiàn)CN :101342214A公開了一種木香總內(nèi)酯藥物組合物 及其制備方法。該發(fā)明提供了一種木香總內(nèi)酯藥物組合物及其制備方法，還提供了一種木 香總內(nèi)酯藥物組合物在制備治療或預(yù)防胃運(yùn)動(dòng)障礙的藥物中的應(yīng)用。中國(guó)專利文獻(xiàn)CN: 101073590A公開了一種從中藥木香中提取得到的總內(nèi)酯提取物及其制備方法，還提供了一 種該提取物用于制備藥物或功能性食品的應(yīng)用。但是關(guān)于去氫木香內(nèi)酯在抑制血管生成中 的應(yīng)用目前還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種去氫木香內(nèi)酯在制備抑制血管 生成藥物中的應(yīng)用。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是去氫木香內(nèi)酯在制備抑制血管生成 藥物中的應(yīng)用。所述的去氫木香內(nèi)酯作為單一成分或與其他藥學(xué)上可接受的成分構(gòu)成組合物以 制備抑制血管生成的藥物。所述的其他藥學(xué)上可接受的成分可以是與去氫木香內(nèi)酯沒有拮抗作用的藥物，也 可以是藥學(xué)上允許的任一一種或多種輔料。所述的抑制血管生成的藥物劑型為膠囊劑、片劑、口服制劑、微囊制劑、注射劑、栓 劑、噴霧劑或軟膏劑。所述的抑制血管生成的藥物的給藥方式為注射、口服、胃腸外、吸入式噴霧或透皮給藥。所述的抑制血管生成藥物為抑制腫瘤血管新生的藥物。所述的血管生成為腫瘤病變組織的血管新生和腫瘤導(dǎo)致的血管新生。所述的腫瘤為實(shí)體腫瘤。所述的實(shí)體腫瘤為原發(fā)性或繼發(fā)性實(shí)體腫瘤。所述的腫瘤血管新生包括白血病、淋巴瘤和骨髓瘤血液癌癥的血管新生。所述的抑制血管生成藥物為抑制銀屑病病變組織血管新生的藥物。所述的抑制血管生成藥物為抑制I^aget’ s疾病血管新生的藥物。所述的抑制血管生成藥物為抑制良性血管增生疾病的血管新生的藥物。所述的抑制血管生成藥物為抑制關(guān)節(jié)炎病變組織的血管新生的藥物。所述的抑制血管生成藥物為抑制動(dòng)脈粥樣硬化病變處的血管新生的藥物。所述的抑制血管生成藥物為抑制新生血管性眼病的血管生成的藥物。所述的新生血管性眼病為原發(fā)性或繼發(fā)性新生血管性眼病。
本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于
本發(fā)明提供了去氫木香內(nèi)酯新的用途，首次發(fā)現(xiàn)去氫木香內(nèi)酯抗血管生成作用，首次 發(fā)現(xiàn)去氫木香內(nèi)酯可有效抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和小管形成，說明去氫木香內(nèi)酯 具有抗血管生成活性，可作為血管生成抑制劑使用，能夠作為血管生成抑制劑應(yīng)用于血管 生成藥物的制備以治療腫瘤、關(guān)節(jié)炎、銀屑病、眼科疾病、動(dòng)脈粥樣硬化等新生血管依賴性 和新生血管相關(guān)性疾病。


附圖1是去氫木香內(nèi)酯抑制HUVEC的增殖的照片。附圖2是去氫木香內(nèi)酯抑制HUVEC Transwell小室遷移的照片。附圖3是去氫木香內(nèi)酯抑制HUVEC小管形成的照片。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式
作詳細(xì)說明。實(shí)施例1去氫木香內(nèi)酯抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)增殖實(shí)驗(yàn)
采用CCK-8法檢測(cè)HUVEC的增殖。CCK-8試劑中含有WST - 8 (2-(2-甲氧基-4-硝基 苯基)-3- (4-硝基苯基)-5- (2，4- 二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽)，它在電子載體I-Methoxy PMS (1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸二甲酯)的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有 高度水溶性的黃色甲臜(Formazan)產(chǎn)物。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。用 酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。通過該方法可 評(píng)價(jià)藥物對(duì)HUVCE增殖的影響。方法HUVEC細(xì)胞接種于96孔板中培養(yǎng)。待細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到80%融合后，將去氫木 香內(nèi)酯按以下濃度1、3、10、30、100 μΜ加入孔中，作用48 h后每孔加與孔內(nèi)體積比為1 10 體積的CCK-8溶液，置于37 ！培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育2 h，用可調(diào)波長(zhǎng)式微孔酶標(biāo)儀在450 nm處 檢測(cè)OD值。以未加去氫木香內(nèi)酯的孔作為對(duì)照。以含細(xì)胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但不含細(xì) 胞的孔做為空白。按如下公式計(jì)算細(xì)胞活力
細(xì)胞活力(％)= (ODsample -ODblank) / (ODcontrol-ODblank) X 100% 結(jié)果與結(jié)論請(qǐng)參照附圖1，附圖1是去氫木香內(nèi)酯抑制HUVEC的增殖的照片。如圖1 所示，去氫木香內(nèi)酯對(duì)HUVEC的增殖抑制作用呈劑量依賴關(guān)系。去氫木香內(nèi)酯的濃度為3 μ M時(shí)，HUVEC的細(xì)胞活力為44%，10 μ M濃度以上時(shí)的HUVEC的增殖被完全抑制，細(xì)胞活力 為0。與對(duì)照組(去氫木香內(nèi)酯的濃度為0 μ Μ)相比具有極顯著性差異< 0.01)。實(shí)施例2去氫木香內(nèi)酯抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)遷移實(shí)驗(yàn)
Transwell法檢測(cè)HUVEC遷移。"Transwell是一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)，這項(xiàng)技術(shù)的主要材料 是Transwell小室(chamber)，小室的底層有一層通透性的膜(一般常用的是聚碳酸酯膜 (polycarbonate membrane)，這層膜帶有孔徑大小0. 1 — 12. 0 Mm的微孔，實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞置于 小室上，在小室下含有的趨化因子或生長(zhǎng)因子的作用下，細(xì)胞透過聚碳酸酯膜，從而進(jìn)行共 培養(yǎng)、細(xì)胞趨化、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲等多方面的研究。方法下室加入600 μ 含有20 ng/ml的VEGF165的HUVEC培養(yǎng)液。上室中加入含 有不同濃度去氫木香內(nèi)酯的HUVEC (細(xì)胞密度為2X 105/ml)，置于(X)2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8 h。未加去氫木香內(nèi)酯的組為對(duì)照。8 h后，從培養(yǎng)箱取出培養(yǎng)板，棄去孔中培養(yǎng)液，加入600 μ 戊二醛常溫固定15 min，用棉簽輕輕擦去上室未遷移的細(xì)胞，然后加入200 μ 0.1% 結(jié)晶紫染色，最后用PBS漂凈多余的結(jié)晶紫染料。在正置顯微鏡(Olympus)下觀察拍照。結(jié)果與結(jié)論遷移后的細(xì)胞經(jīng)結(jié)晶紫染色后顯紫紅色。請(qǐng)參照附圖2，附圖2是去 氫木香內(nèi)酯抑制HUVEC Transwell小室遷移的照片。由圖2所示，與對(duì)照組相比，去氫木香 內(nèi)酯的濃度為30 μ M時(shí)，僅見少數(shù)遷移的細(xì)胞，HUVEC的遷移能力被明顯抑制。實(shí)施例3去氫木香內(nèi)酯抑制HUVEC小管形成實(shí)驗(yàn)
運(yùn)用Matrigel膠檢測(cè)HUVEC的小管形成作用。人工基膜Matrigel膠是從小鼠EHS肉 瘤中提取的基膜成分，在37 °C下可自發(fā)形成凝膠狀的人工基膜，具有天然基膜的生物學(xué)作 用。人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞可以在Matrigel膠上粘附成管，從而可用于研究藥物對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞小 管形成作用的影響。
方法取50 μ 1 Matrigel膠溶液加入到預(yù)冷的96孔培養(yǎng)板中，然后放置于37 °C 培養(yǎng)箱孵育1 h，使膠固化。將含有不同濃度去氫木香內(nèi)酯的HUVEC (細(xì)胞密度為IXlO5/ ml)分別加入鋪有Matrigel的96孔板中，置于CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10 h。未加去氫木 香內(nèi)酯的組為對(duì)照。10 h后在倒置光學(xué)顯微鏡下觀察血管形成。結(jié)果與結(jié)論人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞可在Matrigel上延伸生長(zhǎng)呈管狀并相互連接，形 成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。請(qǐng)參照附圖3，附圖3是去氫木香內(nèi)酯抑制HUVEC小管形成的照片。由圖 3所示，與對(duì)照組相比，去氫木香內(nèi)酯的濃度為3 μΜ時(shí)HUVEC的小管形成能力受到顯著抑 制，濃度增至30 μ M時(shí)，細(xì)胞散在存在，未見小管形成，HUVEC小管形成能力被完全抑制。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為 本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.去氫木香內(nèi)酯在制備抑制血管生成藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的去氫木香內(nèi)酯作為單一成分或與 其他藥學(xué)上可接受的成分構(gòu)成組合物以制備抑制血管生成的藥物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的其他藥學(xué)上可接受的成分可以是 與去氫木香內(nèi)酯沒有拮抗作用的藥物，也可以是藥學(xué)上允許的任一一種或多種輔料。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抑制血管生成的藥物劑型為膠囊 劑、片劑、口服制劑、微囊制劑、注射劑、栓劑、噴霧劑或軟膏劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抑制血管生成的藥物的給藥方式 為注射、口服、胃腸外、吸入式噴霧或透皮給藥。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抑制血管生成藥物為抑制腫瘤血 管新生的藥物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的血管生成為腫瘤病變組織的血管 新生和腫瘤導(dǎo)致的血管新生。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的腫瘤為實(shí)體腫瘤。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的實(shí)體腫瘤為原發(fā)性或繼發(fā)性實(shí)體 腫瘤。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的腫瘤血管新生包括白血病、淋巴 瘤和骨髓瘤血液癌癥的血管新生。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抑制血管生成藥物為抑制銀屑病 病變組織血管新生的藥物。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抑制血管生成藥物為抑制 Paget' s疾病血管新生的藥物。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抑制血管生成藥物為抑制良性血 管增生疾病的血管新生的藥物。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抑制血管生成藥物為抑制關(guān)節(jié)炎 病變組織的血管新生的藥物。
15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抑制血管生成藥物為抑制動(dòng)脈粥 樣硬化病變處的血管新生的藥物。
16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抑制血管生成藥物為抑制新生血 管性眼病的血管生成的藥物。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的新生血管性眼病為原發(fā)性或繼 發(fā)性新生血管性眼病。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種去氫木香內(nèi)酯在制備抑制血管生成藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明提供了去氫木香內(nèi)酯新的用途，首次發(fā)現(xiàn)去氫木香內(nèi)酯抗血管生成作用，首次發(fā)現(xiàn)去氫木香內(nèi)酯可有效抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和小管形成，說明去氫木香內(nèi)酯具有抗血管生成活性，可作為血管生成抑制劑使用，能夠作為血管生成抑制劑應(yīng)用于血管生成藥物的制備以治療腫瘤、關(guān)節(jié)炎、銀屑病、眼科疾病、動(dòng)脈粥樣硬化等新生血管依賴性和新生血管相關(guān)性疾病。
文檔編號(hào)A61P35/02GK102058579SQ20111000421
公開日2011年5月18日 申請(qǐng)日期2011年1月11日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月11日
發(fā)明者方超, 於得紅, 王超, 白帆, 趙梅, 陸琴, 陳紅專 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院