專利名稱：一種金櫻根的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥材的質(zhì)量控制領(lǐng)域，尤其中藥材金櫻根的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
金櫻根別名金櫻菔、脫骨丹等，為雙子葉薔薇科植物金櫻子RosaIaevigataMichx.的根，主產(chǎn)于廣東、廣西、湖南、江西、浙江、江蘇、安徽等地，均為野生，其性味酸澀平，有固精澀腸的作用，可用于治療子宮脫垂、細(xì)菌性痢疾、小兒脫肛等癥，近年來金櫻根受到較廣泛的應(yīng)用，如金雞片、金雞膠囊、廣東涼茶、三金片、婦科千金片、快應(yīng)茶、金雞顆粒、三金顆粒、廣東涼茶顆粒等，但金櫻根在臨床上應(yīng)用較混亂，如有其莖入藥的。為了制定金櫻根的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、為其臨床應(yīng)用及開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)，田素英等提供了一種金櫻根的生藥學(xué)研究田素英等.金櫻根的生藥學(xué)研究.中國藥房，2009，20 (36) :2853-觀55，分別從原植物、性狀、顯微、理化鑒別等方面對金櫻根進(jìn)行生藥學(xué)研究，結(jié)8果表明金櫻根在原植物來源、性狀、顯微、理化等方面具有專屬性的特征，為金櫻根的臨床應(yīng)用及開發(fā)提供了科學(xué)依據(jù)。本發(fā)明人經(jīng)系統(tǒng)的分離研究發(fā)現(xiàn)，野薔薇苷與薔薇苷為金櫻根的特征性活性成分，故增加野薔薇苷與薔薇苷為控制本品質(zhì)量的指標(biāo)成分是十分必要的。本發(fā)明在原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加了 HPLC-ELSD法測定野薔薇苷與薔薇苷的含量，使金櫻根的質(zhì)量控制指標(biāo)更加全面。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種金櫻根的質(zhì)量控制方法，該方法精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性良好，使金櫻根的質(zhì)量控制指標(biāo)更加全面。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種金櫻根的質(zhì)量控制方法，其中，所述質(zhì)量控制方法為控制金櫻根中野薔薇苷(C36H58Oltl)的質(zhì)量含量不得少于0. 15%，和/或薔薇苷(C36H58Oltl)的質(zhì)量含量不得少于0. 15%。本發(fā)明人經(jīng)系統(tǒng)的分離研究發(fā)現(xiàn)，野薔薇苷與薔薇苷為金櫻根的特征性活性成分，故增加野薔薇苷與薔薇苷為控制金櫻根質(zhì)量的指標(biāo)成分是十分必要的。本發(fā)明首次引入野薔薇苷和/或薔薇苷的質(zhì)量含量，從而使金櫻根的質(zhì)量控制指標(biāo)更加全面。根據(jù)前述的質(zhì)量控制方法，其中，該方法為采用HPLC-ELSD法測定野薔薇苷和/或薔薇苷的含量。本發(fā)明首次將HPLC-ELSD法用于野薔薇苷和/或薔薇苷的含量測定，該方法精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性好，ELSD法是針對無紫外吸收化合物進(jìn)行有效測定的較好方法。根據(jù)前述的質(zhì)量控制方法，其中，所述采用HPLC-ELSD法測定野薔薇苷和/或薔薇苷的含量的步驟包括色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、對照品溶液的制備、供試品溶液的制備、含量的測定。
根據(jù)前述的質(zhì)量控制方法，其中，所述色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)為用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水為流動相；用蒸發(fā)光散射檢測器檢測或使用紫外檢測器檢測；理論板數(shù)按野薔薇苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。根據(jù)前述的質(zhì)量控制方法，其中，所述甲醇-水中甲醇與水的體積比為56 44。根據(jù)前述的質(zhì)量控制方法，其中，所述對照品溶液的制備為分別取野薔薇苷與薔薇苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml各含0. 5mg的混合溶液，即得。根據(jù)前述的質(zhì)量控制方法，其中，所述野薔薇苷與薔薇苷對照品采用如下方法自制將金櫻根的根莖，粉碎，用提取溶劑提取后，將提取液減壓濃縮，進(jìn)行溶劑萃取或上大孔樹脂吸附，并依次用水、30%、40 90%乙醇洗脫，收集40 90%乙醇洗脫物，回收溶劑，再將萃取物或洗脫物經(jīng)過柱層析分離，或?qū)⑻崛∫簼饪s至干后，直接經(jīng)過柱層析分離；將含有野薔薇苷和薔薇苷的餾分再次經(jīng)過硅膠柱層析分離，收集含有野薔薇苷和薔薇苷的餾分， 得野薔薇苷和薔薇苷粗晶，再加入重結(jié)晶試劑反復(fù)重結(jié)晶即得。根據(jù)前述的質(zhì)量控制方法，其中，所述供試品溶液的制備為取過三號篩的本品粉末約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50ml，稱定重量，在功率250W、頻率 40kHz的條件下超聲處理45分鐘，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，回收溶劑至干，殘?jiān)?. 05mol/L氫氧化鈉溶液20ml，使溶解， 用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15ml，合并正丁醇提取液，用水40ml洗滌1次，取正丁醇液，減壓回收溶劑至干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。根據(jù)前述的質(zhì)量控制方法，其中，所述含量的測定為分別精密吸取對照品溶液 5μ 1、10μ 1與供試品溶液10 20 μ 1，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程分別計(jì)算野薔薇苷、薔薇苷的含量，即得；本品按干燥品計(jì)算，含野薔薇苷(C36H58Oltl)與薔薇苷 (C36H58O10)分別不得少于0. 15%。本發(fā)明所提供的金櫻根的質(zhì)量控制方法具有如下優(yōu)點(diǎn)(1)本發(fā)明所提供的金櫻根的質(zhì)量控制方法引入了野薔薇苷和/或薔薇苷的含量測定，從而使金櫻根的質(zhì)量控制指標(biāo)更加全面；(2)本發(fā)明所提供的金櫻根的質(zhì)量控制方法首次將HPLC-ELSD法用于野薔薇苷和 /或薔薇苷的含量測定，該方法精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性好。


圖1為野薔薇苷對照品線性回歸方程，其中回歸方程為y = 0. 7282x-8. 5342，r =0. 9996 ；圖2為薔薇苷對照品線性回歸方程，其回歸方程為y = 0. 7342x-8. 5782，r = 0. 9997 ；圖3為金櫻子(廣西柳州)色譜圖；圖4為金櫻子(廣西忻城)色譜圖；圖5為金櫻子(湖南株洲)色譜圖；圖6為金櫻子(江西余江)色譜圖；圖7為金櫻子(貴州安順)液相色譜圖(ELSD)；
圖8為金櫻子(江西樟樹)液相色譜圖(ELSD)；圖9為粉團(tuán)薔薇(廣西永福)液相色譜圖(ELSD)；圖10為小果薔薇(廣西來賓)液相色譜圖(ELSD)；圖11為小果薔薇(廣西永福)液相色譜圖(ELSD)；圖12為小果薔薇(湖南株洲)液相色譜圖(ELSD)；圖13為小果薔薇(湖北恩施)液相色譜圖(ELSD)；圖14為野薔薇苷與薔薇苷對照譜圖(野薔薇苷Rt = 19. 6，薔薇苷Rt = 15. 9)(ELSD)；圖15為金櫻子(廣西柳州)液相色譜圖(UV)；圖16為金櫻子(廣西忻城)液相色譜圖(UV)；圖17為金櫻子(湖南株洲)液相色譜圖(UV)；圖18為金櫻子(江西余江)液相色譜圖(UV)；圖19為金櫻子(貴州安順)液相色譜圖(UV)；圖20為金櫻子(江西樟樹)液相色譜圖(UV)；圖21為粉團(tuán)薔薇(廣西永福)液相色譜圖(UV)；圖22為小果薔薇(廣西來賓)液相色譜圖(UV)；圖23為小果薔薇(廣西永福)液相色譜圖(UV)；圖M為小果薔薇(湖南株洲)液相色譜圖(UV)；圖25為小果薔薇(湖北恩施)液相色譜圖(UV)；圖沈?yàn)橐八N薇苷與薔薇苷對照譜圖(野薔薇苷Rt = 19. 6，薔薇苷Rt = 15. 9)(UV)。
具體實(shí)施例方式以下為本發(fā)明的具體實(shí)施方式
，所述的實(shí)施例是為了進(jìn)一步描述本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明。實(shí)施例1野薔薇苷和薔薇苷的含量測定為新增的檢測項(xiàng)目。本發(fā)明人經(jīng)系統(tǒng)的分離研究發(fā)現(xiàn)，野薔薇苷與薔薇苷為金櫻根的特征性活性成分，故增加野薔薇苷與薔薇苷為控制本品質(zhì)量的指標(biāo)成分是十分必要的，此方法使金櫻根的質(zhì)量控制指標(biāo)更加全面。1、儀器與試劑儀器=Waters 2695高效液相色譜儀，蒸發(fā)光散射檢測器(Alltech-ELSD2000)，(Waters996紫外檢測器)，Empower色譜工作站。試劑甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。對照品自制，因《中國藥典》未收載野薔薇苷與薔薇苷化學(xué)對照品，故我們對野薔薇苷與薔薇苷進(jìn)行了分離制備，并按《中藥新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究用對照品研究技術(shù)要求》進(jìn)行了結(jié)構(gòu)確證和純度檢查，在選定的色譜條件下測定，按歸一化法計(jì)算含量為98. 5%，結(jié)果表明所制備的野薔薇苷和薔薇苷化學(xué)對照品符合含量測定用對照品要求。野薔薇苷與薔薇苷對照品采用如下方法自制將金櫻根的根莖，粉碎，用提取溶劑提取后，將提取液減壓濃縮，進(jìn)行溶劑萃取或上大孔樹脂吸附，并依次用水、30 %、40 90%乙醇洗脫，收集40 90%乙醇洗脫物，回收溶劑，再將萃取物或洗脫物經(jīng)過柱層析分離，或?qū)⑻崛∫簼饪s至干后，直接經(jīng)過柱層析分離；將含有野薔薇苷和薔薇苷的餾分再次經(jīng)過硅膠柱層析分離，收集含有野薔薇苷和薔薇苷的餾分，得野薔薇苷和薔薇苷粗晶，再加入重結(jié)晶試劑反復(fù)重結(jié)晶即得。具體地說采用如下方法自制取新鮮金櫻根根莖10Kg，粉碎，用60%乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，濃縮得浸膏。浸膏加蒸餾水IOOOmL使均勻分散，加同樣體積乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯，濃縮回收溶劑，得乙酸乙酯浸膏。乙酸乙酯浸膏用硅膠柱層析粗分離，以氯仿/甲醇(10 0 0 10)梯度洗脫，每個(gè)梯度洗脫3000mL，TLC檢測合并相同部分，得到9個(gè)主要部分。其中富含野薔薇苷和薔薇苷的餾分，以氯仿/甲醇(10 1) 為洗脫劑進(jìn)行硅膠柱層析，收集富含野薔薇苷的餾分，在體積比為10 1的氯仿/甲醇混合溶液中重結(jié)晶，得白色不定型固體，即野薔薇苷；收集富含薔薇苷的餾分，以55%甲醇為洗脫劑反復(fù)進(jìn)行中壓反相柱層析，在體積比為10 1的氯仿/甲醇混合溶液中重結(jié)晶，得白色不定型固體，即薔薇苷。2、色譜條件的選擇色譜柱=Phenomenex C18 (250 X 4. 6mm, 5 μ m)；流動相甲醇-水(56 44)；流速0. 8ml/min ；漂移管溫度90°C ；氣體流速2. 4L/min ；在流動相選擇中，試驗(yàn)了不同比例的甲醇-水系統(tǒng)的分離效果，結(jié)果以甲醇-水 (56 44)為最佳，保留時(shí)間適宜，分離效果能滿足要求。在選定的條件下，三批供試品的野薔薇苷與薔薇苷色譜峰的分離度、理論板數(shù)的結(jié)果見表1。表1、野薔薇苷與薔薇苷理論板數(shù)和分離度的結(jié)果
供試品野薔薇苷理論板數(shù)薔薇苷理論板數(shù)分離度金櫻根(金櫻子、廣西柳州)252826151. 596金櫻根(金櫻子、廣西忻城)353636321. 538金櫻根(金櫻子、湖南株洲)243324581. 572野薔薇苷與左側(cè)薔薇苷峰分離度R1 = 2 (tR-tRl) / (ff+ffl)tR_為相鄰兩峰中后一峰的保留時(shí)間tRl-為相鄰兩峰中前一峰的保留時(shí)間W、Wl此相鄰兩峰的峰寬根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，考慮到儀器、色譜柱、流動相的配制和溫度等系統(tǒng)因素的影響，規(guī)定理論板數(shù)按野薔薇苷峰計(jì)算，應(yīng)不低于2000。3、線性范圍的考察對照品溶液的制備取經(jīng)105°C干燥至恒重的野薔薇苷與薔薇苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml各含Img的混合溶液(野薔薇苷實(shí)取10. 3aiig，薔薇苷實(shí)取10. 61mg，定容至 10ml，即分別為 1. 032mg/ml、1. 061mg/ml)，即得。測定分別精密吸取混合對照品溶液溶液1 μ 1、2μ 1、4μ 1、8μ 1、10μ 1注入液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積的自然對數(shù)為橫坐標(biāo)，以進(jìn)樣量的自然對數(shù)為縱坐標(biāo)，回歸計(jì)算，得線性方程，測定結(jié)果見表2，表3。表2、野薔薇苷對照品線性考察結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種金櫻根的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述質(zhì)量控制方法為控制金櫻根中野薔薇苷(C36H58Oltl)的質(zhì)量含量不得少于0. 15%，和/或薔薇苷(C36H58Oltl)的質(zhì)量含量不得少于 0. 15%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于，該方法為采用HPLC-ELSD法測定野薔薇苷和/或薔薇苷的含量。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述采用HPLC-ELSD法測定野薔薇苷和/或薔薇苷的含量的步驟包括色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、對照品溶液的制備、供試品溶液的制備、含量的測定。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)為用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水為流動相；用蒸發(fā)光散射檢測器檢測或使用紫外檢測器檢測；理論板數(shù)按野薔薇苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述甲醇-水中甲醇與水的體積比為56 44。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述對照品溶液的制備為分別取野薔薇苷與薔薇苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml各含0. 5mg的混合溶液，即得。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述野薔薇苷與薔薇苷對照品采用如下方法自制將金櫻根的根莖，粉碎，用提取溶劑提取后，將提取液減壓濃縮，進(jìn)行溶劑萃取或上大孔樹脂吸附，并依次用水、30%、40 90%乙醇洗脫，收集40 90%乙醇洗脫物，回收溶劑，再將萃取物或洗脫物經(jīng)過柱層析分離，或?qū)⑻崛∫簼饪s至干后，直接經(jīng)過柱層析分離；將含有野薔薇苷和薔薇苷的餾分再次經(jīng)過硅膠柱層析分離，收集含有野薔薇苷和薔薇苷的餾分，得野薔薇苷和薔薇苷粗晶，再加入重結(jié)晶試劑反復(fù)重結(jié)晶即得。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述供試品溶液的制備為取過三號篩的本品粉末約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80 %甲醇50ml，稱定重量， 在功率250W、頻率40kHz的條件下超聲處理45分鐘，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，回收溶劑至干，殘?jiān)?. 05mol/L氫氧化鈉溶液20ml，使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15ml，合并正丁醇提取液，用水40ml 洗滌1次，取正丁醇液，減壓回收溶劑至干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述含量的測定為分別精密吸取對照品溶液5μ 1、10μ 1與供試品溶液10 20 μ 1，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程分別計(jì)算野薔薇苷、薔薇苷的含量，即得；本品按干燥品計(jì)算，含野薔薇苷 (C36H58O10)與薔薇苷(C36H58O10)分別不得少于0. 15%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種金櫻根的質(zhì)量控制方法，該方法為控制金櫻根中野薔薇苷(C36H58O10)的質(zhì)量含量不得少于0.15％，和/或薔薇苷(C36H58O10)的質(zhì)量含量不得少于0.15％。該方法為采用HPLC-ELSD法測定野薔薇苷和/或薔薇苷的含量。本發(fā)明所提供的金櫻根的質(zhì)量控制方法引入了野薔薇苷和/或薔薇苷的含量測定，從而使金櫻根的質(zhì)量控制指標(biāo)更加全面；本發(fā)明首次將HPLC-ELSD法用于野薔薇苷和/或薔薇苷的含量測定，該方法精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性好。
文檔編號A61P31/04GK102552476SQ20111002894
公開日2012年7月11日 申請日期2011年1月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月31日
發(fā)明者云強(qiáng), 周艷林, 鄒節(jié)明 申請人:桂林三金藥業(yè)股份有限公司