專利名稱：一種星座美洲海鞘脂溶性提取物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領域星座美洲海鞘提取物的制備及其用途。
背景技術：
星座美洲海鞘，也稱星座裙胃海鞘、星座列精海鞘，拉丁名Amarouciumconstellatum Verrill,國外也命名為 Aplidium constellatum Verrill ;為海鞘綱(Ascidiacea)、簡觸亞目(Aplousobranchia)、三段海鞘科(Polyclinidae)海鞘，是我國東南沿海常見海洋附著生物；實驗表明，星座美洲海鞘提取物尤其是こ酸こ酯萃取部位對鹵蟲(Artemia salina)無節(jié)幼體顯示了較強的細胞毒性，提示脂溶性部位可能具有一定的抗腫瘤活性；其結果見于以下文獻方玉春，宋瑾，朱天驕，等.青島沿海海洋附著生物抗腫瘤活性的篩選[J].中國海洋藥物，2004，23 (2) :9-10。有關星座美洲海鞘脂溶性提取物在藥物和功能食品中的應用目前尚無文獻報道。海洋動物脂溶性提取物的常規(guī)化學溶劑提取方法具體包括冰凍個體解凍、切片粉碎，或凍干個體粉碎，然后用有機溶劑或/和水提取制備得到總提取物，所用的有機溶劑可采用醇類，如こ醇，甲醇；將總提取物溶于水或甲醇水溶液后，以較高沸點烷烴(石油醚、正己烷、環(huán)己烷)，或こ酸こ酯等酯類、氯仿或ニ氯甲烷等鹵代烴類溶劑萃取，取溶劑萃取相，回收溶劑后干燥即得到脂溶性部位，其中所用的烷烴(或酯類、鹵代烴類)溶劑優(yōu)選采用環(huán)己烷或こ酸こ酷。脂溶性部位也可以直接通過上述烷烴、酷類或鹵代烴類溶劑提取、或者ニ氧化碳(CO2)超臨界萃取獲得。海洋魚油的常見エ業(yè)制備方法有壓榨法和溶劑提取法，壓榨法一般包含高溫蒸煮步驟，溶劑提取法溫度也往往高于60°C ;從而容易引起其中不穩(wěn)定脂溶性成分變質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供ー種星座美洲海鞘脂溶性提取物的快速低溫制備方法及其用途。本發(fā)明的技術方案采用星座美洲海鞘冰凍個體直接加こ酸こ酯形成低溫混合物，粉碎勻漿，離心，取上層こ酸こ酯清液，回收溶劑后干燥，其特征是提取步驟如下A、稱取星座美洲海鞘-18°C冰凍個體，按照每公斤海鞘加IL溶劑的比例，即直接加入I倍體積的こ酸こ酯形成低溫混合物，再粉碎勻漿6min ；B、4°C低溫離心6min,轉(zhuǎn)速6500轉(zhuǎn)/min ;離心后傾倒收集上層こ酸こ酯清液；下層為水和肉糜混合物；C、水和肉糜混合物再加I倍體積的こ酸こ酯重復2次步驟A、B中的勻漿、離心過程，收集每次的上層こ酸こ酯清液；D、合并3次的上層こ酸こ酯清液，減壓濃縮回收溶劑こ酸こ酷，干燥，得到粘稠油狀物，即星座美洲海鞘脂溶性提取物。星座美洲海鞘脂溶性提取物中多不飽和脂肪酸類化合物的相對含量采用氣相色譜-質(zhì)譜法GC-MS進行分析，測定吋，將星座美洲海鞘脂溶性提取物樣品按照GB/T17376-1998動植物油脂標準進行脂肪酸甲酯制備，再按照GB/T17376-1998動植物油脂標準進行脂肪酸甲酯的氣相色譜分析；各脂肪酸組分的相對含量以面積歸一法計算得出。本發(fā)明的突出特點是為星座美洲海鞘提供了新的快速低溫制備方法，其脂溶性部位制備エ藝簡單，具有提取溫度低、操作時間短的優(yōu)點，可有效降低制備過程中星座美洲海鞘脂溶性成分中的ω-3類多不飽和脂肪酸、類胡蘿卜素等氧化變質(zhì)的危險。星座美洲海鞘的原料來源豐富、價廉，制備的提取物以ω-3類多不飽和脂肪酸類化合物EPA+DHA作為質(zhì) 量控制的氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)指標成分，相對含量大于等于30%;涉及血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平的降低，具有良好的防治血脂升高的作用，有很好的開發(fā)和食用、藥用前景，可用于制備防治血脂升高的藥物或功能性食品。
具體實施例方式實施例I星座美洲海鞘-18°C冰凍個體每次取2. 0kg，直接加2Lこ酸こ酷，在粉碎勻漿6min，4°C低溫離心，轉(zhuǎn)速6500轉(zhuǎn)/min ;收集上層こ酸こ酯清液；下層水分和肉糜混合物再加2. OLこ酸こ酯快速重復2次勻漿、離心過程；合并3次的上層こ酸こ酯清液，回收溶劑后干燥，得到黃褐色粘稠油狀物，即星座美洲海鞘脂溶性提取物。重復多次提取，產(chǎn)品在24. 8-31. 2克之間，其提取率為I. 24-1. 56%。星座美洲海鞘脂溶性提取物中多不飽和脂肪酸類化合物的相對含量采用氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)進行分析，測定時，將星座美洲海鞘脂溶性提取物樣品按照GB/T17376-1998動植物油脂標準進行脂肪酸甲酷制備，再按照GB/T 17376-1998動植物油脂標準進行脂肪酸甲酯的氣相色譜分析；各脂肪酸組分的相對含量以面積歸一法計算得出。經(jīng)GC-MS分析，該脂溶性部位中EPA+DHA相對含量為30. 8-38. 2%，其中一次分析結果見表I。表I星座美洲海鞘脂溶性部位的脂肪酸組成脂肪酸種類脂肪酸相對含量％
豆寇酸(C14:0)3.76
棕梢酸(C16:0)14.5
十七碳酸(C17:0)1.12
硬脂酸(C18:0>8.65
總飽和靨肪酸28.0
十六礙燦酸(C16:l) 10.8 油酸(C18:l) 20.7 二十碳烯酸(C20:l) 2.91 二十碳五稀酸(C20:5, EPA) 19.5 二十 ニ碳六稀酸(C22:6, DHA) 12.7 EPA^IHA 32.2 總不飽和脂麻酸_66,6_實施例2按實施例I提取的星座美洲海鞘脂溶性提取物混懸于石油醚，然后以60%含水甲醇洗滌3次，去除部分大極性成分。取石油醚部分，經(jīng)回收溶劑干燥，得到淺黃褐色粘稠油狀物，其提取率為O. 90-1. 24%。經(jīng)氣相色譜-質(zhì)譜分析，該法提取脂溶性中EPA+DHA相對含量為 35. 2-40. 7%。實施例3按實施例I星座美洲海鞘個體解凍切片、粉碎后，加入的こ酸こ酯可采用80%含水甲醇代替并常溫浸泡提取三次，毎次3天，合并提取液，回收溶劑后干燥，得到深棕色粘稠膏狀物，即星座美洲海鞘總提取物。將星座美洲海鞘總提取物溶于60%含水甲醇，然后以石油醚萃取三次，取石油醚部分合并，經(jīng)回收溶劑干燥，得到黃褐色粘稠油狀物，即星座美洲海鞘脂溶性部位。重復多次提取，產(chǎn)品在56-81克之間，其提取率為I. 12-1. 62%。實施例4星座美洲海鞘脂溶性部位的體內(nèi)降血脂實驗I、實驗材料SD大鼠180 220g，雄性，60只，吉林大學白求恩醫(yī)科大學實驗動物中心(合格證號SCXK(吉)2008-0005);高脂飼料配方93. 8 %基礎飼料、I %膽固醇、5%豬油、O. 2%膽鹽；乳化剤聚山梨酸酯80(吐溫80)，I. Og乳化劑用蒸餾水定容到200ml，攪拌均勻；陽性藥物脂必妥，成都地奧九泓制藥廠(0902006)。星座美洲海鞘脂溶性提取物實驗室按實施例I制備，批號FMX-Oi 120090520。2、實驗方案分組正常組，模型組，脂必妥陽性藥物組，F(xiàn)MX-Oil低劑量組，F(xiàn)MX-Oil高劑量組共5組，每組12只。灌胃劑的配制陽性藥物組35mg/kg，脂必妥O. 070g溶解在9. 930ml乳化劑中，攪拌均勻，按O. 5ml/100g體重的量灌胃。FMX-Oil低劑量組8mg/kg, FMX-Oi 120090520藥品0.0168溶解在9.9841111乳化劑中，攪拌均勻，按O. 5ml/100g體重的量灌胃。高劑量組33mg/kg, FMX-Oi120090520藥品O. 067g溶解在9. 933ml乳化劑中，攪拌均勻，按O. 5ml/100g體重的量灌胃。給藥方案按預防給藥，正常喂養(yǎng)三天適應后，除正常組外其它各組給予高脂飼料，各給藥組分別同時給予陽性藥物及待測樣品FMX-0il20090520。檢測指標給藥30天后，處理動物，取血，測血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高 密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平。結果見表2。表2星座美洲海鞘脂溶性提取物對SD大鼠降血脂模型的實驗結果
權利要求
1.ー種星座美洲海鞘脂溶性提取物，采用星座美洲海鞘冰凍個體直接加こ酸こ酯形成低溫混合物，粉碎勻漿，離心，取上層こ酸こ酯清液，回收溶劑后干燥，其特征是提取步驟如下 A、稱取星座美洲海鞘-18°C冰凍個體，按照每公斤海鞘加IL溶劑的比例，即直接加入I倍體積的こ酸こ酯形成低溫混合物，再粉碎勻漿6min ； B、4°C低溫離心6min,轉(zhuǎn)速6500轉(zhuǎn)/min;離心后傾倒收集上層こ酸こ酯清液；下層為水和肉糜混合物； C、水和肉糜混合物再加I倍體積的こ酸こ酯重復2次步驟A、B中的勻漿、離心過程，收集毎次的上層こ酸こ酯清液； D、合并3次的上層こ酸こ酯清液，減壓濃縮回收溶劑こ酸こ酷，干燥，得到粘稠油狀物，即星座美洲海鞘脂溶性提取物。
2.根據(jù)權利要求I所述的ー種星座美洲海鞘脂溶性提取物，其特征是得到的星座美洲海鞘脂溶性提取物中EPA+DHA相對含量大于等于30%。
3.根據(jù)權利要求2所述的ー種星座美洲海鞘脂溶性提取物，其特征是該星座美洲海鞘脂溶性提取物用于制備防治血脂升高的藥物和功能性食品。
全文摘要
一種星座美洲海鞘脂溶性提取物，涉及生物醫(yī)藥領域星座美洲海鞘提取物的制備及其用途。本發(fā)明采用星座美洲海鞘個體直接加乙酸乙酯形成混合物，粉碎勻漿，離心，取上層乙酸乙酯清液，回收溶劑后干燥，其特征是稱取星座美洲海鞘-18℃冰凍個體，每公斤海鞘直接加1L溶劑，即加入1倍體積的乙酸乙酯形成低溫混合物，再粉碎勻漿6min；4℃低溫離心6min，轉(zhuǎn)速6500轉(zhuǎn)/min；離心后傾倒收集上層乙酸乙酯清液；下層水和肉糜混合物再加1倍體積的乙酸乙酯重復2次勻漿、離心過程，收集每次的上層乙酸乙酯清液；合并3次的上層乙酸乙酯清液，減壓濃縮回收溶劑乙酸乙酯，干燥，得到粘稠油狀物，即星座美洲海鞘脂溶性提取物。本發(fā)明用于防治血脂升高的藥物或功能性食品。
文檔編號A61K35/56GK102648923SQ201110048279
公開日2012年8月29日 申請日期2011年2月28日 優(yōu)先權日2011年2月28日
發(fā)明者楊橋, 樊成奇, 翟尚華, 邵盛男, 陸亞男 申請人:中國水產(chǎn)科學研究院東海水產(chǎn)研究所