專利名稱：赤芍有效組分及其制備方法與用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，涉及中藥有效組分，具體涉及從赤芍中提取有效組分及其 制備方法和醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
心血管疾病是危害人類健康的第一殺手，近年來，隨著我國人口老年化以及人們 工作、生活、飲食結(jié)構(gòu)及環(huán)境等的變化，冠心病等心腦血管疾病的發(fā)生率也逐年增多，嚴(yán)重 威脅著人民的身心健康。天然產(chǎn)物中許多活性物質(zhì)具有抗心肌缺血、缺氧作用，其中一些已 開發(fā)成治療冠心病和心絞痛的新藥。因而從天然產(chǎn)物中尋找具有抗心肌缺血、缺氧生理活 性的有效物質(zhì)，是發(fā)現(xiàn)、開發(fā)新藥的有效途徑之一。我國藥用生物資源十分豐富，其生理活 性物質(zhì)是研究和發(fā)現(xiàn)新藥先導(dǎo)化學(xué)物，開發(fā)新藥的天然寶庫。目前，我國從天然產(chǎn)物中提取 活性物質(zhì)，用于開發(fā)成治療冠心病、安全性好、毒性低的新藥還很少，從天然產(chǎn)物中提取活 性物質(zhì)，開發(fā)成具有抗心肌缺血，用于治療冠心病和心絞痛的新藥，具有重要應(yīng)用價(jià)值和廣 闊發(fā)展前景。赤芍為毛茛科芍藥(Paeonialactiflora Pall.)或川赤芍(A veitchii Lynch.)的干燥根。其味苦，微寒，歸肝經(jīng)，具有清熱涼血，散瘀鎮(zhèn)痛之功效?，F(xiàn)代研究表明， 赤芍中主要含有芍藥苷、羥基芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、氧化芍藥苷、芍藥花苷、沒食子酰芍藥 苷等苷類化合物，此外還有環(huán)烯醚萜類、三萜類、酚及其苷類、留醇及其苷類、鞣質(zhì)、酸類、酯 類、黃酮類、酮類、烷類、揮發(fā)油、糖、氨基酸、蛋白質(zhì)、脂肪油、樹脂、黏液質(zhì)、生物堿、色素、微 量元素等物質(zhì)。赤芍是傳統(tǒng)的活血化瘀類中藥，有較強(qiáng)的抗動脈粥樣硬化作用，該藥也能擴(kuò)張冠 脈血管，增加冠脈血流量從而增加心肌營養(yǎng)性血流量，保護(hù)缺血心肌，提高心肌對低氧的耐 受性，降低肺血管阻力，減輕后負(fù)荷。同時(shí)赤芍能夠降低門脈高壓，對微循環(huán)也有影響。藥理 學(xué)研究表明赤芍能抑制血小板聚集，改善紅細(xì)胞的通透性，增加紅細(xì)胞對低滲張力的抗性， 有一定穩(wěn)定紅細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的作用。另外，赤芍總苷能明顯延長大鼠和小鼠的凝血時(shí)間，并能 延長電刺激大鼠頸總動脈血栓形成的時(shí)間，提示赤芍總苷通過對凝血系統(tǒng)和血小板功能的 影響而產(chǎn)生抗血栓作用。赤芍具有以上對心血管系統(tǒng)的明顯藥理作用，因此，從赤芍中分離 出有效組分，開發(fā)出治療心血管疾病的現(xiàn)代中藥具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種赤芍有效組分，通過以下步驟制備獲得將赤芍藥材粉 碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取，藥渣加乙醇水溶液提取，將提取液濃縮成浸膏，用反 相硅膠柱對其進(jìn)行分離，首先用低濃度甲醇作為流動相，得洗脫液I，然后改換高濃度甲醇 作為流動相，得洗脫液11，最后改換甲醇作為流動相，得洗脫液III，將洗脫液111濃縮干燥 后得赤芍有效組分。具體制備步驟如下取赤芍藥材，將其粉碎后加入體積比1:1為乙酸乙酯和乙醇，加熱回流1小時(shí)，提取2次，濾液合并得提取液I，藥渣加入70%乙醇溶液，加熱回流1小時(shí)， 提取2次，濾液合并得提取液II，將提取液II濃縮成浸膏，用50%甲醇溶液溶解浸膏，采用 ODS-C18柱對其進(jìn)行分離，首先用低濃度的3% -8%甲醇溶液作為流動相，得洗脫液I，然后 改用高濃度的50% -80%的甲醇溶液作為流動相，得洗脫液II，最后改換100%的甲醇溶液 作為流動相，得洗脫液III，將洗脫液III濃縮干燥后得赤芍有效組分。也可選用低濃度的 5%甲醇溶液和高濃度的60%甲醇溶液。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供所述赤芍有效組分在制備治療心血管疾病的藥物中 的應(yīng)用。經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明提供的赤芍有效組分對心肌細(xì)胞有保護(hù)作用。本發(fā)明提供的赤芍有效組分作為活性成分，加入藥劑學(xué)上接受的輔料，按照藥劑 學(xué)上記載的制劑的制備方法制成制劑。所述的制劑包括注射液、滴注液、粉針劑、顆粒劑、片劑、沖劑、散劑、口服液、糖衣 片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口含劑、顆粒劑、丸劑、膏劑、 丹劑、噴霧劑、滴丸劑、崩解劑、口崩片、微丸等。本發(fā)明提供的赤芍有效組分可在制備治療、預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā) 明提供的制備方法設(shè)計(jì)合理，能快速準(zhǔn)確地得到有效成分，在生產(chǎn)中更易于藥物的質(zhì)量控 制。
具體實(shí)施例方式下面將結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容和有益效果，該實(shí)施例僅用 于說明本發(fā)明而非對本發(fā)明的限制。實(shí)施例一赤芍有效組分的制備
將赤芍藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取，藥渣加乙醇水溶液提取，將提取液 濃縮成浸膏，用反相硅膠柱對其進(jìn)行分離，首先用低濃度甲醇作為流動相，得洗脫液I，然后 改用高濃度甲醇作為流動相，得洗脫液II，最后改換甲醇作為流動相，得洗脫液III，將洗 脫液III濃縮干燥后得赤芍有效組分。實(shí)施例二赤芍有效組分的制備
取赤芍藥材，將其粉碎后加入體積比為1:1的乙酸乙酯和乙醇，加熱回流1小時(shí)，提取 2次，濾液合并得提取液I。藥渣加入70%乙醇，加熱回流1小時(shí)，提取2次，濾液合并得提 取液II，將提取液II濃縮成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱對其進(jìn)行分離，首 先用5%甲醇作為流動相，得洗脫液I，然后改用60%甲醇作為流動相，得洗脫液II，最后改 用100%甲醇作為流動相，得洗脫液III，將洗脫液III濃縮干燥后得赤芍有效組分。實(shí)施例三滴丸制劑的制備
取赤芍有效組分0. 5g與10. 5g聚乙二醇-20000混合均勻，加熱熔融，化料后移至滴丸 滴灌中，藥液滴至6、°C液體石蠟中，除油，制得滴丸400粒。實(shí)施例四凍干粉針劑的制備
取赤芍有效組分0. 5g、葡萄糖4. 5g、硫代硫酸鈉0. 9g和蒸餾水1000ml，上述組分混合 均勻后，分裝400支，冷凍干燥，即得。實(shí)施例五赤芍組分的活性評價(jià)實(shí)驗(yàn)
1.赤芍組分對H》2損傷心肌細(xì)胞的保護(hù)作用體外培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞，培養(yǎng)液為DMEM(高糖)+10%FBS (G) +1%非必需氨基酸+0. 1%雙 抗。取對數(shù)生長期細(xì)胞置于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，恒溫培養(yǎng)M h后，加入200 μ mol/mL H2O2 損傷心肌細(xì)胞30 min,再加入終濃度為50 μ g/mL的赤芍組分孵育M h，采用MTT法測定細(xì) 胞活力。結(jié)果表明，該組分對H2O2損傷心肌細(xì)胞的保護(hù)率為59.84%。
2.赤芍組分對缺氧復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞的保護(hù)作用
體外培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞，培養(yǎng)液為DMEM(高糖)+10%FBS (G) +1%非必需氨基酸+0. 1%雙 抗。取對數(shù)生長期細(xì)胞置于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，恒溫培養(yǎng)M h后，在缺氧小室中培養(yǎng)6 h。 缺氧結(jié)束后，取出細(xì)胞培養(yǎng)板加入經(jīng)無糖Hank’ s稀釋的終濃度為50 μ g/mL的赤芍組分，在 正常培養(yǎng)條件下孵育6 h，取細(xì)胞培養(yǎng)上清液測定乳酸脫氫酶(LDH)含量。結(jié)果表明，該組 分對缺氧復(fù)氧損傷的心肌細(xì)胞保護(hù)率為50. 72%。
權(quán)利要求
1.一種赤芍有效組分，其特征在于，通過以下步驟獲得將赤芍藥材粉碎后加入乙酸 乙酯和乙醇，加熱提取，藥渣加乙醇水溶液提取，將提取液濃縮成浸膏，用反相硅膠柱對其 進(jìn)行分離，首先用低濃度甲醇溶液作為流動相，得洗脫液I，然后改用高濃度的甲醇溶液作 為流動相，得洗脫液II，最后改用100%甲醇溶液作為流動相，得洗脫液III，將洗脫液III 濃縮干燥后得有效組分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種赤芍有效組分，其特征在于，低濃度甲醇為5%的甲醇溶 液，高濃度甲醇為60%的甲醇溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種赤芍有效組分，其特征在于，通過以下步驟獲得取赤芍 藥材，將其粉碎后加入體積比為ι ι的乙酸乙酯和乙醇，加熱回流1小時(shí)，提取2次，濾液合 并得提取液I，藥渣加入70%乙醇，加熱回流1小時(shí)，提取2次，濾液合并得提取液II，將提 取液II濃縮成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱對其進(jìn)行分離，首先用低濃度的 體積百分比3% -8%的甲醇溶液作為流動相，得洗脫液I，然后改用高濃度的50% -80%甲 醇溶液作為流動相，得洗脫液II，最后改換100%甲醇溶液作為流動相，得洗脫液III，將洗 脫液III濃縮干燥后得赤芍有效組分。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的一種赤芍有效組分在制備治療心血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物由赤芍有效組分加入藥劑學(xué)上 可接受的輔料，按照藥劑學(xué)上記載的制劑制備方法制成。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的制劑包括液體制劑或固體制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供一種赤芍有效組分，通過將赤芍藥材粉碎加熱提取，濃縮，反相柱分離，洗脫，洗脫液濃縮干燥后得到有效組分。本發(fā)明提供的赤芍有效組分可在制備治療、預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明制備方法設(shè)計(jì)合理，能快速準(zhǔn)確地得到有效成分，在生產(chǎn)中更易于藥物的質(zhì)量控制。
文檔編號A61P9/10GK102133277SQ201110057639
公開日2011年7月27日 申請日期2011年3月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月10日
發(fā)明者李云飛, 王毅, 程翼宇, 葛志偉 申請人:浙江大學(xué)