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      亞油酸在制備抗hpv藥物中的應用的制作方法

      文檔序號:1206634閱讀:448來源:國知局
      專利名稱:亞油酸在制備抗hpv藥物中的應用的制作方法
      技術領域
      本發(fā)明提供了一種亞油酸在制備治療抗HPV藥物中的應用。
      背景技術
      人類乳突病毒(Human Papillomavirus,簡稱HPV)是一種嗜上皮性病毒,有高度的特異性,長期以來,已知HPV可引起人類良性的腫瘤和撫,如生長在生殖器官附近皮膚和粘膜上的人類尋常疣、尖銳濕疣以及生長在粘膜上的乳頭狀瘤。像乙肝病毒一樣,HPV也是一種DNA病毒。它原是多瘤空泡病毒科的一員,1999年國際病毒分類委員會(ICTV)取消多瘤空泡病毒科,代之以乳頭瘤病毒科,因此,HPV便歸屬此門下。人類乳頭狀瘤病毒(HPV)引起的性傳染極為普遍,單是美國就有兩千萬人染得此病。HPV(人乳頭瘤病毒)是繼“世紀絕癥”艾滋病后的一種無藥可救的性病,不論男女都有可能感染HPV,女性染病后甚至可引致子宮頸癌。由于HPV通過皮膚直接傳染,使用安全套也無法預防。全世界有四億四千萬的人口受到HPV的感染,每年至少有五十萬的婦女被診斷有子宮頸癌,這些大部分發(fā)生在開發(fā)中的國家。HPV是引起子宮頸癌與生殖器疣,俗稱“菜花” 的元兇,在一百多種的HPV類型當中,已經知道有37種靠性接觸傳染,能夠導致性病。它們廣泛存在于成年人族群,來無影去無蹤,沒有任何癥狀。第6和第11類型可以引起男女兩性的生殖器疣。這種疣本身并非癌癥,但是它造成的疼痛和心理創(chuàng)傷非言語所能形容。但是,迂回感染了高風險的HPV類型就可以導致子宮頸癌、其它生殖器癌或肛門癌。這些高風險的類型大約有19種之多,其中以造成子宮頸癌的第16和第18類型最為常見。子宮頸癌是一個感染性疾病,它是可以預防,可以治療、治愈和消滅的。子宮頸癌是由于人乳頭瘤病毒感染引起的。如果能夠預防HPV感染,就可以說能夠預防子宮頸癌;如果沒有HPV感染,可以說不會得宮頸癌。這是已有定論的,這是在會上得到公認的。這里講的宮頸癌,就是指子宮頸的浸潤癌,簡稱CC。一般來講,宮頸癌就是浸潤癌;其他的癌前病變,就叫CIN,包括宮頸的原位癌,把它歸在CIN3里面。如果是浸潤癌,就叫子宮頸癌了。亞油酸,英文名稱=Iinoleic acid,學名順,順_9,12-十八(碳)二烯酸,是含有18個碳原子和2個雙鍵的不飽和脂肪酸,分子式=C18H32O2,分子結構簡式CH3(CH2)4CH = CHCH2CH = CH(CH2) 7C00Ho亞油酸具有降低血脂、軟化血管、降低血壓、促進微循環(huán)的作用,可預防或減少心血管病的發(fā)病率,特別是對高血壓、高血脂、心絞痛、冠心病、動脈粥樣硬化、 老年性肥胖癥等的防治極為有利。但是,對于亞油酸的抗HPV作用未見報道。

      發(fā)明內容
      本申請的發(fā)明人意外發(fā)現(xiàn),亞油酸具有抗HPV的作用。因此,本發(fā)明提供亞油酸在制備抗HPV藥物中的應用。本發(fā)明還提供亞油酸在制備預防或治療HPV相關疾病的藥物中的應用。
      本發(fā)明中,亞油酸是通過抑制角質形成細胞增殖來預防或治療HPV相關疾病的。本發(fā)明中,亞油酸是通過抑制成纖維細胞增殖來預防或治療HPV相關疾病的本發(fā)明所述的HPV相關疾病包括但不限于子宮頸癌、其它生殖器癌或肛門癌或生殖器疣。本發(fā)明所述的亞油酸優(yōu)選是藥學上可接受的純亞油酸,也可以是重量百分含量為 0. 45% 99. 9%的亞油酸溶液。本發(fā)明的亞油酸可以從市場購置,也可以按照現(xiàn)有技術的方法獲得,例如可以以大豆油為原料,經皂化、水解、初餾、精餾制備亞油酸;還可以以紅花油為原料制備亞油酸, 具體如下在反應器中,按配比為紅花油、水、氫氧化鈉=2.0 1. 1 1.0,先加入紅花油和水,攪拌均勻后,慢慢升溫至80°C,再緩慢地滴加氫氧化鈉溶液,滴加時間為30min,保溫反應乩。反應完畢,靜置30mln,分去下層的水,再用20min加入硫酸,加酸溫度為95 士 3°C, 硫酸加入量為氫氧化鈉的1. 2倍,水解時間4h。水解結束后,使水解物降至常溫,靜置分水。 然后進行水洗,水洗次數(shù)6 8次.每次加水量為紅花油量的2倍,洗至pH = 7,先沉降分水,再用離心機分離有機相和水相。將分離好的有機相,進行冷凍結晶,冷凍降溫速度為每小時5°C,冷凍結晶溫度為-8 -10°C,時間為48h,再用抽濾法將結晶物濾去,底部濾液為亞油酸產品。本發(fā)明的亞油酸溶液可以是用亞油酸配置的溶液,也可以是從天然植物中提取出來的提取物,例如可以是從鴉膽子提取出來的含亞油酸的鴉膽子脂溶性成分(鴉膽子油)。含亞油酸的鴉膽子油可以按照任何現(xiàn)有技術的方法獲得,優(yōu)選地,可以按照如下方法獲得(1)鴉膽子油的提取鴉膽子破碎果殼后,用體積為鴉膽子重量5倍量的石油醚提取2次,每次1小時,以70°C水浴加熱揮盡石油醚至恒重;(2)鴉膽子油的純化取步驟(1)的鴉膽子油加入石油醚稀釋,再加入活性炭,水浴回流,濾過,回收石油醚得無色鴉膽子油,以95%乙醇萃取3 5次,得95%乙醇萃取物。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)亞油酸對Hacat細胞增殖有抑制作用的趨勢,且隨藥物的作用時間延長,抑制的趨勢增大。表明亞油酸可以通過對人角質形成細胞的增殖抑制作用而抑制 HPV-DNA的復制,從而起到治療CA的作用。


      圖1藥理學PCR實驗工藝流程2HPV-DNA定量回歸直線圖3HPV-DNA擴增陽性標本結果4HPV-DNA擴增陰性標本結果5亞油酸回歸曲線圖6MTT法亞油酸對成纖維細胞的增殖影響作用圖7MTT法亞油酸對Hacat細胞的增殖影響作用圖8MTT法亞油酸對Hacat細胞的不同時間作用增殖影響圖A-以不同濃度為橫坐標,每一組柱圖從左向右分別是培養(yǎng)M小時、48小時和
      472小時的A值;圖B-以不同作用時間為橫坐標1-1% DMS0, 2-0. 00156g/ml 亞油酸,3-0. 00312g/ml 亞油酸,4-0. 00625g/ml 亞油酸,5-0. 0125g/ml 亞油酸,6_0. 025g/ml 亞油酸,7_0. 05g/ml 亞油酸
      具體實施例方式為了說明本發(fā)明的亞油酸的抗HPV和相關疾病的作用,本發(fā)明提供了以下實驗含亞油酸的鴉膽子的抗HPV作用本實驗研究的亞油酸來源于苦木科植物鴉膽子Brucea javanica(L. ) Merr的干燥成熟果實的提取物,具體研究內容如下藥材鑒定鴉膽子的鑒定基于歷代“本草”對中藥形態(tài)特征的記述往往不十分詳盡和準確。致使中藥的品種混亂現(xiàn)象相當突出,同名異物,同物異名等始終未能澄清。這對中藥的生產、科研均有妨礙。此外,中藥市場以次充好、以假亂真現(xiàn)象也較普遍,為了控制中藥質量、保證中藥研究的可信度,中藥材的鑒別有著十分重要的意義,為此,我們根據(jù)《中國藥典2005年版第一部中鴉膽子的相關內容,對本課題研究中所用的鴉膽子進行品種鑒定。1實驗藥材鴉膽子Q0080410)廣東康美藥業(yè)股份有限公司2實驗方法2.1鑒定方法根據(jù)《中國藥典》2005年版第一部中鴉膽子的相關內容規(guī)定,鴉膽子的品種鑒定主要是從性狀和與其它物質鑒別兩方面。具體的標準、方法和結果見表1。表1鴉膽子的鑒定
      權利要求
      1.一種亞油酸在制備抗HPV藥物中的應用。
      2.一種亞油酸在制備預防或治療HPV相關疾病的藥物中的應用。
      3.如權利要求2的應用,其中亞油酸是通過抑制角質形成細胞增殖來預防或治療HPV 相關疾病的。
      4.如權利要求2的應用,其中亞油酸是通過抑制成纖維細胞增殖來預防或治療HPV相關疾病的。
      5.如權利要求2的應用,其中所述的HPV相關疾病是子宮頸癌。
      6.如權利要求2的應用,其中所述的HPV相關疾病是子宮頸癌意外的其它生殖器癌。
      7.如權利要求2的應用,其中所述的HPV相關疾病是肛門癌。
      8.如權利要求2的應用,其中所述的HPV相關疾病是生殖器疣。
      9.如權利要求1-8的應用,其中所述的亞油酸是重量百分含量為0.45% 99. 9%的亞油酸溶液。
      10.如權利要求9的應用,其中所述的亞油酸溶液是含亞油酸的鴉膽子油。
      11.如權利要求10的應用,其中所述的鴉膽子油是按照下述方法獲得的(1)鴉膽子油的提取鴉膽子破碎果殼后,用體積為鴉膽子重量5倍量的石油醚回流提取2次,每次1小時,以70°C水浴加熱揮盡石油醚至恒重;(2)鴉膽子油的純化取步驟(1)的鴉膽子油加入石油醚稀釋,再加入活性炭,水浴回流,濾過,回收石油醚得無色鴉膽子油,以95%乙醇萃取3 5次,得95%乙醇萃取物。
      全文摘要
      本發(fā)明提供了一種亞油酸在制備治療抗HPV藥物中的應用。本發(fā)明的亞油酸溶液可以是用亞油酸配置的溶液,也可以是從天然植物中提取出來的提取物。本發(fā)明的亞油酸對Hacat細胞增殖有抑制作用的趨勢,且隨藥物的作用時間延長,抑制的趨勢增大。從PCR實驗和細胞學實驗,證明具有抗HPV作用,能起到治療CA的作用。
      文檔編號A61P35/00GK102178668SQ20111007026
      公開日2011年9月14日 申請日期2011年3月23日 優(yōu)先權日2011年3月23日
      發(fā)明者馮怡, 朱艷紅, 楊柳, 鄧遠輝, 陳秀朵, 韓凌 申請人:廣州中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院
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