專利名稱：一種治療骨質(zhì)疏松癥的中藥組合物及補腎活血顆粒劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療骨質(zhì)疏松癥的中藥組合物，以及利用該組合物制備的中藥顆 粒劑一補腎活血顆粒。
背景技術(shù)：
骨質(zhì)疏松癥(Osteoporosis，OP)是一種以單位體積內(nèi)骨組織含量減少，骨密度降 低，骨強度減弱，導(dǎo)致骨結(jié)構(gòu)與骨脆性增加并易于發(fā)生骨折的全身性骨骼疾病，為骨科的常 見病、多發(fā)病，其臨床表現(xiàn)主要有骨折、疼痛及肌力低下等其他非特異性癥狀。隨著人口老 齡化的加速，OP已成為嚴重威脅中老年人健康的疾病。據(jù)調(diào)查，中國> 60歲人群的OP總發(fā) 病率為22.6%，男性為15%，女性為28.6%，并有逐年增高的趨勢。骨質(zhì)疏松癥又分為原發(fā) 性和繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥又分為與絕經(jīng)雌激素缺乏有關(guān)和與衰老有關(guān)的 兩類，絕經(jīng)后松質(zhì)骨丟失為I型骨質(zhì)疏松癥；而與年齡有關(guān)的皮質(zhì)骨和小梁骨都丟失者(女 性或男性)為II型骨質(zhì)疏松癥。即I型骨質(zhì)疏松癥是內(nèi)源性雌激素缺乏導(dǎo)致的，II型骨 質(zhì)疏松癥是骨重建效率、鈣和維生素D等的營養(yǎng)狀況，腸和腎對礦物質(zhì)代謝的影響及甲狀 旁腺激素的分泌水平等的綜合平衡的結(jié)果；繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥是繼發(fā)于某種藥物治療及其 他情況或疾病導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松癥?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認為正常成人期骨代謝主要靠破骨細胞的骨吸 收和成骨細胞的骨形成之間的協(xié)調(diào)平衡，從而形成體內(nèi)骨轉(zhuǎn)換的穩(wěn)定狀態(tài)；任何影響破骨 細胞和成骨細胞數(shù)目和功能的因素，使骨吸收過多或骨形成不足，即可導(dǎo)致骨質(zhì)疏松。目前 治療骨質(zhì)疏松的藥物主要可分為3大類①抑制破骨細胞活性的藥物，主要有雌激素、降鈣 素、雙膦酸鹽、異丙氧黃酮、選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑等，②促進成骨細胞生成的藥物，主要 有氯化物、甲狀旁腺激素、蛋白合成激素；③促進骨化的藥物，主要有鈣劑和維生素D及其 衍生物等。目前，臨床上對骨質(zhì)疏松的治療，以藥物治療為主，化學(xué)藥物治療骨質(zhì)疏松癥服 藥時間長，且易引起神經(jīng)系統(tǒng)和消化系統(tǒng)等一系列不良反應(yīng)，在一定程度上還會損害肝臟 等臟器，如雌激素替代療法可增加乳癌的危險性，氟化物可引起骨脆性增加；有些化學(xué)藥價 格昂貴，如活性維生素D、降鈣素。 長期的臨床研究表明，中醫(yī)藥對骨質(zhì)疏松的防治具有療效確切，無化學(xué)藥物的毒 副作用等優(yōu)勢。中醫(yī)認為，骨質(zhì)疏松癥屬于“骨痿”、“骨枯”、“骨痹”等范疇，認為“腎主骨生 髓”，“腎藏精，精生髓，髓養(yǎng)骨”，腎氣足，腎精充實則骨髓化生有源，骨骼堅固，強健有力；若 腎氣不足，腎精虧虛，則骨髓乏源，骨骼失養(yǎng)，脆弱無力。中醫(yī)以腎主骨理論為指導(dǎo)，認為腎 虛為骨質(zhì)疏松癥的主要病因，故確立了補腎為主的治則治法。補腎中藥具有促進成骨細胞、 抑制破骨細胞功能的雙向調(diào)節(jié)作用，促進骨折愈合，同時現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，腎虛者有下丘 腦-垂體-性腺軸功能減退，使體內(nèi)激素分泌失調(diào)。而補腎中藥可提高下丘腦_垂體_性 腺軸的功能，調(diào)節(jié)性激素水平，還可以提高性腺上雌激素受體水平和絕經(jīng)后婦女白細胞上 雌激素總體含量。鑒于骨質(zhì)疏松最常見最主要的癥狀為骨痛，“瘀血阻絡(luò)，不通則痛”，故瘀 血也為其證之一，對OP的治療應(yīng)在補腎基礎(chǔ)上合以活血化瘀、通絡(luò)止痛，因此課題組在前 期研究基礎(chǔ)上提出了補腎活血的基本治則。針對目前骨質(zhì)疏松的研究主要停留于專方專藥和單味中藥的實驗研究上，用于治療骨質(zhì)疏松的中藥制劑僅骨疏康顆粒、仙靈骨葆等少數(shù) 幾個品種。從中藥和天然藥物中尋找和開發(fā)具有自主知識產(chǎn)權(quán)、安全有效、工藝先進、質(zhì)量 穩(wěn)定可控的治療骨質(zhì)疏松的中藥新藥已經(jīng)成為研究開發(fā)的重點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療骨質(zhì)疏松癥的中藥組合物，以及利用該組合物制備 的中藥顆粒劑。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種治療骨質(zhì)疏松癥的中藥組合物，由質(zhì)量配比如下的組分組成熟地5 8份， 杜仲2 5份，附子5 8份，枸杞2 5份，肉桂3 5份，山茱萸1 3份，桃仁3 5 份，紅花1 3份，山藥2 5份，甘草3 5份。本發(fā)明中藥組合物具有補腎益精、活血化瘀、散寒止痛之療效，臨床用于治療骨質(zhì) 疏松癥。方中熟地益髓填精，杜仲補肝腎、壯筋骨，為君藥；附子、肉桂補腎陽，山茱萸、枸杞 養(yǎng)肝血，助君藥以滋腎養(yǎng)肝，是為臣藥；桃仁、紅花活血以散瘀止痛，為佐藥；山藥、甘草補 中養(yǎng)脾，為使藥；諸藥合用，共奏補腎益精、活血化瘀、散寒止痛之功效。作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述中藥組合物質(zhì)量組成如下熟地6份，杜仲4份，附子6 份，枸杞4份，肉桂4份，山茱萸2份，桃仁4份，紅花2份，山藥4份，甘草4份。補腎活血組方是由經(jīng)典古方右歸飲添加桃仁、紅花兩味活血中藥組成，其中杜 仲、熟地、附子、山茱萸、枸杞子、紅花、山藥、甘草8味藥采用水提取，肉桂、桃仁2味藥采 用乙醇提取。水提部分以松脂醇二葡萄糖苷(PDG)、羥基紅花黃色素A(HYSA)的轉(zhuǎn)移率為 評價指標，采用單因素試驗和正交試驗考察提取方法、浸泡時間、加水量、提取時間和提取 次數(shù)的影響，以綜合加權(quán)評分法(權(quán)重系數(shù)為松脂醇二葡萄糖苷羥基紅花黃色素A = 0.7 0. 3)確定補腎活血顆粒的最佳水提工藝，并對最佳工藝進行3份驗證試驗(同時檢 測烏頭堿的含量)。醇提部分以桂皮醛、苦杏仁苷的轉(zhuǎn)移率為評價指標，采用單因素試驗和 正交試驗考察提取方法、浸泡時間、乙醇濃度、加醇量、提取時間和提取次數(shù)的影響，以綜合 加權(quán)評分法(權(quán)重系數(shù)為桂皮醛苦杏仁苷=0.6 0. 4)，確定補腎活血顆粒的最佳醇提 工藝，并對最佳醇提工藝進行3份驗證試驗。采用乙醇沉淀法對水提液進行純化，以松脂醇 二葡萄糖苷、羥基紅花黃色素A的轉(zhuǎn)移率為評價指標，采用單因素試驗和正交試驗考察含 醇量、醇沉時間、含醇量、醇沉時間和藥液密度的影響，以綜合加權(quán)評分法(權(quán)重系數(shù)為松 脂醇二葡萄糖苷羥基紅花黃色素A = 0.7 0.3)確定補腎活血顆粒水提液的最佳純化 工藝，并對最佳純化工藝進行3份驗證試驗(包括烏頭堿的含量測定)。醇提液干浸膏得率 僅為8%，無需純化。按最佳提取工藝、純化工藝制備補腎活血流浸膏，以雌性SD大鼠建立 去勢大鼠骨質(zhì)疏松模型，進行藥效驗證試驗，結(jié)果表明組織形態(tài)學(xué)、骨密度、骨生物力學(xué)、血 鈣、堿性磷酸酶等均有所改善，證明所得提取、純化工藝的合理性。采用減壓干燥法，單因素 試驗考察溫度、干燥時間等因素的影響，確定減壓干燥的工藝參數(shù)，并進行3份驗證試驗。 采用單因素試驗考察輔料類型、輔料與浸膏的比例、潤濕劑濃度和用量；采用L9(34)正交試 驗考察影響較大的輔料與浸膏的比例、潤濕劑的濃度和用量，以成型率、吸濕性、溶解性、休 止角、制粒難易程度及口感等為評價指標，確定成型工藝條件。確定補腎活血組合物的最佳提取工藝為杜仲、熟地、附子、山茱萸等8味藥水提，肉桂、桃仁2味藥醇提。水提部分飲片浸泡lh，加入10 15倍量水回流提取2 4次，每次 1 2h ；提取液減壓濃縮至相對密度為1. 0 1. 1，再加入95%乙醇使含醇量為50 70%， 醇沉24 36h，回收乙醇并濃縮至藥液相對密度為1. 40以上；在0. 09MPa, 50 60°C條件 下進行減壓干燥24 72h，得到水提干浸膏粉；醇提部分的飲片以8 12倍60 %乙醇量浸 泡1 2h，回流提取3次，每次1 2h ；減壓濃縮至藥液相對密度為1. 40以上，在0. 09MPa, 50 60°C條件下進行減壓干燥24 72h，得到醇提干浸膏粉。浙江省中醫(yī)院、浙江省中醫(yī)骨傷研究所臨床應(yīng)用補腎活血方治療骨質(zhì)疏松療效顯 著，有效率達90 %以上，說明其臨床應(yīng)用安全、有效。課題組根據(jù)《中藥新藥研究的技術(shù)要 求》，將補腎活血方研究開發(fā)成具有自主知識產(chǎn)權(quán)、安全有效、工藝先進、質(zhì)量穩(wěn)定可控的治 療骨質(zhì)疏松癥的中藥新藥_補腎活血顆粒。本發(fā)明還涉及利用所述中藥組合物制備的補腎活血顆粒劑，制備所述顆粒劑的中 藥原料質(zhì)量組成如下熟地5 8份，杜仲2 5份，附子5 8份，枸杞2 5份，肉桂3 5份，山茱萸1 3份，桃仁3 5份，紅花1 3份，山藥2 5份，甘草3 5份，所述顆 粒劑由如下方法獲得(1)水提取物提取取配方量的熟地、杜仲、附子、枸杞、山茱萸、紅花、山藥和甘草 的中藥飲片，加入10 15倍質(zhì)量的水，浸泡1 2h后，回流提取2 4次，每次1 2h， 合并水提取液、減壓濃縮至相對密度為1.0 1. 1，再加入95%乙醇使含乙醇體積含量為 50 70%，醇沉24 36h，回收乙醇并濃縮至藥液相對密度為1. 40 1. 50，在0. 09MPa、 50 60°C條件下進行減壓干燥，得到水提干浸膏粉；(2)醇提取物提取取配方量的肉桂和桃仁的中藥飲片，加入8 12倍質(zhì)量的 50 70%乙醇浸泡1 2h后，回流提取2 4次，每次1 2h ；合并醇提取液、減壓濃縮 至藥液相對密度為1. 40 1. 50，在0. 09MPa、50 60°C條件下進行減壓干燥，得到醇提干
浸膏粉；(3)顆粒劑制備將水提干浸膏粉和醇提干浸膏粉混合均勻，按干浸膏粉(水提干 浸膏粉和醇提干浸膏粉之和)與麥芽糊精質(zhì)量比2 1 1 1的比例混合，以80 90% 乙醇為潤濕劑，加入輔料與浸膏粉總質(zhì)量15%的潤濕劑制成軟材，過10目篩制粒，50°C烘 干，整粒，得到所述補腎活血顆粒劑。本發(fā)明補腎活血顆粒的組方是由經(jīng)典古方右歸飲添加桃仁、紅花兩味活血中藥而 成，發(fā)明人前期對六個經(jīng)典補腎方(龜鹿二仙膏、左歸丸、補腎活血湯、補腎健脾湯、六味地 黃丸、金匱腎氣丸)進行系統(tǒng)研究，結(jié)果表明補腎活血湯對促進成骨細胞的增殖、分化及礦 化結(jié)節(jié)形成作用最強，并能顯著提高成骨細胞的活性，由此擬定了補腎活血方。實驗研究表 明，補腎活血方提取物能顯著提高血清Ca、P水平、從而提高骨密度，增強骨組織的強度，改 善骨的生物力學(xué)性能；能有效降低尿脫氧吡啶酚(DPD)的含量從而減少骨基質(zhì)中I型膠原 的代謝，降低骨丟失率；能提高骨質(zhì)疏松模型鼠體內(nèi)激素水平，降低整合素α νβ 3在破骨 細胞上的表達，從而抑制破骨細胞在骨基質(zhì)上的粘附，抑制骨吸收速率。補腎活血方由熟 地、杜仲、制附子、枸杞、肉桂、山茱萸、桃仁、紅花、山藥、甘草組成，方中熟地益髓填精，杜仲 補肝腎、壯筋骨，為君藥；附子、肉桂補腎陽，山茱萸、枸杞養(yǎng)肝血，助君藥以滋腎養(yǎng)肝，是為 臣藥；桃仁、紅花活血以散瘀止痛，為佐藥；山藥、甘草補中養(yǎng)脾，為使藥；諸藥合用，共奏補 腎益精、活血化瘀、散寒止痛之功效。
本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在本發(fā)明提供了一種治療骨質(zhì)疏松癥的中藥組合 物，以及利用該組合物制備的中藥顆粒劑——補腎活血顆粒，可較大限度地提取藥物有效 成分，提高藥效，且對該制劑建立了多組分多指標的質(zhì)量控制體系，更為符合中醫(yī)藥整體作 用的理論，為制劑質(zhì)量的穩(wěn)定可控提供科學(xué)依據(jù)，保證臨床用藥的安全有效。


圖1為補腎活血顆粒制劑中桂皮醛的薄層鑒別結(jié)果圖；1 缺肉桂陰性制劑；2 桂 皮醛對照品；3 實施例1補腎活血顆粒；4 實施例2補腎活血顆粒；5 實施例3補腎活血顆 粒；圖2為補腎活血顆粒制劑中紅花的薄層鑒別結(jié)果圖；1 缺紅花陰性制劑；2 紅花 對照藥材；3、4 實施例1補腎活血顆粒；；5、6 實施例2補腎活血顆粒；7、8 實施例3補腎 活血顆粒；圖3為補腎活血顆粒制劑中枸杞子的薄層鑒別結(jié)果圖；1 枸杞子對照藥材；2 缺 枸杞子陰性制劑；3 實施例1補腎活血顆粒；4 實施例2補腎活血顆粒；5 實施例3補腎活 血顆粒；圖4為補腎活血顆粒制劑中松脂醇二葡萄糖苷、苦杏仁苷、桂皮醛的HPLC檢測結(jié) 果圖譜；A 實施例1補腎活血顆粒供試品色譜圖；B 混合對照品色譜圖；C-I 缺杜仲陰性 對照液色譜圖；C-2 缺桃仁陰性對照液色譜圖；C-3 缺肉桂陰性對照液色譜圖；圖5為補腎活血顆粒制劑中羥基紅花黃色素A的HPLC檢測結(jié)果圖譜；A 實施例1 補腎活血顆粒供試品；B 羥基紅花黃色素A對照品；C-缺紅花陰性對照液。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行進一步描述，但本發(fā)明的保護范圍并不僅限于 此實施例1 處方熟地666g，杜仲444g，附子666g，枸杞444g，肉桂444g，山茱萸222g，桃仁 444g，紅花 222g，山藥 444g，甘草 444g ；制備方法杜仲、熟地、附子、山茱萸、等8味藥水提，肉桂、桃仁2味藥醇提。(1)水提取物提取取配方量的熟地、杜仲、附子、枸杞、山茱萸、紅花、山藥和甘草 中藥飲片，加入12倍量的水，浸泡1 2h后，回流提取3次，每次1. 5h，合并水提取液、減壓 濃縮至相對密度為1. 05，再加入95%乙醇使含乙醇量為60%，醇沉24h，回收乙醇并濃縮至 藥液相對密度為1. 45，在0. 09MPa、60°C條件下進行減壓干燥，得到水提干浸膏粉；(2)醇提取物提取取配方量的肉桂和桃仁的中藥飲片，加入10倍量的60%乙 醇浸泡Ih后，浸提3次，每次1. 5h ；合并醇提取液、減壓濃縮至藥液相對密度為1. 45，在 0. 09MPa、6(TC條件下進行減壓干燥，得到醇提干浸膏粉；(3)將水提干浸膏粉和醇提干浸膏粉混合均勻，按干浸膏粉與麥芽糊精質(zhì)量比 2 1的比例混合，以90%乙醇為潤濕劑，加入輔料與浸膏粉總質(zhì)量15%的潤濕劑制成軟 材，過10目篩制粒，50°C烘干，整粒，得到所述補腎活血顆粒劑。
實施例2:處方熟地550g，杜仲350g,附子550g，枸杞350g,肉桂350g,山茱萸230g，桃仁 350g，紅花 230g,山藥 350g,甘草 350g ；(1)水提取物提取取配方量的熟地、杜仲、附子、枸杞、山茱萸、紅花、山藥和甘草 中藥飲片，加入10倍量的水，浸泡1. 5h后，回流提取3次，每次0. 5h，合并水提取液、減壓濃 縮至相對密度為1. 05，再加入95%乙醇使含乙醇量為50%，醇沉36h，回收乙醇并濃縮至藥 液相對密度為1. 40，在0. 09MPa、60°C條件下進行減壓干燥，得到水提干浸膏粉；(2)醇提取物提取取配方量的肉桂和桃仁的中藥飲片，加入10倍量的60%乙醇 浸泡Ih后，回流提取3次，每次Ih ；合并醇提取液、減壓濃縮至藥液相對密度為1. 40，在 0. 09MPa、6(TC條件下進行減壓干燥，得到醇提干浸膏粉；(3)將水提干浸膏粉和醇提干浸膏粉混合均勻，按干浸膏粉與麥芽糊精質(zhì)量比 2 1的比例混合，以80%乙醇為潤濕劑，加入輔料與浸膏粉總質(zhì)量15%的潤濕劑制成軟 材，過10目篩制粒，50°C烘干，整粒，得到所述補腎活血顆粒劑。實施例3 處方熟地650g，杜仲450g，附子650g，枸杞450g，肉桂450g，山茱萸180g，桃仁 450g，紅花 180g,山藥 450g,甘草 450g ；(1)水提取物提取取配方量的熟地、杜仲、附子、枸杞、山茱萸、紅花、山藥和甘草 中藥飲片，加入8倍量的水，浸泡2h后，回流提取3次，每次1. 5h，合并水提取液、減壓濃縮 至相對密度為1. 10，再加入95%乙醇使含乙醇量為60%，醇沉48h，回收乙醇并濃縮至藥液 相對密度為1. 40，在0. 09MPa、55°C條件下進行減壓干燥，得到水提干浸膏粉；(2)醇提取物提取取配方量的肉桂和桃仁的中藥飲片，加入12倍量的60%乙醇 浸泡0. 5h后，浸提3次，每次1. 5h ；合并醇提取液、減壓濃縮至藥液相對密度為1. 40，在 0. 09MPa、55°C條件下進行減壓干燥，得到醇提干浸膏粉；(3)將水提干浸膏粉和醇提干浸膏粉混合均勻，按干浸膏粉與麥芽糊精質(zhì)量比 1 1的比例混合，以85%乙醇為潤濕劑，加入輔料與浸膏粉總質(zhì)量10%的潤濕劑制成軟 材，過10目篩制粒，45°c烘干，整粒，得到所述補腎活血顆粒劑。產(chǎn)品質(zhì)量鑒別本發(fā)明對補腎活血顆粒3批中試樣品中肉桂、紅花、枸杞等藥味建立了專屬的薄 層鑒別(TLC)方法；通過系統(tǒng)的方法學(xué)考察建立了補腎活血顆粒中羥基紅花黃色素A、松脂 醇二葡萄糖苷、苦杏仁苷、桂皮醛、烏頭堿的HPLC含量測定方法，制定相應(yīng)的含量限度；并 按2005版《中國藥典》(一部)附錄顆粒劑項下的要求進行相關(guān)的制劑通則檢查。各藥味薄層鑒別條件如下桂皮醛取補腎活血顆粒制劑3. 0g，加乙醇20mL回流提取30分鐘，放冷，濾過， 濾液作為供試品溶液。另取缺肉桂的其他藥味按供試品溶液的制備方法制成陰性對照品 溶液。取桂皮醛對照品1. 5mL,用乙醇稀釋成每ImL含1. 5 μ g的溶液，作為對照品溶液。 吸取上述溶液各5 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60 90°C )-乙酸乙酯 (17 13)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯胼乙醇試液，置日光燈下觀察，結(jié)果見 圖1。在TLC圖譜中，補腎活血顆粒供試品色譜在與桂皮醛對照品色譜相應(yīng)的位置上，日光 下顯相同的黃色斑點，而缺肉桂的陰性對照溶液無此斑點。
紅花取補腎活血顆粒制劑2. 5g，加80%丙酮溶液10mL，超聲30分鐘，離心，吸取 上清液，即得供試品溶液。另取缺紅花藥材的其他藥味按供試品溶液的制備方法制成陰性 對照品溶液。取紅花對照藥材0. 5g，加80%丙酮溶液5mL，密塞，振搖15分鐘，靜置，吸取上 清液，即得對照藥材溶液。吸取上述陰性對照品溶液、對照藥材溶液各5 μ L，每批供試品溶 液各吸取5 μ L、7 μ L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以乙酸 乙酯-甲酸-水-甲醇(7 2 3 0.4)為展開劑，展開，取出，晾干，置日光燈下觀察， 結(jié)果見圖2。在日光燈下，補腎活血顆粒供試品色譜在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相 同顏色的斑點；而缺紅花的陰性對照溶液無此斑點。枸杞取補腎活血顆粒制劑2. 5g置分液漏斗中，加水20mL使溶解，用乙酸乙酯 20mL萃取3次(20mL/次)，提取液濃縮至約2mL作為供試品溶液。另取缺枸杞子藥材的其 他藥味按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。枸杞子對照藥材0. 5g，加水35mL，加 熱煮沸15分鐘，放冷，濾過，濾液用乙酸乙酯15mL振搖提取，提取液濃縮至約ImL作為對照 藥材溶液。吸取上述兩種溶液各5μ L分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲 烷-甲酸(3 2 1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下觀察，結(jié)果見圖
3。在紫外燈(365nm)下，補腎活血顆粒供試品色譜在與枸杞子對照藥材色譜相應(yīng)的位置 上，顯相同的藍色熒光斑點，而缺枸杞子的陰性對照溶液無此斑點。含量測定條件如下(1)松脂醇二葡萄糖苷、苦杏仁苷、桂皮醛RP-HPLC法色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試 驗色譜柱Zorbax Extend-C18 (4. 6mmX 150mm，5 μ m)；流動相乙腈/K = 13 87 55 45 (梯度洗脫程序見表96)；松脂醇二葡萄糖苷、苦杏仁苷、桂皮醛檢測波 長分別為:227nm、210nm、290nm ；流速1. OmL · mirT1 ；柱溫-.25V ；進樣量20 μ L0本實驗條 件下，三成分與相鄰組分分離完全，分離度均大于1. 5 ；理論塔板數(shù)以松脂醇二葡萄糖苷峰 計不低于1000，以苦杏仁苷峰計不低于2000，以桂皮醛峰計不低于3000。結(jié)果見圖4。對照品溶液的制備分別精密吸取1. 065Χ IO-1Hig .!^―1松脂醇二葡萄糖苷對照品溶液0. 10mL、0. 30mL ； 分別精密吸取1. 443X KT1mg · πιΓ1苦杏仁苷對照品溶液0. 80mL、2. 50mL ；再分別精密吸取
4.406X 10_2mg · mL—1桂皮醛對照品溶液0. 20mL、l. OOmL ；分別置于5mL的容量瓶中，并用流 動相稀釋至刻度，得松脂醇二葡萄糖苷濃度為2. 130X10_3、9. 390Xl(r3mg · mL—1，苦杏仁苷 濃度為 2. 309Χ1(Γ2、7. 215Xl(T2mg · mL-1，桂皮酸濃度為 1. 763Χ1(Γ3、8. 813Xl(T3mg · mL_1 的混合對照品溶液。供試品溶液的制備取實施例1補腎活血顆粒1. 5g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加入流動相(0. 2%磷酸 溶液甲醇=74 26) 25mL,回流提取30分鐘，放冷，補足重量，濾過，精密吸取續(xù)濾液ImL 置5mL容量瓶中，用流動相稀釋并定容至刻度，搖勻，用0. 45 μ m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作 為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液20 μ L，注入高效液相色譜儀，測定，以外標 兩點法計算，即得。
(2)羥基紅花黃色素A RP-HPLC法色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗色譜柱ZorbaxSB-C18 (4. 6 X 150mm, 5 μ m)；流動相0. 2 % 磷酸甲醇= 74 26 ；流速1. OmL · min-1 ；柱溫25°C ；進樣量20μ L ；分離度> 1. 5 ；理論塔板數(shù)以羥 基紅花黃色素A峰計不低于3000。結(jié)果見圖5。對照品溶液的制備精密吸取1. 425 X IO-1Hig · mL—1羥基紅花黃色素A對照品溶液0. 50mL、l. OOmL于 5mL的容量瓶中，分別用流動相稀釋至刻度，得濃度為0.01425、0. 0285mg ^廠1對照品溶液。供試品溶液的制備取補腎活血顆粒3g，精密稱定，置50mL容量瓶中，加入適量流動相超聲30分鐘，放 冷，用流動相稀釋并定容至刻度，濾過，精密吸取續(xù)濾液ImL置5mL容量瓶中，用流動相稀釋 并定容至刻度，搖勻，用0. 45 μ m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液10 μ L，注入高效液相色譜儀，測定，以外標 兩點法計算，即得。結(jié)論補腎活血顆粒中松脂醇二葡萄糖苷、羥基紅花黃色素Α、桂皮醛、苦杏仁苷、烏 頭堿的HPLC含量測定方法，松脂醇二葡萄糖苷在濃度為8. 52 149. Ing范圍內(nèi)呈良 好的線性關(guān)系，回歸方程為Y = 1. 507Χ103Χ-2. 982 X IO3 (r = 0.9990)，平均回收率 為98. 26 %，RSD為1.6% (η = 6)。羥基紅花黃色素A在57. 0 1140ng范圍內(nèi)呈良 好的線性關(guān)系，回歸方程為Y = 2. 847Χ103Χ+9. 013XlO3(r = 0. 9999)，平均回收率為 101. 0%, RSD0. 65% (η = 6)。苦杏仁苷在0. 05772 1. 732 μ g范圍內(nèi)呈良好的線性 關(guān)系，回歸方程為 Y = 1. 331X 106X-5. 705 X IO4 (r = 0. 9995)，平均回收率為 101.4%， RSD為1.1% (η = 6)。桂皮醛在8. 812 264. 4ng范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方 程為:Y = 1. 215Χ104Χ-3. 921 X IO4 (r = 0. 9995)，平均回收率為 99. 96%，RSD 為 1. 2% (η = 6)。烏頭堿在51.55ng 3093ng范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y = 1. 801Χ103Χ-1. 408 X IO5 (r = 0. 999)，平均回收率為 98. 58 %，RSD 為 1. 3 % (η = 6)。以 3批中試樣品平均含量的80%規(guī)定補腎活血顆粒中松脂醇二葡萄糖苷、羥基紅花黃色素Α、 苦杏仁苷、桂皮醛的含量限度依次為 0. 353mg · g—1，1. 42mg · 04mg · g-1，?！?537mg · g-1。 性狀、粒度、水分、溶化性和裝量差異等各項制劑通則檢查均符合2005年版《中國藥典》(一 部)附錄顆粒項下相關(guān)規(guī)定。
權(quán)利要求
1.一種治療骨質(zhì)疏松癥的中藥組合物，由質(zhì)量配比如下的組分組成熟地5 8份，杜 仲2 5份，附子5 8份，枸杞2 5份，肉桂3 5份，山茱萸1 3份，桃仁3 5份， 紅花1 3份，山藥2 5份，甘草3 5份。
2.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于所述中藥組合物質(zhì)量組成如下熟地6 份，杜仲4份，附子6份，枸杞4份，肉桂4份，山茱萸2份，桃仁4份，紅花2份，山藥4份， 甘草4份。
3.利用權(quán)利要求1所述中藥組合物制備的補腎活血顆粒劑，制備所述顆粒劑的中藥原 料質(zhì)量組成如下熟地5 8份，杜仲2 5份，附子5 8份，枸杞2 5份，肉桂3 5 份，山茱萸1 3份，桃仁3 5份，紅花1 3份，山藥2 5份，甘草3 5份，所述顆粒 劑由如下方法獲得(1)水提取物提取取配方量的熟地、杜仲、附子、枸杞、山茱萸、紅花、山藥和甘草中藥 飲片，加入10 15倍質(zhì)量的水，浸泡1 池后，回流提取2 4次，每次1 池，合并水 提取液、減壓濃縮至相對密度為1. 0 1. 1，再加入95%乙醇使含乙醇量為50 70%醇沉 24 36h，回收乙醇并濃縮至藥液相對密度為1. 40 1. 50，在0. 09MPa、60°C條件下進行減 壓干燥，得到水提干浸膏粉；(2)醇提取物提取取配方量的肉桂和桃仁的中藥飲片，加入8 12倍質(zhì)量的50 70%乙醇浸泡1 池后，回流提取2 4次，每次1 池；合并醇提取液、減壓濃縮至藥液 相對密度為1. 40 1. 50，在0. 09MPa、60°C條件下進行減壓干燥，得到醇提干浸膏粉；(3)顆粒劑制備將水提干浸膏粉和醇提干浸膏粉混合均勻，按干浸膏粉與麥芽糊精 質(zhì)量比2 1 1 1的比例混合，以80 90%乙醇為潤濕劑，加入輔料與浸膏粉總質(zhì)量 10 15%的潤濕劑制成軟材，過10目篩制粒，50°C烘干，整粒，得到所述補腎活血顆粒劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種治療骨質(zhì)疏松癥的中藥組合物及顆粒劑，所述中藥組合物由質(zhì)量配比如下的組分組成熟地5～8份，杜仲2～5份，附子5～8份，枸杞2～5份，肉桂3～5份，山茱萸1～3份，桃仁3～5份，紅花1～3份，山藥2～5份，甘草3～5份。本發(fā)明的優(yōu)點主要體現(xiàn)在本發(fā)明提供了一種治療骨質(zhì)疏松癥的中藥組合物，以及利用該組合物制備的中藥顆粒劑——補腎活血顆粒劑，可較大限度地提取藥物有效成分，提高藥效；而且對該制劑建立了多組分多指標的質(zhì)量控制體系，更符合中醫(yī)藥整體作用理論，為制劑質(zhì)量的穩(wěn)定可控提供科學(xué)依據(jù)，保證臨床用藥的安全有效。
文檔編號A61K36/8945GK102145106SQ20111008650
公開日2011年8月10日 申請日期2011年4月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月7日
發(fā)明者吳承亮, 尹華, 朱希, 李淵貞, 王知青, 童培建, 肖魯偉, 金紅婷 申請人:浙江中醫(yī)藥大學(xué)