專利名稱：一種含豬腦蛋白水解物的凍干組合物及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及藥用制劑領域，具體地說，涉及一種含豬腦蛋白水解物的凍干組合物及其制備方法。
背景技術：
腦外傷、腦血管病后遺癥嚴重威脅著人類健康，腦蛋白水解物中含有生物活性低分子多肽和人體必需的16種氨基酸，有利于細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的合成，有效地維護中樞神經(jīng)系統(tǒng)免受侵害，提高大腦抗缺氧能力，改善細胞的供血狀況。研究表明，腦蛋白注射液穩(wěn)定性差，在長期保存及長途運輸過程中，多肽類物質(zhì)易受環(huán)境影響發(fā)生聚合而影響產(chǎn)品質(zhì)量，容易發(fā)生臨床過敏反應。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有腦蛋白注射液存在的穩(wěn)定性差、不易長期存放等問題， 提供一種穩(wěn)定性好、存放時間長的含豬腦蛋白水解物的凍干組合物。本發(fā)明的另一目的是提供上述凍干組合物的制備方法。為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的含豬腦蛋白水解物的凍干組合物，該組合物由豬腦蛋白水解物、甘露醇、氫氧化鈉和還原型谷胱甘肽組成。前述的組合物，該組合物由以下重量份的成分組成豬腦蛋白水解物250-600、甘露醇10-100、還原型谷胱甘肽1-5. 5和氫氧化鈉5-8。優(yōu)選地，該組合物由以下重量份的成分組成豬腦蛋白水解物300-400、甘露醇 20-50、還原型谷胱甘肽1. 5-3和氫氧化鈉5-7。更優(yōu)選地，該組合物由以下重量份的成分組成豬腦蛋白水解物350、甘露醇35、 還原型谷胱甘肽1. 5和氫氧化鈉6。本發(fā)明還提供制備上述含豬腦蛋白水解物的凍干組合物的方法，該方法包括以下步驟1)將處方量的豬腦蛋白水解物、甘露醇和還原型谷胱甘肽加入適量注射用水中， 攪拌至完全溶解，得溶液I ；幻將氫氧化鈉加入適量注射用水中溶解，然后將氫氧化鈉溶液加入溶液I中，攪拌均勻，使混合液的PH值為5 6，得溶液II ；3)將溶液II除菌后冷凍干燥制成粉末狀的組合物。前述的方法，步驟3)中除菌采用的是0.2μπι微孔濾膜過濾除菌。前述的方法，所述豬腦蛋白水解物的制備方法為1)將冷凍豬腦用注射用水清洗2-3遍后，自然解凍，向豬腦中加入豬腦重量1-2倍的注射用水，進行勻漿；幻將勻漿液置水解罐中，用HCl調(diào)ρΗ值3. 5-5，加熱至40-50°C，按勻漿液重量加入5_12 %的胃蛋白酶，酶解15-20小時后，煮沸30min，冷卻至30_40°C，得水解液A ;3) NaOH調(diào)水解液A的ρΗ 值7. 5-8. 5，按水解液A重量加入2-10 %胰酶，酶解溫度40-50°C，酶解3_6小時后，煮沸 30min，冷卻至40-50°C，過濾，得粗濾液B ；4)向粗濾液B中按其重量0. 加入藥用活性炭加熱至90-100°C攪拌吸附20-25min后，冷卻至室溫，用0. 45 μ m微孔濾膜過濾除炭，再用 0. 22 μ m微孔濾膜過濾，得精濾液C ;5)將精濾液C冷凍干燥后即得粉末狀的豬腦蛋白水解物。本發(fā)明提供的含豬腦蛋白水解物的凍干組合物能夠克服現(xiàn)有腦蛋白注射液穩(wěn)定性差、多肽類物質(zhì)易受環(huán)境影響發(fā)生聚合等問題，更適于臨床使用。
具體實施例方式以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。實施例11、配方(重量mg)豬腦蛋白水解物250、甘露醇10、還原型谷胱甘肽1、氫氧化鈉 5。2、豬腦蛋白水解物的制備方法1)將冷凍豬腦用注射用水清洗2-3遍后，自然解凍，向豬腦中加入等重量的注射用水，進行勻漿；2)將勻漿液置水解罐中，用HCl調(diào)pH值4，加熱至45°C，按勻漿液重量加入10%的胃蛋白酶，酶解20小時后，煮沸30min，冷卻至30°C，得水解液A ;3)NaOH調(diào)水解液A的pH值8，按水解液A重量加入10%胰酶，酶解溫度45°C，酶解5小時后，煮沸30min， 冷卻至45°C，過濾，得粗濾液B ；4)向粗濾液B中按其重量加入藥用活性炭加熱煮沸，攪拌吸附20min后，冷卻至室溫，用0. 45 μ m微孔濾膜過濾除炭，再用0. 22 μ m微孔濾膜過濾， 得精濾液C ；5)將精濾液C冷凍干燥后即得粉末狀的豬腦蛋白水解物。3、含豬腦蛋白水解物的凍干組合物的制備方法1)將處方量的豬腦蛋白水解物、甘露醇和還原型谷胱甘肽加入適量注射用水中， 攪拌至完全溶解，得溶液I ；2)將氫氧化鈉加入適量注射用水中溶解，然后將氫氧化鈉溶液加入溶液I中，攪拌均勻，使混合液的PH值為5，得溶液II ；3)將溶液II經(jīng)0. 2 μ m微孔濾膜過濾除菌后冷凍干燥制成粉末狀的組合物。實施例21、配方(重量mg)豬腦蛋白水解物600、甘露醇100、還原型谷胱甘肽5. 5和氫氧化鈉8。2、豬腦蛋白水解物的制備方法1)將冷凍豬腦(來源于健康動物)用注射用水清洗2-3遍后，自然解凍，向豬腦中加入等重量的注射用水，進行勻漿；2)將勻漿液置水解罐中，用HCl調(diào)pH值5，加熱至50°C， 按勻漿液重量加入12%的胃蛋白酶，酶解18小時后，煮沸30min，冷卻至40°C，得水解液A ； 3) NaOH調(diào)水解液A的pH值8. 5，按水解液A重量加入8 %胰酶，酶解溫度50 V，酶解6小時后，煮沸30min，冷卻至40°C，過濾，得粗濾液B ；4)向粗濾液B中按其重量0. 8 %加入藥用活性炭加熱煮沸，攪拌吸附25min后，冷卻至室溫，用0. 45 μ m微孔濾膜過濾除炭，再用 0. 22 μ m微孔濾膜過濾，得精濾液C ;5)將精濾液C冷凍干燥后即得粉末狀的豬腦蛋白水解物。3、含豬腦蛋白水解物的凍干組合物的制備方法1)將處方量的豬腦蛋白水解物、甘露醇和還原型谷胱甘肽加入適量注射用水中，攪拌至完全溶解，得溶液I ；2)將氫氧化鈉加入適量注射用水中溶解，然后將氫氧化鈉溶液加入溶液I中，攪拌均勻，使混合液的PH值為6，得溶液II ；3)將溶液II經(jīng)0. 2 μ m微孔濾膜過濾除菌后冷凍干燥制成粉末狀的組合物。實施例31、配方(重量mg)豬腦蛋白水解物350、甘露醇35、還原型谷胱甘肽1. 5和氫氧化鈉6。2、豬腦蛋白水解物的制備方法1)將冷凍豬腦(來源于健康動物)用注射用水清洗2-3遍后，自然解凍，向豬腦中加入等重量的注射用水，進行勻漿；2)將勻漿液置水解罐中，用HCl調(diào)pH值4，加熱至45°C， 按勻漿液重量加入10%的胃蛋白酶，酶解20小時后，煮沸30min，冷卻至35°C，得水解液A ； 3) NaOH調(diào)水解液A的pH值8，按水解液A重量加入10 %胰酶，酶解溫度50°C，酶解5小時后，煮沸30min，冷卻至45°C，過濾，得粗濾液B;4)向粗濾液B中按其重量1 %加入藥用活性炭加熱煮沸，攪拌吸附25min后，冷卻至室溫，用0. 45 μ m微孔濾膜過濾除炭，再用0. 22 μ m 微孔濾膜過濾，得精濾液C力)將精濾液C冷凍干燥后即得粉末狀的豬腦蛋白水解物。3、含豬腦蛋白水解物的凍干組合物的制備方法1)將處方量的豬腦蛋白水解物、甘露醇和還原型谷胱甘肽加入適量注射用水中， 攪拌至完全溶解，得溶液I ；2)將氫氧化鈉加入適量注射用水中溶解，然后將氫氧化鈉溶液加入溶液I中，攪拌均勻，使混合液的PH值為5. 5，得溶液II ；3)將溶液II經(jīng)0. 2 μ m微孔濾膜過濾除菌后冷凍干燥制成粉末狀的組合物。對比例1 同 CN1666777A 中實施例 1。1、組分健康動物腦組織水解物400ml，甘露醇100g，pH值5. 0-7. 0。2、制備工藝分裝后冷凍干燥法在潔凈室中，將健康動物的腦組織經(jīng)過處理和勻漿，酶解，脫脂，離心，超濾后制得原料藥。根據(jù)原料含量取約400ml，加注射用水400ml，加注射用甘露醇100g，攪拌溶解，測定溶液PH值應在5. 0-7.0，加注射用水至1000ml，經(jīng)0. (w/v)針用活性炭除雜質(zhì)、熱原，0. 22μm微孔濾膜除菌過濾，按規(guī)格灌裝于已滅菌的瓶中，在-4(rC預凍al，從-37°C 0°C升華干燥，0°C 37°C再干燥，37°C保溫2-3h，軋蓋，封口，包裝制得以腦蛋白水解物為主藥、甘露醇為賦形劑的粉針劑。對比例2同 CN1666777A 中實施例 2。1、組分健康動物腦組織水解物800ml，右旋糖酐100g，pH值5. 0-7. 0。2、制備工藝冷凍干燥后分裝法在潔凈室中，將健康動物的腦組織經(jīng)過處理和勻漿，酶解，脫脂，離心，超濾后制得原料藥。根據(jù)原料含量取約800ml，加注射用水800ml，加注射用右旋糖酐100g，攪拌溶解， 測定溶液PH值應在5. 0-7. 0，加注射用水至2000ml，經(jīng)0. 1% (w/v)針用活性炭除雜質(zhì)、熱原，0. 22 μ m微孔濾膜除菌過濾得無菌溶液。將無菌溶液放置大盤內(nèi)無菌凍干，粉碎，按規(guī)格分裝，軋蓋，封口，包裝制得以腦蛋白水解物為主藥、右旋糖酐為賦形劑的粉針劑。
對比例3 同 CN1666777A 中實施例 3。1、組分健康動物腦組織水解物400ml，山梨醇100g，pH值5. 0-7. 0。2、制備工藝減壓干燥后分裝法在潔凈室中，將健康動物的腦組織經(jīng)過處理和勻漿，酶解，脫脂，離心，超濾后制得原料藥。根據(jù)原料含量取約400ml，加注射用水400ml，加注射用山梨醇100g，攪拌溶解，測定溶液PH值應在5. 0-7. 0，加注射用水至1000ml，經(jīng)0. 1% (w/v)針用活性炭除雜質(zhì)、熱原， 0. 22 μ m微孔濾膜除菌過濾得無菌溶液。將無菌溶液放置大盤內(nèi)減壓干燥，粉碎，按規(guī)格分裝，軋蓋，封口，包裝制得以腦蛋白水解物為主藥、山梨醇為賦形劑的粉針劑。實驗例1安全性試驗對實施例制備的含豬腦蛋白水解物的凍干組合物和對比例制備的含豬腦蛋白水解物的凍干粉針劑進行安全性試驗考察，試驗方法及結(jié)果如下一、血管刺激性實驗取體重為2. 0-2. 5kg的健康兔子78只，隨機分為空白對照組、陽性實驗1 8組、 實驗1 4組，每組6只，采用兔耳緣靜脈緩慢注射，注射量為10ml/kg。其中空白對照組采用氯化鈉注射液，陽性對照1-8組分別采用實施例1 3制備的含豬腦蛋白水解物的凍干組合物，實驗1 4組分別采用對比例1 3制備的粉針劑，分別加注射用水溶解后注射。每天一次，連續(xù)給藥7天，于最后一次給藥M小時后剪短兔耳，置于10%甲醛溶液中固定標本，然后送病理進行組織學檢查(在兔耳緣靜脈的不同部位的5處取材，即從注射初始部位開始向心端每隔Icm作一切片)。經(jīng)兔耳緣靜脈病理學檢查，空白對照組和陽性對照1 8組的耳緣靜脈管壁完整， 內(nèi)皮細胞結(jié)構(gòu)清楚，無明顯病變，血管輕度擴張充血，無炎細胞浸潤。實驗1 4組出現(xiàn)部分血管輕度擴張充血，本發(fā)明的各個實驗組血管正常，未見有血管輕度擴張、血管變性、壞死等明顯刺激反應。二、溶血實驗實驗觀察了氯化鈉空白對照組、陽性對照1-8組與實驗1-4組對家兔血的體外溶血作用，其中空白對照組采用氯化鈉注射液，陽性對照1 8組分別采用實施例1 3制備的含豬腦蛋白水解物的凍干組合物，實驗1 4組分別采用對比例1 3制備的粉針劑，分別加注射用水溶解后注射。結(jié)果表明37°C、3小時，實驗1 4組出現(xiàn)了紅細胞聚集現(xiàn)象，而其余空白對照組及陽性對照1 8組均無溶血現(xiàn)象，未見紅細胞聚集現(xiàn)象出現(xiàn)。三、過敏實驗觀察豚鼠靜脈注射氯化鈉空白對照組、陽性實驗1 8組與實驗1 4組的過敏反應，其中空白對照組采用氯化鈉注射液，陽性對照1 8組分別采用實施例1 3制備的含豬腦蛋白水解物的凍干組合物，實驗1 4組分別采用對比例1 3制備的凍干粉針劑， 分別加注射用水溶解后注射。具體方法是實驗動物間日給予腹腔注射對比例1的含豬腦蛋白水解物的凍干粉針劑致敏，連續(xù)三次，然后將實驗動物分為空白對照組、陽性對照1 8組、實驗1 4組，共12組，并于致敏開始的第14天及21天分別攻擊給藥，立即觀察1小時。結(jié)果顯示，實驗1 4組出現(xiàn)了豎毛、呼吸困難、噴嚏、干嘔、咳嗽或羅音、抽搐、虛脫、死亡等現(xiàn)象，其余各組未出現(xiàn)上述現(xiàn)象。實驗例2穩(wěn)定性實驗室溫下放置9個月，分別放置0天、1個月、3個月、6個月、9個月及12個月按照中國藥典2000年版附錄IXB中規(guī)定檢測澄明度，觀察溶液外觀，結(jié)果見表1和表2 表1穩(wěn)定性檢測數(shù)據(jù)
權利要求
1.一種含豬腦蛋白水解物的凍干組合物，其特征在于，該組合物由豬腦蛋白水解物、甘露醇、氫氧化鈉和還原型谷胱甘肽組成。
2.根據(jù)權利要求1所述的組合物，其特征在于，該組合物由以下重量份的成分組成豬腦蛋白水解物250-600、甘露醇10-100、還原型谷胱甘肽1-5. 5和氫氧化鈉5_8。
3.根據(jù)權利要求2所述的組合物，其特征在于，該組合物由以下重量份的成分組成豬腦蛋白水解物300-400、甘露醇20-50、還原型谷胱甘肽1. 5-3和氫氧化鈉5_7。
4.根據(jù)權利要求3所述的組合物，其特征在于，該組合物由以下重量份的成分組成豬腦蛋白水解物350、甘露醇35、還原型谷胱甘肽1. 5和氫氧化鈉6。
5.一種制備權利要求1-4任一項所述組合物的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟1)將處方量的豬腦蛋白水解物、甘露醇和還原型谷胱甘肽加入適量注射用水中，攪拌至完全溶解，得溶液I ；2)將氫氧化鈉加入適量注射用水中溶解，然后將氫氧化鈉溶液加入溶液I中，攪拌均勻，使混合液的PH值為5 6，得溶液II ；3)將溶液II除菌后冷凍干燥制成粉末狀的組合物。
6.根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟幻中除菌采用的是0.2μ m微孔濾膜過濾除菌。
7.根據(jù)權利要求5或6所述的方法，其特征在于，豬腦蛋白水解物的制備方法為1)將冷凍豬腦用注射用水清洗2-3遍后，自然解凍，向豬腦中加入豬腦重量1-2倍的注射用水，進行勻漿；2)將勻漿液置水解罐中，用HCl調(diào)pH值3.5-5，加熱至40_50°C，按勻漿液重量加入 5-12%的胃蛋白酶，酶解15-20小時后，煮沸30min，冷卻至30_40°C，得水解液A ；3)NaOH調(diào)水解液A的pH值7.5-8. 5，按水解液A重量加入2_10 %胰酶，酶解溫度 40-500C，酶解3-6小時后，煮沸30min，冷卻至40_50°C，過濾，得粗濾液B ；4)向粗濾液B中按其重量0.5-1%加入藥用活性炭加熱至90-100°C攪拌吸附 20-25min后，冷卻至室溫，用0. 45 μ m微孔濾膜過濾除炭，再用0. 22 μ m微孔濾膜過濾，得精濾液C ；5)將精濾液C冷凍干燥后即得粉末狀的豬腦蛋白水解物。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種含豬腦蛋白水解物的凍干組合物及其制備方法，該含豬腦蛋白水解物的凍干組合物由豬腦蛋白水解物、甘露醇、氫氧化鈉和還原型谷胱甘肽組成。該含豬腦蛋白水解物的凍干組合物能夠克服現(xiàn)有腦蛋白注射液穩(wěn)定性差、多肽類物質(zhì)易受環(huán)境影響發(fā)生聚合等問題，更適于臨床使用。
文檔編號A61P25/00GK102166200SQ20111009224
公開日2011年8月31日 申請日期2011年4月12日 優(yōu)先權日2011年4月12日
發(fā)明者羅誠 申請人:羅誠