專利名稱：一種抗菌肽組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物藥物制劑領(lǐng)域，特別涉及一種穩(wěn)定抗菌肽制劑組方及其制備方法。
背景技術(shù)：
抗菌肽(antibacterial peptides, ABP)是生物體產(chǎn)生的一種具有強(qiáng)抗菌作用的陽離子小肽，是生物先天免疫的重要組成成分。迄今為止，已在許多生物包括昆蟲、鳥類、動(dòng)物、植物及原核生物中發(fā)現(xiàn)2000多種抗菌活性肽。效果研究表明，抗菌肽不但廣譜抗菌，能抑殺耐藥性菌株，而且它的殺菌機(jī)制使病原菌不易產(chǎn)生耐藥性突變，從而成為最具開發(fā)前景的抗生素替代品之一。 抗菌肽具有廣譜抗菌活性，并且發(fā)現(xiàn)其中有些種類具有抗腫瘤、病毒、真菌的能力。近年實(shí)驗(yàn)研究表明，抗菌肽能促進(jìn)傷口愈合?？咕哪艽碳だw維母細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，促進(jìn)肉芽組織增生，加快創(chuàng)面愈合，用抗菌肽Cytoporin和磺胺喃Pg銀制成的軟膏治療小白鼠燒傷，比單純用磺胺嘧啶銀傷口愈合快，疤痕小。Shahabuddin等(1998)發(fā)現(xiàn)昆蟲抗菌肽對(duì)感染蚊子的瘧原蟲發(fā)育的不同時(shí)期有不同的作用，主要對(duì)瘧原蟲的卵囊期和子孢子期造成明顯損傷。Efron等(2002)報(bào)道，從南美葉泡蛙皮膚得到的抗菌多肽demasepin對(duì)痕原蟲顯示抑制作用。由于抗菌肽獨(dú)特的抗菌機(jī)制，成為最具開發(fā)前景的抗生素替代品?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)外研究比較熱的抗菌肽，包括有天蠶素(cecropin)，哺乳動(dòng)物和人的防御素，人的BPI (殺菌/滲透-增強(qiáng)蛋白)，兩棲動(dòng)物的magainins等，蜜蜂的蜂毒中提取的蜂毒素等等。而通過DNA重組技術(shù)來獲得基因工程抗菌肽，則成為抗菌肽研究的熱點(diǎn)?？咕慕Y(jié)構(gòu)特點(diǎn)各種抗菌肽有相似的一級(jí)結(jié)構(gòu)，由二十幾至五十幾個(gè)氨基酸組成的短肽，一端為親水性，另一端為疏水性。二級(jí)結(jié)構(gòu)形成兩親a螺旋或￠-折疊。屬于堿性肽，帶多個(gè)正電荷，水溶性好。研制長(zhǎng)效、穩(wěn)定的抗菌肽緩釋制劑，是制劑專家不斷研發(fā)的重要課題。本發(fā)明通過系統(tǒng)研究，研制出了長(zhǎng)效一種穩(wěn)定、透皮效果好的抗菌肽組合物，此組合物在臨床使用中既可以涂抹、澆潑、噴灑，也可以注射，使用途徑多樣，并且透皮稀釋效果明顯增強(qiáng)，具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明人經(jīng)過深入、細(xì)致試驗(yàn)，研發(fā)出了在pH5. 0-7. 0之間穩(wěn)定的抗菌肽組合物，該組合物不需要添加血清白蛋白，主要成分容易獲得，組合物穩(wěn)定大大提高，透皮效果更好。本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定、透皮效果好的抗菌肽組合物及其制備方法，含有抗菌肽或修飾后的抗菌肽、保護(hù)劑、張力劑、促滲劑、PH緩沖物質(zhì)、輔料；各組分重量含量為抗菌肽0.5 20% (WAV)
保護(hù)劑0.1%-10% (W/W)
張力劑0.1%-1% (W/W)
促滲劑0.1% 5% (WAV)
pH 緩沖物質(zhì) 0.1%-18% (WAV)
輔料補(bǔ)至100% (W/W)。本發(fā)明所包含的抗菌肽可以是從動(dòng)物、植物、微生物中分離得到的，可以是基因工程方式表達(dá)的，可以是修飾過的或未修飾過的。 本發(fā)明所選用的保護(hù)劑為甘氨酸、精氨酸、賴氨酸、甘露醇、山梨醇中的一種或多 種；保護(hù)劑的優(yōu)選比例為甘氨酸、精氨酸、賴氨酸0. 1% -1.0% (W/W)，甘露醇、山梨醇1% -10% (W/W)。本發(fā)明所選用的張力劑為0. 1% -1% (W/W)的氯化鈉或氯化鉀。本發(fā)明所選用的促滲劑選自中鏈脂肪酸鈉鹽、膽酸鹽中的一種或多種；其中中鏈脂肪酸鈉鹽選自辛酸鈉、癸酸鈉、月桂酸鈉和油酸鈉中的一種或多種，膽酸鹽選自去氧膽酸鈉、鵝去氧膽酸鈉、甘氨膽酸鈉和?；悄懰徕c中的一種或多種。本發(fā)明的組合物要包括pH緩沖物質(zhì)，所選用的pH緩沖物質(zhì)選自NaH2P04-Na2HP04、檸檬酸-檸檬酸鈉兩種緩沖體系，使用比例為0. 1-18% (W/W)。所述輔料選自葡萄糖、果寡糖、殼寡糖中的一種或兩種以上組合。本發(fā)明通過以下制備方法獲得①先將張力劑、pH緩沖鹽、促滲劑與適宜的輔料進(jìn)行等量倍比稀釋，充分混合均勻；②將保護(hù)劑與抗菌肽充分混合均勻；然后用輔料倍比稀釋兩次；③將上述兩種混合物和剩余的全部輔料進(jìn)行混合，混合均勻后，即得所述組合物。本發(fā)明所述的抗菌肽組合物，在2_8°C下貯藏24個(gè)月后仍然保持著抗菌肽的高化學(xué)、生物學(xué)穩(wěn)定性。本文在說明用于本發(fā)明制劑中的抗菌肽時(shí)，使用的術(shù)語“高化學(xué)穩(wěn)定性”指制劑中的抗菌肽在2-8°C下貯藏24個(gè)月后，化學(xué)完整性保持至少85%。使用的術(shù)語“高生物學(xué)穩(wěn)定性”指本發(fā)明制劑中的抗菌肽在2-8°C下貯藏24個(gè)月后，生物學(xué)活性保持至少85%，(參見實(shí)施例2表I中的結(jié)果)，該生物學(xué)活性采用抑制液體生長(zhǎng)菌活性測(cè)定方法(具體見附件I)進(jìn)行。本發(fā)明的技術(shù)優(yōu)勢(shì)本發(fā)明所述的抗菌肽組合物，不用小牛血清或白蛋白作為保護(hù)劑，避免了這些蛋白攜帶病毒的潛在危險(xiǎn)，節(jié)約了成本，利于更準(zhǔn)確的監(jiān)測(cè)產(chǎn)品的質(zhì)量。該組合物既可以涂抹、澆潑、噴灑，也可以注射，使用途徑多樣。長(zhǎng)效、透皮效果增強(qiáng)的抗菌肽組合物在2-8°C貯藏24個(gè)月后仍然保持著抗菌肽的高活性。
具體實(shí)施例方式結(jié)合以下實(shí)施例可以觀察到本發(fā)明的有益性質(zhì)，這些實(shí)施例是說明性的，不會(huì)對(duì)本發(fā)明構(gòu)成限制。
實(shí)施例I、一種抗菌肽組合物及其制備方法除非另外說明，所述樣品包含
組分每kg用量
a.抗菌肽IOg
d.甘氨酸3g
b.NaH2PO4^H2O0.26g
c.Na2HPO4-12H203.9g
e.低聚殼寡糖IOg
f.山梨醇5g
g.癸酸鈉0.6g
h.甘氨膽酸鈉1.2g
i.氯化鈉5.Og
j.無水葡萄糖加至IOOOg組合物的配制方法是①先用無水葡萄糖分別等量倍比稀釋氯化鈉、NaH2PO4 2H20、Na2HPO4 12H20、癸酸鈉、甘氨膽酸鈉兩次，然后把幾個(gè)成分充分混合得混合物A ；②用無水葡萄糖分別等量倍比稀釋甘氨酸、山梨醇、低聚殼寡糖、抗菌肽兩次，然后把幾個(gè)成分充分混合得混合物B ；③將上述混合物A、B和剩余的全部無水葡萄糖進(jìn)行混合，混合均勻后，即得所述組合物。實(shí)施例2、一種抗菌肽組合物及其制備方法
組分每kg用量
a.抗菌肽IOg
b.梓檬酸0.3g
c.朽1檬酸鈉5.5g
d.精氨酸Ig
e.低聚殼寡糖IOg ￡山梨醇6g
g.月桂酸鈉0.24g
h.去氧膽酸鈉0.8g
i.氯化鉀3.0g
j.無水葡萄糖加至IOOOg組合物的配制方法是
①先用無水葡萄糖分別等量倍比稀釋氯化鉀、檸檬酸、檸檬酸鈉、月桂酸鈉、去氧膽酸鈉兩次，然后把幾個(gè)成分充分混合得混合物A ；
②用無水葡萄糖分別等量倍比稀釋精氨酸、山梨醇、低聚殼寡糖、抗菌肽兩次，然后把幾個(gè)成分充分混合得混合物B ；③將上述混合物A、B和剩余的全部無水葡萄糖進(jìn)行混合，混合均勻后，即得所述組合物。實(shí)施例3、抗菌肽組合物穩(wěn)定性考察評(píng)價(jià)方法和穩(wěn)定性考察結(jié)果除非有另外說明，否則都采用以下的步驟進(jìn)行穩(wěn)定性評(píng)價(jià)。將實(shí)施例I中的樣品分別置于溫度為4°C ±2°C的冰箱、溫度為25°C ±2°C和濕度為60% ±5%的恒溫恒濕箱中。穩(wěn)定性考察過程中測(cè)量所述組合物的外觀性狀、抗菌肽活性，并與初始配制組合物進(jìn)行比較。采用“抑制液體生長(zhǎng)菌活性測(cè)定”方法檢測(cè)抗菌肽活性，具體方法見附件I。實(shí)施例I中的組合物在4°C ±2°C的冰箱條件下放置24個(gè)月后，與初始配制樣品 無外觀性狀上、活性上的明顯差異，在25°C ±2°C和濕度為60% ±5%條件下放置6個(gè)月內(nèi)，制劑沒有明顯外觀性狀和活性上的變化。因此制劑在4°C條件下放置24月是穩(wěn)定的?；钚詼y(cè)定方法見附件一，具體活性測(cè)定結(jié)果見下表I所示。表I實(shí)施例I中抗菌肽組合物穩(wěn)定性考察數(shù)據(jù)
權(quán)利要求
1.一種抗菌肽組合物，其特征在于，所述組合物中各組分的重量含量為抗菌肽0.5 20% (WAV)保護(hù)劑0.1%-10% (W/W)張力劑0.1%-1% (W/W)促滲劑0.1% 5% (WAV)pH 緩沖物質(zhì) 0.1%-18% (WAV)輔料補(bǔ)至100% (W/W)。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種抗菌肽組合物，其特征在于，所述組合物中的抗菌肽選自動(dòng)物、植物、微生物中分離得到的、基因工程方式表達(dá)的、修飾過的或未修飾過的。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種抗菌肽組合物，其特征在于，所述組合物中使用的保護(hù)劑選自甘氨酸、精氨酸、賴氨酸、甘露醇、山梨醇中的一種或兩種以上組合；添加比例為甘氨酸、精氨酸、賴氨酸0. I %-1.0% (W/W)，甘露醇、山梨醇1%-10% (W/W)。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種抗菌肽組合物，其特征在于，所述組合物中使用的張力劑選自氯化鈉或氯化鉀中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種抗菌肽組合物，其特征在于，所述促滲劑選自中鏈脂肪酸鈉鹽、膽酸鹽中的一種或兩種以上組合。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種抗菌肽組合物，其特征在于，所述中鏈脂肪酸鈉鹽選自辛酸鈉、癸酸鈉、月桂酸鈉和油酸鈉中的一種或兩種以上組合。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種抗菌肽組合物，其特征在于，所述膽酸鹽選自去氧膽酸鈉、鵝去氧膽酸鈉、甘氨膽酸鈉和牛磺膽酸鈉中的一種或兩種以上組合。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種抗菌肽組合物，其特征在于，所述輔料選自葡萄糖、果寡糖、殼寡糖中的一種或兩種以上組合。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種抗菌肽組合物，其特征在于，所述PH緩沖物質(zhì)選自NaH2PO4-Na2HPO4、檸檬酸-檸檬酸鈉兩種緩沖體系，使用比例為0. 1-18% (W/W)。
10.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種抗菌肽組合物，其特征在于，其制備方法為 ①先將張力劑、PH緩沖鹽、促滲劑適宜的輔料進(jìn)行等量倍比稀釋，充分混合均勻； ②將保護(hù)劑與抗菌肽充分混合均勻；然后用輔料稀釋倍比兩次； ③將上述兩種混合物和剩余的全部輔料進(jìn)行混合，混合均勻后，即得所述組合物。
全文摘要
本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，涉及一種穩(wěn)定、透皮效果好的抗菌肽組合物及其制備方法。通過在抗菌肽制劑中加入保護(hù)劑、張力劑、促滲劑、pH緩沖物質(zhì)，使制劑使用時(shí)pH值控制在5.0-7.0范圍之間，大大提高抗菌肽的穩(wěn)定性，增強(qiáng)滲透效果。
文檔編號(hào)A61K38/17GK102727866SQ20111009272
公開日2012年10月17日 申請(qǐng)日期2011年4月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月13日
發(fā)明者劉桂蘭, 王偉穎, 閆亮亮 申請(qǐng)人:瑞普(天津)生物藥業(yè)有限公司