專利名稱：一種增強抗深度真菌感染的真菌藥物抑菌效果的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于抗真菌藥物領(lǐng)域，具體涉及一種增強抗真菌藥物抑菌效果的方法。
背景技術(shù)：
目前，根據(jù)其抑菌途徑抗真菌藥物主要有阻斷病原菌DNA、RNA合成類藥物，多烯類藥物，阻斷麥角固醇生物合成類藥物，阻斷細(xì)胞壁組分D- β -1，3-葡聚糖生物合成類藥物。但是，由于真菌的多樣性、不同真菌侵染途徑的相對獨立性、已有抗真菌藥物的抑真菌效果并不盡如人意。尤為突出的是病原真菌可以通過藥物外排泵的功能性高表達(dá)表現(xiàn)為多藥耐藥性，這是目前治療真菌感染所面臨最為嚴(yán)峻的問題。因此，十分有必要采用更為有效的方法提高現(xiàn)有藥物的抑菌效果，并通過有效的方法阻止真菌多藥耐藥性的發(fā)生

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種更為有效的抑制真菌的方法，該方法可以有效提高目前臨床使用的一線抗真菌藥物的抑菌活性，同時可以減少真菌多藥抗性的產(chǎn)生。本發(fā)明公開了一種增強抗真菌藥物抑菌效果的方法，是采用阻斷鈣離子信號系統(tǒng)的方法和阻斷真菌麥角固醇生物合成類藥物聯(lián)合處理真菌。所說的阻斷鈣離子信號系統(tǒng)的方法可以是采用鈣離子信號系統(tǒng)中鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的阻斷劑、重要蛋白的抑制劑、基因敲除，該方法能明顯增強抗深度真菌感染的真菌藥物抑制真菌生長的效果。本發(fā)明中所說的鈣離子信號系統(tǒng)中鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的阻斷劑，包括鈣離子螯合劑，如 BAPTA(1, 2-bis(o-aminophenoxy)ethane-N, N, N' , N' -tetraacetic acid)、EGTA(ethylene glycol tetraacetic acid)等，鈣調(diào)蛋白抑制劑，如氟非那嗪(fluphenazine)、卡米達(dá)佐(calmidazolium)、ff-7 (N-(6-氨基己烷基)_5_氯_1萘-黃胺)、氯丙嗪
(chlorpromazine, CPZ)和吩噻嗪類藥物-三氟拉嗪(trifluoperazine, TFP)等，鈣調(diào)磷
酸酶抑制劑，如Π(506、環(huán)孢菌素(cyclosporin)等。本發(fā)明中所說的真菌麥角固醇合成阻斷劑主要是指唑類藥物，它們是通過抑制真菌細(xì)胞膜成分麥角固醇合成途徑中酶的活性從而起到抑真菌的效果。本發(fā)明中使用的真菌麥角固醇合成阻斷劑唑類藥物的濃度都是指其次抑菌濃度， 即低于各自的抑菌濃度的濃度，單獨使用時該濃度藥物時抑菌效果不明顯。本發(fā)明中使用的唑類藥物是現(xiàn)在臨床上常用于治療深度曲霉感染的伊曲康唑 (ITZ)和伏立康唑(VRC)，其中本實驗室測得ITZ的最低抑菌濃度為0. 2μ g/mL，VRC的最低抑菌濃度為0. 18μ g/mL。伊曲康唑(ITZ)的次抑菌濃度為0. 1 μ g/mL，伏立康唑(VRC)的次抑菌濃度為0. 15 μ g/mL。本發(fā)明所涉及的方法為將鈣信號系統(tǒng)阻斷劑和真菌麥角固醇合成阻斷劑，以次抑菌濃度的唑類藥物和一定濃度(5mM)對菌體無毒害作用的鈣離子信號系統(tǒng)阻斷劑混合后， 一同添加到真菌培養(yǎng)基中，再在混有藥物的培養(yǎng)基上點真菌孢子，37°C培養(yǎng)2 3天，發(fā)現(xiàn)兩類藥物共給藥的平板上菌落直徑明顯減小，說明兩類藥物聯(lián)合給藥的抑菌效果更好。
本發(fā)明的方法特別是對曲霉類絲狀真菌的抑菌效果明顯。本發(fā)明的方法是利用模式真菌構(gòu)巢曲霉或煙曲霉作為測試材料，在其培養(yǎng)基中同時添加鈣信號系統(tǒng)阻斷劑和次抑菌濃度的真菌麥角固醇合成阻斷劑，然后在平板上點接真菌孢子，37°c培養(yǎng)2 3天，觀察菌落直徑。結(jié)果顯示聯(lián)合用藥組菌落直徑明顯小于單獨給藥組。本發(fā)明同時在鈣信號系統(tǒng)重要蛋白的缺失菌株背景條件下，對真菌施用傳統(tǒng)抗真菌藥物，觀察真菌對藥物的敏感性。我們發(fā)現(xiàn)缺失鈣信號系統(tǒng)的重要蛋白Calcineurin或下游轉(zhuǎn)錄因子CrzA時，缺失菌株相較于野生型菌株對傳統(tǒng)抗真菌藥物超敏感。具體實施方法
1、測試菌株
表1使用菌株情況列表
權(quán)利要求
1.一種增強抗真菌藥物抑菌效果的方法，是采用阻斷鈣離子信號系統(tǒng)的方法和阻斷真菌麥角固醇生物合成類藥物聯(lián)合處理真菌；所說的阻斷鈣離子信號系統(tǒng)的方法是采用鈣離子信號系統(tǒng)中鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的阻斷劑、重要蛋白的抑制劑或基因敲除。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增強抗真菌藥物抑菌效果的方法，其特征在于，所說的鈣離子信號系統(tǒng)中鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的阻斷劑，是鈣離子螯合劑、鈣調(diào)蛋白抑制劑和調(diào)磷酸酶抑制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增強抗真菌藥物抑菌效果的方法，其特征在于，所說的真菌麥角固醇合成阻斷劑是唑類藥物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增強抗真菌藥物抑菌效果的方法，其特征在于，真菌麥角固醇合成阻斷劑的使用濃度是指其次抑菌濃度。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增強抗真菌藥物抑菌效果的方法，其特征在于，所說的唑類藥物是伊曲康唑和伏立康唑。
全文摘要
本發(fā)明屬于抗真菌藥物領(lǐng)域，具體涉及一種增強抗真菌藥物抑菌效果的方法。該方法是是采用阻斷鈣離子信號系統(tǒng)的方法和阻斷真菌麥角固醇生物合成類藥物聯(lián)合處理真菌；所說的阻斷鈣離子信號系統(tǒng)的方法是采用鈣離子信號系統(tǒng)中鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的阻斷劑、重要蛋白的抑制劑或基因敲除。本發(fā)明將鈣信號系統(tǒng)阻斷劑和真菌麥角固醇合成阻斷劑，以次抑菌濃度的唑類藥物和一定濃度對菌體無毒害作用的鈣離子信號系統(tǒng)阻斷劑混合后，一同添加到真菌培養(yǎng)基中，再在混有藥物的培養(yǎng)基上點真菌孢子，結(jié)果表明兩類藥物共給藥的平板上菌落直徑明顯減小，說明兩類藥物聯(lián)合給藥的抑菌效果更好。
文檔編號A61K45/06GK102218142SQ20111009976
公開日2011年10月19日 申請日期2011年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月21日
發(fā)明者浦莉, 王莎, 蔣鶴春, 陸玲 申請人:南京師范大學(xué)