專利名稱：一種復(fù)方水蛭膠囊及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，主要涉及一種復(fù)方水蛭膠囊及其制備方法，特別是涉及一種用于預(yù)防和治療血栓性心腦血管疾病的復(fù)方水蛭膠囊以及其制備方法。
背景技術(shù)：
心腦血管疾病是一種嚴(yán)重威脅人類健康，特別是50歲以上中老年人的常見病，即使應(yīng)用目前最先進(jìn)、完善的治療手段，仍可能有50%以上的腦血管意外幸存者生活不能完全自理，全世界每年死于心腦血管疾病的人數(shù)高達(dá)1500萬人，居各種死因首位，心腦血管疾病已成為人類死亡病因最高的頭號(hào)殺手，也是人們健康的“無聲兇煞”。心腦血管疾病具有“發(fā)病率高、致殘率高、死亡率高、復(fù)發(fā)率高、并發(fā)癥多” 8卩“四高一多”的特點(diǎn)，目前，我國心腦血管疾病患者已經(jīng)超過2. 7億人。我國每年死于心腦血管疾病有近300萬人，占我國每年總死亡病因的51%，而存活下來的患者中75%不同程度喪失勞動(dòng)能力，40%重殘。我國腦中風(fēng)病人出院后第一年的復(fù)發(fā)率是30%，第五年的復(fù)發(fā)率高達(dá)59%，而二級(jí)預(yù)防做得較好的美國僅為10 ；由于我國醫(yī)療保險(xiǎn)覆蓋人群小，腦中風(fēng)病人的復(fù)發(fā)率與國際平均水平相比要高出1倍多。治療心腦血管疾病特別是血栓性心腦血管疾病的藥物，普遍存在使用藥材過多， 副作用大、療效一般等缺點(diǎn)，因此，研制出一種使用藥材少、療效好且毒副作用小的藥物成為亟待解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容
1、發(fā)明目的
本發(fā)明針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)中藥物配伍存在的缺陷，提供了一種復(fù)方水蛭膠囊及其制備方法，具有通經(jīng)、活血、止痛等作用，能夠改善心腦血管功能，標(biāo)本兼治，特別是對(duì)血栓性心腦血管疾病療效極佳，并對(duì)甲肝、乙肝等各種肝炎有較好的輔助治療作用。2、技術(shù)方案
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的
一種復(fù)方水蛭膠囊，其特征在于該膠囊內(nèi)容物由水蛭提取物、果糖二磷酸鈉和淀粉混合制備而成，各組分按重量計(jì)比例關(guān)系為水蛭提取物80 120份，果糖二磷酸鈉80 360 份，淀粉20 50份。該膠囊內(nèi)容物由水蛭提取物、果糖二磷酸鈉和淀粉混合制備而成，各組分按重量計(jì)比例關(guān)系為水蛭提取物90 110份，果糖二磷酸鈉180 240份，淀粉30 40份。該膠囊內(nèi)容物由水蛭提取物、果糖二磷酸鈉和淀粉混合制備而成，各組分按重量計(jì)比例關(guān)系為水蛭提取物100份，果糖二磷酸鈉200份，淀粉35份。一種復(fù)方水蛭膠囊的制備方法，其特征在于該方法按以下步驟進(jìn)行
(1)粗提將水蛭的鮮活全體或干燥全體，洗凈后放入勻漿器中打碎，取5 15kg，在室溫下加入2500 7500ml的生理鹽水，攪拌20 50分鐘，凍溶4 8次，2 8°C靜置18 24小時(shí)，4000 6000轉(zhuǎn)/分離心取上清液，并調(diào)節(jié)PH值為4 5后備用。
(2)向步驟(1)中取上清液后剩余的沉淀物中加入沉淀物質(zhì)量4 6倍的質(zhì)量濃度為40 70%的乙醇，攪拌20 50分鐘，離心取沉淀物備用。(3)精制向步驟(2)中備用的沉淀物中加入生理鹽水溶解沉淀物，生理鹽水的加入量是沉淀物質(zhì)量的4 6倍，經(jīng)陰離子交換柱高效色譜梯度洗脫，苯基柱高效反相色譜柱階式洗脫后，再經(jīng)陰離子交換柱濃縮、除菌、過濾得濾液備用。(4)將步驟(1)中備用的上清液與步驟(3)中備用的濾液合并，濃縮后，即得水蛭提取物(液體)待用。(5)按權(quán)利要求1所述的比例取各原料備用，將步驟(4)中得到的水蛭提取物與淀粉按質(zhì)量比1:0. 2 0. 5的比例混合均勻，制成濕顆粒，烘干后再與果糖二磷酸鈉混合，水蛭提取物與果糖二磷酸鈉的質(zhì)量比為1:1 3。(6)將步驟(5)中得到的混合物粉碎并過10 15目篩，在40 65°C條件下干燥， 整粒、殺菌后裝膠囊，經(jīng)包裝后即得本發(fā)明復(fù)方水蛭膠囊成品。上述步驟(1)中將水蛭的鮮活全體或干燥全體，放入勻漿器中打碎，取10kg，在室溫下加入5000ml生理鹽水，限定這個(gè)濃度的原因是不會(huì)破壞水蛭中提取物的活性，攪拌30 分鐘，凍溶6次，4°C靜置20小時(shí)，5000轉(zhuǎn)/分離心取上清液，調(diào)節(jié)PH值為4. 8后備用，當(dāng) PH值為4. 8時(shí)水蛭提取物的活性達(dá)到最佳。上述步驟(2)中，向步驟(1)中取上清液后剩余的沉淀物中加入沉淀物質(zhì)量5倍的質(zhì)量濃度為陽％的乙醇。上述步驟(3)中，向步驟(2)中備用的沉淀物中加入生理鹽水溶解沉淀物，生理鹽水的加入量是沉淀物質(zhì)量的4 6倍，經(jīng)陰離子交換柱(ISN—5 Φ40X300mm)高效色譜梯度洗脫，苯基柱(ISB—10 Φ40X 500mm)高效反相色譜柱階式洗脫后，再經(jīng)陰離子交換柱 (ISN-20 Φ40X250mm)濃縮、除菌、過濾得濾液備用。上述步驟(5)中，水蛭提取物與淀粉的質(zhì)量比為1:0. 35，水蛭提取物與果糖二磷酸鈉的質(zhì)量比為1:2，采用這個(gè)比例配置可以促進(jìn)水蛭和果糖二磷酸鈉的協(xié)同作用，使臨床效果達(dá)到最佳。上述步驟(6)中，將步驟(5)中得到的混合物粉碎并過12目篩，在50°C條件下干燥，整粒時(shí)，再過8 10目篩，殺菌后裝膠囊，經(jīng)包裝后即得本發(fā)明復(fù)方水蛭膠囊成品。上述水蛭提取物為液體，其活性成分為水蛭素。上述生理鹽水為質(zhì)量分?jǐn)?shù)0. 9%的氯化鈉水溶液。3、優(yōu)點(diǎn)及效果
本發(fā)明提出的一種復(fù)方水蛭膠囊及其制備方法，具有如下優(yōu)點(diǎn) 水蛭性寒、味咸、有毒，具有破血、通瘀、通經(jīng)之功能，臨床用于治療癥瘕、痞塊、血瘀閉經(jīng)、跌打損傷；經(jīng)查大量文獻(xiàn)報(bào)道以及臨床試驗(yàn)證明，水蛭唾液中含有水蛭素，具有強(qiáng)力的抑制凝血酶作用，屬一種強(qiáng)力高效抗凝血?jiǎng)?shí)驗(yàn)表明，水蛭素對(duì)凝血酶的抑制作用具有很高的選擇性和特異性，它僅抑制止血系統(tǒng)中的一種因子即凝血酶，并不干擾其他體液或細(xì)胞因子，其抑制作用也勿需其他凝固因子或血漿成分參加；水蛭素作用于血液凝固的開始階段，防止纖維蛋白原斷裂成纖維蛋白，阻止凝血酶對(duì)纖維蛋白的聚合，防止纖維蛋白-凝塊形成，從而防止血液凝固。水蛭提取物中的有效活性成分為水蛭素，水蛭素抗凝血作用很強(qiáng)，很低劑量的水蛭提取物即能產(chǎn)生可以測(cè)量到的抗凝血作用，即能抑制靜脈血栓形成并迅速使纖維蛋白原及血小板數(shù)恢復(fù)正常。人一次靜注0. 9mg水蛭提取物后再連續(xù)滴注0. 6mg水蛭提取物/h， 按75 kg體重計(jì)算，全身恒定的抑制凝血酶濃度可達(dá)50ng/ml(即約0. 5抗凝血酶單位(AT-U) /ml)。這樣一種抑制濃度已證明可足夠防止動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)性。果糖二磷酸鈉(FDP)是一種生物活性物質(zhì)，其生產(chǎn)過程需消耗ATP，在能量代謝過程中起重要作用。近年來大量的藥理及臨床試驗(yàn)證明，F(xiàn)DP能有效的活化腦細(xì)胞，(腦細(xì)胞活化劑)。增強(qiáng)腦細(xì)胞的供養(yǎng)能力，(心肌細(xì)胞增強(qiáng)劑)。并可作為肝細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)劑，(肝細(xì)胞活化劑)。其臨床療效如下 1. 1 :FDP在其代謝過程中可產(chǎn)生大量的ATP (能量合劑)給組織代謝提供能量。1.2 :FDP在多種生化反應(yīng)中產(chǎn)生作用，具有一定的生物活性，特別是具有維持肝臟正常功能的功效(解毒、蛋白質(zhì)合成等)。1. 3 =FDP能增強(qiáng)腦細(xì)胞活力，改善大腦能量代謝。能減輕缺血性腦梗塞的神經(jīng)癥狀；降低梗塞面積和缺血后能量消耗，保護(hù)腦組織。1. 4 :FDP有益于心肌的能量代謝，增強(qiáng)體力和耐力。能增加心肌供氧量；降低心肌耗氧量；減少急性心肌梗塞的面積，并有抗血小板聚集作用，對(duì)于某些心腦血管疾病的預(yù)防和治療有較理想的作用。1. 5 =FDP對(duì)多種代謝性疾病，尤其是糖尿病等癥具有輔助治療作用。1. 6 =FDP還同時(shí)具有抗休克作用。本發(fā)明水蛭提取物的提取過程不需要復(fù)雜的條件，在室溫下即可進(jìn)行，簡化了制備工藝，降低了制備成本；水蛭提取物適用于血栓性心腦血管疾病的治療和預(yù)防，果糖二磷酸鈉具有養(yǎng)心健腦、強(qiáng)體保肝的作用，二者結(jié)合恰好起到相輔相成的作用；單獨(dú)使用水蛭或果糖二磷酸鈉操作繁瑣，成本高，很不方便，在保證不降低水蛭和果糖二磷酸鈉的生物活性且具有穩(wěn)定水蛭和果糖二磷酸鈉生理作用的工藝基礎(chǔ)上，將其做成復(fù)方，既方便了患者，也有利于發(fā)揮二者生理活性的協(xié)同作用，提高臨床療效，不僅避免了單獨(dú)使用水蛭可能產(chǎn)生的副作用，還能起到保肝的作用；本發(fā)明這種復(fù)方水蛭膠囊適用于冠心病、心絞痛、心肌梗塞，并對(duì)甲肝、乙肝等各種肝炎有較好的輔助治療作用；長期服用可預(yù)防冠心病、腦血栓、中風(fēng)等癥。


圖1為本發(fā)明工藝流程圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不僅限于下述的實(shí)施例。實(shí)施例1
一種復(fù)方水蛭膠囊，其特征在于該膠囊內(nèi)容物由水蛭提取物、果糖二磷酸鈉和淀粉混合制備而成，各組分按重量計(jì)比例關(guān)系為水蛭提取物100份，果糖二磷酸鈉200份，淀粉 35份。一種如上所述的復(fù)方水蛭膠囊的制備方法，其特征在于該方法按以下步驟進(jìn)行
(1)粗提將水蛭的鮮活全體或干燥全體，洗凈后放入勻漿器中打碎，取10kg，在室溫下加入5000ml生理鹽水，攪拌30分鐘，凍溶6次，4°C靜置20小時(shí)，5000轉(zhuǎn)/分離心取上清液，并調(diào)節(jié)PH值為4. 8后備用；
(2)向步驟(1)中取上清液后剩余的沉淀物中加入沉淀物質(zhì)量5倍的質(zhì)量濃度為55% 的乙醇，攪拌30分鐘，離心取沉淀物備用；
(3)精制向步驟(2)中備用的沉淀物中加入生理鹽水溶解沉淀物，生理鹽水的加入量是沉淀物質(zhì)量的5倍，經(jīng)陰離子交換柱(ISN—5 Φ40X300mm)高效色譜梯度洗脫，苯基柱(ISB—10 Φ40X500mm)高效反相色譜柱階式洗脫后，再經(jīng)陰離子交換柱(ISN— 20 Φ40Χ250πιπι)濃縮、除菌、過濾得濾液備用；
(4)將步驟(1)中備用的上清液與步驟(3)中備用的濾液合并，濃縮后，即得水蛭提取物待用；
(5)按權(quán)利要求1所述的比例取各原料備用，將步驟(4)中得到的水蛭提取物與淀粉按質(zhì)量比1:0. 35的比例混合均勻，制成濕顆粒，烘干后再與果糖二磷酸鈉混合，水蛭提取物與果糖二磷酸鈉的質(zhì)量比為1:2 ；
(6)將步驟(5)中得到的混合物粉碎并過12目篩，在50°C條件下干燥，整粒時(shí)再過10 目篩，殺菌后裝膠囊，經(jīng)包裝后即得本發(fā)明復(fù)方水蛭膠囊成品。實(shí)施例2
一種復(fù)方水蛭膠囊，其特征在于該膠囊內(nèi)容物由水蛭提取物、果糖二磷酸鈉和淀粉混合制備而成，各組分按重量計(jì)比例關(guān)系為水蛭提取物80份，果糖二磷酸鈉80份，淀粉20 份。一種如上所述的復(fù)方水蛭膠囊的制備方法，其特征在于該方法按以下步驟進(jìn)行
(1)粗提將水蛭的鮮活全體或干燥全體，洗凈后放入勻漿器中打碎，取^g，在室溫下加入2500ml生理鹽水，攪拌20分鐘，凍溶4次，2°C靜置18小時(shí)，4000轉(zhuǎn)/分離心取上清液，并調(diào)節(jié)PH值為4.0后備用；
(2)向步驟(1)中取上清液后剩余的沉淀物中加入沉淀物質(zhì)量4倍的質(zhì)量濃度為40% 的乙醇，攪拌20分鐘，離心取沉淀物備用；
(3)精制向步驟(2)中備用的沉淀物中加入生理鹽水溶解沉淀物，生理鹽水的加入量是沉淀物質(zhì)量的4倍，經(jīng)陰離子交換柱(ISN—5 Φ40X300mm)高效色譜梯度洗脫，苯基柱(ISB—10 Φ40X500mm)高效反相色譜柱階式洗脫后，再經(jīng)陰離子交換柱(ISN—20 Φ40Χ250πιπι)濃縮、除菌、過濾得濾液備用；
(4)將步驟(1)中備用的上清液與步驟(3)中備用的濾液合并，濃縮后，即得水蛭提取物待用；
(5)按權(quán)利要求1所述的比例取各原料備用，將步驟(4)中得到的水蛭提取物與淀粉按質(zhì)量比1:0. 25的比例混合均勻，制成濕顆粒，烘干后再與果糖二磷酸鈉混合，水蛭提取物與果糖二磷酸鈉的質(zhì)量比為1:1 ；
(6)將步驟(5)中得到的混合物粉碎并過10目篩，在40°C條件下干燥，整粒時(shí)再過8目篩，殺菌后裝膠囊，經(jīng)包裝后即得本發(fā)明復(fù)方水蛭膠囊成品。實(shí)施例3
一種復(fù)方水蛭膠囊，其特征在于該膠囊內(nèi)容物由水蛭提取物、果糖二磷酸鈉和淀粉混合制備而成，各組分按重量計(jì)比例關(guān)系為水蛭提取物90份，果糖二磷酸鈉180份，淀粉30份。一種如上所述的復(fù)方水蛭膠囊的制備方法，其特征在于該方法按以下步驟進(jìn)行
(1)粗提將水蛭的鮮活全體或干燥全體，洗凈后放入勻漿器中打碎，取mcg，在室溫下加入4000ml生理鹽水，攪拌25分鐘，凍溶5次，3°C靜置19小時(shí)，4500轉(zhuǎn)/分離心取上清液，并調(diào)節(jié)PH值為4. 2后備用；
(2)向步驟(1)中取上清液后剩余的沉淀物中加入沉淀物質(zhì)量6倍的質(zhì)量濃度70%的乙醇，攪拌20分鐘，離心取沉淀物備用；
(3)精制向步驟(2)中備用的沉淀物中加入生理鹽水溶解沉淀物，生理鹽水的加入量是沉淀物質(zhì)量的6倍，經(jīng)陰離子交換柱(ISN—5 Φ40X300mm)高效色譜梯度洗脫，苯基柱(ISB—10 Φ40X500mm)高效反相色譜柱階式洗脫后，再經(jīng)陰離子交換柱(ISN— 20 Φ40Χ250πιπι)濃縮、除菌、過濾得濾液備用；
(4)將步驟(1)中備用的上清液與步驟(3)中備用的濾液合并，濃縮后，即得水蛭提取物待用；
(5)按權(quán)利要求1所述的比例取各原料備用，將步驟(4)中得到的水蛭提取物與淀粉按質(zhì)量比1:1/3的比例混合均勻，制成濕顆粒，烘干后再與果糖二磷酸鈉混合，水蛭提取物與果糖二磷酸鈉的質(zhì)量比為1:2 ；
(6)將步驟(5)中得到的混合物粉碎并過15目篩，在45°C條件下干燥，整粒時(shí)再過10 目篩，殺菌后裝膠囊，經(jīng)包裝后即得本發(fā)明復(fù)方水蛭膠囊成品。實(shí)施例4
一種復(fù)方水蛭膠囊，其特征在于該膠囊內(nèi)容物由水蛭提取物、果糖二磷酸鈉和淀粉混合制備而成，各組分按重量計(jì)比例關(guān)系為水蛭提取物120份，果糖二磷酸鈉240份，淀粉 48份。一種如上所述的復(fù)方水蛭膠囊的制備方法，其特征在于該方法按以下步驟進(jìn)行
(1)粗提將水蛭的鮮活全體或干燥全體，洗凈后放入勻漿器中打碎，取13kg，在室溫下加入6500ml生理鹽水，攪拌45分鐘，凍溶7次，7°C靜置23小時(shí)，5800轉(zhuǎn)/分離心取上清液，并調(diào)節(jié)PH值為4. 6后備用；
(2)向步驟(1)中取上清液后剩余的沉淀物中加入沉淀物質(zhì)量5倍的質(zhì)量濃度50%的乙醇，攪拌40分鐘，離心取沉淀物備用；
(3)精制向步驟(2)中備用的沉淀物中加入生理鹽水溶解沉淀物，生理鹽水的加入量是沉淀物質(zhì)量的5倍，經(jīng)陰離子交換柱(ISN—5 Φ40X300mm)高效色譜梯度洗脫，苯基柱(ISB—10 Φ40X500mm)高效反相色譜柱階式洗脫后，再經(jīng)陰離子交換柱(ISN—20 Φ40Χ250πιπι)濃縮、除菌、過濾得濾液備用；
(4)將步驟(1)中備用的上清液與步驟(3)中備用的濾液合并，濃縮后，即得水蛭提取物待用；
(5)按權(quán)利要求1所述的比例取各原料備用，將步驟(4)中得到的水蛭提取物與淀粉按質(zhì)量比1:0. 4的比例混合均勻，制成濕顆粒，烘干后再與果糖二磷酸鈉混合，水蛭提取物與果糖二磷酸鈉的質(zhì)量比為1:2 ；(6)將步驟(5)中得到的混合物粉碎并過12目篩，在55°C條件下干燥，整粒時(shí)再過8目篩，殺菌后裝膠囊，經(jīng)包裝后即得本發(fā)明復(fù)方水蛭膠囊成品。實(shí)施例5:
一種復(fù)方水蛭膠囊，其特征在于該膠囊內(nèi)容物由水蛭提取物、果糖二磷酸鈉和淀粉混合制備而成，各組分按重量計(jì)比例關(guān)系為水蛭提取物100份，果糖二磷酸鈉100份，淀粉 50份。一種如上所述的復(fù)方水蛭膠囊的制備方法，其特征在于該方法按以下步驟進(jìn)行
(1)粗提將水蛭的鮮活全體或干燥全體，洗凈后放入勻漿器中打碎，取Wcg，在室溫下加入3000ml生理鹽水，攪拌35分鐘，凍溶8次，5°C靜置21小時(shí)，4800轉(zhuǎn)/分離心取上清液，并調(diào)節(jié)PH值為4. 5后備用；
(2)向步驟(1)中取上清液后剩余的沉淀物中加入沉淀物質(zhì)量6倍的質(zhì)量濃度65%的乙醇，攪拌35分鐘，離心取沉淀物備用；
(3)精制向步驟(2)中備用的沉淀物中加入生理鹽水溶解沉淀物，生理鹽水的加入量是沉淀物質(zhì)量的4倍，經(jīng)陰離子交換柱(ISN—5 Φ40X300mm)高效色譜梯度洗脫，苯基柱(ISB—10 Φ40X500mm)高效反相色譜柱階式洗脫后，再經(jīng)陰離子交換柱(ISN— 20 Φ40Χ250πιπι)濃縮、除菌、過濾得濾液備用；
(4)將步驟(1)中備用的上清液與步驟(3)中備用的濾液合并，濃縮后，即得水蛭提取物待用；
(5)按權(quán)利要求1所述的比例取各原料備用，將步驟(4)中得到的水蛭提取物與淀粉按質(zhì)量比1:0. 5的比例混合均勻，制成濕顆粒，烘干后再與果糖二磷酸鈉混合，水蛭提取物與果糖二磷酸鈉的質(zhì)量比為1:1 ；
(6)將步驟(5)中得到的混合物粉碎并過14目篩，在60°C條件下干燥，整粒時(shí)再過10 目篩，殺菌后裝膠囊，經(jīng)包裝后即得本發(fā)明復(fù)方水蛭膠囊成品。實(shí)施例6
一種復(fù)方水蛭膠囊，其特征在于該膠囊內(nèi)容物由水蛭提取物、果糖二磷酸鈉和淀粉混合制備而成，各組分按重量計(jì)比例關(guān)系為水蛭提取物Iio份，果糖二磷酸鈉330份，淀粉 22份。一種如上所述的復(fù)方水蛭膠囊的制備方法，其特征在于該方法按以下步驟進(jìn)行
(1)粗提將水蛭的鮮活全體或干燥全體，洗凈后放入勻漿器中打碎，取Ukg，在室溫下加入6000ml生理鹽水，攪拌40分鐘，凍溶6次，6°C靜置22小時(shí)，5500轉(zhuǎn)/分離心取上清液，并調(diào)節(jié)PH值為4. 9后備用；
(2)向步驟(1)中取上清液后剩余的沉淀物中加入沉淀物質(zhì)量4倍的質(zhì)量濃度60%的乙醇，攪拌45分鐘，離心取沉淀物備用；
(3)精制向步驟(2)中備用的沉淀物中加入生理鹽水溶解沉淀物，生理鹽水的加入量是沉淀物質(zhì)量的6倍，經(jīng)陰離子交換柱(ISN—5 Φ40X300mm)高效色譜梯度洗脫，苯基柱(ISB—10 Φ40X500mm)高效反相色譜柱階式洗脫后，再經(jīng)陰離子交換柱(ISN—20 Φ40Χ250πιπι)濃縮、除菌、過濾得濾液備用；(4)將步驟(1)中備用的上清液與步驟(3)中備用的濾液合并濃縮后，即得水蛭提取物待用；
(5)按權(quán)利要求1所述的比例取各原料備用，將步驟(4)中得到的水蛭提取物與淀粉按質(zhì)量比1:0. 2的比例混合均勻，制成濕顆粒，烘干后再與果糖二磷酸鈉混合，水蛭提取物與果糖二磷酸鈉的質(zhì)量比為1:3;
(6)將步驟(5)中得到的混合物粉碎并過11目篩，在65°C條件下干燥，整粒時(shí)再過9目篩，殺菌后裝膠囊，經(jīng)包裝后即得本發(fā)明復(fù)方水蛭膠囊成品。實(shí)施例7
一種復(fù)方水蛭膠囊，其特征在于該膠囊內(nèi)容物由水蛭提取物、果糖二磷酸鈉和淀粉混合制備而成，各組分按重量計(jì)比例關(guān)系為水蛭提取物120份，果糖二磷酸鈉360份，淀粉 40份?！N如上所述的復(fù)方水蛭膠囊的制備方法，其特征在于該方法按以下步驟進(jìn)行
(1)粗提將水蛭的鮮活全體或干燥全體，洗凈后放入勻漿器中打碎，取Kkg，在室溫下加入7500ml生理鹽水，攪拌50分鐘，凍溶8次，8°C靜置M小時(shí)，6000轉(zhuǎn)/分離心取上清液，并調(diào)節(jié)PH值為5.0后備用；
(2)向步驟(1)中取上清液后剩余的沉淀物中加入沉淀物質(zhì)量5倍的質(zhì)量濃度45%的乙醇，攪拌50分鐘，離心取沉淀物備用；
(3)精制向步驟(2)中備用的沉淀物中加入生理鹽水溶解沉淀物，生理鹽水的加入量是沉淀物質(zhì)量的6倍，經(jīng)陰離子交換柱(ISN—5 Φ40X300mm)高效色譜梯度洗脫，苯基柱(ISB—10 Φ40X500mm)高效反相色譜柱階式洗脫后，再經(jīng)陰離子交換柱(ISN—20 Φ40Χ250πιπι)濃縮、除菌、過濾得濾液備用；
(4)將步驟(1)中備用的上清液與步驟(3)中備用的濾液合并，濃縮后，即得水蛭提取物待用；
(5)按權(quán)利要求1所述的比例取各原料備用，將步驟(4)中得到的水蛭提取物與淀粉按質(zhì)量比1:1/3的比例混合均勻，制成濕顆粒，烘干后再與果糖二磷酸鈉混合，水蛭提取物與果糖二磷酸鈉的質(zhì)量比為1:3 ；
(6)將步驟(5)中得到的混合物粉碎并過13目篩，在50°C條件下干燥，整粒時(shí)再過9目篩，殺菌后裝膠囊，經(jīng)包裝后即得本發(fā)明復(fù)方水蛭膠囊成品。為了確保臨床用藥的安全，在臨床使用前對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了小鼠急性毒性試驗(yàn) (1)材料和方法
受試動(dòng)物為昆明種小白鼠，由我公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室供給，健康，體重20+1. 0g，雌雄各半， 隨機(jī)分為三組，尾靜脈注射組，皮下注射組和對(duì)照組，每組10只。a)尾靜脈注射給藥試驗(yàn)
動(dòng)物及分組如上，取本發(fā)明復(fù)方水蛭膠囊的內(nèi)容物混合均勻，精密稱取0.25g (相當(dāng)于20u)加氯化鈉注射用水80ml充分溶解，取上清液，給藥方法采用尾靜脈注射法， 隔夜禁食后給藥。給藥容積0.5ml / 20g體重，給藥劑量按人體最大給藥劑量折算 (40uX9. 01X20g) + (60kgX 1000)=0. 12u，式中:u 為活性單位，9. 01 為換算系數(shù)，20g 為小白鼠重量，60kg為平均人體重量；0. 12u即為20g重的小鼠每只的給藥劑量，每只小鼠給藥應(yīng)為0. 5ml,即0. 5ml的藥液相當(dāng)于0. 12u。觀察給藥后的反應(yīng)及2天內(nèi)的死亡率。b)小鼠皮下注射急性毒性試驗(yàn)
動(dòng)物及分組同上，取本發(fā)明復(fù)方水蛭膠囊的內(nèi)容物混合均勻，精密稱取0.25g (相當(dāng)于 20u)加氯化鈉注射用水80ml充分溶解，取上清夜，給藥方法采用皮下法，隔夜禁食后給藥， 間隔1小時(shí)注射一次，連續(xù)注射4次。給藥容積0.5ml / 20g體重，給藥劑量按人體最大給藥劑量折算:(40uX9. 01X20g) + (60kg X 1000)=0. 12u，式中:u為活性單位，9. 01為換算系數(shù)，20g為小白鼠重量，60kg為平均人體重量；0. 12u即為20g重的小鼠每只的給藥劑量，每只小鼠給藥應(yīng)為0. 5ml,即0. 5ml的藥液相當(dāng)于0. 12u。觀察給藥后的反應(yīng)及2天內(nèi)的死亡率。c)對(duì)照組尾靜脈與皮下注射均作對(duì)照實(shí)驗(yàn)，按尾靜脈與皮下注射用藥量給小鼠注射等量的生理鹽水。(2)結(jié)果和討論
復(fù)方水蛭膠囊溶于水后為混懸液體，進(jìn)行了尾靜脈給藥和小鼠皮下注射兩種方法的試驗(yàn)，小鼠尾靜脈注射和皮下注射給藥組48小時(shí)內(nèi)均存活，增重正常，未見異常體癥。尾靜脈注射無一切不適現(xiàn)象，一切良好，2天內(nèi)體重增加，無一只死亡；將受試鼠處死進(jìn)行系統(tǒng)剖解，各臟器未見明顯病理改變。小鼠皮下注射四次，一切良好，2天內(nèi)體重增加，無一只死亡；將受試鼠處死進(jìn)行系統(tǒng)剖解，給藥局部未見刺激，各臟器未見明顯病理改變。對(duì)照組注射等量的生理鹽水，觀察2天，無不適及死亡現(xiàn)象，體重平均增加Ig左
右ο綜合上述結(jié)果可見，連續(xù)三批試制的復(fù)方水蛭膠囊，經(jīng)急性毒性試驗(yàn)驗(yàn)證(最大給藥劑量法)，尾靜脈注射人用量或皮下注射人用量對(duì)于健康小鼠是非常安全的，與對(duì)照組相比，增重顯著，無一只有不適現(xiàn)象或死亡，將受試鼠處死進(jìn)行系統(tǒng)剖解，各臟器未見明顯病理改變，由此證明，本發(fā)明是非常安全可靠的。采用本發(fā)明進(jìn)行臨床用藥，其中男50例，女30例，用于治療65例，用于康復(fù)和預(yù)防15例，年齡最大75歲，年齡最小16歲，患者使用后，冠心病、心絞痛、心肌梗塞、腦血栓等癥狀均有不同程度的緩解，病情得到有效控制，對(duì)由上述疾病引起的頭暈、耳鳴、頭痛、記憶力減退、失眠等癥狀有很好的康復(fù)和預(yù)防作用。用法治療時(shí)，口服成人一日2 3次，一次2 4粒；康復(fù)和預(yù)防時(shí)，一日2次，一次1 2粒，每粒0. 25g。本發(fā)明這種復(fù)方水蛭膠囊內(nèi)容物為白色或類白色顆?；蚍勰?。該復(fù)方水蛭膠囊適用于血栓性心腦血管疾病的治療和預(yù)防；養(yǎng)心健腦、強(qiáng)體保肝，并適用于冠心病、心絞痛、心肌梗塞；腦萎縮，老年性癡呆，腦動(dòng)脈硬化，腦血管病后遺癥，腦外傷，神經(jīng)官能癥等疾病引起的頭暈、耳鳴、頭痛、記憶力減退、失眠等癥，長期服用可預(yù)防冠心病、腦血栓、中風(fēng)等癥， 對(duì)于嚴(yán)重患者療效更為顯著。水蛭的鑒別水蛭唾液中含有溶于乙醇的水蛭提取物，取本品粉末lg，加乙醇 5ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液。另取水蛭對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上， 以正己烷一乙酸乙酯(4:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C 加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色斑點(diǎn)；紫外光燈(365nm)下顯相同的橙紅色熒光斑點(diǎn)。檢查水分，照水分測(cè)定法測(cè)定，不超過18. 0%。總灰分不超過10. 0%。
酸不溶性灰分不超過2.0%。浸出物，照醇溶性浸出物測(cè)定法項(xiàng)下的熱浸法測(cè)定，用稀乙醇作溶劑，不少于 15. 0%
含量測(cè)定取本品粉末(過三號(hào)篩)約lg，精密稱定，精密加入0.9%氯化鈉溶液5ml， 充分?jǐn)嚢?，浸?0分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，離心，精密量取上清液100 μ 1，置試管(IOmmXlOOmm) 中，加入含0.5% (牛)纖維蛋白原(以凝固物計(jì))的三羥甲基氨基甲烷鹽酸緩沖液 (0. 2mol / L三羥甲基氨基甲烷溶液25ml與0. Imol / L鹽酸溶液約40ml，加水至100ml， 調(diào)節(jié)PH值至7. 4) 200 μ 1，搖勻，置水浴(37°C 士0. 5°C )中緩緩滴加每Iml中含40單位的凝血酶溶液(每分鐘5 μ 1，邊滴加邊輕輕搖勻)至凝固，記錄消耗凝血酶溶液的體積，按下式計(jì)算
式中u-每Ig含凝血酶活性單位，U / g； C1-凝血酶溶液的濃度，μ / ml ； C2-供試品溶液的濃度，g / ml ； V1-消耗凝血酶溶液的體積，μ 1 ； V2-供試品溶液的加入量，μ 1 ； W—取樣量。中和一個(gè)單位的凝血酶的量，為一個(gè)抗凝血酶活性單位。本品每Ig含抗凝血酶活性不低于16. 0U。果糖二磷酸鈉，參照衛(wèi)生部部頒標(biāo)準(zhǔn)(試行)的果糖二磷酸鈉(C6H11Na3O12 -SH2O)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢查。鑒別取本品適量，加水制成每ml含50mgFDP的溶液，作為供試品。另取二磷酸果糖對(duì)照品適量，用水制成每ml含50mg的溶液，作為對(duì)照品。以微精纖維素薄層板(層厚 0. 5mm高20cm) 二塊，分別點(diǎn)樣，照中國藥典2005版二部附錄薄層色譜法項(xiàng)下操作，展開劑為正丁醇丙酮冰醋酸:10%氨水水(35 15 20 7. 5 :22. 5)，展距為18cm，加熱蒸發(fā)溶劑，一塊噴以12. 5%鉬酸銨濃鹽酸高氯酸丙酮(8 3 3 86)的溶液，在365nm紫外光下照射10分鐘，應(yīng)顯藍(lán)色(以示P04_3的存在);另一塊噴以洲苯胺溶液 二苯胺乙醇液磷酸(4 4 :1)溶液，經(jīng)105°C加熱10分鐘，應(yīng)顯紅棕色(鑒別糖的存在)。果糖二磷酸鈉含量測(cè)定
1、對(duì)照品溶液精密稱取FDP對(duì)照品30mg于IOOml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用。2、供試品溶液精密稱取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物適量(相當(dāng)于30mgFDP)，置IOOml 量瓶中，加水溶解，稀釋至刻度，過濾，濾液備用。3、測(cè)定方法精取供試品液和對(duì)照品溶液各1ml，分別置IOml量瓶中，加8mol/L鹽酸液5ml及2. 5% 二苯胺冰醋酸液anl，搖勻，置穩(wěn)定架上在96°C 士 1°C恒溫水浴加熱30 分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，取出后迅速冷卻至室溫，用70%乙醇稀釋至刻度，于640nm波長處測(cè)定吸收度，根據(jù)對(duì)照品及供試品的吸收度計(jì)算含量，為標(biāo)示量的90. 0% 110. 0%。經(jīng)檢查，本品符合中國藥典2005版二部附錄膠囊劑項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定。本發(fā)明這種復(fù)方水蛭膠囊應(yīng)用范圍廣泛，經(jīng)試驗(yàn)對(duì)下述臨床癥狀均可適用 (1)冠心病、心絞痛、心肌梗塞；高脂血癥；肺栓塞；心臟人工瓣膜置換術(shù)后。(2)腦血栓、腦栓塞、腦動(dòng)脈粥樣硬化；短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)；椎一基底動(dòng)脈供血不足。(3)血栓閉塞性脈管炎、血栓性靜脈炎、預(yù)防術(shù)后血栓形成。(4)急、慢性腎小球腎炎、腎病綜合癥、腎靜脈血栓。(5)視網(wǎng)膜血管阻塞眼底動(dòng)脈硬化；突發(fā)性耳聾；糖尿病合并各種血管病變的治療；高血糖、高血脂、血液流變學(xué)異常及血小板活化易引起血液高粘、高聚、高凝狀態(tài)，造成組織缺血、缺氧，氧自由基生成增加，轉(zhuǎn)而生成脂質(zhì)過氧化物，激活抗凝因子而誘發(fā)血栓形成及微血管病變。
權(quán)利要求
1.一種復(fù)方水蛭膠囊，其特征在于該膠囊內(nèi)容物由水蛭提取物、果糖二磷酸鈉和淀粉混合制備而成，各組分按重量計(jì)比例關(guān)系為水蛭提取物80 120份，果糖二磷酸鈉 80 360份，淀粉20 50份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)方水蛭膠囊，其特征在于該膠囊內(nèi)容物由水蛭提取物、果糖二磷酸鈉和淀粉混合制備而成，各組分按重量計(jì)比例關(guān)系為水蛭提取物90 110 份，果糖二磷酸鈉180 240份，淀粉30 40份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)方水蛭膠囊，其特征在于該膠囊內(nèi)容物由水蛭提取物、果糖二磷酸鈉和淀粉混合制備而成，各組分按重量計(jì)比例關(guān)系為水蛭提取物100份， 果糖二磷酸鈉200份，淀粉35份。
4.一種如權(quán)利要求1所述的復(fù)方水蛭膠囊的制備方法，其特征在于該方法按以下步驟進(jìn)行(1)粗提將水蛭的鮮活全體或干燥全體，洗凈后放入勻漿器中打碎，取5 15kg，在室溫下加入2500 7500ml的生理鹽水，攪拌20 50分鐘，凍溶4 8次，2 8°C靜置18 24小時(shí)，4000 6000轉(zhuǎn)/分離心取上清液，并調(diào)節(jié)PH值為4 5后備用；(2)向步驟(1)中取上清液后剩余的沉淀物中加入沉淀物質(zhì)量4 6倍的質(zhì)量濃度為 40 70%的乙醇，攪拌20 50分鐘，離心取沉淀物備用；(3)精制向步驟(2)中備用的沉淀物中加入生理鹽水溶解沉淀物，經(jīng)高效色譜梯度洗脫，高效反相色譜柱階式洗脫后，濃縮、除菌、過濾得濾液備用；(4)將步驟(1)中備用的上清液與步驟(3)中備用的濾液合并，濃縮后，即得水蛭提取物待用；(5)按權(quán)利要求1所述的比例取各原料備用，將步驟(4)中得到的水蛭提取物與淀粉按質(zhì)量比1:0. 2 0. 5的比例混合均勻，制成濕顆粒，烘干后再與果糖二磷酸鈉混合，水蛭提取物與果糖二磷酸鈉的質(zhì)量比為1:1 3 ；(6)將步驟(5)中得到的混合物粉碎并過10 15目篩，在40 65°C條件下干燥，整粒、殺菌后裝膠囊，經(jīng)包裝后即得本發(fā)明復(fù)方水蛭膠囊成品。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種復(fù)方水蛭膠囊的制備方法，其特征在于步驟(1)中將水蛭的鮮活全體或干燥全體，放入勻漿器中打碎，取10kg，在室溫下加入5000ml生理鹽水， 攪拌30分鐘，凍溶6次，4°C靜置20小時(shí)，5000轉(zhuǎn)/分離心取上清液，調(diào)節(jié)PH值為4. 8后備用。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種復(fù)方水蛭膠囊的制備方法，其特征在于步驟(2)中，向步驟(1)中取上清液后剩余的沉淀物中加入沉淀物質(zhì)量5倍的質(zhì)量濃度為55%的乙醇。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種復(fù)方水蛭膠囊的制備方法，其特征在于步驟(3)中，向步驟(2)中備用的沉淀物中加入生理鹽水，生理鹽水的加入量是沉淀物質(zhì)量的4 6倍，溶解沉淀物，經(jīng)陰離子交換柱高效色譜梯度洗脫，苯基柱高效反相色譜柱階式洗脫后，再經(jīng)陰離子交換柱濃縮、除菌、過濾得濾液備用。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種復(fù)方水蛭膠囊的制備方法，其特征在于步驟(5)中，水蛭提取物與淀粉的質(zhì)量比為1:0. 35，水蛭提取物與果糖二磷酸鈉的質(zhì)量比為1:2。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種復(fù)方水蛭膠囊的制備方法，其特征在于步驟(6)中，將步驟(5)中得到的混合物粉碎并過12目篩，在50°C條件下干燥，整粒時(shí)，再過8 10目篩，殺菌后裝膠囊，經(jīng)包裝后即得本發(fā)明復(fù)方水蛭膠囊成品。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種復(fù)方水蛭膠囊及其制備方法，其特征在于該膠囊內(nèi)容物由水蛭提取物、果糖二磷酸鈉和淀粉混合制備而成，首先在室溫下從水蛭中提取水蛭提取物并與果糖二磷酸鈉混合后，再加入適量賦形劑淀粉，制備成成品復(fù)方水蛭膠囊。本發(fā)明這種復(fù)方水蛭膠囊適用于血栓性心腦血管疾病的治療和預(yù)防；具有養(yǎng)心健腦、強(qiáng)體保肝的功效，長期服用還可以預(yù)防冠心病、腦血栓、中風(fēng)等癥。
文檔編號(hào)A61K35/62GK102178697SQ201110104219
公開日2011年9月14日 申請(qǐng)日期2011年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月26日
發(fā)明者孫睿, 張啟舉, 朱文瑾, 李伯超, 李雙陽, 李碩, 畢森林, 王淑芬, 趙瑛帆, 靳寶峰, 齊鴻 申請(qǐng)人:李雙陽