專利名稱：救必應藥材的綜合利用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領域中來源于植物的提取分離方法及應用，具體涉及從救必應藥材中同時提取紫丁香苷、長梗冬青苷、救必應酸和救必應總皂苷的方法及應用。
背景技術：
中藥材救必應為冬青科植物鐵冬青(Ilex rotunda Thunb.)的干燥樹皮，廣泛分布于中國南方各省，主產于廣西、廣東省，民間常用于清熱解毒，消腫止痛，治感冒發(fā)熱，急慢性肝炎，急性腸胃炎，胃及十二指腸潰瘍，風濕關節(jié)痛。救必應的化學成分研究報道不多， 在文獻“救必應化學成分的研究”中草藥，1991,22(6) =246-248中報道了救必應中含鐵冬青酸即救必應酸、具棲冬青苷即長梗冬青苷，鐵冬青酸異丙叉酮縮醇，紫丁香苷、芥子醛、芥子醛葡萄糖苷、丁香醛、3 —乙酰齊墩果酸及硬脂酸。救必應中含有大量的五環(huán)三萜類皂苷，據文獻“高效液相色譜法測定救必應藥材中具棲冬青苷的含量”特產研究2007，4 :45-47報道，救必應藥材中具棲冬青苷的含量高達 8.8%，如果再加上其苷元救必應酸的含量，其總皂苷含量更高。救必應藥材現(xiàn)已收載在中國藥典2010版一部，293頁中，藥典規(guī)定其長梗冬青苷的含量不得低于4%，紫丁香苷含量不得低于1%。目前藥材主要用其水提取物制成治療胃腸炎，消化不良等疾病的中成藥，如救必應胃痛片，復方救必應膠囊，腹可安片，腸胃適膠囊等，提取工藝均采用水提取法，提取后的救必應藥渣作為廢渣棄去，既不環(huán)保又是一種浪費。我們發(fā)現(xiàn)救必應藥材水提取法，主要提取了救必應中的水溶性成分紫丁香苷，而藥渣中還存在有很多的五環(huán)三萜類皂苷未提取完全，造成了資源的浪費。本發(fā)明主要目的是從救必應水提后的藥渣中提取長梗冬青苷、 救必應酸及救必應總皂苷，制成藥物，降低生產成本，造福于人類。救必應是有著廣泛用途的藥材，在中國專利CN101032534A公開了救必應總苷的制備方法及在心腦血管系統(tǒng)疾病的應用，其提取方法是救必應藥材直接用乙醇提取，專利中提到的救必應總皂苷實際上為一個救必應提取物，因為專利中未有化學數(shù)據表明它是皂苷，總皂苷中的成分、含量都未有表明，質量難于控制。救必應中的有效成分用途有較多報道及專利，中國專利CN101342186A公開了長梗冬青苷(pedunculoside)用于治療高脂血癥，CN101033M5A還公開了長梗冬青苷可用于治療冠心病，心絞痛，中風，腦梗死等心腦血管系統(tǒng)疾病，CN101342186A公開了救必應酸 (Rotundic acid)用于治療高脂血癥，藥學學報，1980，15 (5) :303-305報道了紫丁香苷具有止血作用，國外醫(yī)藥，中醫(yī)中藥分冊，2000,22(6) :346-347報道了紫丁香苷具有保肝作用，文獻PlantaMed.，2004，70 =1027-1032又報道了紫丁香苷具有抗炎鎮(zhèn)痛作用。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于，提供一種救必應藥材綜合利用的方法。為實施本發(fā)明的目的所采用的技術方案是從救必應藥材的水提取液中制得紫丁香苷，從救必應藥材水提取后的藥渣中制得救必應酸和/或救必應總皂苷，
具體操作步驟具體操作步驟一、救必應藥材用水提取、濾過后得水提取液1和藥渣2，水提取液 1濃縮后，用常規(guī)的醇沉法沉淀，濾過得醇沉液3，醇沉液3回收乙醇、濃縮得稀浸膏4，稀浸膏4加入硅膠混勻，干燥得硅膠干膏粉5，再用有機溶劑A提取，得有機溶劑A提取液6，提取液6回收溶劑至干，得到紫丁香苷提取物7，加有機溶劑B加熱回流溶解，濾過，得有機溶劑 B液8，放置，濾過，沉淀物為紫丁香苷粗品9，粗品9用乙醇或甲醇重結晶得純度在98%以上的紫丁香苷10，所說的有機溶劑A為丙酮或以體積比計氯仿甲醇或乙醇為1 0.02 0.1或二氯甲烷甲醇或乙醇為1 0.02 0.1的二種混合溶劑，所說的有機溶劑B為以體積比計乙醇或甲醇二氯甲烷為1 0.2 3、乙醇或甲醇氯仿為1 0.2 3的二種混合溶劑；二、將藥渣2用乙醇或甲醇提取、濾過得醇提取液11，醇提取液11回收溶劑，濃縮至浸膏，加入硅膠混勻，干燥，得醇提取物硅膠粉12，醇提取物硅膠粉12用弱極性有機溶劑提取，得救必應酸提取液14和殘留物15，取提取液14回收溶劑，放置，濾過，得救必應酸粗品16，救必應酸粗品16用甲醇或乙醇重結晶得純度在98%以上的救必應酸17，所說的弱極性有機溶劑為氯仿、苯、二氯甲烷或石油醚；和/或將醇提取液11回收溶劑后濃縮至救必應投料重量的0. 5 2倍，再加2 5倍濃縮液重量的水攪勻后，濾過，得沉淀物13，干燥得救必應總皂苷21，救必應總皂苷21 中含有長梗冬青苷50 80%和救必應酸5 30%。為了更好地利用藥材，可以進一步將第二步驟所說的殘留物15用強極性有機溶劑提取，得長梗冬青苷提取液18，回收溶劑至干，固體物為長梗冬青苷粗品19，用體積濃度為30 100%甲醇或30 95%乙醇重結晶得純度在98%以上的長梗冬青苷20，所說的強極性有機溶劑為乙酸乙酯、乙醇、甲醇。步驟二中所說的醇提取液11，優(yōu)選用體積濃度為70-100%的甲醇或體積濃度為 70-95%的乙醇提取所得，提取方法可采用常規(guī)的回流提取法、滲漉提取法或浸漬提取法。從救必應水提的藥渣中提取救必應總皂苷21，用于制備防治高脂血癥，改善心肌缺血，心絞痛的中藥制劑，其毒性較低，副作用小，并且具有抗炎鎮(zhèn)痛作用，可用于制備抗炎鎮(zhèn)痛的藥物，如制備治療風濕關節(jié)炎的藥物等。將救必應總皂苷21添加制備不同劑型時所需的各種常規(guī)輔料，按常規(guī)的中藥制劑工藝制成任何一種口服制劑如片劑、硬膠囊、軟膠囊、顆粒劑、口服液、糖漿劑、滴丸劑或緩釋片等。本發(fā)明的有益效果1、從救必應藥材同時得到四種活性成分，充分利用資源，降低生產成本；2、原料易得，工藝簡單、操作方便，產品質量易控制，可大批量投入生產；3、救必應總皂苷是有效降血脂，改善心肌缺血及用于制備抗炎鎮(zhèn)痛的藥物，其毒性較低，副作用


圖1為救必應藥材綜合利用的工藝流程圖下面結合附圖和實施例進一步闡述本發(fā)明的技術方案
具體實施方式
以下通過試驗例來闡述本發(fā)明的技術方案及有益效果試驗例1紫丁香苷、救必應總皂苷、長梗冬青苷及救必應酸的制備，如圖1所示步驟一紫丁香苷的制備取救必應藥材10Kg，粉碎成粗粉，煎煮二次，每次加水80Kg，每次2小時，合并煎液，濾過后得水提取液1和藥渣2，藥渣2備用，水提取液1濃縮至4Kg，加12Kg乙醇沉淀， 放置M小時，濾過，得醇沉液3，回收乙醇后濃縮至稀浸膏4加入硅膠1. 5Kg混勻，干燥得硅膠干膏粉5，置于連續(xù)循環(huán)提取分離器中，用氯仿甲醇體積比為1 0.05的混合溶劑 13000ml回流提取，得有機溶劑A提取液6，回收溶劑至干，得到紫丁香苷提取物7，再用乙醇氯仿體積比為1 0.5的混合有機溶劑3500ml加熱回流溶解，濾過，得有機溶劑B液 8，放置，濾取沉淀物，干燥，為紫丁香苷粗品9，粗品9用乙醇重結晶得得紫丁香苷43. 8g，用高效液相法測定，見中國藥典2010版一部，293頁，純度為98. 68%。步驟二救必應酸和救必應總皂苷的制備取上述的救必應藥渣2，每次加95%乙醇30Kg，回流提取二次，每次2小時，合并二次提取液，濾過，得醇提取液11共56Kg，取一半^Kg (另一半^Kg備用)，回收乙醇并濃縮至浸膏，加入硅膠500g混勻，干燥，得醇提取物硅膠粉12，醇提取物硅膠粉12置于連續(xù)循環(huán)提取分離器中，用氯仿4000ml提取，得救必應酸提取液14和殘留物15，取提取液14回收氯仿至1500ml，放置，濾過，沉淀物為救必應酸粗品16，救必應酸粗品16用乙醇重結晶得救必應酸34. 5g，用高效液相色譜法測定，含量為98. 11%。取救必應醇提取液11另一半量^Kg,回收乙醇，濃縮至5. OKg，加水15.0Kg，攪勻，濾過，得沉淀物13，干燥得救必應總皂苷246g，用高效液相色譜法測定，含長梗冬青苷 61. 81%，含救必應酸22. 66%。步驟三長梗冬青苷的制備第二步驟中氯仿提取后的殘留物15，再用乙醇3500ml回流提取至無長梗冬青苷， 濾過，得長梗冬青苷提取液18，回收乙醇并濃縮至干，固體物為長梗冬青苷粗品19，用50% 乙醇重結晶，得長梗冬青苷122g，用高效液相色譜法測定，含量為98. 23%。高效液相色譜法測定長梗冬青苷，救必應酸及救必應總皂苷含量的方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈0. 磷酸溶液(50 50)作流動相；檢測波長為210nm。對照品溶液的制備分別取長梗冬青苷對照品、救必應酸對照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每Iml含長梗冬青苷150 μ g、救必應酸50 μ g的溶液，即得。供試品溶液的制備分別取上述長梗冬青苷和救必應酸，研細，各取約0. 02g，精密稱定，置IOOml量瓶中，加甲醇適量，在功率250W，頻率50KHz下超聲處理10分鐘，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。取上述救必應總皂苷，研細，取約0.025g，精密稱定，置IOOml量瓶中，加甲醇適量，在功率250W，頻率50KHz下超聲處理10分鐘，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀，測定， 即得。試驗例2 本發(fā)明的活性成分救必應總皂苷的降血脂，抗心肌缺血及抗炎鎮(zhèn)痛作用
1.救必應總苷的降血脂的作用取清潔級SD大鼠50只，雌性，體重210士 10g，隨機分為5組，每組10只，按表1 分組，各組自由攝取普通飼料適應性喂養(yǎng)一周后，除空白對照組外，其余各組每天按IOml/ kg量灌胃給予高脂的脂肪乳(100ml含15g豬油，6g膽固醇，2g膽鹽，0. 2g丙硫氧嘧啶和 20mL吐溫80，65mL蒸餾水)，持續(xù)到實驗結束，造模一周后，正常組與模型組給羧甲基纖維素鈉(lml/100g體重)，其余各組灌胃給藥，藥物均配制成羧甲基纖維素鈉混懸液 (lml/100g體重)，每日1次，按照表1分組給藥，連續(xù)給藥21天，每三天稱1次體重，以調整給藥量。各組動物于給藥21天后禁食不禁水16h，摘眼球取血，分離血清，測定血清總膽固醇(TC)、血清甘油三酯(TG)、血清高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和血清低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。結果見表1表1救必應總皂苷對高脂模型大鼠血脂指標的影響(X ±S)
動物數(shù)TCTGHDL-CLDL-C
組別
(只)(mmol/L)(mmol/L)(mmol/L)(mmol/L)
止常組101.82±0. 190. 82±0.110.81±0.120.50±0.14高脂模鄧紹104.85±032λλ2. 06 + 0.16λλ0.31±0.11ΛΛ1.58±0.13λλ辛伐他汀組 (1. 5mg/kg)102.24±0. 21 林1.07±0.19**0.67±0.12林0.61±0.12**救必應總皂苷組 (350mg/Kg)102.32±0. 21**1. 16±0.20**0.62±0.12**0.65±0.13**救必應總皂it組 (200mg/Kg)102.92 ±0. 28**1. 35 土0.17**0.51 士 0.14**0.邪土 0.15**注與模型組比較，*P < 0. 05有顯著差異；#P < 0. 01有非常顯著差異與正常組比較，Δ P < 0. 05有顯著差異；ΔΔ P <0.01有非常顯著差異結果表明，對高脂血癥的大鼠，救必應總皂苷能顯著降低血清總膽固醇(TC)和血清甘油三酯(TG)含量；顯著降低血清低密度脂蛋白膽固醇含量(LDL-C)，顯著升高血清高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)含量。2.救必應總苷對大鼠垂體后葉素素性急性心肌缺血模型心電圖的影響取心電圖篩選正常用的SD大鼠40只，雌雄各半，隨機分為4組，每組10只，按表2 分組，所有的藥物組均配成羧甲基纖維素鈉的混懸液(lml/100g體重)，模型對照組給
羧甲基纖維素鈉(lml/100g體重)，各組每天灌胃給藥1次，按照表2分組給藥，連續(xù)給藥5天，末次給藥1小時后，用3%戊巴比妥酸鈉(lml/Kg)腹腔注射麻醉，將其固定，連接心電圖機，隨后靜脈注射垂體后葉素(0. 5U/Kg)，10秒內注射完畢，觀察紀錄10分鐘的心電圖，測量注射后30秒內的ST段及T波的變化。結果見表2。表2救必應總皂苷對垂體后葉素致大鼠急性心肌缺血的影響(I ±S)
權利要求
1.一種救必應藥材綜合利用的方法，其特征在于從救必應藥材的水提取液中制得紫丁香苷，從救必應藥材水提取后的藥渣中制得救必應酸和/或救必應總皂苷，具體操作步驟一、救必應藥材用水提取、濾過后得水提取液(1)和藥渣O)，水提取液 (1)濃縮后，用常規(guī)的醇沉法沉淀，濾過得醇沉液(3)，醇沉液(3)回收乙醇、濃縮得稀浸膏 G)，稀浸膏(4)加入硅膠混勻，干燥得硅膠干膏粉(5)，再用有機溶劑A提取，得有機溶劑A 提取液(6)，提取液(6)回收溶劑至干，得到紫丁香苷提取物(7)，加有機溶劑B加熱回流溶解，濾過，得有機溶劑B液(8)，放置，濾過，沉淀物為紫丁香苷粗品(9)，粗品(9)用乙醇或甲醇重結晶得純度在98%以上的紫丁香苷(10)，所說的有機溶劑A為丙酮或以體積比計氯仿甲醇或乙醇為1 0. 02 0. 1或二氯甲烷甲醇或乙醇為1 0. 02 0. 1的二種混合溶劑，所說的有機溶劑B為以體積比計乙醇或甲醇二氯甲烷為1 0.2 3、乙醇或甲醇氯仿為1 0. 2 3的二種混合溶劑；二、將藥渣⑵用乙醇或甲醇提取、濾過得醇提取液(11)，醇提取液(11)回收溶劑，濃縮至浸膏，加入硅膠混勻，干燥，得醇提取物硅膠粉(12)，醇提取物硅膠粉(1 用弱極性有機溶劑提取，得救必應酸提取液(14)和殘留物(15)，取提取液(14)回收溶劑，放置，濾過， 得救必應酸粗品(16)，救必應酸粗品(16)用甲醇或乙醇重結晶得純度在98%以上的救必應酸(17)，所說的弱極性有機溶劑為氯仿、苯、二氯甲烷或石油醚；和/或將醇提取液(11)回收溶劑后濃縮至救必應投料重量的0. 5 2倍，再加2 5 倍濃縮液重量的水攪勻后，濾過，得沉淀物(13)，干燥得救必應總皂苷(21)，救必應總皂苷 (21)中含有長梗冬青苷50 80%和救必應酸5 30%。
2.根據權利要求1所說的救必應藥材綜合利用的方法，其特征在于第二步驟所說的殘留物(1 用強極性有機溶劑提取，得長梗冬青苷提取液(18)，回收溶劑至干，固體物為長梗冬青苷粗品(19)，用體積濃度為30 100%甲醇或30 95%乙醇重結晶得純度在 98%以上的長梗冬青苷00)，所說的強極性有機溶劑為乙酸乙酯、乙醇、甲醇。
3.根據權利要求1所說的救必應藥材綜合利用的方法，其特征在于步驟二中所說的醇提取液(11)，是用體積濃度為70 100%的甲醇或體積濃度為70 95%的乙醇提取所得，提取方法采用常規(guī)的回流提取法、滲漉提取法或浸漬提取法。
4.一種如權利要求1所說的從救必應水提的藥渣中提取救必應總皂苷，用于制備防治高脂血癥，改善心肌缺血，心絞痛的中藥制劑。
5.一種如權利要求1所說的從救必應水提的藥渣中提取救必應總皂苷，用于制備抗炎鎮(zhèn)痛的藥物。
全文摘要
救必應藥材的綜合利用，涉及醫(yī)藥領域中來源于植物的提取分離方法及應用，具體涉及從救必應藥材中同時提取紫丁香苷、長梗冬青苷、救必應酸和救必應總皂苷的方法及應用。本發(fā)明是從救必應藥材的水提取液中制得紫丁香苷，從救必應藥材水提取后的藥渣中制得長梗冬青苷和救必應酸，紫丁香苷、長梗冬青苷和救必應酸的純度均在98％以上，和/或從救必應水提的藥渣中提取救必應總皂苷。救必應總皂苷可用于制備防治高脂血癥、改善心肌缺血、心絞痛及制備抗炎鎮(zhèn)痛的藥物。本發(fā)明的有益效果1、從救必應藥材同時可得到四種活性成分，充分利用資源；2、原料易得，工藝簡單、質量可控，可大批量生產。
文檔編號A61P3/06GK102210724SQ20111011906
公開日2011年10月12日 申請日期2011年5月9日 優(yōu)先權日2011年5月9日
發(fā)明者劉國樵 申請人:劉國樵