專(zhuān)利名稱(chēng)：膠原基質(zhì)作為組織工程支架材料的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及膠原基質(zhì)作為組織工程支架材料的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
膠原是哺乳動(dòng)物含量最豐富的蛋白質(zhì)，其三維螺旋結(jié)構(gòu)由三條多肽鏈組成，多肽鏈的重復(fù)單元為Gly-X-Y，X和Y位置通常為脯氨酸和4-羥基脯氨酸。膠原易從動(dòng)物組織純化，如皮膚、肌腱和遺棄的人組織如胎盤(pán)。膠原具有抗原性低、與細(xì)胞親合力大、與血小板產(chǎn)生血凝作用等特點(diǎn)，因而在醫(yī)藥領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)至少27種遺傳基因不同的膠原類(lèi)型。以存在量最多的I型膠原為例，膠原分子的約95%為三條螺旋鏈領(lǐng)域，剩余的約5%為非膠原性的終端肽鏈結(jié)構(gòu)領(lǐng)域。膠原的抗原性低，主要是由于膠原三條螺旋鏈領(lǐng)域缺 乏酪氨酸殘基，目前市場(chǎng)上膠原產(chǎn)品的抗原性除雜質(zhì)外主要來(lái)自膠原N和C終端的肽鏈。以膠原為基礎(chǔ)的醫(yī)用產(chǎn)品的研究與開(kāi)發(fā)，已經(jīng)獲得了很多成果，主要是將膠原做成不同劑型，如溶液、凝膠、粉末、海綿、纖維、薄膜等，或進(jìn)行各種各樣的改性，使其具有不同的醫(yī)用或醫(yī)療功能。作為組織工程支架材料，膠原可引導(dǎo)細(xì)胞分化、增殖和遷移。但是，單獨(dú)使用膠原制成的海綿作為支架材料造成力學(xué)性能差且降解過(guò)快。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供膠原基質(zhì)的新用途。本發(fā)明所提供的膠原基質(zhì)的新用途是其在制備組織工程支架材料中的應(yīng)用，尤其是作為表皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和骨細(xì)胞等生長(zhǎng)的支架材料，用作皮膚、骨和
血管等組織的重建。本發(fā)明所述膠原基質(zhì)由下述質(zhì)量份數(shù)比的物質(zhì)組成膠原50-90殼聚糖8-48甘油0.5-5。所述膠原基質(zhì)可進(jìn)一步由下述質(zhì)量份數(shù)比的物質(zhì)組成膠原70-80殼聚糖18-28甘油0.8-8。所述膠原可以是市售膠原初級(jí)產(chǎn)品(主要是I型膠原)，也可以是采用以下方法制備的I)將富含膠原的動(dòng)物組織機(jī)械去除表皮層、肌肉和脂肪等雜質(zhì)，粉碎后清洗干凈，得到膠原組織；2)將上述膠原組織分別用pH8. 5-10. 5的堿溶液、醇類(lèi)物質(zhì)水溶液洗滌脫脂，得到膠原粗品；所述堿溶液優(yōu)選由氫氧化鈉、碳酸氫鈉和水組成的堿溶液，其中，氫氧化鈉、碳酸氫鈉和水的質(zhì)量比依次為(0. 1-1) (5-10) (89-94. 9);所述醇類(lèi)物質(zhì)水溶液優(yōu)選由乙醇、異丙醇和水組成的混合溶劑，其中乙醇、異丙醇和水的質(zhì)量比依次為(5-10) (2-5) (85-93)；3)將膠原粗品溶解在pH5. 5-6. 5的酸溶液中；其中酸溶液優(yōu)選甲酸、乙酸、丙酸或鹽酸；4)向上述溶液中加入復(fù)合蛋白酶，30_35°C下攪拌培養(yǎng)10-15小時(shí)；所述復(fù)合蛋白酶由活性比為胃蛋白酶胰蛋白酶木瓜蛋白酶=I I 0. 5的三種蛋白酶組成；所述膠原粗品與復(fù)合蛋白酶的配比為(100-1000) g 10000U ；5)離心收集上清液，向上清液中加入NaCl，使其濃度達(dá)到2mol/L，0_10°C下攪拌10-20小時(shí)，收集得到的沉淀物，記為沉淀物I ;6)將沉淀物I溶于質(zhì)量濃度0. 1-0. 5%乙酸水溶液中，離心收集上清；再向上清中加入NaCl，使其濃度達(dá)到lmol/L，攪拌得到沉淀物2 ;重復(fù)操作3_4次，得到目的產(chǎn)物。
為了使得到的膠原基質(zhì)的性質(zhì)更為優(yōu)良，也可對(duì)市售膠原初級(jí)產(chǎn)品采用以下方法進(jìn)行精制I)將市售膠原初級(jí)產(chǎn)品溶解在pH5. 5-6. 5的稀酸溶液中，其中優(yōu)選甲酸、乙酸、丙酸或鹽酸；2)向上述溶液中加入復(fù)合蛋白酶，30_35°C下攪拌培養(yǎng)10_15小時(shí)；所述復(fù)合蛋白酶由活性比為胃蛋白酶胰蛋白酶木瓜蛋白酶=I I 0. 5的三種蛋白酶組成；所述膠原粗品與復(fù)合蛋白酶的配比為(100-1000) g 10000U ；3)離心收集上清液，向上清液中加入NaCl，使其濃度達(dá)到2mol/L，0_10°C下攪拌10-20小時(shí),收集得到的沉淀物,記為沉淀物a ；4)將沉淀物a溶于質(zhì)量濃度為0. 1-0. 5%乙酸水溶液中，離心收集上清；再向上清中加入NaCl，使?jié)舛冗_(dá)到lmol/L，攪拌得到沉淀物b ;重復(fù)操作3_4次，得到目的產(chǎn)物。為了使膠原基質(zhì)的質(zhì)量更優(yōu)，所述殼聚糖選用脫己酰度為70-90%，粘均分子量為(I. 0-4. 0) XlO5 的殼聚糖。本發(fā)明所述膠原基質(zhì)的制備方法，包括下述步驟I)將膠原溶于質(zhì)量濃度為0. 01-0. I %乙酸水溶液中，制成質(zhì)量濃度為1-3%膠原溶液；2)將殼聚糖溶于質(zhì)量濃度為0. 01-0. I %乙酸溶液中，制成質(zhì)量濃度為1-3%殼聚糖溶液；3)將所述膠原溶液、殼聚糖溶液以及甘油按照膠原、殼聚糖與甘油的質(zhì)量比為(50-90) (8-48) (0. 5-5)的比例混合均勻，在-80°C--10°C下冷凍干燥1-5天，得到海綿狀材料；4)將上述海綿狀材料在40_50°C下采用醛類(lèi)交聯(lián)劑固定20-100分鐘；5)用甘油水溶液清洗后，真空干燥得到膠原基質(zhì)。在生產(chǎn)過(guò)程中，所述殼聚糖選用脫己酰度為70-90 %，粘均分子量為(I. 0-4.0) X IO5的產(chǎn)品為好。步驟4)中采用醛類(lèi)交聯(lián)劑固定海綿狀材料是在氣體發(fā)生器中進(jìn)行的。所述醛類(lèi)交聯(lián)劑可以是甲醛、甲基乙二醛或戊二醛。步驟5)中所用甘油水溶液清洗步驟中，甘油水溶液中甘油與水的質(zhì)量比為(0. 1-10) (90-99. 9)。
進(jìn)一步地，將步驟5)得到的膠原基質(zhì)經(jīng)包裝、6tlCo照射滅菌后制成成品。本發(fā)明巧妙地將膠原、殼聚糖與甘油聯(lián)合運(yùn)用，使膠原基質(zhì)產(chǎn)品的性能明顯增強(qiáng)。殼聚糖的混入，不僅增加膠原基質(zhì)力學(xué)性能，而且使膠原基質(zhì)的降解速率得到控制。戊二醛等醛類(lèi)交聯(lián)劑的交聯(lián)，使膠原基質(zhì)具有較強(qiáng)的生物和化學(xué)穩(wěn)定性。甘油的處理，提高膠原基質(zhì)的柔韌度，有利于接種細(xì)胞發(fā)生生物學(xué)行為。稀堿和醇類(lèi)物質(zhì)水溶液的脫脂處理，使膠原基質(zhì)的脂肪含量降至最低。鑒于膠原產(chǎn)品抗原性主要來(lái)自膠原的N和C終端肽鏈，本發(fā)明創(chuàng)造性地用復(fù)合酶處理膠原，進(jìn)一步切掉終端肽鏈，使產(chǎn)品的抗原性降至最低。在氣體發(fā)生器中對(duì)材料進(jìn)行交聯(lián)固定，可以避免交聯(lián)劑溶液中的雜質(zhì)(如戊二醛溶液中的環(huán)半化合物)引入材料中，從而使本發(fā)明的生物學(xué)性能優(yōu)異。通過(guò)戊二醛和來(lái)源豐富的殼聚糖的化學(xué)改性，優(yōu)化膠原基質(zhì)的性能，模擬細(xì)胞外基質(zhì)用于組織或細(xì)胞培養(yǎng)。細(xì)胞生長(zhǎng)試驗(yàn)，表明人血管內(nèi)皮細(xì)胞在本發(fā)明的膠原基質(zhì)上生 長(zhǎng)良好。


圖I為I型膠原與本發(fā)明膠原基質(zhì)的酶解速率圖；其中，A為I型膠原，B為膠原基質(zhì)；a,酶解Ih ；b,酶解1.5h ；c,酶解4h ；d,酶解ld；e,酶解2d ；f,酶解3d ；g,酶解6d ；h,酶解9d。圖2為人血管內(nèi)皮細(xì)胞與膠原基質(zhì)共培養(yǎng)的激光掃描共聚焦圖。
具體實(shí)施例方式下面通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的進(jìn)行說(shuō)明，但本發(fā)明并不局限于此。下述實(shí)施例中所述實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法；所述試劑和生物材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑獲得。下述實(shí)施例中所用的復(fù)合蛋白酶由活性比為胃蛋白酶胰蛋白酶木瓜蛋白酶= 1:1: 0. 5的三種蛋白酶組成；復(fù)合蛋白酶的酶活為10000U/g。實(shí)施例I、制備膠原基質(zhì)(一 )用動(dòng)物的原始組織生產(chǎn)膠原，具體步驟如下I、將富含膠原的離體組織(豬皮、牛皮、跟腱等)，機(jī)械去除表皮層、肌肉和脂肪等雜質(zhì)，粉碎后分別用自來(lái)水和純水清洗，得到膠原組織；2、配制pH9. 5的稀堿溶液(質(zhì)量份數(shù)比，氫氧化鈉碳酸氫鈉水=0. 5 7. 5 92)和醇類(lèi)物質(zhì)水溶液(質(zhì)量份數(shù)比，乙醇異丙醇水=7 : 4 : 89);3、依次用上述配制的稀堿溶液和醇類(lèi)物質(zhì)水溶液洗滌第一步所得到的動(dòng)物組織，使其脫脂，得到膠原粗品；4、將膠原粗品溶解在pH6. 0的稀甲酸溶液中；5、向上述溶液中加入復(fù)合蛋白酶，膠原粗品與復(fù)合蛋白酶的質(zhì)量比為800 1，33°C下攪拌培養(yǎng)13小時(shí)；6、離心，并收集上清液，在上清液中加入NaCl，使?jié)舛冗_(dá)到2mol/L，5°C下攪拌15小時(shí)，收集得到的沉淀物；
7、將沉淀物溶于質(zhì)量濃度為0. 3%乙酸水溶液中，離心收集上清；上清中再加入NaCl，使?jié)舛冗_(dá)到lmol/L，攪拌得到沉淀物；重復(fù)操作3次，收集沉淀物，即為膠原；( 二)制備膠原基質(zhì)I、將膠原溶于質(zhì)量濃度為0. 05%乙酸水溶液中，制成質(zhì)量濃度為2%膠原溶液；2、將脫己酰度80%，粘均分子量3. OXlO5的殼聚糖溶于質(zhì)量濃度為0. 05%乙酸水溶液中，制成質(zhì)量濃度為2%殼聚糖溶液；3、將上述得到的膠原溶液(以溶液中的膠原干重計(jì))和殼聚糖溶液(以溶液中的殼聚糖干重計(jì))以及甘油按質(zhì)量份數(shù)比70 28 2的比例混合，在-70°C下冷凍2天，凍干得到海綿狀材料；
4、將上述海綿狀材料置于氣體發(fā)生器中，45°C下用甲醛交聯(lián)劑固定60分鐘；5、用甘油水溶液清洗，甘油水溶液中甘油與水質(zhì)量比為I : 99;6、真空干燥得到膠原基質(zhì)；7、膠原基質(zhì)經(jīng)包裝、6tlCo照射滅菌后入庫(kù)。實(shí)施例2、制備膠原基質(zhì)(一 )精制市售膠原，具體步驟如下I、將市售膠原溶解在pH5. 8的稀鹽酸溶液中；2、向上述溶液中加入復(fù)合蛋白酶，膠原與復(fù)合蛋白酶的重量比為500 1，復(fù)合蛋白酶由活性比為胃蛋白酶胰蛋白酶木瓜蛋白酶=I I 0.5的三種蛋白酶組成，34 °C下攪拌培養(yǎng)11小時(shí)；3、離心，并收集上清液，在上清液中加入NaCl，使?jié)舛冗_(dá)到2mol/L，8°C下攪拌12小時(shí)，收集得到的沉淀物；4、將沉淀物溶于質(zhì)量濃度為0. 3%乙酸水溶液中，離心收集上清；5、上清中再加入NaCl，使?jié)舛冗_(dá)到lmol/L，攪拌得到沉淀物；重復(fù)操作4次，收集沉淀物，即為精制的膠原。( 二)制備膠原基質(zhì)I、將精制膠原溶于質(zhì)量濃度為0. 08%乙酸溶液中，制成質(zhì)量濃度為I. 8%膠原溶液；2、將市售脫己酰度75%，粘均分子量2. OX IO5的殼聚糖溶于質(zhì)量濃度為0. 08%乙酸溶液中，制成質(zhì)量濃度為I. 8%殼聚糖溶液；3、將上述得到的膠原溶液(以溶液中的膠原干重計(jì))和殼聚糖溶液(以溶液中的殼聚糖干重計(jì))以及甘油按重量份數(shù)比80 18 4的比例混合均勻，在_30°C下冷凍4天，凍干得到海綿狀材料；4、將上述海綿狀材料置于氣體發(fā)生器中，48°C下用戊二醛交聯(lián)劑固定30分鐘；5、用甘油水溶液清洗，甘油水溶液中甘油與水質(zhì)量比為7 93;6、真空干燥得到膠原基質(zhì)；7、膠原基質(zhì)經(jīng)包裝、6tlCo照射滅菌后入庫(kù)。實(shí)施例3、膠原基質(zhì)的酶解穩(wěn)定性通過(guò)膠原基質(zhì)酶降解實(shí)驗(yàn)測(cè)定酶解速率。具體方法如下取新鮮的DMEM培養(yǎng)液配制濃度為5CDU/ml的膠原酶溶液，冷藏保存；取5mg膠原基質(zhì)樣品，塑料薄膜封裝6tlCtl滅菌處理；將樣品置入Iml I型膠原酶溶液中，37°C下培養(yǎng)，每天更換膠原酶溶液；在lh、l. 5h、4h、ld、2d、3d、6d、9d時(shí)間點(diǎn)取樣，每組3個(gè)樣品；在定期取樣的溶液中加入200 u I 0. 25mol/L EDTA溶液以終止消化過(guò)程；用鑷子夾樣品一小角取出樣品，先用磷酸緩沖液(PH7. 2)清洗，再用無(wú)離子水清洗，置于干凈的小管里，-20°C凍存24h以上；樣品冷凍干燥36h，稱(chēng)取剩余樣品質(zhì)量(以上所用試劑均購(gòu)自SIGMA 公司)。測(cè)定結(jié)果如圖I所示。由I型膠原制成的膠原基質(zhì)在I. 5h-2h內(nèi)幾乎完全降解，而經(jīng)本方法制得的膠原基質(zhì)(實(shí)施例I制備)，酶解穩(wěn)定性顯著提高。I型膠原在2h時(shí)大部分已降解，只有小的碎絮狀漂在溶液中，取出時(shí)發(fā)現(xiàn)成粘稠狀模糊物，經(jīng)真空冷凍干燥后，可觀察到膠原纖維束暴露，且長(zhǎng)短不一，基質(zhì)的三維多孔結(jié)構(gòu)徹底不存在。本發(fā)明膠原基質(zhì)在2h時(shí)其結(jié)構(gòu)保持良好，表面無(wú)纖維束暴露。直到第9d時(shí)，其三維多孔結(jié)構(gòu)和材料表面也無(wú)明顯變化。實(shí)施例4、膠原基質(zhì)的細(xì)胞生長(zhǎng)試驗(yàn) 將人血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)接種于本發(fā)明制備的膠原基質(zhì)上共培養(yǎng)2周，經(jīng)FDA (熒光素二乙酸酯)染色后，活細(xì)胞在CLSM(共聚焦激光掃描顯微鏡)觀察下呈黃綠色，膠原基質(zhì)上的細(xì)胞存活良好。
權(quán)利要求
1.膠原基質(zhì)在制備組織工程支架材料中的應(yīng)用； 所述膠原基質(zhì)由下述質(zhì)量份數(shù)比的物質(zhì)組成 膠原 50-90 殼聚糖 8-48 甘油 0.5-5。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于所述膠原基質(zhì)在制備細(xì)胞生長(zhǎng)的支架材料中的應(yīng)用；所述細(xì)胞優(yōu)選人血管內(nèi)皮細(xì)胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的應(yīng)用，其特征在于所述膠原基質(zhì)是按照包括下述步驟的方法制備得到的 1)將膠原溶于質(zhì)量濃度為0.01-0.I %乙酸水溶液中，制成質(zhì)量濃度為1-3%膠原溶液； 2)將殼聚糖溶于質(zhì)量濃度為0.01-0. I %乙酸溶液中，制成質(zhì)量濃度為1-3%殼聚糖溶液； 3)將所述膠原溶液、殼聚糖溶液以及甘油按照膠原、殼聚糖與甘油的質(zhì)量比為(50-90) (8-48) (0. 5-5)的比例混合均勻，在-80°C--10°C下冷凍干燥1-5天，得到海綿狀材料； 4)在40-50°C下，采用醛類(lèi)交聯(lián)劑對(duì)所述海綿狀材料進(jìn)行交聯(lián)固定20-100分鐘； 5)將固定后的海綿狀材料用甘油水溶液進(jìn)行清洗、真空干燥，得到膠原基質(zhì)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于步驟4)中所述醛類(lèi)交聯(lián)劑為甲醛、甲基乙二醛或戊二醛；所述交聯(lián)固定是在氣體發(fā)生器中進(jìn)行的； 步驟5)所述甘油水溶液中，甘油與水的質(zhì)量比為(0. 1-10) (90-99.9)。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的應(yīng)用，其特征在于所述方法還包括將步驟4)得到的膠原基質(zhì)進(jìn)行包裝、6tlCo照射滅菌的步驟。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述殼聚糖是脫己酰度為70-90%、粘均分子量為(I. 0-4. 0) XlO5的殼聚糖。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述膠原按照下述方法制備得到 a)將富含膠原的離體動(dòng)物組織去除表皮層、肌肉和脂肪，粉碎后清洗干凈，得到膠原組織； b)將所述膠原組織分別用pH8.5-10. 5的堿溶液、醇類(lèi)物質(zhì)水溶液洗滌脫脂，得到膠原粗品； c)將所述膠原粗品溶解在pH5.5-6. 5的酸溶液中； d)向步驟c)溶液中加入復(fù)合蛋白酶，在30-35°C下攪拌培養(yǎng)10-15小時(shí)；所述復(fù)合蛋白酶由活性比為胃蛋白酶胰蛋白酶木瓜蛋白酶=I I 0. 5的三種蛋白酶組成；所述膠原粗品與復(fù)合蛋白酶的配比為(100-1000)g 10000U ； e)離心收集上清液，向上清液中加入NaCl，使其濃度達(dá)到2mOl/L，0-10°C下攪拌10-20小時(shí)，收集得到的沉淀物，記為沉淀物I ; f)將沉淀物I溶于質(zhì)量濃度0.1-0. 5%乙酸水溶液中，離心收集上清；再向上清中加入NaCl，使其濃度達(dá)到lmol/L，攪拌得到沉淀物2 ;重復(fù)步驟f)操作3_4次，得到膠原。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于步驟b)中所述堿溶液由氫氧化鈉、碳酸氫鈉和水組成，其中，氫氧化鈉、碳酸氫鈉和水的質(zhì)量比依次為(0.1-1) (5-10) (89-94.9);所述醇類(lèi)物質(zhì)水溶液由乙醇、異丙醇和水組成，其中乙醇、異丙醇和水的質(zhì)量比依次為(5-10) (2-5) (85-93)； 步驟c)中所述酸溶液為甲酸溶液、乙酸溶液、丙酸溶液或鹽酸溶液。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述膠原按照下述方法制備得到 A)將市售膠原溶解在pH5.5-6. 5的酸溶液中； B)向上述溶液中加入復(fù)合蛋白酶，30-35°C下攪拌培養(yǎng)10-15小時(shí)；所述復(fù)合蛋白酶由活性比為胃蛋白酶胰蛋白酶木瓜蛋白酶=I I 0.5的三種蛋白酶組成；所述膠原粗品與復(fù)合蛋白酶的配比為(100-1000) g 10000U ； C)離心收集上清液，向上清液中加入NaCl，使其濃度達(dá)到2mOl/L，0-10°C下攪拌10-20小時(shí)，收集得到的沉淀物，記為沉淀物a ； D)將沉淀物a溶于質(zhì)量濃度為0.1-0. 5%乙酸水溶液中，離心收集上清；再向上清中加A NaCl，使?jié)舛冗_(dá)到lmol/L，攪拌得到沉淀物b ;重復(fù)步驟D)操作3_4次，得到膠原。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于步驟A)中所述酸溶液為甲酸溶液、乙酸溶液、丙酸溶液或鹽酸溶液。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了膠原基質(zhì)的新用途。該新用途是其作為組織工程支架材料的應(yīng)用。所述膠原基質(zhì)由下述質(zhì)量份數(shù)比的物質(zhì)組成膠原50-90、殼聚糖8-48和甘油0.5-5。制備方法如下1)將膠原溶于0.01-0.1％乙酸水溶液中，制成1-3％膠原溶液；2)將殼聚糖溶于0.01-0.1％乙酸溶液中，制成1-3％殼聚糖溶液；3)將膠原溶液、殼聚糖溶液(干重計(jì))以及甘油按質(zhì)量份數(shù)比50-90∶8-48∶0.5-5的比例混合，在-80℃--10℃下冷凍干燥1-5天，得到海綿狀材料；4)將上述海綿狀材料在40-50℃下采用醛類(lèi)交聯(lián)劑固定20-100分鐘；5)用甘油水溶液清洗后，真空干燥得到膠原基質(zhì)。通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)表明，本發(fā)明膠原基質(zhì)能促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，可作為組織工程支架材料。
文檔編號(hào)A61L27/26GK102772822SQ20111011963
公開(kāi)日2012年11月14日 申請(qǐng)日期2011年5月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月10日
發(fā)明者侍才洪, 關(guān)靜, 張俊民, 張西正, 李志宏, 李瑞欣, 武繼民, 郭勇, 郭濤, 黃姝杰 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生裝備研究所