專利名稱：一種中藥提取液與益生菌混合的腸溶型微膠囊的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種微膠囊劑制備方法，屬于生物醫(yī)藥領域，具體地說是一種中藥提取液與益生菌混合的腸溶型微膠囊。
背景技術：
微膠囊是利用囊材包裹囊芯物而成，囊材由天然或合成的高分子材料構成，也稱作囊膜壁；囊芯物為固態(tài)藥劑或液態(tài)藥劑。其外型一般呈球形，直徑一般在1微米至3毫米，膜為一層或多層；通常利用微膠囊技術保護敏感的生物活性劑。微膠囊化技術在動物科學、畜牧生產領域已有廣泛的應用。將黃芪及楊樹花提取液與益生菌混合使用所含的藥劑能到達動物胃腸道并被其有效的吸收，攝入宿主腸道后，部分有效成分被分解以致有效成分數量不足，而不能達到有效的狀態(tài)。因此，需要一種微膠囊制劑，將黃芪及楊樹花提取液與益生菌作為囊心物質包埋起來，使其與外界環(huán)境相隔絕，從而保持原料藥劑的全部有益成分，使得黃芪及楊樹花提取液與益生菌保證益生菌的存活率，改善腸道菌群結構、降低膽固醇、抑制病原菌、提高免疫力及抗腫瘤等重要生理功效。而腸溶性微膠囊，能夠保證有效藥劑成份不在胃液及消化系統微生物環(huán)境中處于被分解、被抑制的劣勢狀態(tài)，而且具有降低運輸保存成本，提高動物免疫力，降低發(fā)病率的功效；還由于楊樹花中含豐富的密二糖包裹菌體，在益生菌的外圍形成保護膜，提供碳源；促進生長，使其在腸道中形成優(yōu)勢菌群。

發(fā)明內容
本發(fā)明采用多種技術的優(yōu)點，提供一種中藥提取液與益生菌混合的腸溶型微膠囊。其目的為使益生菌在腸道中形成優(yōu)勢菌群，促進畜禽生長；抑制病原菌滋生，且穩(wěn)定性好，安全無毒副作用，無殘留無污染。本發(fā)明所述一種中藥提取液與益生菌混合的腸溶型微膠囊，其特征在于微膠囊由囊材包裹囊芯物而成；所述囊材為海藻酸鈉明膠溶液的體積比為2 1，終濃度為3%， 所述囊芯物由50 70%混合益生菌菌劑、50 30%黃芪及楊樹花提取液混合組成；再將其混合培養(yǎng)生孢，與終濃度為3%的海藻酸鈉/明膠溶液一起，利用擠壓法制得本發(fā)明所述的一種中藥提取液與益生菌混合的腸溶型微膠囊。所述混合益生菌菌劑組成成分為釀酒酵母30 40%、枯草芽孢桿菌30 40%、 蠟樣芽孢桿菌30 40% ；所述黃芪及楊樹花提取液中含有黃芪70 80%、楊樹花20 30%。本發(fā)明所述一種中藥提取液與益生菌混合的腸溶型微膠囊，其具體實現步驟如下(1)混合益生菌菌劑的制備①釀酒酵母的制備種子培養(yǎng)，取兩環(huán)斜面保藏的釀酒酵母接種于IOOmlYPDA培養(yǎng)基上，于30°C通風培養(yǎng)18h ；再次配制YEPD發(fā)酵培養(yǎng)基于115°C高壓滅菌20min，冷卻后接入上述種子液，通風培養(yǎng)18h后，靜置4 6h，取出上層清夜，取出下層酵母泥。
②枯草芽孢桿菌的制備種子培養(yǎng)，取兩環(huán)斜面保藏的枯草芽孢桿菌接種于 IOOml普通培養(yǎng)基上，于37°C通風培養(yǎng)通風18h ；再次配制上述普通培養(yǎng)基于115°C高壓滅菌20min，冷卻后接入上述種子液，通風培養(yǎng)18h做為枯草芽孢桿菌液。③蠟樣芽孢桿菌的制備種子培養(yǎng)，取兩環(huán)斜面保藏的蠟樣芽孢桿菌接種于 IOOml普通培養(yǎng)基，于37°C通風培養(yǎng)通風18h ；再次配制上述普通培養(yǎng)基于115°C高壓滅菌 20min，冷卻后接入上述種子液100ml，通風培養(yǎng)18h做為蠟樣芽孢桿菌液。④混合益生菌菌劑的制備將上述菌液按釀酒酵母30 40%、枯草芽孢桿菌 30 40%、蠟樣芽孢桿菌30 40%混合制成混合益生菌菌劑備用。所述YPDA培養(yǎng)基制作工藝為20g蛋白胨、IOg酵母膏、2g葡萄糖，加水到1L， 115°C高壓滅菌15min。所述普通培養(yǎng)基制作工藝為10g蛋白胨、IOg酵母膏、2g葡萄糖，加水到1L，115°C 高壓滅菌15min。(2)黃芪及楊樹花提取液的制備 ①按黃芪70 80%、楊樹花20 30%粉碎并混合均勻，裝入提取鍋中并加入5 倍重的水，蒸汽煎煮lh，濾出提取液，再重復煎煮2次，棄藥渣；②將三次提取液混合后繼續(xù)煎煮，濃縮至0. 5 1. 5g/ml，降溫到70°C，按10%的比例加入殼聚糖溶液，攪拌均勻，靜置沉淀24h后，去沉淀，得到黃芪及楊樹花提取液待用。(3)腸溶型微膠囊的制備①50 70 %的混合益生菌菌劑和50 30 %的黃芪及楊樹花提取液均勻混合，于 30 35°C下不通風攪拌培養(yǎng)，直到蠟樣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌形成芽孢；②將海藻酸鈉與明膠溶液以2 1混合，終濃度為3%，將其加入混合液中，用注射器向該混合液中注入冷卻的0. 3mol/L的氯化鈣溶液，固化lh，洗滌，4°C或常溫干燥，即得本發(fā)明所述的一種中藥提取液與益生菌混合的腸溶型微膠囊。本發(fā)明所述一種中藥提取液與益生菌混合的腸溶型微膠囊，其有益效果在于a.采用益生菌制劑和植物制劑有機結合，改善宿主的抗病能力，提高疫苗接種的成功率，改善宿主的腸道微環(huán)境；b.提高胃液、膽汁、胰酶等的耐受能力，提高進入腸道的活菌數，增強其在腸道微環(huán)境中的競爭優(yōu)勢；c.提高微膠囊中的活菌數，減少生產運輸過程中雜菌的污染降，低加工運輸成本， 從生產方法上保證了產品的安全性。
具體實施例方式實施例1(一 )、混合益生菌菌劑的制備①釀酒酵母的制備種子培養(yǎng)，取兩環(huán)斜面保藏的釀酒酵母接種于IOOmlYPDA培養(yǎng)基，于30°C通風培養(yǎng)通風18h ；再次配制20L YEPD培養(yǎng)基于30L發(fā)酵罐115°C高壓滅菌 20min,冷卻后接入上述種子液300ml，通風培養(yǎng)18h后，靜置5h，取出上層清夜，取出下層酵母泥。YEPD培養(yǎng)基制作工藝為20g蛋白胨、IOg酵母膏、2g葡萄糖，加水到1L，115°C高壓滅菌15min。②枯草芽孢桿菌的制備種子培養(yǎng)，取兩環(huán)斜面保藏的枯草芽孢桿菌接種于 IOOml普通培養(yǎng)基上；再次配制20L上述普通培養(yǎng)基于30L發(fā)酵罐115°C高壓滅菌20min， 冷卻后接入上述種子液100ml，通風培養(yǎng)18h制得枯草芽孢桿菌液。③蠟樣芽孢桿菌的制備種子培養(yǎng)，取兩環(huán)斜面保藏的蠟樣芽孢桿菌接種于 IOOml普通培養(yǎng)基上，于37°C通風培養(yǎng)通風18h ；再次配制20L上述普通培養(yǎng)基于30L發(fā)酵罐115°C高壓滅菌20min，冷卻后接入上述種子液100ml，于37°C通風培養(yǎng)18h制得蠟樣芽孢桿菌液。普通培養(yǎng)基制作工藝為10g蛋白胨、IOg酵母膏、2g葡萄糖，加水到1L，115°C高壓滅菌15min。④混合益生菌菌劑的制備將上述菌液按釀酒酵母3L、枯草芽孢桿菌4L、蠟樣芽孢桿菌4L混合制成混合益生菌菌劑(活細胞數> 2. 0億/ml)備用。( 二)、黃芪及楊樹花提取液的制備①稱取黃芪飲片7kg及干楊樹花3kg，粉碎并混合均勻，將其裝入提取鍋中并加入 50kg水，蒸汽煎煮lh，濾出提取液，再重復煎煮2次，棄藥渣；

②將三次提取液混合后繼續(xù)煎煮，濃縮至8L，降溫到70°C，按10%的比例加入殼聚糖溶液，攪拌均勻，靜置沉淀24h后，去沉淀，得到黃芪及楊樹花提取液待用。(三)、腸溶型微膠囊的制備①7L混合益生菌劑和3L黃芪及楊樹花提取液均勻混合于無菌攪拌罐，于不通風 30°C溫度下攪拌培養(yǎng)，直到蠟樣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌形成芽孢；②將海藻酸鈉與明膠溶液以2 1混合，終濃度為3%，加入步驟①所述混合液中， 用注射器向該混合液中注入冷卻的0. 3mol/L的氯化鈣溶液，固化lh，洗滌，4°C或常溫干燥，即得本發(fā)明所述的一種中藥提取液與益生菌混合的腸溶型微膠囊，將其25°C溫度之間避光密封保存6個月以內。以本發(fā)明一種中藥提取液與益生菌混合的腸溶型微膠囊在人工胃液中存活率檢測a.人工胃液的配制1000mL水用HCl調節(jié)至pH為1. 2。b.人工胃液耐受試驗①未包被益生菌在人工胃液中菌體存活率，取實施例1中的混合益生菌菌劑，不通風培養(yǎng)30h后，按10%的接種量接種于人工胃液中，震蕩混勻，37°C水浴孵育，每隔0. 5h 取樣進行活菌計數；②未包被益生菌和黃芪及楊樹花提取物混合液(合生元)在人工胃液中菌體存活率，取實施例1第三部分②中的混合液，按10%的接種量接種于人工胃液中，震蕩混勻， 37°C水浴孵育，每隔0. 5h取樣進行活菌計數；③黃芪及楊樹花提取物的益生菌微膠囊在人工胃液中菌體存活率，取微膠囊0. Ig 放入IOml模擬胃液中，震蕩混勻，37°C水浴孵育，每隔0. 5h取樣，置于0. 06mol/L的檸檬酸鈉溶液中震蕩處理lh(35°C，120rpm)使微膠囊充分溶解，進行活菌計數；④活菌計數采用平板計數法，記錄活菌總數。
c.人工胃液中存活率檢測結果本發(fā)明黃芪及楊樹花提取物的益生菌微膠囊在人工胃液中存活實驗結果如表一所示表一
權利要求
1.一種中藥提取液與益生菌混合的腸溶型微膠囊，其特征在于微膠囊由囊材包裹囊芯物而成；其中囊材為海藻酸鈉明膠溶液的體積比為2 1，終濃度為3%，囊芯物由50 70%混合益生菌菌劑、50 30%黃芪及楊樹花提取液混合組成。
2.如權利要求1所述的一種中藥提取液與益生菌混合的腸溶型微膠囊，其特征在于所述混合益生菌菌劑組成成分為釀酒酵母30 40%、枯草芽孢桿菌30 40%、蠟樣芽孢桿菌30 40% ；所述黃芪及楊樹花提取液，其中含有黃芪70 80%、楊樹花20 30%，以上比分為體積比。
3.如權利要求1所述一種中藥提取液與益生菌混合的腸溶型微膠囊，其特征在于混合益生菌菌劑與黃芪及楊樹花提取液混合后須于30 35°C下不通風攪拌培養(yǎng)，直到蠟樣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌形成芽孢。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種微膠囊劑制備方法，屬于生物醫(yī)藥領域，具體地說是一種中藥提取液與益生菌混合的腸溶型微膠囊。其特征在于微膠囊由囊材包裹囊芯物而成；所述囊材為海藻酸鈉∶明膠溶液的體積比為2∶1，終濃度為3％，所述囊芯物由50～70％混合益生菌菌劑、50～30％黃芪及楊樹花提取液混合組成；再將其混合培養(yǎng)生孢，與終濃度為3％的海藻酸鈉/明膠溶液一起，利用擠壓法制得本發(fā)明所述的腸溶型微膠囊。其有益效果在于改善宿主腸道微環(huán)境和抗病能力，提高疫苗接種的成功率；提高胃液、膽汁、胰酶等的耐受能力，提高進入腸道的活菌數，增強其在腸道微環(huán)境中的競爭優(yōu)勢；提高微膠囊中的活菌數，減少生產運輸過程中雜菌的污染。
文檔編號A61P3/06GK102198115SQ20111013257
公開日2011年9月28日 申請日期2011年5月19日 優(yōu)先權日2011年5月19日
發(fā)明者亓英修, 何俊慶 申請人:甘肅易源生物制藥有限公司