專利名稱：一種原花青素柔性納米脂質(zhì)體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種抗氧化藥物原花青素柔性納米脂質(zhì)體及其制備方法。
背景技術(shù)：
原花青素(簡(jiǎn)稱PC)又稱為縮合單寧，是自然界中廣泛存在的聚多酚類化合物，廣泛分布于植物界，也存在某些飲料(茶葉、啤酒)、蔬菜、水果和糧食中。原花青素是一大類多酚類化合物，易于聚合，按聚合度的大小，通常將二-四聚體稱為低聚物，將五聚體以上的稱為高聚物。近年來(lái)研究表明，原花青素具有清除自由基、抗紫外線損傷、抗病驅(qū)蟲的作用，同 時(shí)還具有保護(hù)細(xì)胞、抗突變、抗炎、抗過(guò)敏、保護(hù)心血管、抗衰老和抗腫瘤等一系列優(yōu)良的生物活性和藥理作用，是迄今為止人類從自然界中所發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)有力的天然抗氧化劑之一，廣泛應(yīng)用于食品、保健藥品及化妝品等領(lǐng)域。柔性納米脂質(zhì)體(Flexible nanoliposomes),又稱傳遞體、變形體,是藥物工作者在研究局部止痛藥和局部麻醉藥脂質(zhì)體時(shí)發(fā)現(xiàn)的一種類脂聚集體，是將表面活性劑(如膽酸鈉、去氧膽酸鈉等)加入到制備脂質(zhì)體的類脂材料中制成的具有高度自身形變、可高效地穿過(guò)比其自身小數(shù)倍的皮膚孔道的類脂質(zhì)體，具有高效滲透性、高度柔韌性和親水性。柔性納米脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)類似生物膜，是一種多功能的定向藥物載體，能使更多的藥物保留在皮膚中，減少藥物進(jìn)入血循環(huán)的量，在表皮和真皮內(nèi)形成藥物貯庫(kù)，形成一個(gè)緩釋模型，使藥物持久地對(duì)病變局部起治療作用。原花青素水溶性較好，但穩(wěn)定性較差，易氧化，對(duì)光、溫度、pH值敏感，使其在皮膚給藥及化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用受到限制，且原花青素分子量大，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，粒徑大，不利于人體組織吸收。已有研究將原花青素包封于脂質(zhì)體內(nèi)以減小其粒徑，促進(jìn)人體皮膚的吸收。但普通脂質(zhì)體存在著穩(wěn)定性差、透皮不完全、藥物易滲漏等缺點(diǎn)。如何有效保護(hù)原花青素并促進(jìn)其透皮吸收一直是個(gè)未能得到很好解決的技術(shù)問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種穩(wěn)定性好、包封率高、透皮吸收效果好的原花青素柔性納米脂質(zhì)體及其制備方法，以增強(qiáng)原花青素穩(wěn)定性差，促進(jìn)皮膚對(duì)其的吸收，提高其生物利用度。本發(fā)明根據(jù)柔性納米脂質(zhì)體的特性，選用一定比例的磷脂、表面活性劑的混合物制備包封一定比例的原花青素的柔性納米脂質(zhì)體。膜材磷脂可使用已上市的商品磷脂，包括天然磷脂、合成磷脂，表面活性劑可使用膽酸鹽類等。所述的制備柔性納米脂質(zhì)體的磷脂為大豆卵磷脂，表面活性劑為膽酸鈉，大豆卵磷脂與藥物的質(zhì)量比為5 1-50 1，磷脂與表面活性劑的質(zhì)量比為2 1-10 I。所述的制備方法采用薄膜分散法，將制備得到的柔性納米脂質(zhì)體混懸液進(jìn)行探頭式超聲，超聲時(shí)間為l_20min。原花青素柔性納米脂質(zhì)體的制備方法按以下步驟實(shí)現(xiàn)一、將大豆卵磷脂與膽酸鈉按質(zhì)量比5 1-50 I混合，用5-100ml氯仿與甲醇的混合溶劑溶解，將溶有成膜材料的溶液置于30-50°C水浴中，在0. 04-0. 09mPa、20-70rpm條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成膜；二、按大豆卵磷脂與藥物5 1-50 I比例稱取原花青素，溶解于5-100ml蒸餾水中使其完全溶解；三、將步驟二所得的藥物溶液加入步驟一制得的膜中，在30-50°C、0. 04-0. 09mPa,50-100rpm條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)水合0. 5-5h，得到原花青素柔性納米脂質(zhì)體混懸液；四、將步驟三所得的混懸液于冰水浴中探頭式超聲l_20min，所得的混懸液過(guò)0. 22 U m微孔濾膜，放置于0_5°C條件下避光保存。本發(fā)明采用薄膜分散法制備原花青素柔性納米脂質(zhì)體，把原花青素包封與脂質(zhì)體內(nèi)水相中，降低了其對(duì)外界環(huán)境的敏感度，增強(qiáng)其穩(wěn)定性；原花青素柔性納米脂質(zhì)體的包封率為 67. 13%，粒徑為(168. 3±1. 4)nm。 本發(fā)明制得的柔性納米脂質(zhì)體于透射電鏡下觀察，均為圓球狀，大小均勻。本發(fā)明對(duì)制得的柔性納米脂質(zhì)體進(jìn)行體外釋藥評(píng)析，并與普通脂質(zhì)體體外釋藥比較，佐證了柔性納米脂質(zhì)體在沒(méi)有壓力的情況下，體外釋藥與普通脂質(zhì)體相似。


圖I原花青素柔性納米脂質(zhì)體zate電位分布圖2原花青素柔性納米脂質(zhì)體的粒徑分布圖3原花青素柔性納米脂質(zhì)體釋藥前電鏡4原花青素柔性納米脂質(zhì)體釋藥后電鏡圖
圖5原花青素柔性納米脂質(zhì)體體外釋藥pH-time-Q三維圖譜圖6原花青素普通脂質(zhì)體體體外釋藥pH-time-Q三維圖譜
具體實(shí)施例方式本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉的具體實(shí)施方式
，還包括各具體實(shí)施方式
間的任意組合。
具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式原花青素柔性納米脂質(zhì)體的制備方法按以下步驟實(shí)現(xiàn)一、將0. 1000-10. OOOOg的大豆卵磷脂和0. 0100-1. OOOOg的膽酸鈉置于圓底燒瓶中，然后加入氯仿與甲醇的5-100ml的混合溶劑，超聲溶解，置30-50°C水浴中，在0. 04-0. 09mPa、20-70rpm條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成膜；二、將0. 0020-2. OOOOg的原花青素溶于5_100ml的蒸餾水中使其完全溶解；三、將藥物溶液加入制得的膜中，在30-50°C、0. 04-0. 09mPa、50-100rpm條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)水合0. 5-5h，得到原花青素柔性納米脂質(zhì)體混懸液；四、將得到的混懸液于冰水浴中探頭式超聲l_20min，功率為50w，超聲時(shí)間和間隔時(shí)間均為4s，所得的混懸液過(guò)0. 22 m微孔濾膜，放置于0-5°C條件下避光保存。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一中氯仿與甲醇的體積比為I : I。其他步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
二不同的是步驟一中將0. 9020g大豆卵磷脂和0. 1126g膽酸鈉置于圓底燒瓶中，然后加入氯仿與甲醇的60ml的混合溶劑，超聲溶解，置30-50°C水浴中，在0. 04-0. 09mPa、20-70rpm條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成膜；步驟二中將0. 0706g的原花青素溶于60ml的蒸餾水中使其完全溶解。其他步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
二相同。本實(shí)施方式所得的原花青素柔性納米脂質(zhì)體的包封率為66. 9%。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
二不同的是步驟一中將0. 03044g大豆卵磷脂和0. 0378g膽酸鈉置于圓底燒瓶中，然后加入氯仿與甲醇的20ml的混合溶劑，超聲溶解，置30-50°C水浴中，在0. 04-0. 09mPa、20-70rpm條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成膜；步驟二中將0. 0235g的原花青素溶于20ml的蒸餾水中使其完全溶解。其他步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
二相同。本實(shí)施方式所得的原花青素柔性納米脂質(zhì)體的包封率為67. 2%。
具體實(shí)施方式
五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
四不同的是步驟一中將0. 03044g大豆卵磷脂置于圓底燒瓶中，加入氯仿與甲醇的20ml的混合溶劑，超聲溶解，置37°C水浴中，在0. 06mPa、50rpm條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成膜；步驟二中將0. 0235g的原花青素溶于20ml的蒸餾水中使其完全溶解；步驟三中將藥物溶液加入制得的膜中，在37°C、0. 06mPa、90rpm條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)水合2h，得到原花青素柔性納米脂質(zhì)體混懸液；步驟四中將得到的混懸液于冰水浴中探頭式超聲5min，功率為50w，超聲時(shí)間和間隔時(shí)間均為4s，所得的混懸液過(guò)0.22 um微孔濾膜，放置于4°C條件下避光保存。本實(shí)施方式所得的原花青素柔性納米脂質(zhì)體的包封率為67. 3%。
具體實(shí)施方式
六原花青素柔性納米脂質(zhì)體和普通脂質(zhì)體體外釋藥比較分別取2ml柔性納米脂質(zhì)體和普通脂質(zhì)體置于已處理的透析袋中，再將透析袋置于棕色具塞三角瓶中，分別加入IOmlpH值為5. 0-8. 0的釋放介質(zhì)，置空氣浴振蕩器內(nèi)，溫度為30_40°C，振蕩頻率為100-200次/min，分別在0-24h內(nèi)取8個(gè)時(shí)間點(diǎn)取樣，更換相應(yīng)的新鮮介質(zhì)，計(jì)算累計(jì)釋藥百分率，與釋放時(shí)間分別按零級(jí)、單指數(shù)模型、Weibull分布、對(duì)數(shù)正態(tài)分布及Higuchi分布模型擬合。
具體實(shí)施方式
七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
六不同的是選擇pH = 6. 5的釋放介質(zhì)。其他步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
六相同。結(jié)果見表I。pH = 6. 5體外釋藥的方程擬合(Q代表累計(jì)藥物釋放量)
擬合模型_柔性納米脂質(zhì)體_普通脂質(zhì)體_
零級(jí)模型Q=3. 1539t+22.2418 _Q=2.4981t+26.6055 _
權(quán)利要求
1.一種原花青素柔性納米脂質(zhì)體，其特征在于原花青素柔性納米脂質(zhì)體由原花青素、磷脂、表面活性剤、氯仿與甲醇的混合溶劑、分散介質(zhì)制成。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種原花青素柔性納米脂質(zhì)體，其特征在于磷脂為大豆卵磷月旨，表面活性劑為膽酸鈉，卵磷脂與藥物的質(zhì)量比為5 1-50 1，磷脂與表面活性劑的質(zhì)量比為2 1-10 1，氯仿與甲醇的體積比為I : 1，混合溶劑體積為5-100ml，分散介質(zhì)為水，體積為5-100ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求I和2所述的ー種原花青素柔性納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于采用薄膜分散法制備。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2和3所述的ー種原花青素柔性納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于原花青素柔性納米脂質(zhì)體按以下步驟制備 1)將卵磷脂和膽酸鈉溶于5-100ml氯仿和甲醇的混合溶劑中，在30-50°C、0.04-0. 09mPa>20-70rpm條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成膜； 2)將原花青素溶于5-100ml蒸餾水中，超聲使其完全溶解； 3)將步驟2)所得的溶液加入步驟I)制得的膜中，在30-50で、0.04-0. 09mPa、50-100rpm條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)水合0. 5_5h,得到原花青素柔性納米脂質(zhì)體混懸液； 4)將步驟3)所得的混懸液于冰水浴中探頭式超聲l_20min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4所述的ー種原花青素柔性納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于放置0-5°C條件下避光保存。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種原花青素柔性納米脂質(zhì)體及其制備方法。它解決了原花青素體內(nèi)穩(wěn)定性差的問(wèn)題，優(yōu)化了其柔性納米脂質(zhì)體的處方和制備工藝。本發(fā)明由原花青素與磷脂、表面活性劑等輔料制備而成的。膜材磷脂可使用已上市的商品磷脂，包括天然磷脂、合成磷脂，表面活性劑可使用膽酸鹽類等。磷脂與藥物的質(zhì)量比為5∶1-50∶1，磷脂與表面活性劑的質(zhì)量比為2∶1-10∶1，探頭超聲時(shí)間為1-20min。制備方法采用薄膜分散法。本發(fā)明制備的原花青素柔性納米脂質(zhì)體粒徑較小，穩(wěn)定性好，制備工藝簡(jiǎn)單、穩(wěn)定可行，具有良好的透皮作用。
文檔編號(hào)A61P9/00GK102793665SQ201110137448
公開日2012年11月28日 申請(qǐng)日期2011年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月26日
發(fā)明者熊維政, 張軍斌, 武惠斌, 黃璐琦, 陳燕軍, 熊欣, 袁軍林, 頊佳音 申請(qǐng)人:河南羚銳制藥股份有限公司北京藥物研究院