專利名稱：一種齊墩果酸皂苷類成分的制備方法及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥、獸藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種齊墩果酸皂苷類成分3-0-α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β-D-卩比喃葡萄糖-(1 — 4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷的制備方法及其該成分抗腫瘤的用途，如用于肺癌、肝癌、胃癌、結(jié)腸癌、膠質(zhì)瘤、乳腺癌、宮頸癌、 白血病、淋巴癌等。本發(fā)明還涉及來自白頭翁(Pulsatilla chinensis (Bunge) Regel)根莖的含有該化合物的提取物作為抗上述腫瘤的用途。
背景技術(shù)：
白頭翁藥材取自毛茛科白頭翁屬植物白頭翁的干燥根，味苦，性寒。歸胃、大腸經(jīng)， 具清熱解毒，涼血止痢之功。用于熱毒血痢，陰癢帶下，阿米巴痢。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，白頭翁中含原白頭翁素(Protoanemonin)、白頭翁素(Anemonin)、白頭翁靈(Okinalin，C32H4602)、白頭翁英(0kinalein，C4H602)等，近年來國內(nèi)外學(xué)者從白頭翁屬植物中分離鑒定出幾十種五環(huán)三萜皂苷成分，這些皂苷主要為齊墩果烷型和羽扇豆烷型兩種。白頭翁屬植物具有廣泛的藥理及生物活性，主要表現(xiàn)在抗腫瘤、抗炎抗菌、抗病毒、細(xì)胞凋亡、抗生物酶、殺蟲、殺精等作用。經(jīng)過反復(fù)研究發(fā)現(xiàn)，白頭翁的水提液、醇提液及其堿水解產(chǎn)物均具有抗腫瘤活性， 尤其是堿水解產(chǎn)物，活性更強(qiáng)，經(jīng)過進(jìn)一步成分分析研究，發(fā)現(xiàn)其中均含有一系列的齊墩果酸皂苷類成分。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明利用現(xiàn)代分離技術(shù)及鑒定手段對白頭翁進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分分離，從中分離得到一種齊墩果酸皂苷類成分3-0-α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α -L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷，通過體外抗腫瘤活性篩選研究，發(fā)現(xiàn)該化合物具有顯著的抗腫瘤作用，然而，該成分在白頭翁藥材中的含量不高；同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)， 白頭翁的水提物和醇提物均具有一定的抗腫瘤作用，而其堿水解產(chǎn)物的活性明顯強(qiáng)于水解前，成分分析發(fā)現(xiàn)，堿水解后產(chǎn)物中3-0-α-L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β-D-吡喃葡萄糖-(1 —4)]-a_L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷的含量較水解前大大提高。白頭翁藥材資源豐富，水解產(chǎn)物活性明確，制備工藝簡單易行，適合工業(yè)化大量生產(chǎn)，可作為制備抗腫瘤藥物，具有廣闊的市場前景和開發(fā)價(jià)值。本發(fā)明的技術(shù)方案如下
1、3-0-α -L-吡喃鼠李糖- α — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖_(1 — 4)]-α -L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。2、含有3-0-α-L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β _D_吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α-L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷的白頭翁提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。3,3-0-α-L-吡喃鼠李糖_(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖_(1 — 4)]-α -L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷在制備抗肺癌、肝癌、胃癌、結(jié)腸癌、膠質(zhì)瘤、乳腺癌、宮頸癌、白血病、淋巴癌藥物中的應(yīng)用。4、含有3-0-α-L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β _D_吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α-L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷的白頭翁提取物在制備抗肺癌、肝癌、胃癌、結(jié)腸癌、膠質(zhì)瘤、乳腺癌、宮頸癌、白血病、淋巴癌藥物中的應(yīng)用。5,3-0-α -L-吡喃鼠李糖_(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖_(1 — 4)]-α -L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷的制備方法，包括以下步驟
第一步，將白頭翁藥材粉碎成粗粉，用水或0. 1-95%乙醇浸泡0. 5-池，6-12倍量加熱回流提取2-3次，每次l-3h，過濾，合并濾液。上述濾液于50-70°C減壓濃縮至0. 5-1. Og生藥材/mL，無醇味，0-4°C冷藏過夜，析膠，濾過，即得白頭翁提取物。第二步，白頭翁提取物水溶液中加入氫氧化鈉溶液調(diào)到PH10-13，加熱沸騰4-10 小時(shí)，每30-60分鐘測PH，保持在PH10-13，放冷，加鹽酸溶液，調(diào)PH 3-7,離心，去沉淀，即得白頭翁提取物水解液
第三步，白頭翁提取物水解液，經(jīng)過DlOl或AB-8或ADS-17大孔樹脂吸附，依次用水、 30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脫，收集50-80%乙醇洗脫部分，即得BTW58組分。經(jīng)抗腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)，證明BTW58組分為白頭翁抗腫瘤有效部位。第四步、白頭翁抗腫瘤有效部位經(jīng)ODS反相硅膠柱，用甲醇和水(6:4-9:1)的混合液進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫液依次有五組，其體積配比分別為
第一組甲醇6份水4份； 第二組甲醇7份水3份； 第三組甲醇8份水2份； 第四組甲醇85份水15份； 第五組甲醇9份水1份；
第五步、收集甲醇85份水15份的洗脫部分，經(jīng)kphadex LH-20柱甲醇-水7 :3洗脫， 得到化合物I，經(jīng)對照品比較及LC/MS/MS測試，該化合物為3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷。本發(fā)明所述的齊墩果酸皂苷類成分是單一成分的化合物，其化學(xué)名稱為 3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷。


圖1是3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷的分子結(jié)構(gòu)式； 圖2是BTW58組分的HPLC分析圖3是3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷的核磁共振氫譜圖4是3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷的核磁共振碳譜圖； 具體實(shí)施例
3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷的制備方法為實(shí)施案例1
第一步，將白頭翁藥材粉碎成粗粉，用水浸泡0. 5-2h,6-12倍量加熱回流提取2-3次， 每次l_3h，過濾，合并濾液。上述濾液于50-70°C減壓濃縮至0. 5-1. Og生藥材/mL，0_4°C冷藏過夜，析膠，濾過，即得白頭翁提取物。第二步，白頭翁提取物水溶液中加入氫氧化鈉溶液調(diào)到PH10-13，加熱沸騰4-10 小時(shí)，每30-60分鐘測PH，保持在PH10-13，放冷，加鹽酸溶液，調(diào)PH 3-7,離心，去沉淀，即得白頭翁提取物水解液
第三步，白頭翁提取物水解液，經(jīng)過DlOl或AB-8或ADS-17大孔樹脂吸附，依次用水、 30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脫，收集50-80%乙醇洗脫部分，即得BTW58組分。經(jīng)抗腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)，證明BTW58組分為白頭翁抗腫瘤有效部位。第四步、白頭翁抗腫瘤有效部位經(jīng)ODS反相硅膠柱，用甲醇和水(64-9:1)的混合液進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫液依次有五組，其體積配比分別為
第一組甲醇6份水4份； 第二組甲醇7份水3份； 第三組甲醇8份水2份； 第四組甲醇85份水15份； 第五組甲醇9份水1份；
第五步、收集甲醇85份水15份的洗脫部分，經(jīng)kphadex LH-20柱甲醇-水7 :3洗脫， 得到化合物I，經(jīng)對照品比較及LC/MS/MS測試，該化合物為3-0-α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷。實(shí)施案例2
第一步，將白頭翁藥材粉碎成粗粉，用10%乙醇浸泡0. 5-2h,6-12倍量加熱回流提取 2-3次，每次l-3h，過濾，合并濾液。上述濾液于50-70°C減壓濃縮至0. 5-1. Og生藥材/mL， 無醇味，0-4°C冷藏過夜，析膠，濾過，即得白頭翁提取物。第二步，白頭翁提取物水溶液中加入氫氧化鈉溶液調(diào)到PH10-13，加熱沸騰4-10 小時(shí)，每30-60分鐘測PH，保持在PH10-13，放冷，加鹽酸溶液，調(diào)PH 3-7,離心，去沉淀，即得白頭翁提取物水解液
第三步，白頭翁提取物水解液，經(jīng)過DlOl或AB-8或ADS-17大孔樹脂吸附，依次用水、 30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脫，收集50-80%乙醇洗脫部分，即得BTW58組分。經(jīng)抗腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)，證明BTW58組分為白頭翁抗腫瘤有效部位。第四步、白頭翁抗腫瘤有效部位經(jīng)ODS反相硅膠柱，用甲醇和水(6:4-9:1)的混合液進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫液依次有五組，其體積配比分別為
第一組甲醇6份水4份； 第二組甲醇7份水3份； 第三組甲醇8份水2份； 第四組甲醇85份水15份； 第五組甲醇9份水1份；
第五步、收集甲醇85份水15份的洗脫部分，經(jīng)kphadex LH-20柱甲醇-水7 :3洗脫， 得到化合物I，經(jīng)對照品比較及LC/MS/MS測試，該化合物為3-0-α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2)[β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷。實(shí)施案例3
第一步，將白頭翁藥材粉碎成粗粉，用20%乙醇浸泡0. 5-2h,6-12倍量加熱回流提取 2-3次，每次l-3h，過濾，合并濾液。上述濾液于50-70°C減壓濃縮至0. 5-1. Og生藥材/mL， 無醇味，0-4°C冷藏過夜，析膠，濾過，即得白頭翁提取物。第二步，白頭翁提取物水溶液中加入氫氧化鈉溶液調(diào)到PH10-13，加熱沸騰4-10 小時(shí)，每30-60分鐘測PH，保持在PH10-13，放冷，加鹽酸溶液，調(diào)PH 3-7,離心，去沉淀，即得白頭翁提取物水解液
第三步，白頭翁提取物水解液，經(jīng)過DlOl或AB-8或ADS-17大孔樹脂吸附，依次用水、 30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脫，收集50-80%乙醇洗脫部分，即得BTW58組分。經(jīng)抗腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)，證明BTW58組分為白頭翁抗腫瘤有效部位。 第四步、白頭翁抗腫瘤有效部位經(jīng)ODS反相硅膠柱，用甲醇和水(64-9:1)的混合液進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫液依次有五組，其體積配比分別為第一組甲醇6份水4份； 第二組甲醇7份水3份； 第三組甲醇8份水2份； 第四組甲醇85份水15份； 第五組甲醇9份水1份；
第五步、收集甲醇85份水15份的洗脫部分，經(jīng)kphadex LH-20柱甲醇-水7 :3洗脫， 得到化合物I，經(jīng)對照品比較及LC/MS/MS測試，該化合物為3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷。實(shí)施例4、
第一步，將白頭翁藥材粉碎成粗粉，用40%乙醇浸泡0. 5-2h,6-12倍量加熱回流提取 2-3次，每次l-3h，過濾，合并濾液。上述濾液于50-70°C減壓濃縮至0. 5-1. Og生藥材/mL， 無醇味，0-4°C冷藏過夜，析膠，濾過，即得白頭翁提取物。第二步，白頭翁提取物水溶液中加入氫氧化鈉溶液調(diào)到PH10-13，加熱沸騰4-10 小時(shí)，每30-60分鐘測PH，保持在PH10-13，放冷，加鹽酸溶液，調(diào)PH 3-7,離心，去沉淀，即得白頭翁提取物水解液
第三步，白頭翁提取物水解液，經(jīng)過DlOl或AB-8或ADS-17大孔樹脂吸附，依次用水、 30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脫，收集50-80%乙醇洗脫部分，即得BTW58組分。經(jīng)抗腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)，證明BTW58組分為白頭翁抗腫瘤有效部位。第四步、白頭翁抗腫瘤有效部位經(jīng)ODS反相硅膠柱，用甲醇和水(64-9:1)的混合液進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫液依次有五組，其體積配比分別為
第一組甲醇6份水4份； 第二組甲醇7份水3份； 第三組甲醇8份水2份； 第四組甲醇85份水15份； 第五組甲醇9份水1份；
第五步、收集甲醇85份水15份的洗脫部分，經(jīng)kphadex LH-20柱甲醇-水7 :3洗脫，得到化合物I，經(jīng)對照品比較及LC/MS/MS測試，該化合物為3-0-α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷。實(shí)施例5、
第一步，將白頭翁藥材粉碎成粗粉，用60%乙醇浸泡0. 5-2h,6-12倍量加熱回流提取 2-3次，每次l-3h，過濾，合并濾液。上述濾液于50-70°C減壓濃縮至0. 5-1. Og生藥材/mL， 無醇味，0-4°C冷藏過夜，析膠，濾過，即得白頭翁提取物。第二步，白頭翁提取物水溶液中加入氫氧化鈉溶液調(diào)到PH10-13，加熱沸騰4-10 小時(shí)，每30-60分鐘測PH，保持在PH10-13，放冷，加鹽酸溶液，調(diào)PH 3-7,離心，去沉淀，即得白頭翁提取物水解液
第三步，白頭翁提取物水解液，經(jīng)過DlOl或AB-8或ADS-17大孔樹脂吸附，依次用水、 30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脫，收集50-80%乙醇洗脫部分，即得BTW58組分。經(jīng)抗腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)，證明BTW58組分為白頭翁抗腫瘤有效部位。第四步、白頭翁抗腫瘤有效部位經(jīng)ODS反相硅膠柱，用甲醇和水(6:4-9:1)的混合液進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫液依次有五組，其體積配比分別為
第一組甲醇6份水4份； 第二組甲醇7份水3份； 第三組甲醇8份水2份； 第四組甲醇85份水15份； 第五組甲醇9份水1份；
第五步、收集甲醇85份水15份的洗脫部分，經(jīng)kphadex LH-20柱甲醇-水7 :3洗脫， 得到化合物I，經(jīng)對照品比較及LC/MS/MS測試，該化合物為3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷。實(shí)施例6、
第一步，將白頭翁藥材粉碎成粗粉，用70%乙醇浸泡0. 5-2h,6-12倍量加熱回流提取 2-3次，每次l-3h，過濾，合并濾液。上述濾液于50-70°C減壓濃縮至0. 5-1. Og生藥材/mL， 無醇味，0-4°C冷藏過夜，析膠，濾過，即得白頭翁提取物。第二步，白頭翁提取物水溶液中加入氫氧化鈉溶液調(diào)到PH10-13，加熱沸騰4-10 小時(shí)，每30-60分鐘測PH，保持在PH10-13，放冷，加鹽酸溶液，調(diào)PH 3-7,離心，去沉淀，即得白頭翁提取物水解液
第三步，白頭翁提取物水解液，經(jīng)過DlOl或AB-8或ADS-17大孔樹脂吸附，依次用水、 30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脫，收集50-80%乙醇洗脫部分，即得BTW58組分。經(jīng)抗腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)，證明BTW58組分為白頭翁抗腫瘤有效部位。第四步、白頭翁抗腫瘤有效部位經(jīng)ODS反相硅膠柱，用甲醇和水(64-9:1)的混合液進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫液依次有五組，其體積配比分別為
第一組甲醇6份水4份； 第二組甲醇7份水3份； 第三組甲醇8份水2份； 第四組甲醇85份水15份； 第五組甲醇9份水1份；第五步、收集甲醇85份水15份的洗脫部分，經(jīng)kphadex LH-20柱甲醇-水7 :3洗脫， 得到化合物I，經(jīng)對照品比較及LC/MS/MS測試，該化合物為3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷。實(shí)施例7、
第一步，將白頭翁藥材粉碎成粗粉，用95%乙醇浸泡0. 5-2h,6-12倍量加熱回流提取 2-3次，每次l-3h，過濾，合并濾液。上述濾液于50-70°C減壓濃縮至0. 5-1. Og生藥材/mL， 無醇味，0-4°C冷藏過夜，析膠，濾過，即得白頭翁提取物。第二步，白頭翁提取物水溶液中加入氫氧化鈉溶液調(diào)到PH10-13，加熱沸騰4-10 小時(shí)，每30-60分鐘測PH，保持在PH10-13，放冷，加鹽酸溶液，調(diào)PH 3-7,離心，去沉淀，即得白頭翁提取物水解液
第三步，白頭翁提取物水解液，經(jīng)過DlOl或AB-8或ADS-17大孔樹脂吸附，依次用水、 30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脫，收集50-80%乙醇洗脫部分，即得BTW58組分。經(jīng)抗腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)，證明BTW58組分為白頭翁抗腫瘤有效部位。第四步、白頭翁抗腫瘤有效部位經(jīng)ODS反相硅膠柱，用甲醇和水(6:4-9:1)的混合液進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫液依次有五組，其體積配比分別為
第一組甲醇6份水4份； 第二組甲醇7份水3份； 第三組甲醇8份水2份； 第四組甲醇85份水15份； 第五組甲醇9份水1份；
第五步、收集甲醇85份水15份的洗脫部分，經(jīng)kphadex LH-20柱甲醇-水7 :3洗脫， 得到化合物I，經(jīng)對照品比較及LC/MS/MS測試，該化合物為3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷。
研究發(fā)現(xiàn)，在白頭翁的乙醇提取物中，含有3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]_α -L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷，但含量明顯低于經(jīng)堿水解后的 BTW58組分。BTW58 組分 HPLC 分析
色譜柱，未加預(yù)柱，壓力偏大=Kromasil (C18, 250*4. 6mm，5um);流速:lml/min ；柱溫 350C ；進(jìn)樣量20ul ；洗脫系統(tǒng)甲醇-水系統(tǒng)
ELSD :SHIMADZU ELSD-LT II ；柱溫40°C ；Press :350Kpa
梯度條件時(shí)間(min)甲醇(％)
0.0165
1070
3070
50100
55100 55.01 STOP
化合物I結(jié)構(gòu)解析白色無定形粉末，硫酸乙醇顯紫紅色斑點(diǎn)，醋酐-濃硫酸反應(yīng)陽性，Molish反應(yīng)陽性， 提示該化合物可能為皂苷類化合物。化合物I用2N TFA完全酸水解得到齊墩果酸皂苷元和單糖，糖經(jīng)衍生化后進(jìn)行GC分析，檢測到L-阿拉伯糖、L-鼠李糖和D-葡萄糖的存在。13C NMR譜共顯示47個碳信號，包括30個苷元碳信號。其中苷元碳信號與齊墩果酸苷元基本一致。3位碳向低場位移至δ 88. 9，觀位羰基碳信號在δ 180. 4，說明該化合物的糖是連在苷元的3位上。13C NMR譜中出現(xiàn)了 3個糖信號，結(jié)合NMR數(shù)據(jù)和水解衍生化后的GC分析結(jié)果，證明其分別為L-阿拉伯糖、L-鼠李糖和D-葡萄糖。另外，13C NMR譜中顯示，在δ 106. 5，105. 1和101. 9位置出現(xiàn)3個糖對應(yīng)的端基碳信號。經(jīng)過上述分析，并禾口公開的文獻(xiàn)[Opinya A. Ekabo, Norman R. Farnsworth, Henderson Τ. , et al. J Nat Prod, 1996，59:431-435]中的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，證明化合物I的結(jié)構(gòu)為3_0_ α -L-吡喃鼠李糖-(1 —2)[ β-D-吡喃葡萄糖-(1— 4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷。13C NMR 譜數(shù)據(jù)歸屬見表1。表1 化合物I的碳譜數(shù)據(jù)(Pyridine-(I6)
權(quán)利要求
1.3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
2.含有3-0-α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷的白頭翁提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
3.3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷在制備抗肺癌、肝癌、胃癌、結(jié)腸癌、膠質(zhì)瘤、乳腺癌、宮頸癌、白血病、淋巴癌藥物中的應(yīng)用。
4.含有3-0-α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷的白頭翁提取物在制備抗肺癌、肝癌、胃癌、結(jié)腸癌、膠質(zhì)瘤、乳腺癌、 宮頸癌、白血病、淋巴癌藥物中的應(yīng)用。
5.3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷的制備方法，其特征在于包括以下步驟第一步，將白頭翁藥材粉碎成粗粉，用水或0. 1-95%乙醇浸泡0. 5-池，6-12倍量加熱回流提取2-3次，每次l_3h，過濾，合并濾液；上述濾液于50-70°C減壓濃縮至0. 5-1. Og生藥材/mL，無醇味，0-4°C冷藏過夜，析膠，濾過，即得白頭翁提取物；第二步，白頭翁提取物水溶液中加入氫氧化鈉溶液調(diào)到PH10-13，加熱沸騰4-10小時(shí)， 每30-60分鐘測PH，保持在PH10-13，放冷，加鹽酸溶液，調(diào)PH 3_7，離心，去沉淀，即得白頭翁提取物水解液；第三步，白頭翁提取物水解液，經(jīng)過DlOl或AB-8或ADS-17大孔樹脂吸附，依次用水、 30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脫，收集50-80%乙醇洗脫部分，即得BTW58組分；經(jīng)抗腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)，證明BTW58組分為白頭翁抗腫瘤有效部位；第四步、白頭翁抗腫瘤有效部位經(jīng)ODS反相硅膠柱，用甲醇和水(3 7-10 0)的混合液進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫液依次有五組，其體積配比分別為第一組甲醇5份水5份； 第二組甲醇6份水4份； 第三組甲醇7份水3份； 第四組甲醇8份水2份； 第五組甲醇9份水1份；第五步、收集甲醇8份冰2份的洗脫部分，經(jīng)kphadex LH-20柱甲醇-水7 3洗脫， 得到化合物I，經(jīng)對照品比較及LC/MS/MS測試，該化合物為3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α -L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷。
6.根據(jù)權(quán)利要求2的用途，其中通過用乙醇水溶液提取白頭翁，獲得的含3-0-α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷的白頭翁提取物，以及通過用乙醇水溶液提取白頭翁，并且通過堿水解反應(yīng)獲得而獲得的含 3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷的白頭翁提取物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種齊墩果酸皂苷類成分3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)[β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖齊墩果酸皂苷的制備方法及其該成分抗腫瘤的用途。本發(fā)明還涉及來自白頭翁(Pulsatillachinensis(Bunge)Regel)根莖的含有該化合物的提取物作為抗上述腫瘤的用途。上述腫瘤包括肺癌、肝癌、胃癌、結(jié)腸癌、膠質(zhì)瘤、乳腺癌、宮頸癌、白血病、淋巴癌等。
文檔編號A61K31/704GK102247393SQ201110142210
公開日2011年11月23日 申請日期2011年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月30日
發(fā)明者馮育林, 劉艷麗, 李俊, 楊世林, 簡暉, 羅曉健, 羅穎穎, 許瓊明, 陳蘭英 申請人:江西本草天工科技有限責(zé)任公司