專利名稱：一種具有增加骨密度、改善骨質(zhì)疏松和關(guān)節(jié)疼痛的中藥制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥制劑，特別是具有改善骨質(zhì)疏松、增加骨密度功能，減輕關(guān)節(jié)疼痛的中藥制劑，該中藥制劑含有淫羊藿提取物、丹參提取物、生物碳酸鈣(牡蠣鈣)、水解膠原蛋白、D-氨基葡萄糖鹽酸鹽和硫酸軟骨素活性成分。
背景技術(shù)：
隨著進(jìn)入人口老齡化的社會，老齡人口不斷增加，骨質(zhì)疏松癥已嚴(yán)重威脅著中老年人的健康，骨質(zhì)疏松癥有“無聲殺手”之稱，WHO統(tǒng)計表明目前世界范圍內(nèi)骨質(zhì)疏松癥患者總數(shù)超過2億人口，每年花在治療和住院上的費(fèi)用高達(dá)250億美元。中國健康促進(jìn)基金會發(fā)布的《骨質(zhì)疏松癥中國白皮書2008》顯示，調(diào)查估算2006年全國50歲以上的人群中約有6944萬人患有骨質(zhì)疏松癥，有資料預(yù)計，從現(xiàn)在算起未來的50年中，有75%的髖骨骨折會出現(xiàn)在發(fā)展中國家，這與骨質(zhì)疏松密切相關(guān)。骨質(zhì)疏松癥好發(fā)于絕經(jīng)后婦女和老年男性， 現(xiàn)在還有年輕化趨勢。因此及早預(yù)防、及早治療是緩解這一現(xiàn)狀的關(guān)鍵，現(xiàn)在有關(guān)補(bǔ)鈣、治療骨質(zhì)疏松的各種藥品和功能食品層出不窮，但真正的療效不容樂觀，市場需要有標(biāo)本兼治的產(chǎn)品。中國專利CN101023982A公開了一種治療骨質(zhì)疏松癥的藥物組合物，該組合物含有淫羊藿提取物和丹參提取物；在其他有關(guān)治療骨質(zhì)疏松的藥物中也多采用淫羊藿提取物和丹參提取物。淫羊藿為中國傳統(tǒng)的補(bǔ)益中藥，歷代本草均有記載，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，又名仙靈脾、三枝九葉草等，為小檗科淫羊藿屬植物。《中國藥典》2005年版一部記載，淫羊藿性溫，味辛、甘。歸肝、腎經(jīng)。具有補(bǔ)腎陽，強(qiáng)筋骨，祛風(fēng)濕的作用。用量為3 9g。淫羊藿多糖、淫羊藿苷、淫羊藿甙和黃酮類為其主要成分?，F(xiàn)代研究表明，淫羊藿的作用廣泛，對心血管系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、促進(jìn)蛋白質(zhì)合成、抗炎、抗骨質(zhì)疏松、抗衰老、抗腫瘤等均有作用。中醫(yī)理論認(rèn)為，腎主骨生髓藏精，腎精腎氣充實(shí)，則骨髓生化有源，骨骼堅固，強(qiáng)健有力；若腎氣不足，腎精虧虛，則骨髓乏源，骨骼失養(yǎng)而導(dǎo)致骨質(zhì)疏松。研究表明，淫羊藿不但具有補(bǔ)陽藥所具有的激素樣作用，而且可對破骨細(xì)胞有直接抑制作用，同時又可促進(jìn)骨細(xì)胞的生長，使鈣化骨形成增加，緩解骨痛癥狀。說明淫羊藿具有良好防治骨質(zhì)疏松的作用。殷曉雪等觀察淫羊藿苷對人成骨細(xì)胞增殖和分化的影響，結(jié)果表明淫羊藿苷具有促進(jìn)人成骨細(xì)胞增殖和分化的作用，這一作用可能和其升高人成骨細(xì)胞 BMP-2mRNA的表達(dá)有關(guān)。張?zhí)焖{(lán)等探討淫羊藿黃酮苷及其代謝產(chǎn)物對骨形成和骨吸收的調(diào)控作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)淫羊藿黃酮苷及其代謝產(chǎn)物對大鼠成骨細(xì)胞的增生有明顯的刺激作用， 并能夠促進(jìn)成骨細(xì)胞合成分泌堿性磷酸酶，但對成骨細(xì)胞晚期分化指標(biāo)骨鈣素?zé)o顯著作用。張秀珍等觀察淫羊藿總黃酮(HEF)對體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞以及破骨細(xì)胞功能的影響，結(jié)果表明HEF可以通過影響成骨細(xì)胞增殖、分化、礦化促進(jìn)骨形成；而在體外減少破骨細(xì)胞數(shù)目，減弱破骨細(xì)胞吸收功能。
丹參為唇形科植物丹參的干燥根及根莖，又名血生根、赤參、血參、紅根，是著名的傳統(tǒng)中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，歷代本草均有記載?！吨袊幍洹?005年版一部記載，丹參性微寒，味苦。歸心、肝經(jīng)。具有祛瘀止痛，活血通經(jīng)，清心除煩等功能。用量為 9 15g。丹參含有丹參總酮、丹參酮IIA、丹參酮IIA黃酸鈉、丹參酮I、隱丹參酮、丹酚酸 B、丹參素、原兒茶醛等成分。現(xiàn)代藥理學(xué)研究，丹參具有改善血液流變性，改善血流動力學(xué)， 改善微循環(huán)防止血栓形成，抗心肌缺血，抗腦缺血損傷，止痛，清心除煩，抗菌、抗炎，抗肝損傷，抗氧化，抗腫瘤，調(diào)節(jié)免疫等多種功能，近年來又發(fā)現(xiàn)丹參可促進(jìn)骨愈合，預(yù)防股骨頭壞死，有效降低絕經(jīng)期婦女骨質(zhì)疏松血中骨吸收生物指標(biāo)，提示丹參具有抗骨質(zhì)疏松的作用， 其作用機(jī)制主要通過抑制骨吸收，促進(jìn)成骨細(xì)胞功能，促進(jìn)骨基質(zhì)合成。劉國良等了解丹參對SD大鼠成骨細(xì)胞增殖和分化的影響，結(jié)果提示丹參具有促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖及分化的作用。本發(fā)明人在多年研究的基礎(chǔ)上，意外發(fā)現(xiàn)D-氨基葡萄糖鹽酸鹽能夠進(jìn)一步促進(jìn)丹參提取物和淫羊藿提取物促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖、分化的作用，這一發(fā)現(xiàn)促成了本發(fā)明的完成。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種能顯著促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖、分化的中藥組合物，該組合物含有D-氨基葡萄糖鹽酸鹽，丹參提取物和淫羊藿提取物。本發(fā)明的另一目的是在促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖、分化的同時，補(bǔ)充鈣源和膠原蛋白等， 以全方位的促進(jìn)骨質(zhì)合成。丹參的有效成分復(fù)雜，總有效成分的提取率較低，主要的提取方法有水提法，醇提法、超聲法、C02超臨界萃取法和梯度滲漉法，本發(fā)明丹參提取方法選用水提法。用于本發(fā)明的丹參提取物，其中丹參總黃酮含量彡2. 0%，重金屬彡2. Oppm，農(nóng)藥殘留彡1. Oppm。淫羊藿的提取方法為水提法，用于本發(fā)明的淫羊藿提取物，其中淫羊藿苷含量彡3. 3%，重金屬< 2. Oppm，農(nóng)藥殘留< 1. Oppm。D-氨基葡萄糖鹽酸鹽D-氨基葡萄糖鹽酸鹽(簡稱D-GAH)，又稱氨基葡萄糖鹽酸鹽，化學(xué)名為2-氨基-2-脫氧-D-葡萄糖鹽酸鹽，其結(jié)構(gòu)為D-葡萄糖分子中C2-羥基被氨基所取代，因氨基顯堿性，與鹽酸可成鹽。本發(fā)明的D-氨基葡萄糖鹽酸鹽、丹參提取物和淫羊藿提取物的用量比例為 1-5 1-3 1-3，優(yōu)選 2-5 1 1，進(jìn)一步優(yōu)選 3 1 1。本發(fā)明的中藥組合物還可以進(jìn)一步含有鈣、水解膠原蛋白以及硫酸軟骨素，其中鈣是指醋酸鈣、碳酸鈣、酪蛋白鈣、氯化鈣、檸檬酸鈣、檸檬酸蘋果酸鈣、葡萄糖酸鈣、乳酸鈣、蘋果酸鈣、磷酸氫鈣、磷酸二氫鈣、磷酸鈣、硫酸鈣、抗壞血酸鈣、甘油磷酸鈣，優(yōu)選碳酸鈣，進(jìn)一步優(yōu)選生物碳酸鈣如牡蠣鈣。本發(fā)明的中藥組合物根據(jù)需要可制備為藥學(xué)上所見的各種劑型，如片劑、膠囊、顆粒劑或滴劑等，并可添加所需的制劑輔料。本發(fā)明的中藥組合物具有補(bǔ)腎益肝、強(qiáng)筋壯骨、活血通絡(luò)之功效，促進(jìn)骨骼的再生和修復(fù)的基礎(chǔ)上還能促進(jìn)機(jī)體的免疫力調(diào)節(jié)能力。用于治療骨質(zhì)疏松，改善骨痛及關(guān)節(jié)疼痛，既可制備為藥品也可制備為保健品。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例 1 分煎法制備淫羊藿和丹參提取物淫羊藿提取物的制備取淫羊藿2000g，加入8倍藥材重量的水提取2次，分別提取2. 0和1. 5小時，濾過，合并提取液，減壓濃縮成Ig生藥/mL的水溶液，減壓干燥，粉碎， 過100目篩，即得棕黃色淫羊藿提取物，重量66g，淫羊藿苷含量為5. 0%。丹參提取物的制備取丹參藥材粉碎成粗粉2000g，加入8倍藥材重量的水提取3 次，分別提取2. 0、1. 5、1. 5小時，濾過，合并提取液，減壓濃縮成Ig生藥/mL的水溶液，減壓干燥，粉碎，過100目篩，即得棕黃色淫羊藿苷成品，重量100g，即得棕紅色丹參提取物 100g，含丹參總酮為2.5%。實(shí)施例2片劑
組分名稱配方量(g)
D-氨基葡萄糖鹽酸鹽180. 0
丹參提取物60. 0
淫羊藿提取物60. 0
生物碳酸鈣230. 0
硫酸軟骨素160. 0
水解膠原蛋白80.0
微晶纖維素145. 0
聚維酮K3052. 0
羧甲基淀粉鈉30.0
硬脂酸鎂3. 0以上各原輔料共制成1000片(1. Og/片)實(shí)施例3人成骨細(xì)胞的培養(yǎng)采取人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞的方法。人骨髓取自無代謝性骨病的脊柱手術(shù)患者，術(shù)前經(jīng)患者同意，于術(shù)中取髂骨塊植骨時，順便以骨穿針于傷口處抽吸骨髓約4ml，離心后接種于75cm培養(yǎng)瓶，5d后半量換液，待細(xì)胞完全貼壁融合后，胰酶消化， 傳代，換誘導(dǎo)培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基加入地塞米松、抗壞血酸及β -甘油磷酸鈉，終濃度分別為10-8Π1ΟΓ1，50ug. ml—1，IOmmol. L—1.取此法定向誘導(dǎo)的第3，4代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)施例4中藥組合物對成骨細(xì)胞增殖的影響將淫羊藿提取物，丹參提取物，D-氨基葡萄糖鹽酸鹽，溶解在微量的DMSO中，用誘導(dǎo)培養(yǎng)液配制為所需濃度，其中淫羊藿提取物濃度為20ug/mL，設(shè)為實(shí)驗(yàn)1組，丹參提取物濃度為20ug/mL，設(shè)為實(shí)驗(yàn)2組，D-氨基葡萄糖鹽酸鹽濃度20ug/mL，設(shè)為實(shí)驗(yàn)3組，淫羊藿提取物和丹參提取物混合物濃度為20ug/mL，設(shè)為實(shí)驗(yàn)4組，淫羊藿提取物和丹參提取物再加上D-氨基葡萄糖鹽酸鹽混合物濃度為20ug/mL，設(shè)為實(shí)驗(yàn)5組，和對照組和空白組。每組 12個孔，對照組僅有等量細(xì)胞，不加藥物，空白組既無細(xì)胞也無藥物，各孔均補(bǔ)足培養(yǎng)液至 200uL，CO2孵箱中培養(yǎng)。48小時后取出培養(yǎng)板，吸棄培養(yǎng)液，PBS清洗2遍，每孔加0. ImLPBS 及IOuLMTT (5mg/mL)，置入溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)，4-6小時后每孔加裂解液IOOuL,繼續(xù)置入溫箱中，37°C孵育過夜，酶標(biāo)儀檢測每孔570nm波長的吸光度A570。結(jié)果見表1 表1混合物48h對人成骨細(xì)胞增殖的影響(χ土s, η=12Γ
組別A570
1組·0.543 ±0.029
2 組0.496 ±0.038
3組0. 468±0. 016
4 組0.682 ±0.046
5組0. 864±0. 013*
對照組0.257 ±0.033
空白對照組0.0471 ±0.03濃度為20μ g · mL-1的混合物能顯著促進(jìn)人成骨細(xì)胞的增殖，與其他各組比較P <0. 05,差異有顯著性，由實(shí)驗(yàn)可見，D-氨基葡萄糖鹽酸鹽能顯著促進(jìn)淫羊藿提取物和丹參提取物對人成骨細(xì)胞增殖的影響。實(shí)施例5中藥組合物對ALP比活性的影響取體外擴(kuò)增的第3代成骨細(xì)胞，以2X105/孔的濃度鋪于48孔板。同實(shí)施例4分為5個實(shí)驗(yàn)組和對照組，每組6個復(fù)孔，CO2孵箱中培養(yǎng)。72小時后取出培養(yǎng)板，吸棄培養(yǎng)液，PBS清洗2遍，每孔加入細(xì)胞裂解液3000uL，收集每孔細(xì)胞裂解液，液氮反復(fù)凍融3次， 6000r/min，4°C離心15min，吸取上清200uL，一分為二，IOOuL用于測定蛋白含量，另IOOuL 在全自動生化分析儀上測定ALP含量，ALP含量與蛋白含量的比值即為ALP的比活性，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3遍。結(jié)果見下表2:表2 72hALP比活性測定結(jié)果(χ士s，幻
權(quán)利要求
1.一種治療骨質(zhì)疏松的中藥組合物，所述組合物含有D-氨基葡萄糖鹽酸鹽、丹參提取物和淫羊藿提取物。
2.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其中D-氨基葡萄糖鹽酸鹽、丹參提取物和淫羊藿提取物的含量比例為1-5 1-3 1-3
3.如權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物，所述組合物進(jìn)一步含有鈣。
4.如權(quán)利要求1-3所述的中藥組合物，其中所述組合物進(jìn)一步含有水解膠原蛋白。
5.如權(quán)利要求1-4所述的中藥組合物，其中所述組合物進(jìn)一步含有硫酸軟骨素。
6.如權(quán)利要求1-5所述的中藥組合物，其中所述組合物可以制備為各種劑型。
7.如權(quán)利要求6所述的中藥組合物，其中所述劑型為片劑。
8.含有D-氨基葡萄糖鹽酸鹽、丹參提取物和淫羊藿提取物的混合物在制備治療骨質(zhì)疏松癥的藥物中的用途。
9.含有D-氨基葡萄糖鹽酸鹽、丹參提取物和淫羊藿提取物的混合物在制備治療骨質(zhì)疏松癥的保健品中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥制劑，特別是具有增加骨密度、改善骨質(zhì)疏松和關(guān)節(jié)疼痛功能的中藥制劑，該中藥制劑含有淫羊藿提取物、丹參提取物、D-氨基葡萄糖鹽酸鹽、生物碳酸鈣(牡蠣鈣)、水解膠原蛋白、硫酸軟骨素等活性成分，其中D-氨基葡萄糖鹽酸鹽能顯著促進(jìn)淫羊藿提取物和丹參提取物對成骨細(xì)胞增殖、分化的作用。該制劑立足傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論并結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)藥研究，通過補(bǔ)益肝腎、強(qiáng)腎壯骨、活血通絡(luò)及直接生物補(bǔ)鈣和骨膠原，使腎氣充足、骨有所養(yǎng)，改善骨痛及關(guān)節(jié)疼痛，提高更年期生活質(zhì)量，從而起到增加骨密度、改善骨質(zhì)疏松和關(guān)節(jié)疼痛的作用。
文檔編號A61P19/08GK102218089SQ20111015179
公開日2011年10月19日 申請日期2011年6月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月8日
發(fā)明者高艷慧 申請人:華夏先葆(北京)中藥研究院有限公司