專利名稱：修復受損組織的抗體靶向藥物、給藥方法及磁共振造影劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及藥物，尤其涉及修復受損組織的抗體靶向藥物、給藥方法及磁共振造影劑。
背景技術：
心血管疾病指的是一大類影響心臟和全身血管的疾病。根據(jù)所影響的身體部位，心血管疾病可以分為冠心病、腦血管疾病和間斷性外周血管疾病。心血管疾病是目前世界頭號健康殺手。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO) 2004年的報告，每三例死亡中就有一例是由心血管疾病導致。在中國，心血管疾病死亡率呈明顯上升趨勢，毎年心血管疾病死亡人數(shù)約300萬。

以心肌梗死為例，發(fā)展中國家心肌梗死是最大的死亡原因之一。在過去30年中，心肌梗死發(fā)生后直接的死亡率(發(fā)生后30日內(nèi))降低到了 10%，但一年內(nèi)的死亡率依然不變，約為50%。存活病人的情況也非常危險，因為健康的心肌如在10到15分鐘內(nèi)不能獲得血液就會死亡，且不會重生。因此這些存活病人的心臟功能不斷減弱，最終導致慢性心臟衰竭。目前，心肌梗死緊急治療施用消拴藥劑如鏈激酶、尿激酶等。血管成形手術作為ー種手段也可以提高治療效果。病人情況穩(wěn)定后，病人需長期服用3受體抑制劑。但是，所有這些藥物或手術的功效都在于消除血栓和防止血栓再次形成。再以腦卒中為例，據(jù)統(tǒng)計我國每年發(fā)生腦中風病人達200萬，發(fā)病率高達120人/10萬人次?，F(xiàn)幸存中風病人700萬，其中450萬病人不同程度喪失勞動カ和生活不能自理，致殘率高達75%。我國每年中風病人死亡120萬。已得過腦中風的患者，還易再復發(fā)，每復發(fā)一次，加重一次。病人在恢復期所服用的藥物也都是以預防再次腦卒中為主，并不能讓死亡的腦細胞再生。讓因心肌梗死和腦卒中死亡的心肌細胞和腦細胞再生，這是使病人康復的根本所在。日漸得到科學界和醫(yī)學界重視的干細胞療法提供了完美的解決方案將未分化的干細胞注射到病人的體內(nèi)，這些干細胞游走到損傷部位，修復受損組織。但是，干細胞治療有很大的局限性1)自體干細胞不易獲得，而異體移植則可能導致嚴重的免疫排斥反應；2)研究表明移植干細胞可能會產(chǎn)生腫瘤；3)使用胚胎干細胞受到倫理的限制；4)干細胞治療的機理尚不明確。與此同時，越來越多的最新科學研究表明受損的器官會向整個人體發(fā)布信號，動員全身干細胞前往病灶區(qū)域。比如說人的心臟在心肌梗死后會釋放求救信號，動員全身干細胞前往心梗區(qū)域，修復壞死心肌細胞，再生健康心肌組織?？上У氖?，這個干細胞動員過程雖然存在，但產(chǎn)生的修復作用不足以抵消心肌梗死導致的大面積細胞死亡。因此，科學界努力的趨勢是如何放大和優(yōu)化這個體內(nèi)干細胞動員過程，使之達到可以治療的能級。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種治療心血管疾病的抗體靶向藥物，該靶向藥物可以修復壞死心肌細胞，再生健康心肌組織。為達到上述目的，本發(fā)明采用的技術方案是ー種修復受損組織的抗體靶向藥物，包括干細胞特異性抗體和受損部位特異性抗體，干細胞特異性抗體和受損部位特異性抗體通過化學共價鍵直接偶聯(lián)或同時偶聯(lián)到納米或微米級的鐵顆粒上。優(yōu)選的，干細胞特異性抗體包括CD45、CD 117、CD34、CD31、CD90、CD44、CD 105、CD29、VEGF、FLKl、SCAl、CD133、Nestin、Neural Tubulin、BMP-4、BMP-2、GATA_4、NKx2. 5、SCF 其一或多種。受損部位特異性抗體包括MLC、MHC、ICAM-1、VCAM-l、Troponin、TNF_alpha、AnnexinV、CD3、CD4、CD68 其一或多種。優(yōu)選的,鐵顆粒的粒徑為I 20000nm,鐵顆粒與干細胞特異性抗體和受損部位特異性抗體的重量比分別為I : 0. 00001 I。
優(yōu)選的，鐵顆粒是鐵磁性、亞鐵磁性或超順磁性鉄粉，該鐵粉表面經(jīng)表面活化劑和表面改性劑處理，并經(jīng)有機物或無機物修飾和包裹包被、或未經(jīng)修飾和包裹包被。優(yōu)選的，鐵粉比上表面活化劑或表面改性劑的原料重量比為I : 0. 00001 I。鐵粉比上有機物或無機物包裹包被物質(zhì)的原料重量比為I : 0.0001 10。優(yōu)選的，鐵粉的包裹包被成分載有活性修復因子，可包括VEGF，SCF, BMP4, BMP2,SDFl，IGF, HGF, PDGF, EGF, FGF2 其一或多種。優(yōu)選的，該修復受損組織的抗體靶向藥物分散在復合溶媒或純水中成為注射劑。其中，修復受損組織的抗體靶向藥物與復合溶媒或純水的重量比為I : 0. 5 100。復合溶媒為溶有無機、有機、生物、非生物物質(zhì)的溶液，復合溶媒中純水與無機、有機、生物、非生物物質(zhì)的重量比為I : 0 0. 2。本發(fā)明采用的另ー技術方案是ー種修復受損組織的抗體靶向藥物的給藥方法，該修復受損組織的抗體靶向藥物包括干細胞特異性抗體和受損部位特異性抗體，干細胞特異性抗體和受損部位特異性抗體通過化學共價鍵同時偶聯(lián)到納米或微米級的鐵顆粒上。在給藥過程中和給藥后，外加磁場覆蓋病灶區(qū)域，外加磁場的強度為0. 2 IOTesla(特斯拉)，作用時間為0.01 100小時。本發(fā)明采用的還ー技術方案是ー種磁共振造影(Magnetic Resonance Imaging,MRI)的造影剤，包括干細胞特異性抗體和受損部位特異性抗體，干細胞特異性抗體和受損部位特異性抗體通過化學共價鍵同時偶聯(lián)到納米或微米級的鐵顆粒上。本發(fā)明修復受損組織的抗體靶向藥物的主要成分抗體藥物和鐵藥物都已經(jīng)被廣泛使用多年，被證明安全可靠。同時，該修復受損組織的抗體靶向藥物可優(yōu)化人體自身干細胞的修復功能，井能靶向投遞效應分子，是ー種高效修復且安全無毒副作用的治療新手段。外加磁場可以增強該靶向藥物的靶向性。另外，由于該修復受損組織的抗體靶向藥物可主動識別心血管病灶，還可以作為MRI造影剤。
具體實施例方式本發(fā)明修復受損組織的抗體靶向藥物是一種聚集體內(nèi)干細胞并修復受損組織的抗體靶向藥物，它的結構可以簡單表述為抗體A-抗體B，兩種特異性抗體通過化學共價鍵偶聯(lián)。其中抗體A為效應分子，它對游離在人體內(nèi)的干細胞有較高特異性和親和性，因此它可以主動識別和捕獲修復干細胞。抗體B為導向分子，它對缺血性損傷組織(人心肌梗死后區(qū)域)有較高的特異性和親和性，因此它可以主動識別損傷區(qū)域。這種靶向藥物注射到人體內(nèi)后所產(chǎn)生的功效是捕獲人體內(nèi)游離的修復性干細胞，使其聚集到受損組織，從而起到修復組織的作用。這種靶向藥物的ー種變形是將前述特異性抗體偶聯(lián)在納米或微米級的鐵顆粒上。其結構簡單表述為抗體A-鉄-抗體B。這種靶向藥物在前述抗體A-抗體B結構上，功能又有增強。其優(yōu)點是1)可以通過外加磁場，靶向投遞該藥物至病灶區(qū)域；2)可以使用MRI等設備觀測該靶向藥物在人體的分布。同時這種鐵-抗體靶向藥物還可以作為ー種造影劑，用于心血管疾病的診斷。構成本發(fā)明修復受損組織的靶向藥物的抗體A和抗體B代表兩類特異性的抗體，具體構成上，該靶向藥物可以由兩個或多個抗體偶聯(lián)并具有生物活性，這些抗體至少具有下述兩種特異性，也可以具有多重特異性其中至少ー種抗體特異性針對體內(nèi)的修復性干細胞，該特異性抗體可以選用但不局限于:CD45，CD117 (c-kit)，CD34, CD31，CD90，CD44, CD 105，CD29, VEGF, FLKl，SCAl，CD· 133，Nestin, Neural Tubulin, BMP-4，BMP-2，GATA-4，NKx2. 5，SCF 等其一或多種；同時，其中至少ー種抗體特異性針對受損組織，該特異性抗體可以選用但不局限于MLC (myosin light chain), MHC (myosin light chain), ICAM-I (Inter-CellularAdhesion Molecule I ；CD54), VCAM-I(Vascular cell adhesion protein I ；CD106),Troponin, TNF-alpha(tumor necrosis factor-alpha), Annexin V, CD3, CD4, CD68 等其一或多種?？贵w可以是多克隆抗體、單克隆抗體、抗體Fab片斷或基因重組抗體。抗體Fab片斷或基因重組抗體由于其分子量小、特異性和親和カ高，在免疫源性、穿透性、以及各種對蛋白酶的抵抗性上優(yōu)于傳統(tǒng)的單抗和多杭?？贵w可以是鼠源、兔源等動物源抗體，也可以是人源或人源化抗體。人源化抗體和人源抗體因為具有較小的免疫排斥反應，優(yōu)于動物源抗體。鐵顆粒的粒徑在I 20000nm,鐵顆粒與干細胞特異性抗體和受損部位特異性抗體的重量比分別為I : 0.00001 I。鐵顆?？梢允羌{米級，粒徑為l-5nm、5-10nm、10-20nm、20-30nm、30-40nm、40-50nm、50-100nm 或 100-1000nm。鐵顆粒也可以是微米級，粒徑為 1-5 u m、5_10 u m 或 10-20 u m。鐵顆粒是表面經(jīng)過表面活化劑和表面改性劑處理、由有機物或無機物修飾和包裹包被或未經(jīng)修飾和包裹包被的鐵磁性、亞鐵磁性和超順磁性(SPIO)鉄粉。鐵顆粒表面經(jīng)過一次或多次表面活化、改性、修飾、包裹包被的目的是使鐵顆粒具有不同功能化的表面，如陰離子化表面、陽離子化表面、非離子化表面、氨基化表面(-NH2)、巰基化表面(-SH)、羥基化表面(-0H)、羧基化表面(-C00H)、無機物表面、有機物表面、聚合物表面、生物表面以及其他能與抗體偶聯(lián)的功能化表面。鉄粉比上表面活化劑和表面改性劑的原料重量比為I 0. 00001 I。鐵粉和包裹包被物質(zhì)的原料重量比在I : 0. 0001 10。表面已經(jīng)經(jīng)過處理的鐵顆粒可以自行制備也可以直接購買，如美國AMAG公司的Feraheme ，美國AMAG公司的Feridex ,法國Guerbet公司的Endorem 等等。鐵顆粒的包裹包被材料內(nèi)可以載有對組織修復有利的藥物和活性因子，可以選用但不局限于VEGF，SCF, BMP4, BMP2, SDFl, IGF, HGF, PDGF, EGF, FGF2 等等。這些因子會通過包被材料的降解而緩慢釋放，協(xié)同干細胞修復，提高干細胞修復的療效。抗體和抗體，或抗體和鐵粉，在水溶液、純水或有機單質(zhì)以及有機單質(zhì)溶液中混合偶聯(lián)成為抗體靶向藥物。該靶向藥物通過注射(如靜動脈注射，腹腔注射)進入人體，再進一步通過抗體靶向和磁力靶向，高濃度集聚在心血管疾病病灶部位，通?？贵w濃度可以是正常組織的1-1000倍。本發(fā)明修復受損組織的抗體靶向藥物通過冷凍干燥制成固體粉末，便于靶向藥物的長期儲存和保持藥物的穩(wěn)定性能。該固體粉末在使用前配制成注射劑。該修復受損組織的抗體靶向藥物分散在復合溶媒或純水中成為注射劑。其中，修復受損組織的抗體靶向藥物比上復合溶媒或純水的重量比為I : 0.5 100。復合溶媒為溶有無機、有機、生物、^_生物物質(zhì)的溶液，復合溶媒中純水與無機、有機、生物、^_生物物質(zhì)的重量比為I : 0 0. 2。復合溶媒包括生理鹽水、磷酸鹽緩沖液(PBS)、聚こニ醇，及以有無機、有機、生物、非生物物質(zhì)為溶質(zhì)的溶液。注射劑中，靶向藥物與復合溶媒或純水的重 量比例在I : 0.5 100。復合溶媒中，純水與有機、無機、生物、非生物物質(zhì)的重量比例在I 0 0.2。制成注射劑的藥物分散成微小顆粒，具有良好的組織穿透性，與相關的病灶組織有高度的特異性和親和性，但和正常細胞無交互作用。本發(fā)明修復受損組織的抗體靶向藥物在給藥的過程中和給藥后，可以通過覆蓋病灶區(qū)域的外界磁場(永久性磁鐵或電磁體)的導向作用，使靶向藥物在病灶部位集聚，進ー步提高靶向投遞效率，減小副作用。外界磁場的強度在0. 2 lOTesla，作用時間在0. 01 100小吋。該修復受損組織的抗體靶向藥物在給藥過程中和給藥后，可以通過MRI觀測靶向藥物在人體內(nèi)的分部，確定靶向藥物是否投遞至理想部位，并檢測靶向藥物在人體內(nèi)的降解過程。該靶向藥物具有生物降解性，藥物應用劑量通常小于150mg。該靶向藥物適用任何可以通過干細胞修復治療的組織損傷疾病，包括但不局限干心肌梗死，心衰，腦卒中，肢體
缺血等等。以下結合實施例對本發(fā)明做進ー步說明。實施例I將l-5nm、5_10nm、10-20nm、20-30nm、30-40nm、40-50nm、50-100nm、IOO-IOOOnm 的鐵顆粒經(jīng)過油酸鈉、聚こニ醇等進行表面活化和改性再經(jīng)過葡聚糖、脂質(zhì)體、納米ニ氧化硅包裹包被制成超順磁性鐵粉(SPIO)。將此鐵粉以重量配比為I : 1，1 0. 2,1 0.1，I : 0.05，I : 0.001,1 0. 0001 與 CD117 和 MLC 在 Imject EDC 交聯(lián)緩沖液中偶聯(lián)得至Ij靶向藥物CD117-SPI0-MLC。通過SDS page和A280方法測得偶聯(lián)效率大于85%。實施例2直接購得Feraheme 顆粒(30nm粒徑)。將此鐵粉以重量配比為I : 1，1 : 0.2，I 0. I, I 0. 05,1 0.001 或 I : 0. 0001 與 CD117 和 MLC 在 Imject EDC 交聯(lián)緩沖液中偶聯(lián)得到靶向藥物CD117-Feraheme -MLC。通過SDS page和A280方法測得偶聯(lián)效率大于 85 。實施例3將l-5nm、5_10nm、10-20nm、20-30nm、30-40nm、40-50nm、50-100nm、IOO-IOOOnm 的
鐵顆粒通過油酸鈉、聚こニ醇等進行表面活化和改性，再經(jīng)過葡聚糖、脂質(zhì)體、納米ニ氧化硅包裹包被，制成超順磁性鐵粉(SPIO)。將此鐵粉以重量配比為I : 1，1 : 0. 2，1 : 0. 1，I 0.05，I 0.001,1 0. 0001 與 CD3 和 CD68 在 Imject EDC 交聯(lián)緩沖液中偶聯(lián)得到靶向造影剤CD3-SPI0-CD68。通過SDS page和A280方法測得偶聯(lián)效率大于85%。實施例4將l-5nm、5_10nm、10-20nm、2 0-30nm、30-40nm、40-50nm、50-100nm、IOO-IOOOnm 的鐵顆粒經(jīng)過油酸鈉、聚こニ醇等進行表面活化和改性再經(jīng)過葡聚糖、脂質(zhì)體、納米ニ氧化硅包裹包被制成超順磁性鐵粉(SPIO)。將此鐵粉以重量配比為I : 1，1 0. 2,1 0.1，I : 0.05，I : 0.001,1 0. 0001 與 CD34 和 ICAMl 在 Imject EDC 交聯(lián)緩沖液中偶聯(lián)得到靶向藥物CD34-SPI0-ICAM1。通過SDS page和A280方法測得偶聯(lián)效率大于85%。實施例5將上述實施例1、2、3、4中的靶向藥物經(jīng)PBS洗滌離心后在分散在PBS制成1%的水溶液，作為靶向藥物注射劑。實施例6將上述實施例5中靶向藥物注射劑離心，除去上清液，冷凍干燥制成靶向藥物固體粉末。實施例I提取初生大鼠心肌細胞(NRCM)，體外培養(yǎng)，并用穿透劑(如Triton X-100)處理，得到細胞膜損傷的心肌細胞(模擬心肌梗死后的情況)。將上述實施例I中靶向藥物⑶117-SPI0-MLC與受損的NRCM混合，在37°C共培養(yǎng)I小吋。用PBS洗滌。帶熒光標記的ニ抗染色，免疫組化方法確定⑶117-SPI0-MLC顆粒特異性標識受損心肌細胞。如在ー小時共培養(yǎng)過程中加入外界磁場，在培養(yǎng)皿底部固定永久磁鐵，CD117-SPI0-MLC吸附受損心肌細胞效率進ー步提高。將上述實施例2中靶向藥物⑶117-Feraheme‘ -MLC重復該試驗，得到同樣結果。實施例8提取大鼠巨噬細胞和T細胞，體外培養(yǎng)，流失細胞儀檢測表明巨噬細胞表達⑶68，T細胞表達⑶3。將上述實施例3中靶向藥物⑶3-SPI0-⑶68與巨噬細胞和T細胞混合，在37°C共培養(yǎng)I小吋。用PBS洗滌。帶熒光標記的ニ抗染色，免疫組化方法確定⑶3-SPI0-⑶68顆粒特異性標識巨噬細胞和T細胞。如在一小時共培養(yǎng)過程中加入外界磁場，在培養(yǎng)皿底部固定永久磁鐵，CD3-SPI0-CD68顆粒特異性標識巨噬細胞和T細胞效率進ー步提高。將⑶3-SPI0-⑶68顆粒特異性標識巨噬細胞和T細胞分散到純水中，入MRI機器7 Tesla ClinScan animal MRI scanner掃描，引起特異性MRI信號衰減。信號衰減程度和CD3-SPI0-CD68顆粒數(shù)量正相關。實施例9先建立大鼠心肌梗死(缺血-再灌注)模型。取Wistar-Kyoto大鼠，麻酔，器官插管，手術開胸，結扎前降支冠狀動脈(LAD)，閉胸。三小時后再麻酔，開胸，解開結扎，使血液再灌注。三天后，心超(echocardiography)確認大鼠左心室射血指數(shù)(LVEF)從正常均值80 %降到均值35 %。尾靜脈注射實施例I中所述的⑶117-SPI0-MLC (劑量為7mg靶向藥物/千克大鼠體重)。對照組尾靜脈注射無靶向藥物的溶液PBS。注射三天后，處死大鼠。制作心臟切片，并免疫組化染色。⑶117-SPI0-MLC組每個顯微鏡高倍視野內(nèi)⑶117陽性干細胞數(shù)量為對照組的10. 5倍。該試驗證明⑶117-SPIO-MLC有效提高心臟內(nèi)⑶117陽性干細胞數(shù)量，并集中在心肌梗死的邊緣區(qū)域。在之前試驗基礎上再加入一組，注射⑶117-SPIO-MLC同吋，在大鼠心臟區(qū)域綁定ー塊直徑在Icm的磁鐵，并在注射后繼續(xù)綁定24小吋。免疫組化染色表明，心臟內(nèi)⑶117陽性干細胞數(shù)量進ー步提高到⑶117-SPIO-MLC(無磁鐵組)的
3.2倍，PBS對照組的33. 6倍。此試驗證明，磁力靶向進一步提高靶向藥物在心臟內(nèi)的分部，提高干細胞集聚效率。在此試驗基礎上，注射三天后不處死大鼠，4周后，心超測定心功能。對照組左心室射血指數(shù)LVEF從基線值平均35%下降到26%。⑶117-SPIO-MLC(無磁鐵組)從基線值平均35%上升到43%。⑶117-SPIO-MLC(加磁力靶向組)從基線值平均35%上升到48%。此試驗證明，⑶117-SPIO-MLC對心急梗死有治療作用，磁力靶向進ー步提高療效。心超測定心功能試驗完成后，處死所有大鼠。取心臟、肝、脾、腎、肺檢驗，未發(fā)現(xiàn)腫瘤或其他副作用表達。大鼠血液中ferritin和transferrin含量正常。大鼠在4周試驗過程中未見不良反應和體重下降。此試驗證明⑶117-SPIO-MLC靶向藥物的安全性。取實施例2中⑶117-Feraheme -MLC重復該試驗，療效和安全性相似。 實施例10建立實施例8所述的大鼠心肌梗死(缺血-再灌注)模型。三天后，尾靜脈注射實施例3中所述⑶3-SPI0-⑶68靶向造影剤。對照組注射無⑶3-SPI0-⑶68靶向造影剤的PBS0 I小時后，使用磁共振機器7 Tesla ClinScan animal MRI scanner對動物心臟區(qū)域掃描，發(fā)現(xiàn)特異性信號。MRI后，處死大鼠。對心臟切變免疫組化染色，發(fā)現(xiàn)⑶68陽性巨噬細胞和⑶3陽性T細胞。Prussian blue染色顯示，該區(qū)域⑶3-SPI0-⑶68靶向造影劑的存在。并且，該染色區(qū)域和磁共振信號衰減區(qū)域吻合。該試驗表明，CD3-SPI0-CD68可以作為ー種新型造影剤，用于診斷心血管病變。重復該試驗，試驗過程延長至四周，大鼠在4周試驗過程中未見不良反應和體重下降。4周后處死所有大鼠。取心臟、肝、脾、腎、肺檢驗，未發(fā)現(xiàn)腫瘤或其他副作用表達。此試驗證明⑶3-SPI0-⑶68靶向造影剤的安全性。實施例11先建立大鼠腦卒中模型。取Wistar-Kyoto大鼠，麻酔，結扎頸總動脈，ニ小時后松開，使血液再灌注。大鼠出現(xiàn)行動受限、平衡能力下降等腦卒中癥狀。三天后，尾靜脈注射實施例4中所述的⑶34-SPI0-ICAM1 (劑量為7mg靶向藥物/千克大鼠體重)。對照組尾靜脈注射無靶向藥物的溶液PBS。注射三天后，處死大鼠。制作大腦切片，并免疫組化染色。⑶34-SPI0-ICAM1組每個顯微鏡高倍視野內(nèi)⑶34陽性干細胞數(shù)量為對照組的8. 2倍。該試驗證明⑶34-SPI0-ICAM1有效提高心臟內(nèi)⑶34陽性干細胞數(shù)量，并集中在腦梗死的邊緣區(qū)域。在之前試驗基礎上再加入ー組，注射⑶34-SPI0-ICAM1同時，在大鼠頭部區(qū)域綁定ー塊直徑在Icm的磁鐵，并在注射后繼續(xù)綁定24小吋。免疫組化染色表明，心臟內(nèi)CD34陽性干細胞數(shù)量進ー步提高到⑶34-SPI0-ICAM1 (無磁鐵組)的3. 5倍，PBS對照組的28. 7倍。此試驗證明，磁力靶向進一步提高靶向藥物在腦梗死區(qū)域內(nèi)的分部，提高干細胞集聚效率。在此試驗基礎上，注射三天后不處死大鼠，3周后，對照組大鼠腦卒中后遺癥無明顯改善。⑶34-SPI0-ICAM1 (無磁鐵組)大鼠具有更好的活動能力和平衡能力。⑶34-SPI0-ICAM1 (加磁力靶向組)在3個實驗組中具有最好的活動能力和平衡能力。三周后處死大鼠，腦切片和免疫組化染色證明⑶34-SPI0-ICAM1組大腦的毛細血管數(shù)量比對照組明顯增多，死亡細胞數(shù)量和炎癥因子顯著減少。此試驗證明，⑶34-SPI0-ICAM1對腦卒中有治療作用。磁力靶向進ー步提高療效。大鼠在3周試驗過程中未見不良反應和體重下降。4周后處死所有大鼠。取心臟、肝、脾、腎、肺檢驗，未發(fā)現(xiàn)腫瘤或其他副作用表達。此試驗證明⑶34-SPI0-ICAM1靶向藥物的安全性。實施例12將⑶117抗體和MLC抗體直接通過蛋白質(zhì)修飾試劑2-亞氨氫氯化硫醇，2-Iminothiolane hydrochloride和4-(N-馬來酸亞胺甲基)環(huán)己燒-I-羧酸橫酸基玻珀酰亞胺酯鈉鹽(Sulph0-SMCC)偶聯(lián)，得到抗體靶向藥物⑶117-MLC。建立大鼠心肌梗死(缺血-再灌注)模型。三天后，尾靜脈注射實施例I中所述的CD117-MLC。對照組尾靜脈注射無靶向藥物的溶液PBS。注射三天后，處死大鼠。制作心臟切片，并免疫組化染色。⑶117-MLC組每個顯微鏡高倍視野內(nèi)⑶117陽性干細胞數(shù)量為對照組的11. 2倍。該試驗證明⑶117-MLC有效提高心臟內(nèi)⑶117陽性干細胞數(shù)量，并集中在心肌梗死的邊緣區(qū)域。在此試驗基礎上，注射三天后不處死大鼠，4周后，心超測定心功能。對照組左心室射血指數(shù) LVEF從基線值平均35%下降到26%。⑶117-MLC從基線值平均35%上升到42. 7%。心超測定心功能試驗完成后，處死所有大鼠。取心臟、肝、脾、腎、肺檢驗，未發(fā)現(xiàn)腫瘤或其他副作用表達。大鼠在4周試驗過程中未見不良反應和體重下降。此試驗證明⑶117-MLC靶向藥物的安全性。因為沒有SPIO鐵顆粒成分，因此該靶向藥物無法使用磁力靶向，也無法通過MRI觀測，但亦具有療效。本發(fā)明修復受損組織的抗體靶向藥物是由抗體和抗體，或抗體和鐵顆粒偶聯(lián)構成的抗體靶向藥物。該靶向藥物充分體用人體的自主修復功能，識別和捕獲人體內(nèi)干細胞，靶向集聚至病灶區(qū)域。由于靶向藥物顆粒微小且可生物降解，其在體內(nèi)具有良好的穿透性和生物相容性，在血液中可長期穩(wěn)定循環(huán)。它具有主動靶向功能，因此副作用微小。根據(jù)不同種類的干細胞特異性和病灶組織特異性，該修復受損組織的抗體靶向藥物可以治療因心肌梗死、慢性心衰、腦卒中、嚴重肢體缺血所引起的損傷。由于鐵顆粒的存在，該修復受損組織的抗體靶向藥物可通過外界磁場進行磁力靶向投遞以及MRI監(jiān)測。并且，它還可以作為一種新型的造影剤，通過MRI診斷心血管疾病病灶部位。以上所述，僅為本發(fā)明的具體實施方式
，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本領域的技術人員在本發(fā)明所揭露的技術范圍內(nèi)，可不經(jīng)過創(chuàng)造性勞動想到的變化或替換，都應涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。因此，本發(fā)明的保護范圍應該以權利要求書所限定的保護范圍為準。
權利要求
1.ー種修復受損組織的抗體靶向藥物，其特征在于所述修復受損組織的抗體靶向藥物包括干細胞特異性抗體和受損部位特異性抗體，所述干細胞特異性抗體和受損部位特異性抗體通過化學共價鍵直接偶聯(lián)或同時偶聯(lián)到納米或微米級的鐵顆粒上。
2.根據(jù)權利要求I所述的修復受損組織的抗體靶向藥物，其特征在于所述干細胞特異性抗體包括 CD45、CD117、CD34、CD31、CD90、CD44、CD105、CD29、VEGF、FLK1、SCA1、CD133、Nestin,Neural Tubulin、BMP-4、BMP-2、GATA_4、NKx2. 5、SCF 其一或多種；所述受損部位特異性抗體包括 MLC、MHC、ICAM-I、VCAM-I、Troponin、TNF-alpha、Annexin V、CD3、CD4、CD68其一或多種。
3.根據(jù)權利要求I所述的修復受損組織的抗體靶向藥物，其特征在于所述鐵顆粒的粒徑為I 20000nm，所述鐵顆粒與所述干細胞特異性抗體和受損部位特異性抗體的重量比分別為I 0.00001 I。
4.根據(jù)權利要求I所述的修復受損組織的抗體靶向藥物，其特征在于所述鐵顆粒是鐵磁性、亞鐵磁性或超順磁性鉄粉，所述鐵粉表面經(jīng)表面活化劑和表面改性劑處理，并經(jīng)有機物或無機物修飾和包裹包被、或未經(jīng)修飾和包裹包被。
5.根據(jù)權利要求4所述的修復受損組織的抗體靶向藥物，其特征在于所述鐵粉比上表面活化劑或表面改性劑的原料重量比為I : 0. 00001 I ;所述鐵粉和包裹包被物質(zhì)的原料重量比為I : 0. 0001 10。
6.根據(jù)權利要求4所述的修復受損組織的抗體靶向藥物，其特征在于所述鐵粉的包裹包被材料內(nèi)載有對組織修復有利的藥物和活性因子。
7.根據(jù)權利要求6所述的修復受損組織的抗體靶向藥物，其特征在于所述對組織修復有利的活性因子包括 VEGF、SCF、BMP4、BMP2、SDFl、IGF、HGF、PDGF, EGF、FGF2 其一或多種。
8.根據(jù)權利要求I所述的修復受損組織的抗體靶向藥物，其特征在于所述修復受損組織的抗體靶向藥物分散在復合溶媒或純水中成為注射劑，所述修復受損組織的抗體靶向藥物比上復合溶媒或純水的重量比為I : 0. 5 100,所述復合溶媒為溶有無機、有機、生物、非生物物質(zhì)的溶液，所述復合溶媒中純水與無機、有機、生物、非生物物質(zhì)的重量比為I 0 0. 2。
9.ー種修復受損組織的抗體靶向藥物的給藥方法，其特征在于所述修復受損組織的抗體靶向藥物包括干細胞特異性抗體和受損部位特異性抗體，所述干細胞特異性抗體和受損部位特異性抗體通過化學共價鍵同時偶聯(lián)到納米或微米級的鐵顆粒上；在給藥過程中和給藥后，外加磁場覆蓋病灶區(qū)域，所述外加磁場的強度為0. 2 lOTesla，作用時間為0.01 100小時。
10.ー種磁共振造影剤，其特征在于所述磁共振造影剤包括干細胞特異性抗體和受損部位特異性抗體，所述干細胞特異性抗體和受損部位特異性抗體通過化學共價鍵同時偶聯(lián)到納米或微米級的鐵顆粒上。
全文摘要
本發(fā)明揭示了一種修復受損組織的抗體靶向藥物，包括干細胞特異性抗體和受損部位特異性抗體，干細胞特異性抗體和受損部位特異性抗體通過化學共價鍵直接偶聯(lián)或同時偶聯(lián)到納米或微米級的鐵顆粒上。其中，特異性抗體與鐵顆粒偶聯(lián)的靶向藥物在給藥過程中和給藥后，可使用外加磁場覆蓋病灶區(qū)域。且特異性抗體與鐵顆粒偶聯(lián)的靶向藥物還可作為MRI造影劑。該修復受損組織的抗體靶向藥物安全可靠，可優(yōu)化人體自身干細胞的修復功能，并能靶向投遞效應分子，是一種高效修復且安全無毒副作用的治療新手段。外加磁場可以增強該靶向藥物的靶向性，減小副作用。另外，由于該修復受損組織的抗體靶向藥物可主動識別心血管病灶，還可以作為MRI造影劑。
文檔編號A61P9/10GK102836429SQ201110168958
公開日2012年12月26日 申請日期2011年6月22日 優(yōu)先權日2011年6月22日
發(fā)明者程柯 申請人:程柯