專利名稱：腫瘤抗原Pokemon的HLA-A*0201限制性CTL表位及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種抗原細胞毒性T細胞(CTL)表位，特別涉及腫瘤抗原Pokemon的HLA_A*0201限制性CTL表位，還涉及該CTL表位的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
神經(jīng)膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)腫瘤，發(fā)生率約占顱內(nèi)腫瘤的309Γ50%， 且絕大多數(shù)為惡性腫瘤，采用傳統(tǒng)腫瘤治療方案如手術(shù)、化療、放療等，患者的平均生存期往往不足1年。因此，尋求新的治療方法迫在眉睫。腫瘤特異性免疫治療由于不傷及無關(guān)正常組織，是近年來發(fā)展迅速的腫瘤治療方法。其基本原理是腫瘤抗原多肽在抗原提呈細胞(APC)的作用下以MHC-I-肽復(fù)合物(與 MHC-I類分子結(jié)合的肽被定義為CTL表位)的形式被提呈于APC表面，CTL通過其T細胞受體特異識別APC表面的MHC-I-肽復(fù)合物而得以活化，最終特異識別存在于腫瘤細胞表面的抗原多肽而特異殺傷腫瘤細胞。因此，尋求特異腫瘤抗原及其相應(yīng)的CTL表位是腫瘤特異性免疫治療的關(guān)鍵。Pokemon是近年發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)錄抑制因子，由Zbtb7基因編碼，是POK蛋白家族的成員之一，在細胞分化中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，Pokemon是腫瘤發(fā)生的一個關(guān)鍵因素。缺失 Zbtb7基因的小鼠胚胎成纖維細胞對其它原癌基因如E1A、Ras, Myc和T2Ag等介導(dǎo)的細胞轉(zhuǎn)化完全無反應(yīng)。在轉(zhuǎn)基因小鼠模型中，Pokemon的過表達導(dǎo)致了腫瘤的發(fā)生，其通過直接結(jié)合特異地抑制腫瘤抑制基因ARF的轉(zhuǎn)錄，BCL6基因的活性也有賴于Pokemon。在神經(jīng)膠質(zhì)瘤、乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌和膀胱癌等人類腫瘤中，Pokemon異常高表達，也證明了人類許多腫瘤的發(fā)生是由于Pokemon表達異常升高所引起的。關(guān)于Pokemon的作用模式研究結(jié)果顯示，Pokemon的作用位于許多腫瘤抑制基因和原癌基因的上游，因此，將其作為靶基因?qū)⒂兄谀[瘤的根治。由于HLA-A*0201是中國人群最為常見的HLA-I類分子的型別，陽性率高達50%， 同時也是北美高加索人種最常見的HLA-I類分子的型別，陽性率高達98%。因此，鑒定出腫瘤抗原Pokemon的HLA_A*0201限制性CTL表位，將會對中國人群和北美高加索人群中 Pokemon表達異常升高的惡性腫瘤提供免疫治療的基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供腫瘤抗原Pokemon的HLA_A*0201限制性 CTL表位，該表位能夠以高親和力結(jié)合HLA-A*0201，所形成的復(fù)合物穩(wěn)定，能夠誘導(dǎo)肽特異性的CTL應(yīng)答，刺激肽特異性CTL分泌高水平的IFN- γ并對腫瘤細胞產(chǎn)生特異性殺傷效應(yīng)。為達到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案腫瘤抗原Pokemon的HLA_A*0201限制性 CTL 表位，其氨基酸序列如 SEQ ID No. 1、SEQ ID No. 2、SEQ ID No. 3 或 SEQ ID No. 4 所示。
本發(fā)明的目的之二在于提供所述腫瘤抗原Pokemon的HLA_A*0201限制性CTL表位在制藥方面的應(yīng)用。為達到此目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案腫瘤抗原Pokemon的HLA_A*0201限制性CTL表位在制備腫瘤治療性肽疫苗中的應(yīng)用。進一步，所述腫瘤治療性肽疫苗為神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療性肽疫苗。本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明提供了腫瘤抗原Pokemon的HLA_A*0201限制性 CTL表位，該CTL表位能夠以高親和力結(jié)合HLA-A*0201，所形成的復(fù)合物穩(wěn)定，能夠誘導(dǎo)肽特異性的CTL應(yīng)答，刺激肽特異性CTL分泌高水平的IFN- γ并對腫瘤細胞產(chǎn)生特異性殺傷效應(yīng)，可用于制備腫瘤治療性肽疫苗例如神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療性肽疫苗，在腫瘤特異性免疫治療領(lǐng)域有著潛在、良好的開發(fā)應(yīng)用前景。


圖1為預(yù)測CTL表位Pl與HLA_A*0201的復(fù)合物模型。圖2為預(yù)測CTL表位P2與HLA_A*0201的復(fù)合物模型。圖3為預(yù)測CTL表位P3與HLA_A*0201的復(fù)合物模型。圖4為預(yù)測CTL表位P4與HLA_A*0201的復(fù)合物模型。圖5為預(yù)測CTL表位Pl的分子動力學(xué)模擬構(gòu)象。圖6為預(yù)測CTL表位P2的分子動力學(xué)模擬構(gòu)象。圖7為預(yù)測CTL表位P3的分子動力學(xué)模擬構(gòu)象。圖8為預(yù)測CTL表位P4的分子動力學(xué)模擬構(gòu)象。圖9為預(yù)測CTL表位肽PI、P2、P3、P4與HLA_A*0201的親和力檢測結(jié)果。圖10為預(yù)測CTL表位肽P1、P2、P3、P4與HLA_A*0201的復(fù)合物穩(wěn)定性檢測結(jié)果。圖11為預(yù)測CTL表位肽Pl、P2.P3.P4刺激肽特異性CTL殺傷靶細胞的能力檢測結(jié)果。圖12為預(yù)測CTL表位肽Pl、P2、P3、P4刺激肽特異性CTL分泌IFN- γ的能力檢測結(jié)果。
具體實施例方式為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面將結(jié)合附圖對本發(fā)明作進一步的詳細描述。一、Pokemon HLA_A*0201 限制性 CTL 表位預(yù)測
1、超基序方案預(yù)測CTL表位
超基序是指在同一 HLA家族，甚至是不同家族的HLA同種異型分子接納的抗原肽具有相同和相似的錨著殘基構(gòu)成的肽基序。超基序主要的錨定殘基是肽鏈第2位(P》和第9 位(P9)的氨基酸殘基，當(dāng)P2、P9位氨基酸殘基為V、L、I、M或T時，肽與HLA_A*0201有高親和力；當(dāng)P2、P9位氨基酸殘基為A、I、L、M、V或T時，肽與HLA-A*0201有較高親和力。利用 SYFPEITHI 在線軟件(http://www. syfpeithi. de/scripts/MHCServer. dll/home. htm), 以P2、P9位氨基酸殘基為V、L、I、M或T為條件，對腫瘤抗原Pokemon (Genbank登錄號為 ΝΜ_015898. 2)的HLA_A*0201限制性CTL表位進行預(yù)測。
結(jié)果獲得分值大于M的預(yù)測CTL表位4個，分別是Pl :GLLCDVVIL(SEQ ID No. 1)， 得分四；P2 :LLCDVVILV (SEQ ID No. 2)，得分 27 ；P3 :AVAAAVAAV (SEQ ID No. 3)，得分 25 ； P4 KLFTSGAW (SEQ ID No. 4)，得分 24。2、預(yù)測CTL表位的分子動力學(xué)模擬
運用Silicon graphics工作站及hsight II軟件包中的Discover 3模塊(采用CVFF 力場)，對4個預(yù)測CTL表位與HLA-A2. 1的復(fù)合物進行分子動力學(xué)模擬。HLA_A*0201的初始坐標(biāo)來自于蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(Protein Data Bank)登錄的流感病毒蛋白Μ158_66 (Τ 細胞表位)與HLA-A*0201的復(fù)合物模型(登錄號為IHH I )，預(yù)測CTL表位是運用Bioploymer 模塊對IHH I中的Ml58,進行氨基酸替換而得。分子動力學(xué)模擬過程如下第一步，將 HLA-A*0201與β an固定，運用最陡下降法對預(yù)測CTL表位進行2000步優(yōu)化計算，再用共扼梯度法優(yōu)化，直到能量均方根誤差(RMS)小于1. 0187K/J. mol ；第二步，在預(yù)測CTL表位與HLA-A*0201復(fù)合物周圍加一層7. 5A的水分子，再固定復(fù)合物對水分子進行2000步能量優(yōu)化，以消除水分子之間以及水分子與蛋白質(zhì)之間的不合理接觸；第三步，對溶液狀態(tài)下的預(yù)測CTL表位與HLA-A*0201復(fù)合物進行能量最小化計算，非鍵相互作用采用9. 5A的截斷值，先后運用最陡下降法和共扼梯度法優(yōu)化，直到能量RMS小于1. 0187K/J. mol ；第四步， 在^SK的恒定溫度下進行20皮秒的分子動力學(xué)計算；第五步，對動力學(xué)優(yōu)化得到的最后構(gòu)象進行分子力學(xué)優(yōu)化5000步，獲得預(yù)測CTL表位與HLA-A*0201復(fù)合物的最終構(gòu)象。借助 Homology模塊，計算4個預(yù)測CTL表位的P2、P9錨定間距等結(jié)合參數(shù)。4個預(yù)測CTL表位與HLA_A*0201的復(fù)合物模型分別見圖1_4，4個預(yù)測CTL表位的分子動力學(xué)模擬構(gòu)象分別見圖5-8。4個預(yù)測CTL表位的P2、P9錨定間距在17 2θΑ范圍內(nèi)，滿足大部分HLA-A*0201限制性CTL表位的錨定間距在15 2θΑ范圍的要求。4個預(yù)測 CTL表位與HLA-A*0201結(jié)合槽的氨基酸殘基之間均形成5個以上的穩(wěn)定氫鍵。二、預(yù)測Pokemon HLA_A*0201限制性CTL表位肽的合成
4個預(yù)測CTL表位肽的合成在ABI 431A型固相多肽合成儀上進行。采用標(biāo)準(zhǔn)芴甲氧羰基(Fmoc)方案，精氨酸采用兩次偶聯(lián)。起始選用0. 125mmol對羥甲基苯氧甲基聚苯乙烯樹脂(HMP樹脂)，按照多肽的氨基酸序列使肽鏈從羧基端逐個向氨基端延伸，每種氨基酸的用量為0.5mmol，與樹脂的摩爾比為4:1。各種氨基酸的α -氨基為Fmoc保護，其余側(cè)鏈保護基團分別為Lys(Boc)、Ser(tBu) ,Glu(OtBu) ,Arg(Pmc) ,His(Trt)、Thr(tBu)和 Tyr(tBu)。 第一個氨基酸連接到樹脂上用4-二甲氨基吡啶(DMAP)，氨基酸的活化用1-羥基苯并三唑 (HOBt)和二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)，偶聯(lián)后用體積分?jǐn)?shù)為20%的哌啶水溶液去除Fmoc保護基。多肽合成后，將樹脂-粗肽產(chǎn)品在冰浴條件下混合于IOmL切割液A(由結(jié)晶苯酚0. 75g、 1，2-乙二硫醇即EDT 0. 25mL、苯甲硫醚0. 5mL、去離子水0. 25mL和三氟乙酸即TFA IOmL組成)中，待切割液溫度上升至室溫后，攪拌反應(yīng)2小時，使肽鏈從樹脂上裂解下來，同時去除多種保護基團。將反應(yīng)混合液經(jīng)G4玻砂漏斗過濾以去除樹脂，先后用ImL TFA、5 10mL 二氯甲烷反復(fù)沖洗反應(yīng)瓶、樹脂和漏斗。將濾液在常溫低壓下蒸發(fā)至廣2mL，加入50mL預(yù)冷乙醚沉淀多肽，4°C放置過夜，G6玻砂漏斗過濾，真空抽干，即得多肽粗品，-20°C保存?zhèn)溆?。將多肽粗品用二甲基亞?DMSO)溶解制成濃度為20mg/mL的溶液，經(jīng)孔徑為 0. 45 μ m的微孔濾膜過濾后，在AKTA explorer 100型中壓液相色譜儀(瑞典Amerssham Bioscienc公司)上用SOURCE凝膠柱進行純化。流動相A由體積分?jǐn)?shù)為10%的乙醇和體積分?jǐn)?shù)為0. 1%的TFA組成，流動相B由體積分?jǐn)?shù)為90%的乙醇和體積分?jǐn)?shù)為0. 1%的TFA組成；洗脫梯度為先用流動相A洗脫1. 5個柱體積，再用流動相A和流動相B的混合液洗脫 8個柱體積(流動相B占混合液的體積分?jǐn)?shù)在8個柱體積內(nèi)由0%逐漸增加至80%)，再用流動相A和流動相B的混合液洗脫0. 5個柱體積(流動相B占混合液的體積分?jǐn)?shù)在0. 5個柱體積內(nèi)由80%逐漸增加至100%)，在主峰處收集多肽溶液，冷凍干燥，即得多肽純品，用DMSO 溶解，-20°C保存?zhèn)溆?。將多肽純品用Delta 600型高壓液相色譜儀鑒定純度，采用Symmetry ShieldTM C18柱，流動相由體積分?jǐn)?shù)為10%飛0%的乙腈和體積分?jǐn)?shù)為0. 1%的TFA組成，流速為ImL/ min。結(jié)果顯示，合成多肽的純度均達到95%以上。同時，將多肽純品用API 2000 LC/MS型電噴霧離子化質(zhì)譜儀測定分子量。結(jié)果顯示，合成多肽的分子量分別與4個預(yù)測CTL表位肽的理論分子量相符。三、預(yù)測Pokemon HLA_A*0201限制性CTL表位肽與HLA_A*0201的親和力檢測采用HLA-A*0201表達陽性但內(nèi)源性抗原肽遞呈途徑必需的抗原加工相關(guān)轉(zhuǎn)運體
(TAP)缺陷的T2細胞進行實驗。T2細胞表面空載的HLA-A*0201表達極不穩(wěn)定，呈遞后很快降解，而結(jié)合了抗原肽的HLA-A*0201表達穩(wěn)定，且抗原肽與HLA-A*0201的結(jié)合力越強， HLA-A*0201的表達量越高。因T2細胞的內(nèi)源性抗原肽加工處理能力缺失，故T2細胞表面 HLA-A*0201的表達量增加直觀地反應(yīng)了外源性抗原肽與HLA-A*0201的結(jié)合力。實驗分為5組P1組(預(yù)測CTL表位肽Pl)、P2組(預(yù)測CTL表位肽P2)、P3組(預(yù)測CTL表位肽P3)、P4組(預(yù)測CTL表位肽P4)和陰性對照組(無關(guān)表位肽AAVEEVRAL)。將 3 X IO5個T2細胞接種于Iml含有濃度為100M的肽(按實驗分組加入相應(yīng)肽)以及濃度為10% (w/w)的胎牛血清(FCS)的RPMI 1640培養(yǎng)基中，在溫度為37°C、0)2氣體體積分?jǐn)?shù)為5%的條件下培養(yǎng)16小時，用PBS洗滌細胞2次，加入BB7. 2雜交瘤細胞分泌的鼠抗人HLA_A*0201 單克隆抗體100 μ 1，4°C培養(yǎng)30分鐘，再用PBS洗滌細胞2次，加入按體積比為1 50稀釋的 FITC標(biāo)記的羊抗鼠IgG抗體100 μ 1，4°C培養(yǎng)30分鐘，用PBS洗滌并重懸細胞后，用流式細胞儀于波長488nm處測定熒光強度，計算熒光系數(shù)(FI )。結(jié)果如圖9所示，可見Pl組、P2組、P3組和P4組的FI值均明顯高于陰性對照組， 說明4個預(yù)測CTL表位肽PI、P2、P3和P4均能以高親和力結(jié)合HLA_A*0201。四、預(yù)測Pokemon HLA_A*0201限制性CTL表位肽與HLA_A*0201的復(fù)合物穩(wěn)定性檢測
實驗分為5組P1組(預(yù)測CTL表位肽Pl )、P2組(預(yù)測CTL表位肽P2)、P3組(預(yù)測CTL 表位肽P3)、P4組(預(yù)測CTL表位肽P4)和陰性對照組(無關(guān)表位肽AAVEEVRAL)。將1 X IO6 個T2細胞接種于Iml含有濃度為100M的肽(按實驗分組加入相應(yīng)肽)以及濃度為10% (w/ w)的FCS的RPMI 1640培養(yǎng)基中，在溫度為37°C、0)2氣體體積分?jǐn)?shù)為5%的條件下培養(yǎng)16 小時，用PBS洗滌細胞2次，再加入無血清RPMI 1640培養(yǎng)基，在溫度為37°C、0)2氣體體積分?jǐn)?shù)為5%的條件下繼續(xù)培養(yǎng)，分別于0、2、4、6、8小時取出細胞，加入BB7. 2雜交瘤細胞分泌的鼠抗人HLA-A*0201單克隆抗體100 μ 1，4°C培養(yǎng)30分鐘，用PBS洗滌細胞2次，再加入按體積比為1 50稀釋的FITC標(biāo)記的羊抗鼠IgG抗體100 μ 1，4°C培養(yǎng)30分鐘，用PBS洗滌并重懸細胞后，用流式細胞儀于波長488nm處測定熒光強度，計算肽與HLA_A*0201分子復(fù)合物的半數(shù)解離時間(DC50)。
結(jié)果如圖10所示，可見Pl組、P2組、P3組和P4組的DC50值均明顯高于陰性對照組，說明4個預(yù)測CTL表位肽P1、P2、P3、P4與HLA_A*0201的復(fù)合物均具有較高的穩(wěn)定性。五、預(yù)測Pokemon HLA_A*0201限制性CTL表位肽促進特異性的CTL應(yīng)答檢測
實驗分為5組P1組(預(yù)測CTL表位肽Pl )、P2組(預(yù)測CTL表位肽P2)、P3組(預(yù)測CTL 表位肽P3)、P4組(預(yù)測CTL表位肽P4)和陰性對照組(無關(guān)表位肽AAVEEVRAL)。1、預(yù)測CTL表位肽體外誘導(dǎo)特異性的CTL
采用聚蔗糖-泛影葡氨分層液密度梯度離心法從HLA-A*0201陽性健康者的外周血濃縮白細胞中分離出外周血單個核細胞(PBMC)。將PBMC用RPMI 1640培養(yǎng)基在溫度37°C、CO2 氣體體積分?jǐn)?shù)為5%的條件下孵育2小時，分離非貼壁細胞[主要為淋巴細胞(PBL)]和貼壁細胞[樹突狀細胞(DC)]。將DC按細胞密度為2X106/3ml加入含有濃度為800IU/ml的集落刺激因子(GM-CSF)、濃度為1000 IU/ml的白介素4 (IL-4)以及濃度為10% (w/w)的FCS 的RPMI 1640培養(yǎng)基，在溫度為37°C、0)2氣體體積分?jǐn)?shù)為5%的條件下培養(yǎng)，每2天半量換液并補充GM-CSF和IL-4，第5天加入終濃度為lOng/ml的腫瘤壞死因子(TNF- α )，第7天獲得成熟DC。向成熟DC中加入終濃度為IOM的肽(按實驗分組加入相應(yīng)肽)，在溫度37°C、 CO2氣體體積分?jǐn)?shù)為5%的條件下孵育2小時，30Gy放射性處理，獲得負(fù)載肽的DC。按PBL 與DC的數(shù)量比為3 1 6 1向PBL中加入負(fù)載肽的DC,再按PBL細胞密度為1. 5 X 106/2ml加入含有濃度為10ng/ml的白介素7 (IL-7)以及濃度為10% (w/w)的FCS的RPMI 1640培養(yǎng)基，在溫度為37°C、0)2氣體體積分?jǐn)?shù)為5%的條件下培養(yǎng)，第11天加入負(fù)載肽的DC再次刺激培養(yǎng)的PBLJ4 48小時后向細胞培養(yǎng)液中加入濃度為10IU/ml的白介素2 (IL-2)并補充IL-7至終濃度為lOng/ml，之后每隔7天按照上述相同方法再次刺激培養(yǎng)的PBL，連續(xù)刺激4次，獲得肽特異性CTL，用含有濃度為10% (w/w)的FCS的RPMI1640培養(yǎng)基調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為效應(yīng)細胞。2、肽特異性CTL對靶細胞的體外殺傷能力檢測
將IX IO6個神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞U251轉(zhuǎn)移至離心管中，用含有濃度為10% (w/w)的FCS的 RPMI1640培養(yǎng)基洗滌1次，吸除大部分上清液，剩余約0. Iml培養(yǎng)基于管底，重懸細胞，加入相應(yīng)量的51Cr溶液，在溫度為37°C、0)2氣體體積分?jǐn)?shù)為5%的條件下培養(yǎng)2小時，獲得51Cr 標(biāo)記的靶細胞。在96孔板中，每孔分別按效靶比(E/T)為100 1,50 1和25 1加入效應(yīng)細胞與上述51Cr標(biāo)記的靶細胞，每種效靶比設(shè)3個復(fù)孔，同時設(shè)最大釋放孔(用濃度為 2mol/L的鹽酸替代效應(yīng)細胞)和最小釋放孔[用含有濃度為10% (w/w)的FCS的RPMI1640 培養(yǎng)基替代效應(yīng)細胞]。將96孔板1200r/min離心30秒，溫度37°C孵育4小時，向最大釋放孔中加入終濃度為21 (w/w)的Triton X-100并吹打混勻，孵育10分鐘，再將96孔板 1200r/min離心5分鐘，分別吸取各孔上清液至SiCr計數(shù)管，用計數(shù)儀計數(shù)，計算不同效靶比時的殺傷率。結(jié)果如圖11所示，可見Pl組、P2組、P3組和P4組在各效靶比對U251細胞均有特異性殺傷作用，且隨著效靶比增大，特異性殺傷作用逐漸增強，說明4個預(yù)測CTL表位肽 PI、P2、P3、P4均能有效激發(fā)CTL的細胞毒活性，從而特異性殺傷靶細胞。 3、肽特異性CTL分泌IFN- γ的能力檢測
采用ELISP0T檢測試劑盒進行檢測，具體操作參照試劑盒說明書調(diào)整效應(yīng)細胞密度至IXio6Ail，取100 μ 1鋪板，加入終濃度為IOM的肽(按實驗分組加入相應(yīng)肽)，刺激48小時后去除細胞，按試劑盒說明書依次加入一抗、二抗和顯色劑進行反應(yīng)，顯色晾干后讀數(shù)。結(jié)果如圖12所示，可見Pl組、P2組、P3組和P4組的斑點數(shù)均明顯高于陰性對照組，說明4個預(yù)測CTL表位肽PI、P2、P3、P4均具有良好的免疫原性，能夠有效激發(fā)CTL分泌 IFN- γ。綜合上述實驗結(jié)果4個預(yù)測CTL表位肽PI、P2、P3、P4均能以高親和力結(jié)合 HLA-A*0201，所形成的復(fù)合物穩(wěn)定，能夠誘導(dǎo)肽特異性的CTL應(yīng)答，刺激肽特異性CTL分泌高水平的IFN-Y并對腫瘤細胞產(chǎn)生特異性殺傷效應(yīng)，可得出以下結(jié)論4個預(yù)測CTL表位 Pl、P2、P3和P4均為腫瘤抗原Pokemon的HLA_A*0201限制性CTL表位，其對應(yīng)的表位肽 P1、P2、P3和P4可用于制備腫瘤治療性肽疫苗，例如神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療性肽疫苗。最后說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管通過參照本發(fā)明的優(yōu)選實施例已經(jīng)對本發(fā)明進行了描述，但本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以在形式上和細節(jié)上對其作出各種各樣的改變，而不偏離所附權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明的精神和范圍。
權(quán)利要求
1.腫瘤抗原Pokemon的HLA_A*0201限制性CTL表位，其特征在于氨基酸序列如SEQ ID No. 1、SEQ ID No. 2、SEQ ID No. 3 或 SEQ ID No. 4 所示。
2.權(quán)利要求1所述的腫瘤抗原Pokemon的HLA_A*0201限制性CTL表位在制備腫瘤治療性肽疫苗中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的腫瘤抗原Pokemon的HLA_A*0201限制性CTL表位的應(yīng)用，其特征在于所述腫瘤治療性肽疫苗為神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療性肽疫苗。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及腫瘤抗原Pokemon的HLA-A*0201限制性CTL表位及其應(yīng)用，該CTL表位的氨基酸序列如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3或SEQ ID No.4所示，能夠以高親和力結(jié)合HLA-A*0201，形成的復(fù)合物穩(wěn)定，能夠誘導(dǎo)肽特異性的CTL應(yīng)答，刺激肽特異性CTL分泌高水平的IFN-γ并對腫瘤細胞產(chǎn)生特異性殺傷效應(yīng)，可用于制備腫瘤治療性肽疫苗例如神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療性疫苗，在腫瘤特異性免疫治療領(lǐng)域有著潛在、良好的開發(fā)應(yīng)用前景。
文檔編號A61P35/00GK102229648SQ201110171178
公開日2011年11月2日 申請日期2011年6月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月23日
發(fā)明者吳玉章, 楊曌 申請人:中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)