專利名稱：一種鵝掌楸的生物堿提取物及其提取方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種樹木組織提取物及其提取方法和應(yīng)用，具體涉及一種鵝掌楸的生物堿提取物及其提取方法和抗腫瘤應(yīng)用。
背景技術(shù)：
木蘭科鵝掌楸屬僅有兩個(gè)種，一種為天然分布于美國(guó)東部的北美鵝掌楸，另一種為分布于我國(guó)南部的馬褂木。這兩個(gè)種在美國(guó)、中國(guó)和世界其他國(guó)家均有藥學(xué)歷史記載。 北美鵝掌楸，即郁金香樹或黃楊樹，是一種高大的樹種，通?？蛇_(dá)一百英尺高，是美國(guó)東部 (Keeler，1902)特有的樹種。北美鵝掌楸的樹皮被印第安人用作補(bǔ)品、興奮劑和退熱藥， 并有可能用于治療由瘧疾引起的間歇性發(fā)燒(Rafinesque等，1828)。北美鵝掌楸在美國(guó)歷史上被用作抗瘧疾藥物近年來被大量證實(shí)(R. Graziosea, T. Rathinasabapathy, C. Lategan, et al. 2011)。它還被后來的美國(guó)移民作為進(jìn)口稀缺的秘魯樹皮(金雞納樹皮) (Thacher, 1967)的替代品。在印度，北美鵝掌楸被用來治療恢復(fù)、風(fēng)濕、消化不良(S. K. Kuanar, 2006)。在中國(guó)，其近緣種馬褂木的樹皮、葉和根在傳統(tǒng)中醫(yī)中被用來治療風(fēng)濕和由于風(fēng)邪入侵(風(fēng)寒)導(dǎo)致的咳嗽(江蘇新醫(yī)學(xué)院，2001年)。1963年，一個(gè)新的雜交種，馬褂木X北美鵝掌楸，由中國(guó)學(xué)者葉培忠教授成功培育。無論是在林木遺傳育種理論上，還是在園林種植上都有驕人研究成果(Wang ZR，2003年)。然而，到目前為止，雜交樹的藥用價(jià)值尚未得到研究，尤其在治療腫瘤的藥物研究中。癌癥每年在全球造成數(shù)百萬人死亡。在逆轉(zhuǎn)、抑制甚至預(yù)防癌癥中，植物藥單獨(dú)或聯(lián)合的醫(yī)藥干預(yù)在與腫瘤治療中起到了關(guān)鍵作用(Siveen KS，Kuttan G. 2010)。人們對(duì)替代藥品和無毒的抗腫瘤治療方法越來越感興趣。據(jù)報(bào)道，民族藥或功能食品中的某些活性成分的對(duì)癌癥有效，而且對(duì)正常的動(dòng)物細(xì)胞是安全的(Hakimuddin et al.，2006)。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的是提供一種鵝掌楸的生物堿提取物。本發(fā)明的另一目的是提供一種提取上述提取物的方法。本發(fā)明還有一目的是提供一種上述提取在在制備用于治療癌細(xì)胞藥物中的應(yīng)用。技術(shù)方案為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下
一種鵝掌楸的生物堿提取物，由如下方法得到取鵝掌楸植物材料，35°C烘干，粉碎； 用10%氨水浸潤(rùn)12h，過濾，得殘?jiān)? h后，用氯仿回流2 h，過濾，濃縮，用的鹽酸萃取3飛次，將鹽酸萃取液用10%的氨水調(diào)節(jié)pH > 8，然后用氯仿萃取2 3次，過濾，合并，蒸干得總生物堿提取物。生物堿質(zhì)量占總生物堿提取物質(zhì)量的20-90%。所述鵝掌楸植物材料為3種鵝掌楸的葉和樹皮。所述3種鵝掌楸植物為馬褂木、北美鵝掌楸，以及雜交馬褂木?！N提取鵝掌楸的生物堿提取物的方法，包括取鵝掌楸植物材料，35°C烘干，粉碎；用10%氨水浸潤(rùn)12h，過濾，得殘?jiān)? h后，用氯仿回流2 h，過濾，濃縮，用的鹽
3酸萃取3飛次，將鹽酸萃取液用10%的氨水調(diào)節(jié)pH > 8，然后用氯仿萃取2 3次，過濾，合并，蒸干得總生物堿提取物。上述的鵝掌楸的生物堿提取物在制備用于治療癌癥細(xì)胞藥物中的應(yīng)用。所述的癌癥細(xì)胞包括乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、乳腺癌細(xì)胞MCF-7、胃癌細(xì)胞 SGC-7901、肝癌細(xì)胞Huh7和結(jié)腸癌細(xì)胞HCT15。有益效果本發(fā)明的鵝掌楸的生物堿提取物，突出的優(yōu)點(diǎn)包括制備工藝簡(jiǎn)單，產(chǎn)物得率高，可以制備生物堿含量不同的提取物，該提取物具有良好的抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、 增值與轉(zhuǎn)移能力，在制備用于治療癌癥細(xì)胞藥物中的具有廣泛的用途，具有一定的實(shí)用性， 能夠產(chǎn)生很好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。以下實(shí)施例所使用的材料為新鮮鵝掌楸的葉子和樹皮由南京林業(yè)大學(xué)收集，所有收集的標(biāo)本進(jìn)行系統(tǒng)鑒定，干燥標(biāo)本保存在于南京理工大學(xué)。乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、乳腺癌細(xì)胞MCF-7、胃癌細(xì)胞SGC-7901、肝癌細(xì)胞Huh7和結(jié)腸癌細(xì)胞HCT15均來自南京醫(yī)科
大學(xué)第一附屬醫(yī)院。以下實(shí)施例所使用的藥品為沒食子酸(GA)、福林酚(2M)、MTT (3- ，5-甲基-2-基]-2，3-diphenyltetrazodium溴)、氟脲嘧啶和阿霉素，均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，其他所有化學(xué)品為分析試劑。實(shí)施例1
取新鮮采集的鵝掌楸材料，將樹葉和樹皮分開，并立即在空氣中35°C烘干。將干料研磨到中等細(xì)粉末，約40目，備用。取鵝掌楸植物材料350g，35°C烘干，粉碎至約40目的細(xì)粉末；用10%氨水浸潤(rùn) 12h，過濾，得殘?jiān)?；Ih后，用2 L氯仿回流2 h，過濾，濃縮，用的鹽酸萃取5次，100 mL/次，將鹽酸萃取液用10%的氨水調(diào)節(jié)pH > 8，然后用氯仿萃取，100 mL/次，總計(jì)3次，過濾，合并，蒸干得總生物堿提取物。各鵝掌楸屬的葉子和樹皮中提取的方法與上述相同，各不同植物材料的提取物重量如表1所示。表1不同植物材料的提取物得率表
表中，LT 北美鵝掌楸；LC 馬褂木；LX 馬褂木X北美鵝掌楸；B 樹皮；L 樹葉。總生物堿測(cè)定方法
(1) Dragendorff reagent (DR)稱取0. 8g的硝酸鉍溶解在40mL蒸餾水+IOmL冰醋酸中，然后與20mL 40%的碘化鉀溶液混合。(2 )標(biāo)準(zhǔn)曲線取18. 39mg硝酸鉍溶解在5mL濃硝酸中，然后用蒸餾水定容至IOOmL,得硝酸鉍儲(chǔ)存溶液。取硝酸鉍儲(chǔ)存溶液樣稀釋成379. 1,284. 3,213. 3、160. 0,120. 0、 90. 0,67. 5,50. 6和38. 0 μ mol/L，取各稀釋溶液ImL,向其中加入3%的硫脲5mL，在435nm 中測(cè)定形成的黃色復(fù)合物的吸光度，作回歸曲線。(3)標(biāo)準(zhǔn)溶液在5mL蒸餾水中溶解5mg boIdine (波爾定堿，N-甲基六駁堿)。稱取0. 15g總生物堿提取物同樣溶解在5mL蒸餾水中。(4)用0. OlM HCl溶液調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液的pH=2 2. 5，分別加入2mL DR溶液形成橙色沉淀，在5000rpm離心15min，在離心所得上清液中再加入DR，檢查是否沉淀完全，收集離心所得的沉淀。(5)在沉淀中加入2mL 1%的硫化鈉溶液，形成褐黑色沉淀，然后5000rpm離心 15min，在上清液中加入1%的硫化鈉溶液，檢查沉淀是否完全，收集沉淀。(6)沉淀溶解在2mL硝酸溶液中，加熱，聲波降解，蒸餾水定容至10mL，取ImL上述溶液加入5mL3%硫脲，產(chǎn)生黃色的鉍復(fù)合物，在435nm下測(cè)定其吸光度?？偵飰A含量結(jié)果表示為NIB的百分重量。具體測(cè)定結(jié)果如表2所示。(7)計(jì)算方法生物堿 ％=n樣 X 1/1000X10X313. 3511/1000 (mg)/m樣 X100% ；η樣 =A樣/A對(duì)Xn對(duì)(umol/L);根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線及boldine與鉍的摩爾比為1:1，得到A對(duì)所對(duì)應(yīng)的摩爾量；A對(duì)為對(duì)照品吸光度，A樣為樣品，M(去甲基波爾丁堿)=313. 3511mol/L, m# =若干mg。表2從植物葉和樹皮中抽提出的生物堿提取物成份表
權(quán)利要求
1.一種鵝掌楸的生物堿提取物，其特征在于，由以下方法制得取鵝掌楸植物材料， 35°C烘干，粉碎；用10%氨水浸潤(rùn)12h，過濾，得殘?jiān)? h后，用氯仿回流2 h，過濾，濃縮， 用的鹽酸萃取3飛次，將鹽酸萃取液用10%的氨水調(diào)節(jié)pH > 8，然后用氯仿萃取2 3 次，過濾，合并，蒸干得總生物堿提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鵝掌楸的生物堿提取物，其特征在于生物堿提取物提取物的生物堿質(zhì)量含量為20-90%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鵝掌楸的生物堿提取物，其特征在于所述鵝掌楸植物材料為鵝掌楸的葉和樹皮。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鵝掌楸的生物堿提取物，其特征在于所述鵝掌楸植物為中國(guó)馬褂木、北美鵝掌楸，以及雜交馬褂木。
5.一種提取鵝掌楸的生物堿提取物的方法，其特征在于，包括取鵝掌楸植物材料， 35°C烘干，粉碎；用10%氨水浸潤(rùn)12h，過濾，得殘?jiān)? h后，用氯仿回流2 h，過濾，濃縮， 用的鹽酸萃取3飛次，將鹽酸萃取液用10%的氨水調(diào)節(jié)pH > 8，然后用氯仿萃取2 3 次，過濾，合并，蒸干得總生物堿提取物。
6.權(quán)利要求1所述的鵝掌楸的生物堿提取物在制備用于治療癌癥細(xì)胞藥物中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于所述的癌癥細(xì)胞包括乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-231、乳腺癌細(xì)胞MCF-7、胃癌細(xì)胞SGC-7901、肝癌細(xì)胞Huh7和結(jié)腸癌細(xì)胞HCT15。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種鵝掌楸的生物堿提取物及其提取方法和應(yīng)用，鵝掌楸的生物堿提取物由如下方法得到取鵝掌楸植物材料，35℃烘干，粉碎至約40目的細(xì)粉末；用10％氨水浸潤(rùn)12h，過濾，得殘?jiān)?h后，用2L氯仿回流2h，過濾，濃縮，用1%~2%的鹽酸萃取5次，100mL/次，將鹽酸萃取液用10%的氨水調(diào)節(jié)pH＞8，然后用氯仿萃取，100mL/次，總計(jì)3次，過濾，合并，蒸干得總生物堿提取物。鵝掌楸的生物堿提取物，提取方法簡(jiǎn)單，方便，生物堿得率高，該提取物具有良好的抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、增值與轉(zhuǎn)移能力，在制備用于治療癌癥細(xì)胞藥物中的具有廣泛的用途，具有一定的實(shí)用性，能夠產(chǎn)生很好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
文檔編號(hào)A61K127/00GK102335234SQ20111022538
公開日2012年2月1日 申請(qǐng)日期2011年8月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月8日
發(fā)明者施季森, 賈愛群, 陳金慧, 魏繼福 申請(qǐng)人:南京林業(yè)大學(xué)