專利名稱：一種姜黃素固體脂質(zhì)納米粒作為治療哮喘藥物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥材料技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種姜黃素固體脂質(zhì)納米粒的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
姜黃素為常用傳統(tǒng)中藥，安全無(wú)毒，對(duì)哮喘具有明顯的療效，但是姜黃素不溶于水，難溶于油，僅僅溶于一些有機(jī)溶劑，生物體對(duì)姜黃素的吸收利用度非常低，還不到給藥的1%，而且利用度個(gè)體差異極大，也給姜黃素的應(yīng)用帶來(lái)很大的限制。要解決姜黃素生物利用度差、給藥難的問(wèn)題，將其發(fā)展成為治療和控制哮喘的新藥，就要引入適合的載藥體系，這也是近幾年對(duì)姜黃素研究較為熱門的一個(gè)領(lǐng)域。目前國(guó)內(nèi)外研究較多的適用于姜黃素的載藥體系有微球、多聚物、脂質(zhì)體、固體脂質(zhì)納米粒(SLN)等等，這方面的文獻(xiàn)往往都是用于腫瘤治療及克服其它腫瘤藥物耐藥性方面的研究，或者僅限于如何提高姜黃素的穩(wěn)定性和生物利用度，而在哮喘治療與控制方面的研究國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)。·

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺陷而提供一種姜黃素固體脂質(zhì)納米粒(SLN-Curcumin)作為治療哮喘藥物的應(yīng)用。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案本發(fā)明采用目前研究較為成熟安全、體內(nèi)可降解的固體脂質(zhì)納米粒(SLN)作為姜黃素的載藥體系。并且具有很強(qiáng)的肺部靶向性，非常適合應(yīng)用于肺部疾病。一種姜黃素固體脂質(zhì)納米粒作為治療哮喘藥物的應(yīng)用。所述的姜黃素固體脂質(zhì)納米粒的給藥方式為口服、注射或霧化給藥。所述的姜黃素固體脂質(zhì)納米粒對(duì)大鼠的有效用量的范圍是每次5mg/kg 20mg/kg,每日一次。所述的姜黃素固體脂質(zhì)納米粒對(duì)大鼠的給藥周期為兩周，每周五天。所述的姜黃素固體脂質(zhì)納米粒，每IOOmg包含以下組份及其含量姜黃素15 40mg，脂質(zhì)基質(zhì)15 40mg,卵磷脂8 20mg，表面活性劑10_30mg。所述的脂質(zhì)基質(zhì)選自脂肪酸、甘油酯或甘油三酯，優(yōu)選硬脂酸、棕櫚酸、二十二碳烷酸、三硬脂酸甘油酯或膽固醇。所述的表面活性劑選自Myrj53(聚氧乙烯(50)硬脂酸酯)、Tween-20 (聚氧乙烯山梨醇酐單月桂酸酯)、Tween-80 (聚氧乙烯去水山梨醇單油酸酯)或去氫膽酸鈉。所述的姜黃素固體脂質(zhì)納米粒的粒徑為50-200nm，平均粒徑為65nm。按照每只大鼠250g計(jì)算，稱取SLN-姜黃素I. 25 5mg溶于ImL的PBS (O. 01M,PH 7.4)中，充分混合后腹腔注射/ 口服給藥，每天給藥一次，每周五天，持續(xù)給藥2周。
提高姜黃素的可注射性，提高姜黃素的在體內(nèi)血藥濃度以及對(duì)肺部的靶向性，首次將其應(yīng)用于哮喘治療，在大鼠哮喘模型上取得了和地塞米松磷酸鈉DSP相當(dāng)?shù)寞熜?，氣道水平恢?fù)到PBS陰性對(duì)照組水平，且沒(méi)有明顯毒副作用。一種上述姜黃素固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，包含以下步驟(I)稱取脂質(zhì)基質(zhì)15 40mg,卵磷脂8 20mg,姜黃素15 40mg,溶于10_30ml有機(jī)溶劑，形成有機(jī)相；(2)準(zhǔn)確稱取10-30mg表面活性劑，超聲溶于30_90ml去離子水，形成水相，將水相倒入3 口燒瓶中，加熱，攪拌；(3)將有機(jī)相勻速注入到水相中，800-2000rpm, 68-78 °C條件下攪拌至體系剩余3-8ml，即體系呈現(xiàn)膠狀，撤去水浴鍋，迅速倒入準(zhǔn)備好的4°C去離子水，室溫下，繼續(xù)1200rpm攪拌2小時(shí)；(4)收取三口燒瓶中的反應(yīng)產(chǎn)物，12000-20000rpm，離心6-18h，去上清，去離子水重懸，12000-20000rpm，離心6h，去上清，沉淀產(chǎn)物冷凍干燥成粉末。所述的步驟⑴的有機(jī)溶劑選自氯仿、環(huán)己烷、叔丁醇、二氯甲烷和甲醇混合體系或丙酮和乙醇的混合體系等。所述的步驟(2)的加熱溫度為68-78°C，攪拌速度為800-2000rpm，攪拌時(shí)間為lh。本發(fā)明制備的50 60nm的納米姜黃素,通過(guò)小鼠血藥濃度監(jiān)測(cè),發(fā)現(xiàn)SLN-姜黃素能夠提高單純藥物的血藥濃度(AUC)高達(dá)29. 4倍。在此基礎(chǔ)上，開展了 SLN-姜黃素、姜黃素血藥濃度比較、傳統(tǒng)糖皮質(zhì)激素類藥物DSP對(duì)SD哮喘大鼠的藥效比較，研究結(jié)果表明，SLN-姜黃素不僅能夠使大鼠氣道阻力恢復(fù)到PBS對(duì)照組水平，而且大鼠體重保持初發(fā)水平(DSP組大鼠體重下降了 20% )，顯示其具有很好的安全性。在哮喘大鼠模型上的實(shí)驗(yàn)也證實(shí)SLN-姜黃素?zé)o任何明顯毒副作用，而且僅僅采用很小的劑量對(duì)于哮喘大鼠就具有比地塞米松磷酸鈉(DSP)更好的療效，SLN-姜黃素安全有效、毒副作用小，是非常有醫(yī)療應(yīng)用潛力的抗哮喘新藥。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)I、本發(fā)明將傳統(tǒng)中藥姜黃素用固體納米脂質(zhì)體載藥后，提高了姜黃素的可注射性，提高姜黃素的生物利用度達(dá)約30倍，提高姜黃素的肺部靶向性。2、本發(fā)明SLN-姜黃素能夠有效治療哮喘，恢復(fù)氣道阻力到正常水平，且安全無(wú)明顯毒副作用，具有很大的市場(chǎng)開發(fā)潛力。3、本發(fā)明涉及的反應(yīng)體系相對(duì)較穩(wěn)定，技術(shù)操作較簡(jiǎn)單、特別是產(chǎn)物處理方便簡(jiǎn)捷，易于工業(yè)化。


圖I是SLN-姜黃素TEM粒徑分析。圖2是SLN-姜黃素表面電位分析。圖3是XRD圖譜分析(a)姜黃素；(b) SLN納米粒子空載體；(c) SLN-姜黃素納米載藥體系。圖4 是 SLN-姜黃素體外緩釋曲線(PBS (O. 01M, pH 7. 4，I % Tween (吐溫)80))。圖5是小鼠體內(nèi)血藥濃度變化曲線。(▲ )SLN_姜黃素給藥組；(■)姜黃素給藥組。圖6是小鼠體內(nèi)藥物組織分布圖。圖7是SD大鼠氣道阻力。(▲)姜黃素給藥組；(■ ) SLN-姜黃素給藥組；( )哮喘陽(yáng)性對(duì)照組(·)PBS陰性對(duì)照組。數(shù)據(jù)表示為means土SEM(平均值土標(biāo)準(zhǔn)誤差)。圖8是SD大鼠哮喘模型肺部盥洗液中IL-4表達(dá)水平。Cp < O. 05 ；**p < 0.01,和OVA陽(yáng)性對(duì)照組比較)。
具體實(shí)施方式

實(shí)施例I稱取硬脂酸40mg,卵磷脂20mg,姜黃素40mg,溶于IOml氯仿；將有機(jī)相用10#針頭勻速注入到含有30mg Myr j53的已經(jīng)預(yù)熱至75°C的水相30ml中，1200rpm攪拌大約I小時(shí),等到體系剩余5ml,撤去水浴鍋,迅速倒入準(zhǔn)備好的4°C去離子水，室溫下繼續(xù)1200rpm攪拌2小時(shí)，充分離心收取樣品，PBS清洗兩次，冷凍干燥，得藥物成品。SLN-姜黃素粒徑為50_200nm，呈圓形(如圖I)，表面帶負(fù)電荷，表面電位為-20mV(如圖2)。通過(guò)XRD分析表明SLN-姜黃素具有SLN的所有特征峰，同時(shí)具有姜黃素的部分特征峰，表明SLN將姜黃素包裹在脂質(zhì)中，二者有機(jī)結(jié)合(如圖3)。在體外通過(guò)透析袋法對(duì)SLN-姜黃素進(jìn)行藥物緩釋實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明在I % Tween 80的PBS溶液中，SLN-姜黃素的藥物釋放可達(dá)5天以上，2天左右藥物的釋放達(dá)到50% (如圖
4)。在血藥濃度實(shí)驗(yàn)中，采用BALB/C實(shí)驗(yàn)小鼠共計(jì)3組，每組3只，分別為PBS組，SLN-姜黃素給藥組和姜黃素給藥組，以所含姜黃素為計(jì)量，腹腔給藥，200mg/kg，分別于不同時(shí)間點(diǎn)取血樣，于I小時(shí)時(shí)間點(diǎn)取組織，HPLC定量分析，分別計(jì)算血藥濃度和組織分布，發(fā)現(xiàn)在姜黃素給藥組中，血液中姜黃素濃度幾乎不可測(cè)，而在SLN-姜黃素組中，血藥濃度AUC可達(dá)單純藥物的29. 4倍(如圖5)。根據(jù)基于蛋白的藥物濃度，SLN-姜黃素具有很強(qiáng)的肺部靶向性(如圖6)。采用卵白蛋白建立SD大鼠的過(guò)敏性哮喘模型，在成功建立SD大鼠支氣管哮喘模型的基礎(chǔ)上，隨機(jī)分4組，每組10只，分別設(shè)為陽(yáng)性對(duì)照組、姜黃素給藥組、SLN-姜黃素給藥組，給藥計(jì)量為10mg/kg，腹腔注射給藥；同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照組。連續(xù)給藥2周(5天/周)，測(cè)試大鼠肺部氣道阻力。SLN能夠顯著提高姜黃素的治療效果，使得哮喘大鼠的氣道阻力恢復(fù)到陰性對(duì)照組水平(如圖7所示)。同時(shí)SLN-姜黃素給藥組的大鼠肺部灌洗液中IL-4表達(dá)水平相對(duì)哮喘陽(yáng)性對(duì)照組合單純藥物給藥組都具有顯著差異性，基本上恢復(fù)到陰性對(duì)照組水平(如圖8)。實(shí)施例2稱取硬脂酸40mg，卵磷脂20mg，姜黃素20mg，溶于IOml氯仿；將有機(jī)相用10#針頭勻速注入到含有30mg Myrj53的水相30ml中，75°C，1200rpm攪拌大約I小時(shí)，等到體系剩余大約5ml,撤去水浴鍋,迅速倒入準(zhǔn)備好的4°C去離子水,室溫下繼續(xù)1200rpm攪拌2小時(shí)，充分離心收取樣品，PBS清洗兩次，冷凍干燥，得藥物成品。SLN-姜黃素粒徑為50-200nm，呈圓形，表面帶負(fù)電荷，表面電位為-25mV。在1%Tween80的PBS溶液中，SLN-姜黃素的藥物釋放可達(dá)7天以上，2天左右藥物的釋放達(dá)到45%。在血藥濃度實(shí)驗(yàn)中，采用BALB/C實(shí)驗(yàn)小鼠共計(jì)3組，每組3只，分別為PBS組，SLN-姜黃素給藥組和姜黃素給藥組，以所含姜黃素為計(jì)量，腹腔給藥，200mg/kg,分別于不同時(shí)間點(diǎn)取血樣，于I小時(shí)時(shí) 間點(diǎn)取組織，HPLC定量分析，分別計(jì)算血藥濃度和組織分布，發(fā)現(xiàn)在姜黃素給藥組中，血液中姜黃素濃度幾乎不可測(cè)，而在SLN-姜黃素組中，血藥濃度AUC可達(dá)單純藥物的26. 8倍。采用卵白蛋白建立SD大鼠的過(guò)敏性哮喘模型，隨機(jī)分4組，每組10只，分別設(shè)為陽(yáng)性對(duì)照組、姜黃素給藥組、SLN-姜黃素給藥組，給藥計(jì)量為20mg/kg，腹腔注射給藥；同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照組。連續(xù)給藥2周(5天/周)，測(cè)試大鼠肺部氣道阻力。SLN能夠顯著提高姜黃素的治療效果，使得哮喘大鼠的氣道阻力恢復(fù)到陰性對(duì)照組水平。實(shí)施例3稱取硬脂酸20mg，卵磷脂10mg，姜黃素15mg，溶于IOml氯仿；將有機(jī)相用10#針頭勻速注入到含有20mg Myrj53的水相30ml中，75°C，1200rpm攪拌大約2小時(shí)，等到體系剩余大約5ml,撤去水浴鍋,迅速倒入準(zhǔn)備好的4°C去離子水,室溫下繼續(xù)1200rpm攪拌2小時(shí)，充分離心收取樣品，PBS清洗兩次，冷凍干燥，得藥物成品。SLN-姜黃素粒徑為50-200nm，呈圓形，表面帶負(fù)電荷，表面電位為-25mV。在1%Tween80的PBS溶液中，SLN-姜黃素的藥物釋放可達(dá)5天以上，2天左右藥物的釋放達(dá)到48%。在血藥濃度實(shí)驗(yàn)中，采用BALB/C實(shí)驗(yàn)小鼠共計(jì)3組，每組3只，分別為PBS組，SLN-姜黃素給藥組和姜黃素給藥組，以所含姜黃素為計(jì)量，腹腔給藥，200mg/kg,分別于不同時(shí)間點(diǎn)取血樣，于I小時(shí)時(shí)間點(diǎn)取組織，HPLC定量分析，分別計(jì)算血藥濃度和組織分布，發(fā)現(xiàn)在姜黃素給藥組中，血液中姜黃素濃度幾乎不可測(cè)，而在SLN-姜黃素組中，血藥濃度AUC可達(dá)單純藥物的27倍。采用卵白蛋白建立SD大鼠的過(guò)敏性哮喘模型，隨機(jī)分4組，每組10只，分別設(shè)為陽(yáng)性對(duì)照組、姜黃素給藥組、SLN-姜黃素給藥組，給藥計(jì)量為5mg/kg，霧化器吸入給藥，同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照組。連續(xù)給藥2周(5天/周)，測(cè)試大鼠肺部氣道阻力。SLN能夠顯著提高姜黃素的治療效果，使得哮喘大鼠的氣道阻力恢復(fù)到陰性對(duì)照組水平。實(shí)施例4稱取硬脂酸20mg，卵磷脂15mg，姜黃素20mg，溶于IOml氯仿；將有機(jī)相用10#針頭勻速注入到含有30mg Myrj53的水相30ml中，70°C，1200rpm攪拌大約3小時(shí)，等到體系剩余大約5ml,撤去水浴鍋,迅速倒入準(zhǔn)備好的4°C去離子水,室溫下繼續(xù)1200rpm攪拌2小時(shí)，充分離心收取樣品，PBS清洗兩次，冷凍干燥，得藥物成品。SLN-姜黃素粒徑為50-200nm，呈圓形，表面帶負(fù)電荷，表面電位為-20mV。在1%Tween80的PBS溶液中，SLN-姜黃素的藥物釋放可達(dá)5天以上，2天左右藥物的釋放達(dá)到50%。在血藥濃度實(shí)驗(yàn)中，采用BALB/C實(shí)驗(yàn)小鼠共計(jì)3組，每組3只，分別為PBS組，SLN-姜黃素給藥組和姜黃素給藥組，以所含姜黃素為計(jì)量，腹腔給藥，200mg/kg,分別于不同時(shí)間點(diǎn)取血樣，于I小時(shí)時(shí)間點(diǎn)取組織，HPLC定量分析，分別計(jì)算血藥濃度和組織分布，發(fā)現(xiàn)在姜黃素給藥組中，血液中姜黃素濃度幾乎不可測(cè)，而在SLN-姜黃素組中，血藥濃度AUC可達(dá)單純藥物的28. 4倍。采用卵白蛋白建立SD大鼠的過(guò)敏性哮喘模型，隨機(jī)分4組，每組10只，分別設(shè)為陽(yáng)性對(duì)照組、姜黃素給藥組、SLN-姜黃素給藥組，給藥計(jì)量為20mg/kg，口服灌胃給藥，同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照組。連續(xù)給藥2周(5天/周)，測(cè)試大鼠肺部氣道阻力。SLN能夠顯著提高姜黃素的治療效果，使得哮喘大鼠的氣道阻力恢復(fù)到陰性對(duì)照組水平。上述的對(duì)實(shí)施例的描述是為便于該技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能理解和應(yīng)用本發(fā)明。熟悉本領(lǐng)域技術(shù)的人員顯然可以容易地對(duì)這些實(shí)施例做出各種修改，并把在此說(shuō)明的一般原理應(yīng)用到其他實(shí)施例中而不必經(jīng)過(guò)創(chuàng)造性的勞動(dòng)。因此，本發(fā)明不限于這里的實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的揭示，不脫離本發(fā)明范疇所做出的改進(jìn)和修改都應(yīng)該在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)?！?br> 權(quán)利要求
1.一種姜黃素固體脂質(zhì)納米粒作為治療哮喘藥物的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于所述的姜黃素固體脂質(zhì)納米粒的給藥方式為口服、注射或霧化給藥。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于所述的姜黃素固體脂質(zhì)納米粒對(duì)大鼠的有效用量的范圍是每次5mg/kg 20mg/kg,每日一次。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于所述的姜黃素固體脂質(zhì)納米粒對(duì)大鼠的給藥周期為兩周，每周五天。
5.一種權(quán)利要求1-4中任一所述的作為治療哮喘藥物的姜黃素固體脂質(zhì)納米粒，其特征在于每IOOmg姜黃素固體脂質(zhì)納米粒包含以下組份及其含量 姜黃素15 40mg， 脂質(zhì)基質(zhì)15 40mg, 卵磷脂8 20mg, 表面活性劑 10-30mg。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的姜黃素固體脂質(zhì)納米粒，其特征在于所述的脂質(zhì)基質(zhì)選自脂肪酸、甘油酯或甘油三酯，優(yōu)選硬脂酸、棕櫚酸、二十二碳烷酸、三硬脂酸甘油酯或膽固醇。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的姜黃素固體脂質(zhì)納米粒，其特征在于所述的表面活性劑選自聚氧乙烯(50)硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐單月桂酸酯、聚氧乙烯去水山梨醇單油酸酯或去氫膽酸鈉。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的姜黃素固體脂質(zhì)納米粒，其特征在于所述的姜黃素固體脂質(zhì)納米粒的粒徑為50-200nm，平均粒徑為65nm。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥材料技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種姜黃素固體脂質(zhì)納米粒的應(yīng)用。本發(fā)明將傳統(tǒng)中藥姜黃素用固體納米脂質(zhì)體載藥后，提高了姜黃素的可注射性，提高姜黃素的生物利用度達(dá)約30倍，提高姜黃素的肺部靶向性。本發(fā)明SLN-姜黃素能夠有效治療哮喘，恢復(fù)氣道阻力到正常水平，且安全無(wú)明顯毒副作用，具有很大的市場(chǎng)開發(fā)潛力。本發(fā)明涉及的反應(yīng)體系相對(duì)較穩(wěn)定，技術(shù)操作較簡(jiǎn)單、特別是產(chǎn)物處理方便簡(jiǎn)捷，易于工業(yè)化。
文檔編號(hào)A61K9/127GK102949344SQ201110253469
公開日2013年3月6日 申請(qǐng)日期2011年8月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月30日
發(fā)明者汪世龍, 朱融融, 王文銳 申請(qǐng)人:同濟(jì)大學(xué)