專利名稱：一種馬桑內(nèi)酯類物質(zhì)的提純方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物分離領(lǐng)域，尤其是涉及一種應(yīng)用超臨界萃取法提純馬桑內(nèi)酯類物質(zhì)的方法。
背景技術(shù)：
馬桑Cbriaria sinica Maxim.為馬?？岂R桑屬植物，是多年生落葉有毒的小喬木或灌木。其自然資源豐富，在我國(guó)分布廣泛。馬桑根部藥用，用于治風(fēng)濕麻木、風(fēng)火牙痛、痰飲、跌打損傷、燙火傷、急性結(jié)膜炎等。馬桑全株有毒，在民間有用于土農(nóng)藥的記載，馬桑提取物對(duì)多種咀嚼式害蟲(chóng)具有明顯的拒食和胃毒作用，可用作植物農(nóng)藥。馬桑內(nèi)酯類化合物是馬桑的主要活性成分，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有顯著的藥理作用。周莉君等研究表明馬桑提取物對(duì)真菌抑制效果顯著高于細(xì)菌，且醇提物抑菌效果優(yōu)于水提物。張雁冰等通過(guò)對(duì)羥基馬桑毒素和馬桑亭的殺蟲(chóng)活性實(shí)驗(yàn)，表明羥基馬桑毒素對(duì)小菜蛾具有明顯的拒食作用。此外，馬桑內(nèi)酯類化合物還可用于點(diǎn)燃癲癇模型，具有安全性好、對(duì)腦無(wú)直接機(jī)械損傷等優(yōu)點(diǎn)?，F(xiàn)有馬桑內(nèi)酯類化合物的提取方法有醇提，石油醚萃取除雜，大孔樹(shù)脂吸附，柱色譜及重結(jié)晶等方法得到。該方法能耗大，步驟繁多，制備量少。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種馬桑內(nèi)酯類物質(zhì)的提純方法，該方法操作簡(jiǎn)單，制備量大。本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
一種馬桑內(nèi)酯類物質(zhì)的提純方法，其特征在于包含以下步驟
1)超臨界萃取將馬桑藥材粉碎，過(guò)20目篩，置于萃取釜中，采用超臨界CO2萃取，通入甲醇作為夾帶劑參與萃取，收集萃取物；
2)石油醚脫脂向上述萃取物中加入3飛倍量石油醚回流提取2、次，離心分離固液， 得脫脂物；
3)柱層析將上述脫脂物進(jìn)行硅膠柱層析，用氯仿-甲醇洗脫，高效液相監(jiān)測(cè)，收集相應(yīng)流分，濃縮干燥得到馬桑內(nèi)酯類物質(zhì)。所述的馬桑內(nèi)酯類物質(zhì)包括馬桑毒素、羥基馬桑毒素、馬桑亭和馬桑寧等物質(zhì)。所述步驟1)中的萃取參數(shù)為萃取溫度為^_40°C，萃取壓力為20_30MPa，CO2流量為15-25L/h，萃取時(shí)間為2-4h，分離釜I溫度為20_30°C，壓力為6_12MPa，分離釜II溫度為 8-15°C，壓力為 4-8MPa。所述步驟3)中的硅膠粒度為10(Γ300目，洗脫劑氯仿-甲醇洗脫比例2 15 :5。本發(fā)明的積極效果是
(1)超臨界萃取，萃取過(guò)程耗能低，萃取劑(X)2來(lái)源豐富、清潔無(wú)污染；
(2)本發(fā)明采用溶劑萃取法精制馬桑內(nèi)酯類物質(zhì)，該法能快速的去處雜質(zhì)，得到純度高
3的馬桑內(nèi)酯類物質(zhì)，工藝簡(jiǎn)單，成本低，效率高。下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中硅膠柱層析采用高效液相監(jiān)測(cè)接收洗脫液，具體方法如下(參照文獻(xiàn)“馬桑籽中馬桑內(nèi)酯類化合物的提取分離及其活性”)
高效液相色譜條件
色譜柱0DS 柱 Q50mmX4· 6mmX5Mm)；
流動(dòng)相15%乙腈；
流速:lml/min ；
檢測(cè)波長(zhǎng)215nm ；
柱溫室溫。實(shí)施例1
取馬桑干燥藥材1kg，粉碎過(guò)20目篩，加入至萃取釜中，采用超臨界CO2萃取，通入 200ml甲醇作為夾帶劑參與萃取，設(shè)定萃取參數(shù)為萃取溫度40°C，萃取壓力20MPa，萃取時(shí)間2h，CO2通入的量為15L/h，設(shè)定分離釜I溫度為20°C，壓力為6MPa，分離釜II溫度為8°C， 壓力為4MPa，在分離釜II中收集萃取物，加入500ml石油醚回流提取4次，離心除去液體得馬桑內(nèi)酯類化合物粗提物；
取馬桑內(nèi)酯類化合物和等量硅膠混合，研勻，上硅膠(100目)柱層析，用氯仿-甲醇 (2-15:5)洗脫，每接收IOOml用高效液相色譜跟蹤，收集目標(biāo)流分，合并，減壓回收試劑，得到精制的由馬桑毒素、羥基馬桑毒素、馬桑亭和馬桑寧等組成的馬桑內(nèi)酯類物質(zhì)6. 7g。實(shí)施例2:
取馬桑干燥藥材1kg，粉碎過(guò)20目篩，加入至萃取釜中，采用超臨界CO2萃取，通入 300ml甲醇作為夾帶劑參與萃取，設(shè)定萃取參數(shù)為萃取溫度40°C，萃取壓力30MPa，萃取時(shí)間4h，CO2通入的量為25L/h，設(shè)定分離釜I溫度為30°C，壓力為12MPa，分離釜II溫度為 15°C，壓力為8MPa，在分離釜II中收集萃取物，加入800ml石油醚回流提取3次，離心除去液體得馬桑內(nèi)酯類化合物粗提物。取馬桑內(nèi)酯類化合物和等量硅膠混合，研勻，上硅膠(200目)柱層析，用氯仿-甲醇(2-15:5)洗脫，每接收IOOml用高效液相色譜跟蹤，收集目標(biāo)流分，合并，減壓回收試劑， 得到精制的由馬桑毒素、羥基馬桑毒素、馬桑亭和馬桑寧等組成的馬桑內(nèi)酯類物質(zhì)7. Sg。實(shí)施例3:
取馬桑干燥藥材^g，粉碎過(guò)20目篩，加入至萃取釜中，采用超臨界CO2萃取，通入 1.2L甲醇作為夾帶劑參與萃取，設(shè)定萃取參數(shù)為萃取溫度30°C，萃取壓力^MPa,萃取時(shí)間2. 5h，CO2通入的量為18L/h，設(shè)定分離釜I溫度為22°C，壓力為8MPa，分離釜II溫度為 13°C，壓力為6MPa，在分離釜II中收集萃取物，用2. 5L石油醚回流提取2次，離心除去液體得馬桑內(nèi)酯類化合物粗提物。取馬桑內(nèi)酯類化合物和等量硅膠混合，研勻，上硅膠(300目)柱層析，用氯仿-甲醇(2-15:5)洗脫，每接收IOOml用高效液相色譜跟蹤，收集目標(biāo)流分，合并，減壓回收試劑，得到精制的由馬桑毒素、羥基馬桑毒素、馬桑亭和馬桑寧等組成的馬桑內(nèi)酯類物質(zhì)33. 5g。實(shí)施例4:
取馬桑干燥藥材10kg，粉碎過(guò)20目篩，加入至萃取釜中，采用超臨界(X)2萃取，通入2L 甲醇作為夾帶劑參與萃取，設(shè)定萃取參數(shù)為萃取溫度35°C，萃取壓力20MPa，萃取時(shí)間池， CO2通入的量為22L/h，設(shè)定分離釜I溫度為25°C，壓力為lOMPa，分離釜II溫度為14°C，壓力為5MPa，在分離釜II中收集萃取物，用5L石油醚回流提取4次，離心除去液體得馬桑內(nèi)酯類化合物粗提物。取馬桑內(nèi)酯類化合物和等量硅膠混合，研勻，上硅膠(200目)柱層析，用氯仿-甲醇(2-15:5)洗脫，每接收IOOml用高效液相色譜跟蹤，收集目標(biāo)流分，合并，減壓回收試劑， 得到精制的由馬桑毒素、羥基馬桑毒素、馬桑亭和馬桑寧等組成的馬桑內(nèi)酯類物質(zhì)45. 7g。
權(quán)利要求
1.一種馬桑內(nèi)酯類物質(zhì)的提純方法，其特征在于包含以下步驟1)超臨界萃取將馬桑藥材粉碎，過(guò)20目篩，置于萃取釜中，采用超臨界CO2萃取，通入甲醇作為夾帶劑參與萃取，收集萃取物；2)石油醚脫脂向上述萃取物中加入3飛倍量石油醚回流提取2、次，離心分離固液， 得脫脂物；3)柱層析將上述脫脂物進(jìn)行硅膠柱層析，用氯仿-甲醇洗脫，高效液相監(jiān)測(cè)，收集相應(yīng)流分，濃縮干燥得到馬桑內(nèi)酯類物質(zhì)。
2.如權(quán)利要求所述的一種馬桑內(nèi)酯類物質(zhì)的提純方法，其特征在于所述的馬桑內(nèi)酯類物質(zhì)包括馬桑毒素、羥基馬桑毒素、馬桑亭和馬桑寧等物質(zhì)。
3.如權(quán)利要求所述的一種馬桑內(nèi)酯類物質(zhì)的提純方法，其特征在于所述步驟1)中的萃取參數(shù)為萃取溫度為^_40°C，萃取壓力為20-30MPa，C02流量為15_25L/h，萃取時(shí)間為 2-4h，分離釜I溫度為20-30°C，壓力為6-12MPa，分離釜II溫度為8_15°C，壓力為4_8MPa。
4.如權(quán)利要求所述的一種馬桑內(nèi)酯類物質(zhì)的提純方法，其特征在于所述步驟3)中的硅膠粒度為ΚΚΓ300目，洗脫劑氯仿-甲醇洗脫比例2 15 :5。
全文摘要
本發(fā)明涉及了一種馬桑內(nèi)酯類物質(zhì)的提純方法，尤其是涉及一種應(yīng)用超臨界萃取法提純馬桑內(nèi)酯類物質(zhì)的方法，方法步驟包括取馬桑藥材粉碎，置于超臨界萃取釜中，采用超臨界CO2萃取，在分離釜中收集萃取物，用石油醚回流脫除脂溶性雜質(zhì)，再采用硅膠柱層析，氯仿-甲醇洗脫，分離精制得馬桑內(nèi)酯類物質(zhì)。本發(fā)明工藝流程簡(jiǎn)單、消耗低、效率高、簡(jiǎn)單易操作，可實(shí)現(xiàn)大量制備。
文檔編號(hào)A61P31/10GK102327261SQ20111026427
公開(kāi)日2012年1月25日 申請(qǐng)日期2011年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月8日
發(fā)明者劉東鋒, 吳艷波 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司