專利名稱：組合物和傳遞藥劑的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于腸胃外或其他內(nèi)部使用、包含藥物活性劑的藥物組合物，其與可獲的類似藥物制劑比較時具有降低在給藥時某些不希望有的副作用的效果。
背景技術(shù)：
公認許多用于腸胃外使用的藥物，特別是靜脈內(nèi)給藥的那些，導致不希望有的副作用如靜脈刺激，靜脈炎，注射時的燒灼感和疼痛，靜脈血栓形成，外滲和其它給藥相關(guān)的副作用。這些藥物中的許多不溶于水，因此與增溶劑、表面活性劑、溶劑和/或乳化劑配制，當給藥于患者時這些增溶劑、表面活性劑、溶劑和/或乳化劑是刺激性的、變應性的或有毒的(參見例如，Briggs 等，Anesthesis 37，1099 (1982)，和 Waugh 等，Am. J. Hosp. Pharmacists, 48,1520(1991))。經(jīng)常，存在于制劑中的游離藥物在給藥后誘導疼痛或刺激。 例如，在作為晚期非小細胞肺癌的一線化學療法接受外周靜脈給藥異環(huán)磷酰胺和長春瑞濱的患者中，患者中的50%觀察到了靜脈炎。(參見例如Vallejo等，Am. J. Clin. Oncol.， 19 (6) ,584-8(1996))。此外，已經(jīng)顯示萬古霉素誘導副作用如靜脈炎(參見例如，Lopes Rocha 等，Braz. J. Infect. Dis. , 6 (4), 196-200 (2002)) 在實體瘤患者中使用順鉬、吉西他濱和STO416已經(jīng)導致不利事件如深度靜脈血栓形成和靜脈炎(參見例如，Kuenen等， J. Clin. Oncol. , 20 (6), 1657-67 (2002)) 0另外，丙泊酚(一種麻醉劑)在注射時可以誘導疼痛，燒灼感和靜脈刺激，特別是當作為卵磷脂穩(wěn)定的脂肪乳劑給藥時(參見例如，Tan等， Anathesia, 53,468-76, (1998))。其它顯示給藥相關(guān)副作用的藥物包括例如泰素(紫杉醇) (參見例如，泰素的包裝說明書I. V. )，codarone (鹽酸胺碘酮)(參見例如，Codarone的包裝說明書)，甲狀腺激素T3或碘塞羅寧(可作為復方碘塞羅寧商購)，塞替派，博來霉素，和診斷放射造影劑。與制備注射用藥物、特別是水不溶性藥物相關(guān)的另一問題是確保無菌。通過在制備前將所有組分絕對消毒，接著通過在所有制備階段中的絕對無菌技術(shù)可以完成藥物乳劑 /分散體的無菌制備。然而，這些方法耗時且昂貴。另外，在制備或貯存期間通過暴露于空氣而氧化藥物制劑可以導致例如降低的PH，藥物降解，和變色，由此使藥物制劑不穩(wěn)定和/ 或減小了貯藏壽命。為了避免藥物制劑與給藥相關(guān)的副作用有關(guān)的問題，已經(jīng)嘗試代替的制劑。例如關(guān)于丙泊酚，降低丙泊酚誘導的疼痛的方法包括增加溶劑的脂肪含量(例如長鏈甘油三酸酯(LCT))，術(shù)前用藥法，用非留族藥物預處理，局部麻醉，阿片樣物質(zhì)，加入利多卡因， 加入環(huán)糊精，和微量過濾法(參見例如，Mayer等，Anaesthesist, 45 (11), 1082-4(1996), Davies, 等 Anaesthesia,57,557-61 (2002), Doenicke, 等，Anaesth. Analg. ,82, 472-4(1996)，Larsen 等，Anaesthesitis, 50,842-5(2001), Lilley 等，Anaesthesia,51， 815-8 (1996)，Bielen 等，Anaesth. Analg.，82 (5)，920-4 (1996)，和 Knibbe 等，Br. J. Clin. Pharmacol.，47 (6)，653-60 (1999))。然而，這些制劑誘導其它副作用(例如心血管并發(fā)癥) 或?qū)е卤捶又苿┑牟环€(wěn)定。為了克服細菌污染的問題，已經(jīng)用抗菌劑如EDTA等價物(如乙二胺四乙酸鹽)、 噴替酸鹽或含亞硫酸鹽的試劑開發(fā)丙泊酚制劑，或者將它們用較低PH配制(參見例如，美國專利 5，714，520,5, 731，355,5, 731，356,6, 028，108,6, 100，302,6, 147，122,6, 177，477、 6，399，087、6，469，069和國際專利申請?zhí)朩O 99/39696)。然而，由于乙二胺四乙酸鹽和噴替酸鹽是金屬離子螯合劑，它們具有從身體細胞中清除必需金屬離子的危險潛力。此外，將亞硫酸鹽加入藥物制劑對兒科人群和對硫敏感的普通人群中的那些帶來了潛在的不利作用。因此，仍需要降低或消除與腸胃外或體內(nèi)給藥藥物有關(guān)的副作用的組合物和方法。還需要無菌的藥物組合物和制備這種組合物的方法。另外，需要降低或消除藥物制劑氧化以防止藥物不穩(wěn)定的藥物組合物和方法。本發(fā)明提供這些組合物和方法。本發(fā)明的這些和其它優(yōu)勢以及另外的發(fā)明特征將從這里提供的本發(fā)明的描述中變得明顯。發(fā)明概述本發(fā)明提供藥物組合物的各種實施方案。各種實施方案中的一個，一些或所有性能可以在本發(fā)明不同的實施方案中發(fā)現(xiàn)并且仍然屬于后附權(quán)利要求的范圍內(nèi)。本發(fā)明提供一種包含藥劑和藥用載體的藥物組合物，其中所述藥用載體包含蛋白質(zhì)如清蛋白，更優(yōu)選人血清清蛋白，其量有效降低一種或多種將藥物組合物給藥于人的副作用，且其中所述藥用載體包含去鐵胺，其量有效抑制藥物組合物中的微生物生長。本發(fā)明還提供包含藥劑和藥用載體的藥物組合物，其中所述藥用載體包含蛋白質(zhì)如清蛋白，其量有效降低一種或多種將藥物組合物給藥于人的副作用，且其中所述藥用載體包含去鐵胺， 其量有效抑制藥物組合物中的氧化。本發(fā)明提供降低一種或多種與將藥物組合物給藥于人相關(guān)的副作用的方法，該方法包含(a)向人給藥包含藥劑和藥用載體的藥物組合物，其中所述藥用載體包含清蛋白和去鐵胺。本發(fā)明還提供用于在藥物組合物中抑制微生物生長，或抑制氧化，或抑制微生物生長和氧化的方法。這些方法包含制備包含藥劑和藥用載體的藥物組合物，其中所述藥用載體以有效抑制藥物組合物中微生物生長的量或以有效抑制藥物組合物氧化的量包含去鐵胺。本發(fā)明還提供用于增強藥劑向虛弱部位轉(zhuǎn)運的方法，該方法包含向人給藥包含藥劑和藥用載體的藥物組合物，其中所述藥用載體包含清蛋白，且其中清蛋白與藥物組合物中的藥劑的比率為約18 1或更小。本發(fā)明進一步提供用于增強藥劑與體外或體內(nèi)細胞結(jié)合的方法，該方法包含向所述體外或體內(nèi)細胞給藥包含藥劑和藥用載體的藥物組合物， 其中所述藥用載體包含清蛋白，且其中清蛋白與藥物組合物中的藥劑的比率為約18 1或更小。本發(fā)明還提供包含藥劑和藥用載體的藥物組合物，其中所述藥用載體以有效增加藥物向人虛弱部位轉(zhuǎn)運的量包含清蛋白，且其中清蛋白與藥劑的比率為約18 1或更小。本發(fā)明進一步提供通過將所述藥劑與蛋白質(zhì)組合來增加藥劑向體外或體內(nèi)細胞轉(zhuǎn)運的方法，其中所述蛋白質(zhì)結(jié)合所述細胞上的特異細胞表面受體，其中所述蛋白質(zhì)-藥劑組合與所述受體的結(jié)合導致轉(zhuǎn)運發(fā)生，且其中清蛋白與藥劑的比率為約18 1或更小。發(fā)明詳述本發(fā)明提供一種包含藥劑和藥用載體的藥物組合物，其中所述藥用載體包含蛋白質(zhì)如清蛋白，優(yōu)選人血清清蛋白，其量有效降低一種或多種將藥物組合物給藥于人的副作用，且其中所述藥用載體包含去鐵胺，其量有效抑制藥物組合物中的微生物生長。本發(fā)明還提供包含藥劑和藥用載體的藥物組合物，其中所述藥用載體包含蛋白質(zhì)如清蛋白，其量有效降低一種或多種將藥物組合物給藥于人的副作用，且其中所述藥用載體包含去鐵胺，其量有效抑制藥物組合物中的氧化。任何適當?shù)乃巹┛梢杂糜诒景l(fā)明的藥物組合物中。適當?shù)乃巹┌ǖ幌抻诳拱﹦┗蚩鼓[瘤藥，抗微管劑，免疫抑制劑，麻醉劑，激素，用于心血管病癥的藥劑，抗心率失常藥，抗生素，抗真菌劑，抗高血壓藥，抗喘藥，鎮(zhèn)痛藥，抗炎藥，抗關(guān)節(jié)炎劑，和血管活性劑。本發(fā)明還與許多其它藥物類別有效。更具體地，適當?shù)乃巹┌ǖ幌抻谧仙纪轭悾?例如泰素 (紫杉醇)，和泰索帝TM(多西他賽))，埃坡霉素(印othilones)，喜樹堿，秋水仙堿，胺碘酮，甲狀腺激素類，血管活性肽(例如血管活性腸肽)，兩性霉素，皮質(zhì)甾類，丙泊酚，褪黑激素，環(huán)孢菌素，雷帕霉素(西羅莫司)，他克莫司，麥考酚酸，異環(huán)磷酰胺，長春瑞濱，萬古霉素，吉西他濱，STO416，塞替派，博來霉素，診斷放射造影劑，及它們的衍生物?？梢杂糜诒景l(fā)明組合物的其它藥物描述于例如美國專利5，916，596和共同待審的美國專利申請?zhí)?09/446，783，優(yōu)選地，藥劑是丙泊酚，紫杉醇，或多西他賽。更優(yōu)選地，藥劑是丙泊酚或紫杉醇。最優(yōu)選地，藥劑是丙泊酚。泰素 (紫杉醇)(Bristol-Myers Squibb)對卵巢癌、乳腺癌、肺癌、食管癌和頭頸癌有活性。然而，泰素已經(jīng)顯示誘導與給藥有關(guān)的毒性，以及顯著的急性和累積毒性，如骨髓抑制，中性粒細胞減少性發(fā)熱，過敏反應，和周圍神經(jīng)病。因為紫杉醇難溶于水，典型地將聚氧乙烯蓖麻油(cremophor)用作溶劑，需要大輸注體積和特別的導管和濾器。聚氧乙烯蓖麻油與副作用相關(guān)，這些副作用可以是嚴重的，包括過敏癥和其它過敏性反應，這可能要求用皮質(zhì)甾類、抗組胺和H2阻斷劑預處理(參見例如，Gelderblom等，Eur. J of Cancer, 37,1590-1598, (2001)) 0泰索帝 (多西他賽)用于治療抗蒽環(huán)霉素的乳腺癌，但是也已經(jīng)顯示誘導過敏和體液潴留的副作用，這可能是嚴重的。埃坡霉素(及其衍生物)也典型地在聚氧乙烯蓖麻油中給藥，并且已經(jīng)顯示誘導嚴重的中性粒細胞減少，過敏和神經(jīng)病。丙泊酚(2，6_ 二異丙基苯酚)是疏水性的、水不溶性油，廣泛用作靜脈麻醉藥來誘導和保持人和動物的全身麻醉和鎮(zhèn)靜。丙泊酚典型地直接給藥于血流中并通過血腦屏障。包含丙泊酚的藥物組合物必須具有足夠的脂溶性以通過該屏障和抑制大腦的相關(guān)機制。丙泊酚在水中在22. 5°C具有的最大溶解度為1. 0+/-0. 02μΜ(參見例如，Tonner等， Anesthesiology，77，926-931 (1992))。因此，丙泊酚通常作為含有增溶劑、表面活性劑、溶劑的乳劑配制，或作為水包油型乳劑配制(參見例如，U. S.專利6，150，423,6, 326，406和6，362，234)。除了活性藥劑以外，本發(fā)明的組合物還包括藥物載體或賦形劑。載體的選擇不一定是關(guān)鍵的，任何本領(lǐng)域已知的載體可以用于組合物中。載體的選擇優(yōu)選部分地通過藥物組合物給藥的具體部位和用于給藥藥物組合物的具體方法來確定。優(yōu)選地，藥用載體包含蛋白質(zhì)?？梢允褂萌魏芜m當?shù)牡鞍踪|(zhì)。適當?shù)鞍踪|(zhì)的實例包括但不限于清蛋白，包括 IgA的免疫球蛋白，脂蛋白，載脂蛋白B，β -2-巨球蛋白，甲狀腺球蛋白等。最優(yōu)選地，藥用載體包含清蛋白，最優(yōu)選人血清清蛋白。適合于本發(fā)明的包括清蛋白的蛋白質(zhì)可以是天然來源的或者合成制備的。人血清清蛋白(HSA)是^65Κ的高度可溶的球蛋白，由585個氨基酸組成。HSA 是血漿中最豐富的蛋白質(zhì)并且占人血漿膠體滲透壓的70-80%。HSA的氨基酸序列包含總共17個二硫橋，一個自由硫醇(Cys 34)，和單個色氨酸(Trp 214)。靜脈使用HSA溶液已經(jīng)顯示用于預防和治療低血容量性休克(參見例如，Tullis, JAMA，237，355-360，460-463， (1977))和 Houser 等，Surgery，Gynecology and Obstetrics，150，811-816 (1980))和換血療法一起用于治療新生兒血膽紅素過多(參見例如，F(xiàn)inlayson，Seminars in Thrombosis and Hemostasis，6，85-120， (1980))。人血清清蛋白(HSA)具有多個疏水結(jié)合位點(總共8個針對脂肪酸，HSA的內(nèi)源性配體)和結(jié)合各種各樣的藥物，特別是中性或帶負電的疏水化合物(Goodman等，The Pharmacological Basis of Therapeutics,第 9 版，McGraw-Hill New York(1996))。 在HSA的亞結(jié)構(gòu)域IIA和IIIA已經(jīng)提出了兩個高親和力結(jié)合位點，它們是高度延伸的疏水囊，在表面附近具有帶電的賴氨酸和精氨酸殘基，用作極性配體特征的連接點(參見例如，F(xiàn)ehske 等，Biochem. Pharmcol.，30，687—92 (1981)，Vorum, Dan. Med. Bull.，46， 379-99 (1999), Kragh-Hansen, Dan. Med. Bull.，1441，131-40 (1990), Curry 等，Nat. Struct. Biol. ,5,827-35(1998)，Sugio 等，Protein. Eng.，12，439-46 (1999)，He 等，Nature, 358, 209-15 (1992)，和 Carter 等，Adv. Protein. Chem.，45，153-203 (1994))。紫杉醇和丙泊酚已經(jīng)顯示結(jié)合 HSA (參見例如，Paal 等，Eur. J. Biochem.，268 (7)，2187-91 (2001)，Purcell 等，Biochim. Biophys. Acta, 1478 (1) ,61-8 (2000), Altmayer 等，Arzneimittelforschung, 45，1053-6 (1995)，和 Garrido 等，Rev. Esp. Anestestiol. Reanim.，41，308-12 (1994))。另外，多西他賽已經(jīng)顯示結(jié)合人血漿蛋白(參見例如，toien等，hvest.New Drugs, 14(2), 147-51 (1996))。因此，盡管不希望束縛于任何一種具體理論，但是認為將蛋白質(zhì)如清蛋白包括在本發(fā)明的藥物組合物中導致與給藥藥物組合物有關(guān)的副作用的降低，這至少部分是由于人血清清蛋白與存在于組合物中的任何游離藥物的結(jié)合。包括在本發(fā)明藥物組合物中的清蛋白的量將根據(jù)藥物活性劑、其它賦形劑和預期給藥的途徑和位點而變化。理想地，包括在組合物中的清蛋白的量是由于向人給藥本發(fā)明的藥物組合物有效降低一種或多種活性藥劑的副作用的量。典型地，將藥物組合物制備成液體形式，然后將清蛋白加入至溶液中。優(yōu)選地，液體形式的藥物組合物包含約0. 1重量％ 至約25重量％ (例如約0.5重量％，約5重量％，約10重量％，約15重量％，或約20重量％)的清蛋白。最優(yōu)選地，液體形式的藥物組合物包含約0.5重量％至約5重量％的清蛋白。藥物組合物可以例如通過凍干、噴霧干燥、流化床干燥、濕式制粒法和其它本領(lǐng)域已知的適當方法脫水。當以固體形式，如通過濕式制粒法、流化床干燥和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它方法制備組合物時，優(yōu)選將清蛋白作為溶液涂覆于活性藥劑和其它賦形劑(如果存在)。HSA溶液優(yōu)選有約0. 1重量％至約25重量％ (約0. 5重量％，約5重量％，約10重量％，約15重量％，或約20重量％ )的清蛋白。除了清蛋白以外，本發(fā)明的組合物優(yōu)選還包含去鐵胺。去鐵胺是分離自 Streptomyces pilous的天然產(chǎn)物，能夠形成鐵絡(luò)合物。例如用于注射USP的甲磺酸去鐵胺被食品與藥物管理局批準為鐵螯合劑且可供用于肌內(nèi)、皮下和靜脈內(nèi)給藥。甲磺酸去鐵胺 USP是白色至灰白色的粉末。它易溶于水并且它的分子量是656. 79。甲磺酸去鐵胺的化學名稱是N- [5- [3- [ (5-氨基戊基)-羥基氨基甲?；鵠-丙-酰氨基]戊基]-3 [ [5- ((N-羥基乙酰氨基)戊基]-氨基甲酰基]丙酰異羥肟酸一甲磺酸鹽(鹽)，它的結(jié)構(gòu)式是C25H48N6O8. CH3SO3H0如實施例所述，去鐵胺或其類似物、衍生物或鹽(例如甲磺酸鹽)抑制藥物組合物中的微生物生長和氧化，認為它結(jié)合組合物中的游離藥物。去鐵胺還顯示結(jié)合酚類化合物 (參見例如，Juven 等，J. Appl. Bacteriol.，76 (6)，626-31 (1994))。紫杉醇，多西他賽，丙泊酚等或者類似酚或者具有酚或苯基取代基。因此，認為去鐵胺可以結(jié)合本發(fā)明藥物組合物中的游離藥物或減少本發(fā)明藥物組合物中的游離藥物的量，由此還降低或減輕了注射時的刺激或疼痛。包括在組合物中的去鐵胺或其優(yōu)選鹽(即去鐵胺的甲磺酸鹽)的量將取決于活性藥劑和其它賦形劑。理想地，在組合物中去鐵胺、其鹽及其類似物的量是有效抑制微生物生長和/或抑制氧化的量。如上所述，典型地藥物組合物以液體形式制備，然后將去鐵胺及其類似物以溶液形式加入。優(yōu)選地，液體形式的藥物組合物包含約0. 0001重量％至約0. 5重量％ (例如，約0.005重量％，約0.1重量％，或約0.25重量％)的去鐵胺、其鹽或其類似物。更優(yōu)選地，液體形式的組合物包含類似量的優(yōu)選的去鐵胺鹽，甲磺酸去鐵胺。更優(yōu)選地，液體形式的藥物組合物包含約0. 1重量％的甲磺酸去鐵胺。當以固體形式，如上所述，如通過濕式制粒法、流化床干燥和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它方法制備組合物時，優(yōu)選將甲磺酸去鐵胺作為溶液加入活性藥劑和其它賦形劑(如果存在)。甲磺酸去鐵胺溶液優(yōu)選有約0. 0001重量％至約0. 5重量％ (例如，約0. 005重量％，約0. 1重量％，或約0. 25 重量％ )的去鐵胺。與本發(fā)明一致，藥物組合物可以包括其它藥劑，賦形劑或穩(wěn)定劑以改善組合物的性能。例如，為了通過增加納米?；蚣{米滴的負ζ電位來增加穩(wěn)定性，可以加入某些帶負電組分。這些帶負電組分包括但不限于膽汁酸的膽汁鹽類，所述膽汁酸由下列各項組成 甘氨膽酸，膽酸，鵝脫氧膽酸，?；悄懰?，甘鵝脫氧膽酸(glycochenodeoxycholic acid)，?；蛆Z脫氧膽酸(taurochenodeoxycholic acid)，石膽酸，烏索脫氧膽酸(ursodeoxycholic acid)，脫氫膽酸和其它；磷脂，包括卵磷脂(蛋黃)基磷脂，該卵磷脂(蛋黃)基磷脂包括下列磷脂酰膽堿棕櫚酰油酰磷脂酰膽堿，棕櫚酰亞油酰磷脂酰膽堿，硬脂酰亞油酰磷脂酰膽堿，硬脂酰油酰磷脂酰膽堿，硬脂?；ㄉ南Ａ字Ｄ憠A，和二棕櫚酰磷脂酰膽堿。其它磷脂包括L- α - 二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)，二油酰磷脂酰膽堿(DOPC)，二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)，氫化大豆磷脂酰膽堿(HSPC)，D- α -磷脂酰膽堿，β -乙?；?Y _0_十六烷基，L-α-磷脂酰膽堿，β-乙?；?Υ-0-十六烷基，DL-α-磷脂酰膽堿，β-乙酰基-Y -0-十六烷基，L- α -磷脂酰膽堿，β -乙?；?Y -0-十八烷基，L- α -磷脂酰膽堿， β -花生四烯酰-Y -0-十六烷基，L- α -磷脂酰膽堿，β -乙?；?Y -0-(十八碳-9-順-烯基)，D-α-磷脂酰膽堿，β-花生四烯酰-Y-O-棕櫚酰，3-sn-磷脂酰膽堿，2-花生四烯酰-1-硬脂酰，L- α -磷脂酰膽堿，β -花生四烯酰-Y -硬脂酰，L- α -磷脂酰膽堿，二花生四烯酰，L-α-磷脂酰膽堿，二(山崳炔酰)，L-α-磷脂酰膽堿，β _(順_8，11，14-二十碳三烯酰)-Y -0-十六烷基，L- α -磷脂酰膽堿，β -油酰-γ -肉豆蔻酰，L- α -磷脂酰膽堿， β -(芘-1-基)癸?；?Y -棕櫚酰，3-sn-磷脂酰-N，N- 二甲基乙醇胺，1,2- 二棕櫚酰， L- α -磷脂酰乙醇胺，二(十七烷酰)，3-sn-磷脂酰乙醇胺，1，2_ 二月桂酰，3-sn-磷脂酰乙醇胺，1，2- 二肉豆蔻酰，3-sn-磷脂酰乙醇胺，1,2- 二油酰，3-sn-磷脂酰乙醇胺，1，2_ 二棕櫚酰，L- α -磷脂酰乙醇胺，二棕櫚酰，L- α -磷脂酰乙醇胺，二棕櫚酰，N-丹酰，L- α -磷脂酰乙醇胺，二棕櫚酰，Ν，Ν_ 二甲基，L-α-二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(鈉鹽)(DMPG)，二棕櫚酰磷脂酰甘油(鈉鹽)(DPPG)，二硬脂酰磷脂酰甘油(鈉鹽)(DSPG)，N-(羰基-甲氧基聚乙二醇2000)-1,2- 二硬脂酰-sn-甘油_3_磷酸乙醇胺鈉(MPEG-DSPE), L-α -磷脂酸，二癸?；c鹽，L-α-磷脂酸，二(十七碳酰)鈉鹽，3-sn-磷脂酸，1，2_ 二肉豆蔻酰鈉鹽，L-α-磷脂酸，二辛?；c鹽，L- α -磷脂酸，二油酰鈉鹽，L- α -磷脂酸，二棕櫚酰鈉鹽，L- α -磷脂酰-DL-甘油，二肉豆蔻酰鈉鹽，L- α -磷脂酰-DL-甘油，二油酰鈉鹽，L- α -磷脂酰-DL-甘油，二棕櫚酰銨鹽，L- α -磷脂酰-DL-甘油，二硬脂酰銨鹽，L- α -磷脂酰-DL-甘油，β -油酰Y -棕櫚酰銨鹽，L- α -磷脂酰肌醇銨鹽，L- α -磷脂酰肌醇鈉鹽，L- α -磷脂酰-L-絲氨酸，二油酰鈉鹽，L-α-磷脂酰-L-絲氨酸，和二棕櫚酰鈉鹽。帶負電的乳化劑的表面活性劑也適合作為添加劑，例如膽留醇基硫酸鈉等。藥劑(例如丙泊酚)可以單獨使用或溶解在水不混溶的溶劑中。可以使用各種各樣的水不混溶的溶劑如大豆油，紅花油，棉籽油，玉米油，向日葵油，花生油，蓖麻油，橄欖油。優(yōu)選的油是植物油，其中最優(yōu)選大豆油。大豆油可以在組合物重量的-10%范圍內(nèi)使用。優(yōu)選大豆油以約3重量％的量存在于組合物中。本發(fā)明的藥物組合物可以用藥用表面活性劑穩(wěn)定。這里使用的術(shù)語“表面活性劑”是指兩性分子的表面活性基團。表面活性劑可以是陰離子型，陽離子型，非離子型和兩性離子型。任何適當?shù)谋砻婊钚詣┛梢园ㄔ诒景l(fā)明的藥物組合物中。適當?shù)谋砻婊钚詣┌ǚ请x子型表面活性劑如磷脂，聚氧乙烯失水山梨醇酯，和生育酚聚氧乙烯琥珀酸酯。優(yōu)選的表面活性劑是卵磷酯，吐溫80和維生素E-t d-α-生育酚聚氧乙烯-1000琥珀酸酯 (TPGS)。對于含有大豆油的制劑，優(yōu)選卵磷脂且對于含有3%大豆油的制劑不超過組合物的 1. 2重量％，優(yōu)選1. 1重量％。對于不含大豆油的制劑，吐溫80或維生素E-TPGS是優(yōu)選的表面活性劑。典型，0. 1-1. 5重量％的吐溫80或0. 5-4重量％的維生素E-TPGS是適當?shù)摹?優(yōu)選地，使用1.5重量％的吐溫80或1重量％的維生素E-TPGS。其它適當表面活性劑的實例描述于例如Becher,Emulsions :Theory and Practice,Robert Ε. Krieger Publishing, Malabar, Fla. (1965)中。存在各種各樣的本發(fā)明藥物組合物的適當制劑(參見例如，U.S.專利 5，916，596)。下列制劑和方法僅僅是例舉性的而絕非限制性的。適于口服給藥的制劑可以由以下各項組成(a)液體溶液，如有效量的溶于稀釋劑中的化合物，所述稀釋劑如水，鹽水或橙汁，(b)膠囊，小藥囊或片劑，各自含有預定量的作為固體或顆粒的活性成分，(c)在適當液體中的混懸劑，和(d)適當?shù)娜閯Ｆ瑒┬问娇梢园ㄒ环N或多種乳糖，甘露糖醇， 玉米淀粉，馬鈴薯淀粉，微晶纖維素，阿拉伯膠，明膠，膠體二氧化硅，交聯(lián)羧甲基纖維素鈉，滑石，硬脂酸鎂，硬脂酸，和其它賦形劑，著色劑，稀釋劑，緩沖劑，潤濕劑，防腐劑，調(diào)味劑， 和藥理學上相容的賦形劑。錠劑形式可以在調(diào)味劑中包含活性成分，所述調(diào)味劑通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠，以及在惰性基質(zhì)中包含活性成分的錠劑，所述惰性基質(zhì)如明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠，除了活性成分以外還含有諸如本領(lǐng)域已知的賦形劑的乳劑、凝膠等。適合于腸胃外給藥的制劑包括水性和非水性的等滲無菌注射液，其可以含有抗氧化劑，緩沖劑，抑菌劑，和使得制劑與期望接受者的血液等滲的溶質(zhì)，和可以包括懸浮劑、增溶齊 、增稠劑、穩(wěn)定劑和防腐劑的水性和非水性的無菌混懸劑。制劑可以以單位劑量或多劑量密封的容器提供，如安剖和小瓶，并且可以貯存在冷凍干燥(凍干)條件下，這在即刻使用前只要求加入無菌液體賦形劑，例如水以便注射。臨時注射液和混懸劑可以從前述種類的無菌粉末、顆粒和片劑制備。優(yōu)選注射制劑。適于氣溶膠給藥的制劑包含本發(fā)明的藥物組合物，其包括可以含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和溶質(zhì)的水性和非水性的等滲無菌溶液，以及可以包括懸浮劑、增溶劑、增稠劑、穩(wěn)定劑和防腐劑的水性和非水性無菌混懸劑，這些組分單獨或與其它適當組分組合，可以制備成氣溶膠制劑以通過吸入給藥。這些氣溶膠制劑可以放入加壓可接受的推進劑中， 所述推進劑如二氯二氟甲烷，丙烷，氮氣等。它們還可以配制成用于非加壓制劑的藥物，如在噴霧器或霧化器中。其它適當?shù)闹苿┦强赡艿?，例如可以通過使用各種基質(zhì)(base)如乳化基質(zhì)或水不溶性基質(zhì)來制備栓劑。適于陰道給藥的制劑可以提供為陰道栓劑，棉塞，乳膏劑，凝膠劑， 糊劑，泡沫，或噴霧劑制劑，其除了活性成分以外還含有諸如本領(lǐng)域已知的適當載體。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，將藥物組合物配制成具有4. 5-9. 0的pH，更優(yōu)選 5. 0-8. 0的pH。還可以通過加入適當滲透調(diào)節(jié)劑如甘油使得藥物組合物與血液等滲。此外， 藥用載體優(yōu)選還含有不含熱原的水或注射用水，USP。優(yōu)選地，本發(fā)明的藥物組合物被制備成無菌水性制劑，納米粒，水包油型乳劑，或油包水型乳劑。最優(yōu)選地，藥物組合物是水包油型乳劑。按照本發(fā)明，對于包含丙泊酚的藥物組合物，可以通過將丙泊酚單獨溶解在水不混溶的溶劑中和制備含有清蛋白、去鐵胺、表面活性劑和其它水溶性成分的水相，將油與水相混合來制備水包油型乳劑。粗制乳劑在10，000至25，OOOpsi的壓力下高壓均化并再循環(huán)5-20個周期以形成理想的乳劑。優(yōu)選的壓力是15，000至20，OOOpsi，更優(yōu)選10，OOOpsi。 粗制乳劑可以再循環(huán)7-15個周期且優(yōu)選再循環(huán)15個周期。備選地，可以使用通過均化器的分開通道。優(yōu)選地，本發(fā)明的藥物組合物可以含有尺寸小于約200納米(nm)的顆粒或液滴。 例如，在紫杉醇，多西他賽，雷帕霉素，環(huán)孢菌素，丙泊酚和其它的情形中，這些分散體的平均尺寸小于200nm。本發(fā)明另外提供降低一種或多種與向人給藥藥物組合物有關(guān)的副作用的方法。該方法包含向人給藥包含藥劑和藥用載體的藥物組合物，其中所述藥用載體包含清蛋白和去鐵胺。以上結(jié)合本發(fā)明藥物組合物陳述的藥物組合物、藥劑和藥用載體、及其成分的描述也適用于本發(fā)明方法的那些相同方面。在本發(fā)明上下文中，本發(fā)明藥物組合物給藥于人的劑量將隨著具體的藥物組合物、給藥方法和被治療的具體部位而變化。該劑量應當足以在期望時間范圍內(nèi)實現(xiàn)期望反應，如對特定疾病的治療或預防反應，或者當藥劑是麻醉劑如丙泊酚時麻醉反應。盡管任何適當?shù)南蛉私o藥藥物組合物的方式可以用于本發(fā)明上下文中，優(yōu)選將本發(fā)明的藥物組合物通過靜脈內(nèi)給藥、動脈內(nèi)給藥、肺內(nèi)給藥、口服給藥、吸入、膀胱內(nèi)給藥、 肌內(nèi)給藥、氣管內(nèi)給藥、皮下給藥、眼內(nèi)給藥、鞘內(nèi)給藥或透皮給藥給藥于人。例如，本發(fā)明的藥物組合物可以通過吸入給藥以治療呼吸道病癥。與吸入本發(fā)明藥物組合物有關(guān)的副作用最小，因為清蛋白是呼吸道內(nèi)層和分泌物的天然成分。本發(fā)明組合物可以用于治療呼吸道病癥如肺纖維化，閉塞性細支氣管炎，肺癌，支氣管肺泡癌等。本發(fā)明的方法導致與向人給藥藥物組合物有關(guān)的一種或多種副作用的減小。這些副作用包括例如，骨髓抑制，神經(jīng)毒性，過敏，炎癥，靜脈刺激，靜脈炎，疼痛，皮膚刺激，及其組合。然而這些副作用僅僅是例舉性的，通過使用本發(fā)明的新組合物和方法可以減小或避免與各種藥劑有關(guān)的其它副作用或副作用組合。本發(fā)明另外提供抑制藥物組合物中微生物生長的方法?！耙种莆⑸锷L”是指從藥物組合物中完全消除微生物，或降低藥物組合物中微生物生長的量或速率。該方法包含制備包含藥劑和藥用載體的藥物組合物，其中所述藥用載體包含去鐵胺，其鹽，其類似物， 及其組合，它們的量有效抑制藥物組合物中的微生物生長。另外，本發(fā)明提供抑制藥物組合物氧化的方法。該方法包含制備包含藥劑和藥用載體的藥物組合物，其中所述藥用載體包含去鐵胺，其鹽，其類似物，及其組合，它們的量有效抑制藥物組合物的氧化。以上結(jié)合本發(fā)明藥物組合物闡明的藥物組合物、藥劑、和藥用載體、及其組分的描述也適用于本發(fā)明方法的那些相同方面。包括在組合物中的去鐵胺，或其優(yōu)選鹽(去鐵胺的甲磺酸鹽)的量將取決于活性藥劑和其它賦形劑。理想地，組合物中去鐵胺，其鹽，其類似物的量是有效抑制微生物生長和/或抑制氧化的量。如上所述，典型地，藥物組合物以液體形式制備，然后將去鐵胺，其鹽，和其類似物加入至溶液中。優(yōu)選地，液體形式的藥物組合物包含約0.0001重量％至約 0.5重量％ (例如約0.005重量％，約0. 1重量％或約0.25重量％ )的去鐵胺，其鹽，或其類似物。更優(yōu)選地，液體形式的組合物包含類似量的優(yōu)選去鐵胺鹽，甲磺酸去鐵胺。最優(yōu)選地，液體形式的藥物組合物包含約0. 5重量％的甲磺酸去鐵胺。當組合物以固體形式制備時，如上所述，如通過濕式制粒法、流化床干燥和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它方法制備組合物時，優(yōu)選將甲磺酸去鐵胺作為溶液涂覆至活性藥劑，和其它賦形劑(如果存在)。甲磺酸去鐵胺溶液優(yōu)選具有約0.0001重量％至約0.5重量％ (例如約0.005重量％，約0. 1重量％或約0. 25重量％ )的去鐵胺。本發(fā)明還提供用于增強藥劑向虛弱部位轉(zhuǎn)運的方法，該方法包含向人給藥包含藥劑和藥用載體的藥物組合物，其中所述藥用載體包含清蛋白，且其中藥物組合物中清蛋白與藥劑的比率為約18 1或更小。本發(fā)明進一步提供用于增強藥劑與體外或體內(nèi)細胞結(jié)合的方法，該方法包含向所述體外或體內(nèi)細胞給藥包含藥劑和藥用載體的藥物組合物，其中所述藥用載體包含清蛋白，且其中藥物組合物中清蛋白與藥劑的比率為約18 1或更小。以上結(jié)合本發(fā)明藥物組合物和本發(fā)明方法闡明的藥物組合物、藥劑、藥用載體、給藥途徑、及其組分的描述也適用于轉(zhuǎn)運和結(jié)合方法的那些相同方面。在用于將藥劑轉(zhuǎn)運給虛弱部位或用于增強藥劑與細胞結(jié)合的方法中，藥用載體優(yōu)選包含清蛋白，最優(yōu)選人血清清蛋白。不束縛于任何一種具體理論，認為蛋白質(zhì)例如人血清清蛋白與藥物組合物中的藥劑的比率影響藥劑與細胞結(jié)合的能力和藥劑向細胞的轉(zhuǎn)運。在這點上，蛋白質(zhì)與藥劑的較高比率通常與差的藥劑的細胞結(jié)合和轉(zhuǎn)運有關(guān)，這可能是受體在細胞表面上競爭的結(jié)果。蛋白質(zhì)例如清蛋白與活性藥劑的比率必須是使得足量藥劑藥劑與細胞結(jié)合或轉(zhuǎn)運至細胞。蛋白質(zhì)-藥物制劑的例舉性范圍是蛋白質(zhì)與藥物比率(w/V) 為0.01 1至約100 1。更優(yōu)選地，比率為0.02 1至約40 1。盡管蛋白質(zhì)與藥劑的比率必須對不同的蛋白質(zhì)和藥劑組合優(yōu)化，但是通常蛋白質(zhì)例如清蛋白與藥劑的比率為約18 1或更小(例如約15 1，約10 1，約5 1，或約3 1)。更優(yōu)選地，比率為約 0.2 1至約12 1。最優(yōu)選地，比率為約1 1至約9 1。優(yōu)選地，制劑基本上不含聚氧乙烯蓖麻油，更優(yōu)選地不含聚氧乙烯蓖麻油EL (BASF)。聚氧乙烯蓖麻油HL 是非離子型乳化劑，是作為蓖麻油和聚氧乙烯的聚醚。如上所述，聚氧乙烯蓖麻油被典型地用作紫杉醇的溶劑，且與可能是嚴重的副作用有關(guān)(參見例如，Gelderblom等，上文)。藥劑可以是本文描述的任何適當?shù)乃巹?例如，丙泊酚，紫杉醇，或多西他賽)。另外，藥劑可以是核酸序列，最優(yōu)選DNA序列。這方面，本發(fā)明的藥物組合物可以通過受體介導/腔穴(caveolar)/囊轉(zhuǎn)運將基因轉(zhuǎn)運至細胞。為了將DNA序列如基因或其它遺傳物質(zhì)， 包括但不限于質(zhì)粒或c-DNA，轉(zhuǎn)運到細胞(例如內(nèi)皮細胞或腫瘤細胞)中，可以制備包含清蛋白結(jié)合遺傳物質(zhì)的藥物組合物。因為在炎癥部位的腫瘤細胞和其它細胞具有對蛋白質(zhì)的高攝取，優(yōu)選將遺傳物質(zhì)吸入至這些細胞類型中并且可以整合到細胞的遺傳物質(zhì)中以達到有效的治療效果。蛋白質(zhì)如人血清請蛋白的使用起作傳遞遺傳物質(zhì)的非病毒載體的作用而沒有與病毒相關(guān)的疾病或副作用的風險。例如，可以制備包含編碼半乳糖苷酶或綠色熒光蛋白(GFP)和清蛋白的核酸序列的藥物組合物，并與來源于人臍靜脈或人肺微脈管的內(nèi)皮細胞接觸，以促進核酸序列整合到內(nèi)皮細胞中。核酸序列的整合可以使用本領(lǐng)域已知的方法檢測，如例如熒光或染色。在本發(fā)明用于增強藥劑向虛弱部位轉(zhuǎn)運的方法中，虛弱可以是任何適當?shù)募膊』虿“Y。優(yōu)選地，虛弱是癌癥，心血管疾病，或關(guān)節(jié)炎。在本發(fā)明用于增強藥劑與體外或體內(nèi)細胞結(jié)合的方法中，將藥物組合物給藥于體外或體內(nèi)細胞。理想地，細胞是動物細胞。更優(yōu)選，細胞是哺乳動物細胞，最優(yōu)選地，細胞是人細胞。優(yōu)選將藥物組合物給藥于體內(nèi)細胞。細胞可以是作為給藥藥物組合物的期望靶標的任何適當細胞。例如，細胞可以位于或來源于消化系統(tǒng)組織，包括例如食管，胃，小腸，結(jié)腸，直腸，肛門，肝，膽囊，和胰。細胞還可以位于或來源于呼吸系統(tǒng)組織，包括例如喉，肺，和支氣管。細胞可以位于或來源于例如組成男性或女性生殖系統(tǒng)的子宮頸，子宮體，卵巢孔， 陰道，前列腺，睪丸，和陰莖，和組成泌尿系統(tǒng)的膀胱，腎，腎盂，和輸尿管。細胞可以位于或來源于心血管系統(tǒng)的組織，包括例如內(nèi)皮細胞和心肌細胞。細胞還可以位于或來源于淋巴系統(tǒng)的組織(例如淋巴細胞)，神經(jīng)系統(tǒng)(例如神經(jīng)元或神經(jīng)膠質(zhì)細胞)，和內(nèi)分泌系統(tǒng)(例如甲狀腺細胞)。優(yōu)選地，細胞位于或來源于心血管系統(tǒng)的組織。最優(yōu)選地，細胞是內(nèi)皮細胞。在本發(fā)明用于增強轉(zhuǎn)運和藥劑與細胞結(jié)合的方法的內(nèi)容中，藥物組合物理想地接觸多于一種細胞。在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明用于增強轉(zhuǎn)運和增強藥劑與細胞結(jié)合的方法可以用于治療腫瘤細胞。與正常細胞相比，腫瘤細胞顯示增強的蛋白質(zhì)攝取，該蛋白質(zhì)包括清蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白。由于腫瘤細胞快速分裂，所以與正常細胞相比，它們要求更多的營養(yǎng)來源。本發(fā)明含有紫杉醇和人血清清蛋白的藥物組合物的腫瘤研究表明腫瘤對清蛋白-紫杉醇的高攝取。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這是由于以前未認識到的通過糖蛋白60(“gp60”)受體的清蛋白-藥物轉(zhuǎn)運的現(xiàn)象，該糖蛋白60受體對于清蛋白是特異性的。因此，按照本發(fā)明的另一方面，清蛋白特異性的gp60受體和腫瘤細胞上存在的其它蛋白轉(zhuǎn)運受體可以用作抑制腫瘤生長的靶標。通過使用抗gp60受體的抗體或結(jié)合、阻斷或失活gp60的其它大或小分子化合物阻斷gp60受體，和阻斷在腫瘤細胞或腫瘤內(nèi)皮細胞上的其它蛋白轉(zhuǎn)運受體，可以阻斷蛋白質(zhì)向這些細胞的轉(zhuǎn)運，由此降低它們的生長速率和導致細胞死亡。因此，該機制的阻斷導致患有癌癥或另外的疾病的患者(例如人)的治療。鑒定特異蛋白受體的阻斷/結(jié)合是通過篩選任何數(shù)量的針對分離的gp60或其它受體如gpl6或gp30的化合物或通過使用全細胞制備來完成的。另外，適當?shù)膭游锬Ｐ鸵部梢杂糜谠撃康?，如例如含有編碼gp60或小窩蛋白-1或?qū)τ谵D(zhuǎn)運特異的其它蛋白的基因“敲除”突變的小鼠。因此，鑒定阻斷或結(jié)合gp60，gpl6，gp30或其它蛋白受體的化合物的方法屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)。另外，阻斷或結(jié)合gp60受體或其它蛋白受體的化合物可以用于治療包括癌癥的數(shù)種疾病。關(guān)于癌癥的治療，阻斷或結(jié)合化合物可以用作單一藥劑或與其它標準化療或多種化療結(jié)合。例如，它與常規(guī)化療或與本發(fā)明的清蛋白-藥物藥物組合物(其在腫瘤中顯示高累積)、接著與阻斷蛋白質(zhì)向腫瘤細胞轉(zhuǎn)運的化合物用于治療癌癥。阻斷化合物可以在其它化療或抗癌劑之前或結(jié)合給藥。因此，任何可以阻斷或結(jié)合gp60受體或其它蛋白受體的化合物屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明清蛋白-藥物組合物，如例如清蛋白-紫杉醇，清蛋白-多西他賽，清蛋白-埃坡霉素，清蛋白-喜樹堿，或清蛋白-雷帕霉素以及其它，可以用于治療疾病。認為這些藥物組合物有效是因為增加的蛋白質(zhì)-藥物組合物向所需部位(例如腫瘤)的受體介導的轉(zhuǎn)運。不希望束縛于任何具體理論，通過導致治療效果的受體介導的轉(zhuǎn)運的蛋白質(zhì)-藥物組合物的轉(zhuǎn)運被認為是例如清蛋白-紫杉醇組合物向腫瘤、以及清蛋白-紫杉醇和清蛋白-雷帕霉素轉(zhuǎn)運透過肺的轉(zhuǎn)運機制。轉(zhuǎn)運受這些組織中g(shù)p60，gpl6或gp30的存在的影響。因此，向疾病例如炎癥(例如關(guān)節(jié)炎)或腫瘤位點的轉(zhuǎn)運與gp60，gpl6或gp30受體相關(guān)和導致治療效果的藥物和蛋白質(zhì)-藥物組合物被考慮作為本發(fā)明的組合物。按照本發(fā)明的另一方面，內(nèi)皮細胞可以與具有特定功能的細胞共培養(yǎng)。內(nèi)皮細胞與其它細胞類型如胰島細胞、肝細胞、神經(jīng)內(nèi)分泌細胞和其它細胞的溫育允許所需的組分如蛋白質(zhì)和其它有益組分向這些細胞的轉(zhuǎn)移。內(nèi)皮細胞提供這些組分向培養(yǎng)的細胞類型的轉(zhuǎn)移以便模擬體內(nèi)條件，即其中這些細胞類型通常與內(nèi)皮細胞緊密接近和將依賴于內(nèi)皮細胞轉(zhuǎn)運營養(yǎng)，生長因子，激素信號等，而這些對于它們的正常功能是需要的。當內(nèi)皮細胞不存在時，先前不可能充分地培養(yǎng)這些不同細胞類型和獲得生理性能。在具有期望細胞類型的培養(yǎng)物中內(nèi)皮細胞的存在允許體外或來自體內(nèi)的胰島、肝細胞、或神經(jīng)內(nèi)分泌組織的分化和適當功能。因此發(fā)現(xiàn)與在缺少內(nèi)皮細胞下培養(yǎng)的那些相比，內(nèi)皮細胞和胰島的共培養(yǎng)導致具有改善的生理性能(例如分泌胰島素的能力)的胰島。該組織然后可以在體外使用或移植到體內(nèi)以治療由于缺少適當細胞功能而導致的疾病(例如在胰島細胞的情形中糖尿病，在肝細胞情形中的肝功能失常，和在神經(jīng)內(nèi)分泌細胞的情形中的神經(jīng)內(nèi)分泌紊亂或疼痛減輕)。來源于其它組織和器官的細胞(如上所述)也可以與內(nèi)皮細胞共培養(yǎng)以提供相同的益處。另外，共培養(yǎng)可以用于將遺傳物質(zhì)整合到靶細胞類型中。發(fā)現(xiàn)在這些培養(yǎng)物中清蛋白的存在非常有益。下列實施例進一步舉例說明本發(fā)明，但是當然不應當被認為是以任何方式限制其范圍。實施例1本實施例舉例說明了含有紫杉醇和清蛋白的藥物組合物的制備。紫杉醇-清蛋白組合物的制備描述于美國專利5，439，686和5，916，596中，它們通過引用完整地結(jié)合于此。具體地，將30mg紫杉醇溶解在3. Oml 二氯甲烷中。將該溶液加入至27. Oml人血清清蛋白溶液中。根據(jù)需要加入去鐵胺。將該混合物在低RPM下均化5分鐘(Vitris 均化器，型號Tempest I. Q.)以便形成粗乳劑，然后轉(zhuǎn)移到高壓均化器(Avestin)中。在 9000-40, OOOpsi下進行乳化，同時將乳劑再循環(huán)至少5個周期。將獲得的系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器，在40°C、減壓(30mm Hg)下快速去除二氧甲烷20-30分鐘。獲得的分散體是半透明的，獲得的紫杉醇顆粒的典型平均直徑為50-220nm(Z-平均值，Malvern Zetasizer) 0 將該分散體進一步凍干48小時。通過加入無菌水或鹽水，獲得的餅塊可以容易地重構(gòu)為原有分散體。在重構(gòu)后的粒徑與凍干前相同。應當認識到用于本實施例的藥物、溶劑、蛋白質(zhì)的量、類型和比率不受任何方式的限制。當與溶于聚氧乙烯蓖麻油制劑中的紫杉醇的毒性相比時，本發(fā)明含有清蛋白的藥物組合物顯示顯著更低的毒性。實施例2本實施例舉例說明了含有胺碘酮和清蛋白的藥物組合物的制備。將30mg胺碘酮溶于3. Oml 二氯甲烷中。將溶液加入至27. Oml人血清清蛋白溶液(1%W/V)中。根據(jù)需要加入去鐵胺。將混合物在低RPM下均化5分鐘(Vitris均化器，型號"Tempest I. Q.)以便形成粗乳劑，然后轉(zhuǎn)移到高壓均化器(Avestin)中。在9000-40，OOOpsi下進行乳化，同時將乳劑再循環(huán)至少5個周期。將獲得的系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器，在40°C、減壓(30mm Hg) 下快速去除二氯甲烷20-30分鐘。獲得的分散體是半透明的，獲得的胺碘酮顆粒的典型平均直徑為50-220nm(Z-平均值，Malvern Zetasizer)。將該分散體進一步凍干48小時。通過加入無菌水或鹽水，獲得的餅塊可以容易地重構(gòu)為原有分散體。在重構(gòu)后的粒徑與凍干前相同。應當認識到用于本實施例的藥物、溶劑、蛋白質(zhì)的量、類型和比率不受任何方式的限制。當與溶于吐溫制劑中的胺碘酮的毒性相比時，本發(fā)明含有清蛋白的藥物組合物顯示顯著更低的毒性。實施例3本實施例舉例說明了含有碘塞羅寧和清蛋白組合物的藥物組合物的制備。將碘塞羅寧(或適當鹽)以0.5-50mg/ml的濃度溶于水性醇溶液或堿性溶液中。將醇(或堿性) 溶液加入至清蛋白溶液(0. 1-25% w/v)中并攪拌。攪拌是使用攪拌器的低剪切或使用超聲波儀或均化器的高剪切。在低濃度的碘塞羅寧下，獲得(5-1000yg/ml)澄清溶液。當濃度增加時，獲得穩(wěn)定的乳狀混懸劑。這些溶液或混懸劑通過無菌濾器過濾。通過蒸發(fā)或其它適當方法去除有機溶劑。
實施例4本實施例舉例說明了含有雷帕霉素和清蛋白的藥物組合物的制備。將30mg雷帕霉素溶于2ml氯仿/乙醇中。將溶液加入至27. Oml人血清清蛋白溶液(3% w/v)中。將混合物在低RPM下均化5分鐘(Vitris均化器，型號Tempest I. Q.)以便形成粗乳劑，然后轉(zhuǎn)移到高壓均化器(Avestin)中。在9000-40，OOOpsi下進行乳化，同時將乳劑再循環(huán)至少5 個周期。將獲得的系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至Rotavap，在40°C、減壓(30mm Hg)下快速去除溶劑20-30分鐘。獲得的分散體是半透明的，獲得的顆粒的典型平均直徑為50-220nm(Z-平均值，Malvern ktasizer)。將該分散體進一步凍干48小時。通過加入無菌水或鹽水，獲得的餅塊可以容易地重構(gòu)為原有分散體。在重構(gòu)后的粒徑與凍干前相同。應當認識到用于本實施例的藥物、 溶劑、蛋白質(zhì)的量、類型和比率不受任何方式的限制。實施例5本實施例舉例說明了含有埃坡霉素B和清蛋白的藥物組合物的制備。將30mg埃坡霉素B溶于2ml氯仿/乙醇中。將溶液加入至27. Oml人血清清蛋白溶液(3%W/v)中。根據(jù)需要加入去鐵胺。將混合物在低RPM下均化5分鐘(Vitris均化器，型號Tempest I. Q.) 以便形成粗乳劑，然后轉(zhuǎn)移到高壓均化器(Avestin)中。在9000-40，OOOpsi下進行乳化， 同時將乳劑再循環(huán)至少5個周期。將獲得的系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至Rotavap，在40°C、減壓(30mm Hg) 下快速去除溶劑20-30分鐘。獲得的分散體是半透明的，獲得的顆粒的典型平均直徑為 50-220nm(Z-平均值，Malvern Zetasizer)。將該分散體進一步凍干48小時。通過加入無菌水或鹽水，獲得的餅塊可以容易地重構(gòu)為原有分散體。在重構(gòu)后的粒徑與凍干前相同。應當認識到用于本實施例的藥物、溶劑、蛋白質(zhì)的量、類型和比率不受任何方式的限制。當與溶于聚氧乙烯蓖麻油制劑中的埃坡霉素B的毒性相比時，本發(fā)明含有清蛋白的藥物組合物顯示顯著更低的毒性。實施例6本實施例舉例說明了含有秋水仙堿二聚體和清蛋白的藥物組合物的制備。將30mg 秋水仙堿-二聚體溶于2ml氯仿/乙醇中。將溶液加入至27. Oml人血清清蛋白溶液(3% w/v)中。根據(jù)需要加入去鐵胺。將混合物在低RPM下均化5分鐘(Vitris均化器，型號 Tempest I. Q.)以便形成粗乳劑，然后轉(zhuǎn)移到高壓均化器(Avestin)中。在9000-40，OOOpsi 下進行乳化，同時將乳劑再循環(huán)至少5個周期。將獲得的系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至Rotavap，在40°C、減壓(30mm Hg)下快速去除溶劑20-30分鐘。獲得的分散體是半透明的，獲得的顆粒的典型平均直徑為50-220nm(Z-平均值，Malvern Zetasizer)。將該分散體進一步凍干48小時。 通過加入無菌水或鹽水，獲得的餅塊可以容易地重構(gòu)為原有分散體。在重構(gòu)后的粒徑與凍干前相同。應當認識到用于本實施例的藥物、溶劑、蛋白質(zhì)的量、類型和比率不受任何方式的限制。當與溶于吐溫中的秋水仙堿二聚體的毒性相比時，本發(fā)明含有清蛋白的藥物組合物顯示顯著更低的毒性。實施例7本實施例舉例說明了含有多西他賽和清蛋白的藥物組合物的制備。將30mg多西他賽溶于2ml氯仿/乙醇中。將溶液加入至27. Oml人血清清蛋白溶液(3% w/v)中。根據(jù)需要加入去鐵胺。將混合物在低RPM下均化5分鐘(Vitris均化器，型號Tempest I. Q.) 以便形成粗乳劑，然后轉(zhuǎn)移到高壓均化器(Avestin)中。在9000-40，OOOpsi下進行乳化，同時將乳劑再循環(huán)至少5個周期。將獲得的系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至Rotavap，在40°C、減壓(30mm Hg) 下快速去除溶劑20-30分鐘。獲得的分散體是半透明的，獲得的顆粒的典型平均直徑為 50-220nm(Z-平均值，Malvern Zetasizer)。將該分散體進一步凍干48小時。通過加入無菌水或鹽水，獲得的餅塊可以容易地重構(gòu)為原有分散體。在重構(gòu)后的粒徑與凍干前相同。應當認識到用于本實施例的藥物、溶劑、蛋白質(zhì)的量、類型和比率不受任何方式的限制。當與溶于該藥物的標準溶劑一吐溫/乙醇中的多西他賽的毒性相比時，本發(fā)明含有清蛋白的藥物組合物顯示顯著更低的毒性。實施例8本實施例舉例說明了含有多西他賽和清蛋白的藥物組合物的制備。將150mg多西他賽溶于Iml乙酸乙酯/乙酸丁酯和0.5ml油例如大豆油或維生素E油中。使用其它比率的溶劑和油，這些組合物也被考慮為本發(fā)明的一部分。還任選地加入將少量帶負電組分， 例如苯甲酸(0. 001% -0. 5% )0然后將溶液加入至27. Oml人血清清蛋白溶液(5% w/v) 中。根據(jù)需要加入去鐵胺。將混合物在低RPM下均化5分鐘(Vitris均化器，型號Tempest I.Q.)以便形成粗乳劑，然后轉(zhuǎn)移到高壓均化器(Avestin)中。在9000-40，OOOpsi下進行乳化，同時將乳劑再循環(huán)至少5個周期。將獲得的系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至Rotavap，在40°C、減壓(30mm Hg)下快速去除溶劑20-30分鐘。獲得的分散體是半透明的，獲得的顆粒的典型平均直徑為50-220nm(Z-平均值，Malvern Zetasizer)。將該分散體進一步凍干48小時。通過加入無菌水或鹽水，獲得的餅塊可以容易地重構(gòu)為原有分散體。在重構(gòu)后的粒徑與凍干前相同。 應當認識到用于本實施例的藥物、溶劑、蛋白質(zhì)的量、類型和比率不受任何方式的限制。當與溶于該藥物的標準溶劑一吐溫/乙醇中的多西他賽的毒性相比時，本發(fā)明含有清蛋白的藥物組合物顯示顯著更低的毒性。實施例9本實施例舉例說明了含有紫杉烷IDN5390和清蛋白的藥物組合物的制備。將 150mg IDN5390溶于Iml乙酸乙酯/乙酸丁酯和0. 5ml油例如大豆油或維生素E油中。使用其它比率的溶劑和油，這些組合物也被考慮為本發(fā)明的一部分。還任選地加入將少量帶負電組分，例如苯甲酸(0. 001% -0.5% )0然后將溶液加入至27. Oml人血清清蛋白溶液 (5% w/v)中。根據(jù)需要加入去鐵胺。將混合物在低RPM下均化5分鐘(Vitris均化器，型號 Tempest I. Q.)以便形成粗乳劑，然后轉(zhuǎn)移到高壓均化器(Avestin)中。在9000-40，OOOpsi 下進行乳化，同時將乳劑再循環(huán)至少5個周期。將獲得的系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至Rotavap，在40°C、減壓(30mm Hg)下快速去除溶劑20-30分鐘。獲得的分散體是半透明的，獲得的顆粒的典型平均直徑為50-220nm(Z-平均值，Malvern Zetasizer)。將該分散體進一步凍干48小時。 通過加入無菌水或鹽水，獲得的餅塊可以容易地重構(gòu)為原有分散體。在重構(gòu)后的粒徑與凍干前相同。應當認識到用于本實施例的藥物、溶劑、蛋白質(zhì)的量、類型和比率不受任何方式的限制。當與溶于吐溫中的IDN5390的毒性相比時，本發(fā)明含有清蛋白的藥物組合物顯示顯著更低的毒性。實施例10本實施例舉例說明了含有紫杉烷IDN5109和清蛋白的藥物組合物的制備。將 150mg IDN5109溶于2ml氯仿/乙醇。使用其它比率的溶劑和油，這些組合物也被考慮為本發(fā)明的一部分。還任選地加入將少量帶負電組分，例如苯甲酸(0.001%-0.5%)。然后將溶液加入至27. Oml人血清清蛋白溶液(5% w/v)中。根據(jù)需要加入去鐵胺。將混合物在低RPM下均化5分鐘(Vitris均化器，型號Tempest I. Q.)以便形成粗乳劑，然后轉(zhuǎn)移到高壓均化器(Avestin)中。在9000-40，OOOpsi下進行乳化，同時將乳劑再循環(huán)至少5個周期。將獲得的系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至Rotavap，在40°C、減壓(30mm Hg)下快速去除溶劑20-30分鐘。 獲得的分散體是半透明的，獲得的顆粒的典型平均直徑為50-220nm(Z-平均值，Malvern ktasizer)。將該分散體進一步凍干48小時。通過加入無菌水或鹽水，獲得的餅塊可以容易地重構(gòu)為原有分散體。在重構(gòu)后的粒徑與凍干前相同。應當認識到用于本實施例的藥物、 溶劑、蛋白質(zhì)的量、類型和比率不受任何方式的限制。當與溶于吐溫中的IDN5109的毒性相比時，本發(fā)明含有清蛋白的藥物組合物顯示顯著更低的毒性。實施例11本實施例舉例說明了含有10-羥基喜樹堿(10HC)和清蛋白的藥物組合物的制備。 將30mg IOHC溶于2. Oml DMF/二氯甲烷/大豆油。然后將溶液加入至27. Oml人血清清蛋白溶液(3% w/v)中。將混合物在低RPM下均化5分鐘(Vitris均化器，型號"Tempest I.Q.)以便形成粗乳劑，然后轉(zhuǎn)移到高壓均化器(Avestin)中。在9000-40，OOOpsi下進行乳化，同時將乳劑再循環(huán)至少5個周期。將獲得的系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至Rotavap，在40°C、減壓(30mm Hg)下快速去除溶劑20-30分鐘。獲得的分散體是半透明的，獲得的顆粒的典型平均直徑為50-220nm(Z-平均值，Malvern Zetasizer)。將該分散體進一步凍干48小時。通過加入無菌水或鹽水，獲得的餅塊可以容易地重構(gòu)為原有分散體。在重構(gòu)后的粒徑與凍干前相同。 應當認識到用于本實施例的藥物、溶劑、蛋白質(zhì)的量、類型和比率不受任何方式的限制。實施例12本實施例舉例說明了含有環(huán)孢菌素和清蛋白的藥物組合物的制備。將30mg環(huán)孢菌素溶于3. Oml 二氯甲烷。然后將溶液加至入27. Oml人血清清蛋白溶液(1%W/V)中。將混合物在低RPM下均化5分鐘(Vitris均化器，型號Tempest I. Q.)以便形成粗乳劑，然后轉(zhuǎn)移到高壓均化器(Avestin)中。在9000-40，OOOpsi下進行乳化，同時將乳劑再循環(huán)至少5個周期。將獲得的系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至Rotavap，在40°C在減壓(30mm Hg)下快速去除溶劑 20-30分鐘。獲得的分散體是半透明的，獲得的顆粒的典型平均直徑為50-220nm(Z-平均值，Malvern Zetasizer) 0將該分散體進一步凍干48小時。通過加入無菌水或鹽水，獲得的餅塊可以容易地重構(gòu)為原有分散體。在重構(gòu)后的粒徑與凍干前相同。實施例13本實施例舉例說明了含有油和包含環(huán)孢菌素和清蛋白的藥物組合物的制備。將 30mg環(huán)孢菌素溶于3. Oml適當油(含有10 %橙油的芝麻油)中。然后將溶液加入至 27. Oml人血清清蛋白溶液(1 % w/v)中。將混合物在低RPM下均化5分鐘(Vitris均化器，型號Tempest I. Q.)以便形成粗乳劑，然后轉(zhuǎn)移到高壓均化器(Avestin)中。在 9000-40, OOOpsi下進行乳化，同時將乳劑再循環(huán)至少5個周期。獲得的顆粒的典型平均直徑為50-220nm(Z-平均值，Malvern Zetasizer) 0直接使用分散體或通過任選地加入適當防凍劑凍干48小時。通過加入無菌水或鹽水，獲得的餅塊可以容易地重構(gòu)為原有分散體。 應當認識到用于本實施例的藥物、溶劑、蛋白質(zhì)的量、類型和比率不受任何方式的限制。實施例14本實施例舉例說明了含有兩性霉素和清蛋白的藥物組合物的制備。將30mg兩性霉素溶于3. Oml甲基吡咯烷酮/ 二氯甲烷。將溶液加入于27. Oml人血清清蛋白溶液(1% w/v)中。將混合物在低RPM下均化5分鐘(Vitris均化器，型號"Tempest I. Q.)以便形成粗乳劑，然后轉(zhuǎn)移到高壓均化器(Avestin)中。在9000-40，OOOpsi下進行乳化，同時將乳劑再循環(huán)至少5個周期。將獲得的系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器，在40°C、減壓(30mm Hg)下快速去除溶劑20-30分鐘。獲得的分散體是半透明的，獲得的兩性霉素顆粒的典型平均直徑為50-220nm(Z-平均值，Malvern Zetasizer)。將該分散體進一步凍干48小時。通過加入無菌水或鹽水，獲得的餅塊可以容易地重構(gòu)為原有分散體。在重構(gòu)后的粒徑與凍干前相同。 應當認識到用于本實施例的藥物、溶劑、蛋白質(zhì)的量、類型和比率不受任何方式的限制。加入其它組分如脂質(zhì)、膽鹽等也產(chǎn)生適當?shù)闹苿?。實施?5本實施例舉例說明含有清蛋白和紫杉醇的藥物組合物的臨床前的藥代動力學和藥效學。進行小鼠和大鼠中的幾個臨床前藥代動力學研究以評估清蛋白-紫杉醇藥物組合物相對于聚氧乙烯蓖麻油-紫杉醇(泰素)藥物組合物的可能優(yōu)勢。這些研究證明(1) 在大鼠中清蛋白-紫杉醇的藥代動力學是線性的，而泰素的藥代動力學相對于劑量是非線性的，(2)包含清蛋白和紫杉醇的藥物組合物顯示更低的血漿AUC和Cmax，提示與泰素相比清蛋白-紫杉醇組合物對組織的更快的分布(排泄是類似的)，C3)包含清蛋白和紫杉醇的藥物組合物顯示更低的Cmax，這可能解釋了與泰素相比與血液峰值水平相關(guān)的降低的毒性， (4)與泰素相比，包含清蛋白和紫杉醇的藥物組合物顯示的半衰期在大鼠中高約2-倍和在攜帶腫瘤的小鼠中高4-倍，和( 包含清蛋白和紫杉醇的藥物組合物中紫杉醇的代謝低于泰素藥物組合物中的紫杉醇的代謝。在大鼠中注射后M小時，對于包含清蛋白和紫杉醇的藥物組合物，44%的總放射性仍與紫杉醇相關(guān)，相比較下對于泰素僅22 %。對于含有清蛋白和紫杉醇的藥物組合物顯示的上述藥代動力學的最終效果，即增強的細胞內(nèi)攝取，延長的半衰期和更低的代謝導致與泰素相比在攜帶腫瘤的小鼠中腫瘤AUC高1. 7倍，腫瘤Cmax高 1.2倍，和腫瘤半衰期長1.7倍。實施例16本實施例舉例說明了與包含紫杉醇和清蛋白的藥物組合物相關(guān)的降低的副作用和降低的毒性。由于在沒有聚氧乙烯蓖麻油下包含紫杉醇和清蛋白的藥物組合物的獨特性質(zhì)，包含紫杉醇和清蛋白的藥物組合物的毒性顯著低于泰素。在小鼠和大鼠中的臨床前研究中， 在小鼠中的單一劑量急性毒性研究顯示對于含有紫杉醇和清蛋白的藥物組合物，其LD5tl劑量比泰素大約59倍。在小鼠中的多劑量毒性研究中，對于含有紫杉醇和清蛋白的藥物組合物，其LD5tl劑量比泰素大約10倍。進一步的研究評估在用含有紫杉醇和清蛋白的藥物組合物和泰素處理的大鼠中骨髓抑制的程度。結(jié)果顯示在等劑量下，包含紫杉醇和清蛋白的藥物組合物在大鼠中比泰素產(chǎn)生顯著更小的骨髓抑制。在大鼠中的急性毒性研究中，在接受 9mg/kg泰素的動物中觀察到腦皮層壞死或嚴重的神經(jīng)毒性，但在接受高達120mg/kg劑量的包含紫杉醇和清蛋白的藥物組合物的動物中未觀察到。因此，與包含紫杉醇的常規(guī)藥物組合物相比，包含紫杉醇的藥物組合物中清蛋白的存在導致副作用和毒性的顯著減小。實施例17
本實施例舉例說明了包含紫杉醇和清蛋白的藥物組合物在人中的臨床效果。迄今在超過500位人患者中的臨床研究為含紫杉醇和清蛋白(“清蛋白-紫杉醇”)的藥物組合物提供了支持與聚氧乙烯蓖麻油-紫杉醇組合物(泰素)相比降低的毒性和副作用的證據(jù)。在19位患者的I期研究中，每3周提供清蛋白-紫杉醇的最大耐受劑量為300mg/m2。這顯著高于通常給藥的聚氧乙烯蓖麻油_紫杉醇的劑量，即每3周提供一次175mg/m2。在這些患者中血液毒性是溫和的，沒有過敏，輕度神經(jīng)病，和沒有給藥相關(guān)的副作用如靜脈刺激等。在另一對27位患者的I期研究中，按照每周一次進度表提供的清蛋白-紫杉醇的最大耐受劑量為125-150mg/m2。這顯著高于通常給藥的聚氧乙烯蓖麻油-紫杉醇的劑量， 即按照每周一次進度表提供的80mg/m2。在這些患者中血液毒性是溫和的，沒有過敏，輕度神經(jīng)病，和沒有給藥相關(guān)的副作用如靜脈刺激等。分別在43和63位患者中的每3周提供175或300mg/m2的清蛋白-紫杉醇的兩個 II期研究中，血液毒性低，在175mg/m2和300mg/m2下分別僅有7%和M%患者ANC < 500/ mm3。在175mg/m2和300mg/m2下分別有0%和14%的患者發(fā)生嚴重的神經(jīng)病。沒有發(fā)生嚴重的過敏，沒有發(fā)生給藥相關(guān)的副作用如靜脈刺激，注射疼痛等，這些副作用顯著低于使用泰素所經(jīng)歷的。在將清蛋白-紫杉醇組合物ABI-007與泰素(含有聚氧乙烯蓖麻油-紫杉醇)比較的III期試驗中，ABI-007的劑量顯著更高O60mg/m2，比較泰素的175mg/m2)，表明它更好地被耐受。當與聚氧乙烯蓖麻油-紫杉醇相比時，清蛋白-紫杉醇組合物還顯示顯著減少的中性粒細胞減少癥。實施例18本實施例舉例說明了使用含有清蛋白和紫杉醇的藥物組合物的增強的臨床前功效。比較清蛋白-紫杉醇和泰素對子宮頸鱗狀細胞癌A431的作用的體外細胞毒性研究顯示清蛋白-紫杉醇細胞毒活性增加約4倍，清蛋白-紫杉醇和泰素的IC5tl分別為
0.0038 和 0. 012μ g/mL·在無胸腺小鼠中的五個不同人異種移植腫瘤模型(MX-1乳房，NCI-H522肺， SK-0V-3卵巢，PC-3前列腺，和HT-29結(jié)腸)中，ABI-007的MTD或等毒劑量比泰素高
1.5-3. 4倍，在除了肺腫瘤(p = 0. 15)以外的所有腫瘤中導致腫瘤生長延遲方面統(tǒng)計學顯著的改善(P < 0. 05)。在MX 1乳房模型中，百分之百(100% )的清蛋白-紫杉醇治療的動物存活103 天，相比較下在用等價劑量的泰素治療的組中20-40%存活。實施例19本實施例舉例說明了使用動脈內(nèi)給藥的包含清蛋白和紫杉醇的藥物組合物增強的臨床功效。在動脈內(nèi)給藥包含清蛋白和紫杉醇的藥物組合物的I/II期研究中，如本文所述， 招募頭頸癌患者(N = 31)和肛管癌患者(N = 12)。通過經(jīng)皮超選擇性動脈內(nèi)輸注，劑量在 30分鐘內(nèi)給藥的劑量從120mg/m2逐步增加到300mg/m2，q 3_4周。頭頸癌患者顯示76% (N = 29)的應答率，而肛管癌患者顯示64% (N = 11)的應答率。
實施例20本實施例舉例說明了含有3%油和包含丙泊酚和清蛋白的藥物組合物的制備。如下制備含有1重量％的丙泊酚的水包油型乳劑。通過將甘油(2.25重量％) 和人血清清蛋白(0.5重量％)加入至注射用水中并攪拌直至溶解來制備水相。將水相通過濾器(0.2um濾器)。通過在約50°C-60°C下，將卵磷脂(0.4重量％)和丙洎酚(1重量％)溶解在大豆油(3重量％)中并攪拌直至溶解來制備油相。將油相加入至水相中并在10，000RPM均化5分鐘。將粗乳劑在20，OOOpsi下高壓均化并在5°C再循環(huán)15個周期。 備選地，使用通過均化器的分離通道。將最終乳劑過濾(0.2μπι濾器)并在氮下貯存。獲得的藥物組合物包含下列通常范圍的組分(按重量％計)丙泊酚0.5-5% ；人血清清蛋白0. 5-3% ；大豆油0. 5-3. 0% ；卵磷脂0. 12-1. 2% ；甘油2. 25% ；注射用水適量至100 ；ρΗ 5-8。任選地加入適當?shù)尿蟿缛ヨF胺(0. 001-0. 1% )0實施例21本實施例舉例說明了含有5%油和包含丙泊酚和清蛋白的藥物組合物的制備。如下制備含有1重量％的丙泊酚的水包油型乳劑。通過將甘油(2.25重量％) 和人血清清蛋白(0.5重量％)加入至注射用水中并攪拌直至溶解來制備水相。將水相通過濾器(0.2um濾器)。通過在約50°C-60°C下，將卵磷脂(0.8重量％)和丙泊酚(1重量％)溶解在大豆油(5重量％)中并攪拌直至溶解來制備油相。將油相加入至水相中并在10，000RPM均化5分鐘。將粗乳劑在20，OOOpsi下高壓均化并在5°C再循環(huán)15個周期。 備選地，使用通過均化器的分離通道。將最終乳劑過濾(0.2μπι濾器)并在氮下貯存。獲得的藥物組合物包含下列通常范圍的組分(按重量％計)丙泊酚0.5-5% ；人血清清蛋白 0. 5-3% ；大豆油0. 5-10.0% ；卵磷脂0. 12-1. 2% ；甘油2. 25% ；注射用水適量至100 ；ρΗ 5-8。任選地加入適當?shù)尿蟿?，例如去鐵胺(0. 001-0. 1% )0實施例22本實施例舉例說明了含有丙泊酚和清蛋白、不含油的藥物組合物的制備。使用類似于實施例18所述方法，制備含有清蛋白和吐溫80的丙泊酚組合物。通過將甘油(2. 25重量％)、人血清清蛋白(0.5重量％)，吐溫80(1. 5重量％ )和甲磺酸去鐵胺(0. 1重量％ )加入至注射用水中并攪拌直至溶解來制備水相。將水相通過濾器 (0. 2 μ m濾器)。將丙泊酚(1重量％ )加入至水相中并在10，000RPM均化5分鐘。將粗乳劑在20，OOOpsi下高壓均化并在5°C再循環(huán)15個周期。備選地，使用通過均化器的分離通道。將最終乳劑過濾(0.2μπι濾器)并在氮下貯存。獲得的藥物組合物包含下列通常范圍的組分(按重量％計)丙泊酚0.5-5 ；人血清清蛋白0.5-3% ；吐溫800. 1-1.5% ；甲磺酸去鐵胺0. 0001-0. 1% ；甘油2. 25% ；注射用水適量至100 ；ρΗ 5-8。實施例23本實施例舉例說明了含有丙泊酚、清蛋白和維生素E-TPGS、不含油的藥物組合物的制備。使用類似于實施例19所述方法，制備含有清蛋白和維生素E-TPGS的丙泊酚組合物。通過將甘油(2. 25重量％ )、人血清清蛋白(0. 5重量％ )，維生素E-TPGS (1重量％ )和甲磺酸去鐵胺(0. 1重量％)加入至注射用水中并攪拌直至溶解來制備水相。將水相通過濾器(0.2μπι濾器)。將丙泊酚(1重量％)加入至水相中并在10，000RPM均化5分鐘。將粗乳劑在20，OOOpsi下高壓均化并在5°C再循環(huán)15個周期。備選地，使用通過均化器的分離通道。將最終乳劑過濾(0.2μπι濾器)并在氮下貯存。獲得的藥物組合物包含下列通常范圍的組分(按重量％計)丙泊酚0. 5-5 ；人血清清蛋白0. 5-3% ；維生素E-TPGS 0. 5-4. 0% ； 任選地甲磺酸去鐵胺0. 0001-0. 1% ；甘油2. 25% ；注射用水適量至100 ；ρΗ 5_8。實施例M本實施例舉例說明了含有丙泊酚、清蛋白、維生素E-TPGS和油的藥物組合物的制備。通過下列方法制備含有1重量％的丙泊酚的乳劑。通過將甘油(2. 25重量％ )和人血清清蛋白(0.5重量％)加入至注射用水中并攪拌直至溶解來制備水相。將水相通過濾器(0. 2 μ m濾器)。將表面活性劑例如維生素E-TPGS (0. 5% )加入至水相中。油相由丙泊酚(1重量％ )和大豆油組成。將油相加入至水相中并在10，000RPM均化5分鐘。將粗乳劑在20，OOOpsi下高壓均化并在5°C再循環(huán)最多15個周期。備選地，使用通過均化器的分離通道。將最終乳劑過濾(0.2μπι濾器)并在氮下貯存。獲得的藥物組合物包含下列通常范圍的組分(按重量％計)丙泊酚0.5-5% ； 人血清清蛋白0.01-3% ；維生素E-TPGS 0. 1-2% ；大豆油或其它油(0. 1 % -5 % )；甘油 2. 25% ；注射用水適量至100 ；ρΗ 5-8。任選地加入去鐵胺(0. 001重量％ -0. 1重量％ )。實施例25本實施例舉例說明了含有丙泊酚、清蛋白、維生素E_TPGS、1%油和帶負電組分的藥物組合物的制備。通過下列方法制備含有1重量％的丙泊酚的乳劑。通過將甘油(2. 25重量％ )和人血清清蛋白(0.5重量％)加入至注射用水中并攪拌直至溶解來制備水相。將水相通過濾器(0.2μπι濾器)。將表面活性劑例如維生素E-TPGS (0.5%)加入至水相中。油相由丙泊酚(1重量％)和大豆油組成。加入少量帶負電組分(0.001^-1%),例如磷脂或膽鹽。將油相加入至水相中并在10，000RPM均化5分鐘。將粗乳劑在20，OOOpsi下高壓均化并在5°C再循環(huán)最多15個周期。備選地，使用通過均化器的分離通道。將最終乳劑過濾 (0.2μπι濾器)并在氮下貯存。獲得的藥物組合物包含下列通常范圍的組分(按重量％計)丙泊酚0.5-5% ； 人血清清蛋白0.01-3% ；維生素E-TPGS 0. 1-2% ；大豆油或其它油(0. 1 % -5 % )；甘油 2. 25% ；注射用水適量至100 ；ρΗ 5-8。任選地加入去鐵胺(0. 001重量％ -0. 1重量％ )。實施例沈本實施例舉例說明了含有丙泊酚、清蛋白、維生素E-TPGSU %油和帶負電組分 (脫氧膽酸鈉)的藥物組合物的制備。通過下列方法制備含有1重量％的丙泊酚的乳劑。通過將甘油(2. 25重量％ )和人血清清蛋白(0.5重量％)加入至注射用水中并攪拌直至溶解來制備水相。將水相通過濾器(0. 2 μ m濾器)。將表面活性劑例如維生素E-TPGS (0. 5% )加入至水相中。油相由丙泊酚(1重量％ )和大豆油組成。加入少量帶負電組分(0.001^-1% )，例如脫氧膽酸鈉。將油相加入至水相中并在10，000RPM均化5分鐘。將粗乳劑在20，OOOpsi下高壓均化并在5°C再循環(huán)最多15個周期。備選地，使用通過均化器的分離通道。將最終乳劑過濾 (0.2μπι濾器)并在氮下貯存。
獲得的藥物組合物包含下列通常范圍的組分(按重量％計)丙泊酚0.5-5% ； 人血清清蛋白0.01-3% ；維生素E-TPGS 0. 1-2% ；大豆油或其它油(0. 1 % -5 % )；甘油 2. 25% ；注射用水適量至100 ；pH 5-8。任選地加入去鐵胺(0. 001重量％ -0. 1重量％ )。實施例27本實施例舉例說明了含有丙泊酚、清蛋白、維生素E-TPGSU %油和帶負電組分 (磷脂，膽鹽，聚氨基酸等)的藥物組合物的制備。通過下列方法制備含有1重量％的丙泊酚的乳劑。通過將甘油(2. 25重量％ )和人血清清蛋白(0.5重量％)加入至注射用水中并攪拌直至溶解來制備水相。將水相通過濾器(0. 2 μ m濾器)。將表面活性劑例如維生素E-TPGS (0. 5% )加入至水相中。油相由丙泊酚(1重量％ )和大豆油組成。加入少量帶負電組分(0. 001% -1% )，例如磷脂酰膽堿。將油相加入至水相中并在10，000RPM均化5分鐘。將粗乳劑在20，OOOpsi下高壓均化并在5°C再循環(huán)最多15個周期。備選地，使用通過均化器的分離通道。將最終乳劑過濾 (0.2μπι濾器)并在氮下貯存。獲得的藥物組合物包含下列通常范圍的組分(按重量％計)丙泊酚0.5-5% ； 人血清清蛋白0.01-3% ；維生素E-TPGS 0. 1-2% ；大豆油或其它油(0. 1 % -5 % )；甘油 2. 25% ；注射用水適量至100 ；pH 5-8。任選地加入去鐵胺(0. 001重量％ -0. 1重量％ )。實施例觀本實施例舉例說明了丙泊酚與清蛋白的結(jié)合。如下測定丙泊酚與清蛋白的結(jié)合。在水中和在含有清蛋白的溶液中測試丙泊酚的溶解度。將250 μ L丙泊酚加入至IOmL水或清蛋白溶液中并在閃爍管中攪拌2小時。然后將溶液轉(zhuǎn)移至15mL聚乙烯離心管中并保持在40°C約16小時。測定水和清蛋白溶液樣品中的丙泊酚。丙泊酚在水中的溶解度被測定為0. iaiig/ml。丙泊酚在清蛋白溶液中的溶解度取決于清蛋白的濃度，當清蛋白的濃度為2% (20mg/ml)時增加至0. Mmg/ml。將溶液超濾通過30kD MWCO濾器并測定濾液中的丙泊酚。發(fā)現(xiàn)對于丙泊酚/水溶液，61%的丙泊酚可以在濾液中回收，而對于丙泊酚/清蛋白溶液，僅14%被回收在濾液中，顯示丙泊酚與清蛋白的相當大的結(jié)合?；谶@些結(jié)果，由于清蛋白與丙泊酚結(jié)合，將清蛋白加入包含丙泊酚的藥物組合物導致游離丙泊酚的量的減少。實施例四本實施例舉例說明了通過過濾/膜接觸在藥物組合物中游離丙泊酚的減少。如在實施例28中所述實驗中觀察到的，包含丙泊酚的藥物組合物的過濾或超濾導致游離丙泊酚的量的減少。雙異丙酚和按照本發(fā)明制備的含有清蛋白的藥物組合物，各自含有丙泊酚(10mg/ml)，使用30kD膜超濾。使用HPLC測量在濾液中游離丙泊酚的量。 對于雙異丙酚在濾液中游離丙泊酚的濃度為約17μ g/ml，而對于本發(fā)明的藥物組合物在濾液中的游離丙泊酚的濃度為約7 μ g/ml。結(jié)果對應于對于包含丙泊酚和清蛋白的藥物組合物的游離丙泊酚的有效減少大于2倍。實施例30本實施例舉例說明了向人給藥包含丙泊酚和清蛋白的藥物組合物。進行隨機的雙盲臨床試驗，以比較包含丙泊酚和清蛋白的藥物組合物與商購的丙泊酚制劑一雙異丙酚的不利的皮膚感覺。按照良好臨床實踐(Good Clinical Practices)進行試驗并且從受試者獲得知情同意書。任何性別的成人受試者都可以參加，前提是他們具有未破損的、表面正常的手背面皮膚。原來貯存在冰箱中的制劑被帶到室溫環(huán)境中，然后將10 μ L制劑同時緩慢放置在受試者兩只手的手背。記錄他們的手對于制劑的總體反應和感覺。該研究的結(jié)果在表1中列出。表 1
對受試者的試驗順序使用ABI-丙泊酚的受試者％ 感覺使用雙異丙酚的受試者％ 感覺溫熱或剌感或刺痛的無感覺溫熱或剌感或刺痛的無感覺第1次發(fā)生率0.0100.07525實施例31本實施例舉例說明了在包含丙泊酚的藥物組合物中作為抗氧化劑的去鐵胺的應用。包含丙泊酚和甲磺酸去鐵胺，和含有吐溫或TPGS的藥物組合物被貯存在4°C， 25°C或40°C，以檢測甲磺酸去鐵胺在防止丙泊酚氧化中的作用。對于這些制劑隨時間測量丙泊酚的濃度以，測定去鐵胺的抗氧化活性。該數(shù)據(jù)在下表2和3中作為相對于時間零點的效力％報道。表2.清蛋白/吐溫制劑
1個月貯存、〉曰 F^ 恤/又4°C25°C40。C對照100%88%48%0.01%甲磺酸去鐵胺101%89%61%0.1%甲磺酸去鐵胺103%89%64%表3.清蛋白/TPGS制劑
1個月貯存、>曰 FfcP imL/JC4°C25°C40。C對照99%73%42%0.01%甲磺酸去鐵胺99%87%55%0.1%甲磺酸去鐵胺99%85%58%
在這些條件下，去鐵胺足以降低丙泊酚的氧化水平。該效果在越高的溫下越顯著。 在4°C未發(fā)生顯著氧化。使用沒有被惰性材料或聚四氟乙烯涂覆的塞子進行該研究。實施例32本實施例舉例說明了含有紫杉醇和清蛋白的藥物組合物(ABI-007)的肺內(nèi)傳遞。本研究的目的是測定[3H]ABI-007在血液中的時程和在向Sprague Dawley大鼠氣管內(nèi)滴注后選擇組織?；诿縦g體重1.5mL的劑量體積，計算向動物給藥的氣管內(nèi)劑量制劑的目標體積。劑量給藥裝置由與Ι-mL氣密的Iuer-鎖型注射器連接的Perm-Century微型噴霧器 (型號 1A-1B ；Penn-Century, Inc. , Philadelphia, PA ；購自 DeLong Distributors, Long Branch, NJ)。將適當體積的劑量制劑吸入劑量給藥裝置，稱量填充的裝置并記錄重量。將導管放入被麻醉的動物的氣管中，將劑量給藥裝置的微型噴霧器部分通過導管放置在氣管內(nèi)，給藥劑量。在劑量給藥后，重新稱量空的劑量給藥裝置，作為劑量給藥前后劑量給藥裝置的重量差計算給藥的劑量。對于所有動物平均劑量為4. 7738士0.0060 (CV 1.5059)mg紫杉醇/kg體重。在下列預定劑量給藥后的時刻從JVC大鼠的留置的頸靜脈套管中收集約250 μ L 的血樣:1，5，10，15，30，和45分鐘(min)，和1，4，8，和24小時(h)。24小時血樣，以及在 10分鐘、45分鐘和2小時從處死的動物中收集的血樣是在處死時通過心穿刺從麻醉的大鼠中收集的。將用于總放射性分析的所有血樣分散到預稱重的樣品管中，將樣品管重新稱重， 通過減法計算每個樣品的重量。測定從頸靜脈收集的血樣以及在處死時從每個動物收集的 250-μ L的血液等分試樣的總氚含量。對于所有大鼠，血液中氚的最大濃度在劑量給藥后5分鐘(0. 0833小時)時觀察到。在從4h至24h的時間間隔內(nèi)測定的氚的消除半衰期為19. 7 至43. 02h。應當注意該間隔僅包括三個數(shù)據(jù)點，其可以解釋該參數(shù)的變異性。氚從血液中的表觀清除率為約0. 04L/ h。這些實驗的結(jié)果在下表4中列出。表4.在氣管內(nèi)滴注[3H]ABI-007后在大鼠中血液氚濃度(mg-eq/L)對于時間曲線的非區(qū)室分析
參數(shù)平均+/-SD
Cmax (mg-eq/L)1.615+/-0.279
Tmax (hr) 1/2β (hr)
AUC 終(mg-eqxhr/L)
Cl/F(L/hr)
Fa (生物利用度)
0.0833 +/-0.0 33.02+/-1.99 7.051+/-1.535 0.0442 +/-0.0070 1.229+/-0.268 作為時間的函數(shù)分析在向大鼠靜脈內(nèi)給藥后來源于[3Η]ΑΒΙ-007的放射性的平均血濃度，以便評估來源于氣管內(nèi)給藥[3Η]ΑΒΙ-007的氚的生物利用度。該分析導致 6. 1354mg-eq □ hr/L的24-小時AUC(AUC終)?；谶@些數(shù)據(jù)，來源于氣管內(nèi)給藥[3H] ABI-007的放射性是高生物利用度的。這些分析是基于總放射性。
來源于[3H]ABI-007的氚在氣管內(nèi)滴注以后被快速吸收。在氣管內(nèi)給藥[3H] ABI-007后在血液中氚的平均吸收和消除半衰期(分別為k01半衰期和klO半衰期)分別為0. 0155+/-0. 0058小時和4. 738+/-0. 366小時。氚從血液中的平均表觀清除率為 0. 1235+/-0. 0180L/小時(參見以上表4)。來源于[3H]ABI-007的氚在氣管內(nèi)給藥后被吸收和分配。氚在血液中的時程很好地通過二區(qū)室模型描述，平均吸收和消除半衰期分別為0. 0155和4. 738小時。在氣管內(nèi)給藥后10分鐘在肺中回收約的給藥劑量。除了胃腸道以外，在所有檢查的時刻，在其它組織中回收到最大小于的劑量。基于來自先前使用『H]CapX0lTM進行的靜脈內(nèi)劑量給藥研究結(jié)果，對于該劑量組的三只動物，來源于氣管內(nèi)給藥的氚的生物利用度為1.2 士0^68(平均值士SD)。然而， 應當注意，這個對于生物利用度的估計是基于總放射性。令人驚奇的是，通過使用本發(fā)明含有清蛋白的組合物的肺途徑傳遞的紫杉醇快速可生物利用，顯示極好的跨過肺內(nèi)皮的轉(zhuǎn)運。在動物中未注意到毒性，這是令人驚奇的，因為已知肺傳遞細胞毒素類導致肺毒性。在劑量給藥(27%的氣管內(nèi)給藥)后M小時，相當量的放射性存在于胃腸道(包括內(nèi)含物)中。在胃腸道中氚的存在可能是由于膽汁排泄或氚從呼吸道通過粘膜纖毛清除和隨后吞咽的清除。實施例33本實施例舉例說明了用于肺部傳遞包含紫杉醇和清蛋白的藥物組合物的 Aerotech II 和 Pari 噴霧器。本研究是使用紫杉醇-清蛋白藥物組合物ABI-007在下列條件下進行的室溫 (20-230C )，相對濕度(48-54% )，環(huán)境壓力(629mmHg)，噴霧器流率(對于Aerotech II為 10L/min ；對于Pari為7L/min)，總流率(28. 3L/min)，噴霧器壓力下降(對于Aerotech II 為 23 lb/in2 ；對于 Pari 為 32 lb/in2)，運行時間(15-60 秒)，樣品體積(1. 5mL), ABI-007 紫杉醇濃度(5，10，15和20mg/mL)。當將ABI-007以5_15mg/mL的濃度重構(gòu)時，Aerotech II和Pari噴霧器都提供了可接受的總效率(30% -60 % ) 0 Pari噴霧器效率具有比Aerotech II噴霧器更高的效率。Pari噴霧器效率隨著ABI-007濃度增加而有稍微下降。觀察到極好的細粒部分 (74% -96% )0 Aerotech II噴霧器具有比Pari噴霧器更高的細粒部分。細粒部分與濃度無關(guān)。使用15mg/mL的ABI-007溶液，在小于30分鐘內(nèi)Pari噴霧器傳遞IOOmg紫杉醇。 使用10mg/mL或15mg/mL的ABI-007溶液，在約65分鐘內(nèi)Aerotech II噴霧器傳遞IOOmg 紫杉醇。對于Aerotech II和Pari噴霧器檢測性能穩(wěn)定性。直至藥物排盡，兩種噴霧器的氣溶膠濃度和效率是穩(wěn)定的。在15mg/mL，Pari噴霧器消耗藥物的速率是Aerotech II噴霧器的兩倍，產(chǎn)生比Aerotech II噴霧器更高的氣溶膠濃度。總之，當通過肺途徑給藥時，紫杉醇的納米粒/清蛋白制劑(ABI-007)在大鼠中顯示極好的生物利用度。在給藥劑量下，沒有早期毒性的明顯標記。納米粒紫杉醇(ABI-007) 的肺傳遞可以使用常規(guī)噴霧器實現(xiàn)。實施例34本實施例描述了包含清蛋白和雷帕霉素的藥物組合物的肺內(nèi)傳遞。本研究的目的是測定在向Sprague Dawley大鼠氣管內(nèi)滴注以后在血液中雷帕霉素的肺吸收，并與靜脈內(nèi)滴注比較?；诿縦g體重ImL的劑量體積計算向動物給藥的氣管內(nèi)劑量制劑的目標體積。 劑量給藥裝置由與Ι-mL氣密的Iuer-鎖型注射器連接的Perm-Century微型噴霧器(型號 1A-1B ；Penn-Century, Inc. , Philadelphia, PA ；購自 DeLong Distributors, Long Branch, NJ)。將適當體積的劑量制劑吸入劑量給藥裝置，稱量填充的裝置并記錄重量。將導管放入被麻醉的動物的氣管中，將劑量給藥裝置的微型噴霧器部分通過導管放置在氣管內(nèi)，給藥劑量。在劑量給藥后，重新稱量空的劑量給藥裝置，作為劑量給藥前后劑量給藥裝置的重量差計算給藥的劑量。在下列預定劑量給藥時刻從大鼠的留置的頸靜脈套管中收集約250 μ L的血樣 1，5，10，15，30，和45分鐘(min)，和1，4，8，和24小時(h)。將所有分析的血樣分配到預先稱重的樣品管中，將樣品管重新稱重，通過減法計算每個樣品的重量。使用LC/MS/MS測定收集的血樣的總雷帕霉素濃度。令人驚奇的是，結(jié)果顯示在通過肺途徑和通過靜脈內(nèi)傳遞的雷帕霉素的血濃度之間沒有顯著差異。使用包含清蛋白的藥物組合物，通過肺途徑傳遞的雷帕霉素的生物利用度被計算為109%，顯示極好的跨過肺內(nèi)皮的轉(zhuǎn)運。實施例35本實施例舉例說明在肺內(nèi)給藥按照本發(fā)明制備的包含雷帕霉素和清蛋白的藥物組合物以后，清蛋白-雷帕霉素的組織分布。本研究的目的是測定在向Sprague Dawley大鼠氣管內(nèi)滴注以后雷帕霉素在組織中的肺吸收，并與靜脈內(nèi)滴注相比較?；诿縦g體重ImL的劑量體積計算向動物給藥的氣管內(nèi)劑量制劑的目標體積。 劑量給藥裝置由與Ι-mL氣密的Iuer-鎖型注射器連接的Perm-Century微型噴霧器(型號 1A-1B ；Penn-Century, Inc. , Philadelphia, PA ；購自 DeLong Distributors, Long Branch, NJ)。將適當體積的劑量制劑吸入劑量給藥裝置，稱量填充的裝置并記錄重量。將導管放入被麻醉的動物的氣管中，將劑量給藥裝置的微型噴霧器部分通過導管放置在氣管內(nèi)，給藥劑量。在劑量給藥后，重新稱量空的劑量給藥裝置，作為劑量給藥前后劑量給藥裝置的重量差計算給藥的劑量。在10分鐘、45分鐘、2小時和M小時的每個時刻從每組3只大鼠的腦，肺和肝中收集樣品。收集樣品并使用LC/MS/MS分析總雷帕霉素濃度。結(jié)果顯示當通過肺傳遞時與靜脈內(nèi)傳遞相比雷帕霉素濃度在肺組織中更大。然而，與靜脈內(nèi)(IV)傳遞相比，當通過氣管內(nèi)(IT)傳遞時雷帕霉素在腦中的總濃度較低。在肝中，無論IT或IV傳遞，雷帕霉素的濃度似乎沒有差別?；谶@些結(jié)果，肺內(nèi)傳遞雷帕霉素可以適用于治療病癥(即肺移植)， 其中高局部濃度的雷帕霉素將是有益的。實施例36本實施例舉例說明了口服傳遞含有紫杉醇和清蛋白的藥物組合物(ABI-007)。將氚化的ABI-007用于在大鼠中在口服管飼法后測定紫杉醇的口服生物利用度。 在過夜禁食后，將5只大鼠給予5. 5mg/kg在ABI-007中的紫杉醇(組A)且另5只大鼠(組 B)用環(huán)孢菌素(5.0mg/kg)預處理，接著用5. 6mg/kg在ABI-007中的紫杉醇處理。在通過燃燒測定血樣中的放射性以后，進行在0.5，1，2，3，4，5，6，8，12，和24小時抽取的血樣的藥代動力學分析。通過與先前獲得的靜脈內(nèi)數(shù)據(jù)相比較來測定口服生物利用度。結(jié)果在下表 5中列出。表5.在口服給藥后3H-紫杉醇來源的放射性的平均AUC 0-24, Cmax，Tmax和％吸收
組 處理劑量/途徑AUC0-24吸收Cmax(mg/kg) ‘ Tmax
mg/kg(噸 eq x hr/mL)(%)(fig x eq/mL)(hr)
A 在生理鹽水中的5.5/PO(P)2.9244.30.2451 ABI-007
B 在含有 CsA 的生5/PO(C)，8.02121.10.5650.5
理鹽水中的5.6/PO(P) ABI-007將AUC 0-24IV(6. 06 μ g χ hr. /mL)和 IV 劑量(5. lmg/kg)用于計算吸收百分率 (基于ABI-007的IV劑量的數(shù)據(jù))。對于單獨ABI-007觀察到44 %的口服生物利用度。這顯著高于對于其它紫杉醇制劑所觀察到的。當用環(huán)孢菌素(CsA)處理動物時，生物利用度增加到121%。這是預料到的，因為CsA是ρ-糖蛋白泵的已知抑制劑，其通常將抑制化合物如紫杉醇從GI道吸收。大于100%的生物利用度可以通過在將紫杉醇膽汁排泄到GI道以后的再吸收來解釋。其它已知的吸收抑制劑或增強劑也可以用于該目的。實施例37本實施例舉例說明了在給藥包含紫杉醇和清蛋白的藥物組合物后改善的紫杉醇向紅細胞和腫瘤細胞的穿透。將人MX-I乳腺瘤碎片皮下移植到無胸腺小鼠中。用咕紫杉醇紫杉醇制備如上所述的包含紫杉醇和清蛋白的藥物組合物(“紫杉醇-清蛋白”)和泰素，比放射性為25yCi/ mg紫杉醇。當腫瘤體積達到約500mm3時，將20mg/kg放射標記的紫杉醇-清蛋白或泰素在鹽水中靜脈內(nèi)給藥。將血漿、血液和腫瘤組織采樣并在給藥后5，15，和30分鐘和在1，3，8， 和M小時顯示分析放射性。使用WinNonlin，Pharsight，USA分析腫瘤藥代動力學(AUC和吸收常數(shù))。紫杉醇-清蛋白顯示向紅細胞(RBC)的快速分配，如在靜脈內(nèi)給藥藥物以后血漿 /血液放射性比率快速降低至一致所示。向RBC中的完全分配早在給藥紫杉醇-清蛋白后 1小時就發(fā)生了。相比之下，配制為泰素的紫杉醇向RBC的分配要緩慢地多，并且直至超過 8小時還未完成。紫杉醇-清蛋白顯示向腫瘤組織的快速分配，吸收常數(shù)(Ka)比泰素大3.3X。&對于紫杉醇-清蛋白和泰素分別為0.431^-1和0. Uhr—1。紫杉醇的快速攝取導致紫杉醇-清蛋白的腫瘤AUC比泰素高33%。AUC對于紫杉醇-清蛋白和泰素分別為3632nCi*hr/g和 2739nCi*hr/go實施例38本實施例舉例說明了向小鼠給藥的含有紫杉醇和清蛋白的藥物組合物的安全性。每天用逐漸增加劑量的紫杉醇-清蛋白或泰素處理無胸腺小鼠，連續(xù)5天。將存活率對劑量作圖以測定LD5tlt5與泰素相比，紫杉醇-清蛋白極大增加了存活率(p = 0.017， AN0VA)。對于qldx5進度表，紫杉醇-清蛋白和泰素的LD5tl分別計算為47mg/kg/天和30mg/ kg/天。在13. %ig/kg/天的劑量水平下，紫杉醇-清蛋白和泰素都被很好地耐受，死亡率分別為1 % (72只小鼠中1只死亡)和4% (47只小鼠中2只死亡)。在20mg/kg/天的劑量水平下，紫杉醇-清蛋白的死亡率為(72只小鼠中1只死亡)，泰素死亡率為17% (47只小鼠中8只死亡)(p = 0. 0025)。在30mg/kg/天的劑量水平下，紫杉醇-清蛋白的死亡率為 4% (72只小鼠中3只死亡)，泰素死亡率為49% (47只小鼠中23只死亡)(ρ < 0. 0001)。實施例39本實施例舉例說明了對于紫杉醇-清蛋白組合物，跨過微脈管內(nèi)皮細胞(EC)的新紫杉醇轉(zhuǎn)運機制。由于腫瘤中“滲漏”脈管導致的Era作用，納米粒和清蛋白-紫杉醇組合物可以在腫瘤組織中累積。清蛋白特異的gp60受體(albondin)通過細胞表面處的細胞膜穴樣內(nèi)陷內(nèi)的受體的胞轉(zhuǎn)，將清蛋白轉(zhuǎn)運通過EC。該胞轉(zhuǎn)機制允許清蛋白-紫杉醇轉(zhuǎn)運至底層的胞間隙中。相反，泰素中的聚氧乙烯蓖麻油抑制紫杉醇與清蛋白的結(jié)合，極大地降低了紫杉醇向腫瘤的轉(zhuǎn)運。另外，gpl6和gp30受體還涉及含有結(jié)合的紫杉醇的修飾的清蛋白的胞內(nèi)轉(zhuǎn)運，導致增加的紫杉醇與內(nèi)皮細胞的結(jié)合，與泰素相比抗血管生成作用更大。實施例40本實施例舉例說明了與泰素相比，含有紫杉醇和清蛋白的藥物組合物的內(nèi)皮胞轉(zhuǎn)的增加。將人肺微脈管內(nèi)皮細胞(HLMVEC)在transwell上培養(yǎng)至匯合。將濃度為20 μ g/ mL本發(fā)明含有紫杉醇和清蛋白的藥物組合物或泰素加入至上transwell室中。使用熒光計連續(xù)監(jiān)視紫杉醇通過胞轉(zhuǎn)從上室轉(zhuǎn)運到下室中的轉(zhuǎn)運。還使用僅含有Flutax而無清蛋白的對照。含有Flutax的對照未顯示轉(zhuǎn)運，證明匯合HLMVEC單層的完整性。在5% HSA(生理濃度)的存在下，來自清蛋白-紫杉醇組合物的紫杉醇的轉(zhuǎn)運要比來自泰素的紫杉醇快得多。轉(zhuǎn)運速率常數(shù)(Kt)對于清蛋白-紫杉醇組合物和泰素分別為 1. SQBhr-1和0. OShr-10清蛋白-紫杉醇組合物的轉(zhuǎn)運跨過單層的紫杉醇的總量比泰素的轉(zhuǎn)運跨過單層的紫杉醇的總量高3倍。實施例41本實施例舉例說明了與泰素相比，含有紫杉醇和清蛋白的藥物組合物改善的內(nèi)皮細胞(EC)結(jié)合。將人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)培養(yǎng)在96-孔微量滴定板上。在一個實驗中， 在增加濃度的聚氧乙烯蓖麻油EL/^tOH(泰素的載體)的存在下，將HUVEC與紫杉醇 (Flutax-Oregon Green標記的紫杉醇)反應。在另一實驗中，含有清蛋白和Flutax的藥物組合物和泰素-Flutax組合物在各種終濃度下與HUVEC反應。紫杉醇與細胞的結(jié)合受聚氧乙烯蓖麻油的抑制。通過聚氧乙烯蓖麻油EL/EtOH的0.02%的IC5tl顯示抑制。該濃度的聚氧乙烯蓖麻油已經(jīng)顯示在泰素化療期間持續(xù)至少M小時。因此，它是體內(nèi)相關(guān)過程。在所有檢測濃度下，顯著量的來自清蛋白-紫杉醇組合物的紫杉醇與細胞結(jié)合。相比之下，對于泰素觀察到很少或未觀察到結(jié)合。實施例42
本實施例舉例說明了與泰素相比，含有紫杉醇和清蛋白的藥物組合物的改善的清
蛋白結(jié)合。將人血清清蛋白(HSA)固定在塑料ELISA板上。將紫杉醇(Flutax-Oregon Green 標記的紫杉醇)與固定的HSA在增加濃度的聚氧乙烯蓖麻油EL/EtOH的存在下反應。在另一實驗中，清蛋白-紫杉醇-Flutax組合物和泰素-Flutax組合物與固定的HSA在20 μ g 紫杉醇/mL的終濃度下反應。紫杉醇與清蛋白的結(jié)合受聚氧乙烯蓖麻油的抑制。通過聚氧乙烯蓖麻油EL/^tOH的0. 003%的IC5tl顯示抑制。該濃度的聚氧乙烯蓖麻油已經(jīng)顯示在泰素化療期間持續(xù)至少M小時。因此，它是體內(nèi)相關(guān)過程。在相關(guān)藥物紫杉醇濃度(20yg/ mL)下，顯著量的來自清蛋白-紫杉醇組合物的紫杉醇與固定的HSA結(jié)合。相比之下，對于泰素未觀察到結(jié)合。實施例43本實施例舉例說明了與泰素相比，對于含有紫杉醇和清蛋白的藥物組合物增加的紫杉醇向清蛋白的轉(zhuǎn)運。將泰素-Flutax和清蛋白-紫杉醇-Flutax組合物以20 μ g/mL，40 μ g/ml，和 80 μ g/ml與在Hanks緩沖液中的5% HSA或與血清混合。立即在天然3-14%聚丙烯酰胺凝膠上分離混合物，通過掃描熒光計測定與清蛋白結(jié)合的紫杉醇的量。與泰素相比，對于清蛋白-紫杉醇組合物，紫杉醇向HSA的轉(zhuǎn)運更快。當將血清或5% HSA與清蛋白-紫杉醇-Flutax組合物或泰素-Flutax組合物溫育時，更多的紫杉醇與HSA共電泳。與泰素-Flutax組合物相比，20 μ g/ml，40 μ g/ml，和80 μ g/ml的清蛋白-紫杉醇-Flutax組合物在接觸5 % HSA后，分別有45 %，60 %，和33 %更多的紫杉醇轉(zhuǎn)運至HSA。對于^Omg/m2 的ABI-007，Cmax為約20 μ g/mL,因此這是重要的體內(nèi)過程。實施例44本實施例舉例說明了糖蛋白受體gp60負責清蛋白-紫杉醇的結(jié)合和胞轉(zhuǎn)。熒光標記的紫杉醇(Flutax)清蛋白組合物與培養(yǎng)物中的微脈管內(nèi)皮細胞接觸。 在顯微鏡下觀察到熒光染色，證據(jù)是斑點區(qū)域，這推測是與清蛋白-紫杉醇結(jié)合的gp60受體。這通過使用羅丹明標記的清蛋白證實，羅丹明標記的清蛋白與紫杉醇的斑點熒光位置相同。實施例45本實施例舉例說明了增加量的清蛋白可以與紫杉醇的結(jié)合競爭。將清蛋白固定在微量滴定板上。將熒光紫杉醇加入孔中，使用掃描熒光計測量紫杉醇的結(jié)合。將增加量的清蛋白加入孔中并測量與固定的清蛋白結(jié)合的紫杉醇的抑制水平。數(shù)據(jù)顯示隨著加入的清蛋白的量增加，觀察到結(jié)合的相應降低。對于與內(nèi)皮細胞的結(jié)合觀察到類似效果。這顯示更高的清蛋白濃度抑制紫杉醇的結(jié)合。優(yōu)選本發(fā)明具有較低量的清蛋白的組合物。實施例46本實施例舉例說明了在本發(fā)明藥物組合物中較低量的清蛋白導致穩(wěn)定的組合物。為了研究組合物中較低量的清蛋白是否影響本發(fā)明藥物組合物的穩(wěn)定性，制備含有低量清蛋白的清蛋白-紫杉醇組合物。當在不同溫度0-8°C，25t^n4(TC )下檢查紫杉醇功效、雜質(zhì)形成、粒徑、PH和其它穩(wěn)定性的典型參數(shù)時，發(fā)現(xiàn)這些組合物與具有更高量的清蛋白的組合物一樣穩(wěn)定。因此優(yōu)選具有較低量的清蛋白的組合物，因為這可以極大地降低成本和允許增加的結(jié)合和向細胞的轉(zhuǎn)運。實施例47本實施例舉例說明了含有清蛋白和紫杉醇的藥物組合物，其具有高的清蛋白與紫
杉醇比率。將30mg紫杉醇溶解在3. Oml 二氯甲烷中。將溶液加入至27. Oml人血清清蛋白溶液(3%W/v)中(相當于清蛋白與紫杉醇的比率為27)。根據(jù)需要加入去鐵胺。將該混合物在低RPM下均化5分鐘(Vitris均化器，型號Tempest I. Q.)以便形成粗乳劑，然后轉(zhuǎn)移到高壓均化器(Avestin)中。在9000-40，OOOpsi下進行乳化，同時將乳劑再循環(huán)至少5個周期。將獲得的系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器，在40°C、減壓(30mm Hg)下快速去除二氯甲烷20-30分鐘。獲得的分散體是半透明的，獲得的紫杉醇顆粒的典型平均直徑為 50-220nm(Z-平均值，Malvern Zetasizer)。將該分散體進一步凍干48小時。通過加入無菌水或鹽水，獲得的餅塊可以容易地重構(gòu)為原有分散體。在重構(gòu)后的粒徑與凍干前相同。應當認識到用于本實施例的藥物、溶劑、蛋白質(zhì)的量、類型和比率不受任何方式的限制。當與溶于聚氧乙烯蓖麻油制劑中的紫杉醇的毒性相比時，本發(fā)明含有清蛋白的藥物組合物顯示顯著更低的毒性。實施例48本實施例舉例說明了含有清蛋白和紫杉醇的藥物組合物，其具有低的清蛋白與紫
杉醇比率。具體地，將300mg紫杉醇溶解在3. Oml 二氯甲烷中。將溶液加入至27ml人血清清蛋白溶液(5%W/v)中(相當于清蛋白與紫杉醇的比率為4. 5)。根據(jù)需要加入去鐵胺。將該混合物在低RPM下均化5分鐘(Vitris均化器，型號Tempest I. Q.)以便形成粗乳劑， 然后轉(zhuǎn)移到高壓均化器(Avestin)中。在9000-40，OOOpsi下進行乳化，同時將乳劑再循環(huán)至少5個周期。將獲得的系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器，在40°C、減壓(30mm Hg)下快速去除二氯甲烷20-30分鐘。獲得的分散體是半透明的，獲得的紫杉醇顆粒的典型平均直徑為 50-220nm(Z-平均值，Malvern Zetasizer)。將該分散體進一步凍干48小時。通過加入無菌水或鹽水，獲得的餅塊可以容易地重構(gòu)為原有分散體。在重構(gòu)后的粒徑與凍干前相同。應當認識到用于本實施例的藥物、溶劑、蛋白質(zhì)的量、類型和比率不受任何方式的限制。當與溶于聚氧乙烯蓖麻油制劑中的紫杉醇的毒性相比時，本發(fā)明含有清蛋白的藥物組合物顯示顯著更低的毒性。實施例49本實施例舉例說明了含有清蛋白和紫杉醇的藥物組合物，其具有中等的清蛋白與紫杉醇比率。具體地，將135mg紫杉醇溶解在3. Oml 二氯甲烷中。將溶液加入至27ml人血清清蛋白溶液(5%W/v)中。根據(jù)需要加入去鐵胺。將該混合物在低RPM下均化5分鐘(Vitris 均化器，型號Tempest I. Q.)以便形成粗乳劑，然后轉(zhuǎn)移到高壓均化器(Avestin)中。在 9000-40, OOOpsi下進行乳化，同時將乳劑再循環(huán)至少5個周期。將獲得的系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器，在40°C在減壓(30mm Hg)下快速去除二氯甲烷20-30分鐘。獲得的分散體是半透明的，獲得的紫杉醇顆粒的典型平均直徑為50-220nm(Z-平均值，Malvern Zetasizer) 0將該分散體進一步凍干48小時。通過加入無菌水或鹽水，獲得的餅塊可以容易地重構(gòu)為原有分散體。在重構(gòu)后的粒徑與凍干前相同。在本發(fā)明組合物中，清蛋白與紫杉醇的計算比率(w/w)為約10。應當認識到用于本實施例的藥物、溶劑、蛋白質(zhì)的量、類型和比率不受任何方式的限制。當與溶于聚氧乙烯蓖麻油制劑中的紫杉醇的毒性相比時，本發(fā)明含有清蛋白的藥物組合物顯示顯著更低的毒性。實施例50本實施例舉例說明了用清蛋白-紫杉醇組合物治療動物模型中的類風濕性關(guān)節(jié)炎。將在Louvain大鼠中膠原蛋白誘導的關(guān)節(jié)炎模型用于檢測清蛋白-紫杉醇組合物對關(guān)節(jié)炎的治療效果。監(jiān)視實驗動物的爪尺寸以評估關(guān)節(jié)炎的嚴重性。在關(guān)節(jié)炎完全發(fā)展以后(通常在膠原蛋白注射后約9-10天)，將實驗動物分成不同組以腹膜內(nèi)接受清蛋白-紫杉醇lmg/kg q. ο. d，或清蛋白-紫杉醇0. 5mg/kg+潑尼松 0. 2mg/kgq. ο. d.(聯(lián)合治療)達6個劑量，然后每周一個劑量達三周。在治療開始(第0 天)和每次注射藥物時測量爪尺寸。僅接受生理鹽水的一組作為對照。在實驗結(jié)束時，接受清蛋白-紫杉醇的組爪尺寸實現(xiàn)42%的減小，聯(lián)合治療組顯示爪尺寸減小33%，而對照組爪尺寸與治療開始時相比增加約20%?？傊?，清蛋白-紫杉醇組合物對關(guān)節(jié)炎顯示治療效果。清蛋白-紫杉醇的組合可能通過受體介導的機制如gp60的轉(zhuǎn)運定位于關(guān)節(jié)炎損傷的部位。實施例51本實施例舉例說明了清蛋白-紫杉醇組合物在治療心血管再狹窄中的應用。動物中紫杉醇流出支架(Paclitaxel eluting stents)導致不完全的愈合，在有些情形中，導致在動脈中缺少對新內(nèi)膜生長的持續(xù)抑制。本研究檢驗了新的系統(tǒng)傳遞清蛋白-紫杉醇本發(fā)明組合物對于降低支架內(nèi)再狹窄的功效。在接受雙側(cè)髂動脈支架的38只新西蘭白兔中檢測鹽水重構(gòu)的清蛋白-紫杉醇。將清蛋白-紫杉醇的劑量(1. 0-5. Omg/kg紫杉醇劑量)作為10-分鐘的動脈內(nèi)輸注給藥；對照動物接受載體(0. 9%生理鹽水)。在接下來的慢性實驗中，將5. Omg/kg清蛋白-紫杉醇提供給支架，在第觀天靜脈內(nèi)重復劑量給藥3. 5-mg/kg清蛋白-紫杉醇；這些研究在3個月終止。在第觀天，通過劑量給藥清蛋白-紫杉醇>=2. 5mg/kg降低了平均新內(nèi)膜厚度(ρ <= 0. 02)，證據(jù)為延長的愈合。然而，單劑量的5. Omg/kg清蛋白-紫杉醇的功效在90天前喪失。相反，在上支架后觀天第二次重復給藥3. 5mg/kg清蛋白-紫杉醇導致在90天時新內(nèi)膜厚度的持續(xù)抑制 (與單劑量5. Omg/kg清蛋白-紫杉醇和對照相比，ρ <= 0. 009)，新內(nèi)膜幾乎完全愈合。盡管系統(tǒng)的清蛋白-紫杉醇在觀天降低了新內(nèi)膜生長，但是對于持續(xù)新內(nèi)膜抑制要求單次重復劑量。因此，本發(fā)明組合物適用于治療心血管疾病如再狹窄。本發(fā)明包含除了紫杉醇以外的藥劑(例如雷帕霉素，其它紫杉烷類，埃坡霉素等)的組合物全都適用于治療血管或人造血管移植物如在需要血液透析的患者中用于動脈-靜脈入口的那些中的再狹窄。
權(quán)利要求
1.一種包含藥劑和藥用載體的藥物組合物，其中所述藥用載體包含清蛋白，其中在所述藥物組合物中所述清蛋白與所述藥劑的比率(重量/重量)為約18 1或更小。
2.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中在所述藥物組合物中所述清蛋白與所述藥劑的比率 (重量/重量)為約91或更小。
3.權(quán)利要求2的藥物組合物，其中在所述藥物組合物中所述清蛋白與所述藥劑的比率為約1 1到約9 1。
4.權(quán)利要求2的藥物組合物，其中在所述藥物組合物中所述清蛋白與所述藥劑的比率為約9 1。
5.權(quán)利要求1-4的藥物組合物，其中所述藥物組合物包含約0.1重量％至25重量％的清蛋白。
6.權(quán)利要求1-4中任一項的藥物組合物，其中所述藥用載體還包含鹽水。
7.權(quán)利要求1-4中任一項的藥物組合物，其中所述藥物組合物包含納米粒，所述納米粒包含清蛋白和所述藥劑。
8.權(quán)利要求7的藥物組合物，其中在所述組合物中的納米粒具有不超過約200納米的大小。
9.權(quán)利要求8的藥物組合物，其中所述藥劑是抗癌劑。
10.權(quán)利要求9的藥物組合物，其中所述藥劑是紫杉烷。
11.權(quán)利要求10的藥物組合物，其中所述紫杉烷是紫杉醇。
12.權(quán)利要求10的藥物組合物，其中所述藥劑是雷帕霉素。
13.權(quán)利要求1-4中任一項的藥物組合物用于制備用于治療疾病的藥物的應用。
14.權(quán)利要求13的應用，其中所述疾病是選自癌癥、類風濕性關(guān)節(jié)炎和心血管疾病的疾病。
15.權(quán)利要求14的應用，其中所述疾病是癌癥。
16.權(quán)利要求14的應用，其中所述癌癥是乳腺癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含藥劑和藥用載體的藥物組合物，所述載體包含蛋白質(zhì)，例如人血清清蛋白和/或去鐵胺。人血清清蛋白以有效降低一種或多種與給藥藥物組合物有關(guān)的副作用的量存在。本發(fā)明還提供降低一種或多種給藥藥物組合物的副作用的方法，抑制藥物組合物中微生物生長和氧化的方法，和增強藥劑轉(zhuǎn)運至細胞和藥劑與細胞結(jié)合的方法。
文檔編號A61K9/00GK102343094SQ201110273390
公開日2012年2月8日 申請日期2003年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月9日
發(fā)明者A·楊, B·比爾斯·格里姆, N·P·德賽, P·宋祥, S·X·司, T·德, V·德留, 姚強 申請人:阿布拉西斯生物科學有限責任公司