專利名稱：一種鹽地堿蓬黃酮提取及含量測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種海濱藜科植物-鹽地堿蓬黃酮提取以及含量測定方法研究，屬于天然產(chǎn)物提取及含量測定領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
堿蓬，俗稱嫩苗稱“狼尾巴條”、常稱為“海英菜”、“堿蒿”、“鹽蒿”，一年生草本，莖直立，圓柱形，高達(dá)30 100厘米，花單生或2 3朵有柄簇生于葉腋的短柄上，呈團(tuán)傘狀，花被于果期呈五角星狀，正常年份3月上中旬至6月上旬都可出苗，出土子葉鮮紅。7 8月為花期，9 10月為結(jié)實(shí)期，11月初種子完全成熟。成熟時(shí)植株火紅，極具觀賞價(jià)值。是典型鹽生植物，其栽培技術(shù)比較粗放，主要分布于東北、西北、華北和河南、山東、江蘇、浙江等地。堿蓬的商品性好，堿蓬株型美觀，有“翡翠珊瑚”的雅稱；鮮嫩莖葉營養(yǎng)豐富，具有特別的海鮮味，口感好，切可入藥主治食積停滯、發(fā)熱等。黃酮類化合物是一類廣泛存在于植物體內(nèi)的天然產(chǎn)物，基本結(jié)構(gòu)為C6-C3-C6,在植物體內(nèi)大部分與糖結(jié)合成苷，部分以游離形式存在，因具有抗病毒、抗癌、抗氧化、抗炎、抗衰老等生理和藥理活性，而成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)課題。研究發(fā)現(xiàn)，鹽地堿蓬(S. salsa)葉總黃酮含量較高，并有較強(qiáng)的抗氧化活性。與南方堿蓬同一屬的鹽地堿蓬主要分布在我國各地沿海的灘涂沙地、資源豐富，其葉可食用與飼用，近年來由于沿海灘涂養(yǎng)殖的發(fā)展，常被視為雜草以閑置或根除。探討該植物體內(nèi)黃酮類化合物的含量及提取工藝，將為其藥用開發(fā)與食品保健利用提供科學(xué)依據(jù)。近年來有關(guān)南方堿蓬中黃酮的提取及含量測定的研究有較多的報(bào)道，目前多采用顯色法測定以蘆丁為對照品，通過與亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉顯色后，采用分光光度法，在510nm處測定總黃酮含量，但在實(shí)際測定中發(fā)現(xiàn)顯色法穩(wěn)定性差，雜質(zhì)干擾也會導(dǎo)致測定含量偏高。在紫外光波長范圍內(nèi)，利用高效液相色譜法測定鹽地堿蓬中黃酮含量的方法研究甚少，可以有效地提高含量測定方法的準(zhǔn)確性、靈敏度、重現(xiàn)性和線性范圍。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種鹽地堿蓬黃酮提取及含量測定方法。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案I)采集海濱植物鹽地堿蓬，選取莖、葉，晾干、粉碎；2)鹽地堿蓬(重量)與溶劑(體積)之比為1: 20 1: 30，浸泡30min，于微波爐中處理10min，趁熱抽濾，收集提取液；3)提取液中加入與乙醇提取液體積比為1:1的石油醚，萃取3 4次，脫去脂溶性雜質(zhì)，得乙醇溶液層；4)將乙醇溶液層轉(zhuǎn)入大孔吸附樹脂柱，原液與樹脂量的比為1: 2，依次用水、80%乙醇洗脫至溶液由淺黃色變?yōu)闊o色，收集乙醇溶液洗脫液；5)將洗脫液于50°C條件下減壓濃縮，得到鹽地堿蓬黃酮類化合物浸膏。
6)所得鹽地堿蓬的黃酮提取浸膏用標(biāo)準(zhǔn)溶液溶解，配制成待測溶液；7)將對照品蘆丁烘干至恒重，加標(biāo)準(zhǔn)溶液溶解，配制成梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在360nm波長下，記錄蘆丁的出峰時(shí)間并測定該標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰面積，根據(jù)峰面積與濃度之間的對應(yīng)關(guān)系建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；8)將待測液在360nm波長下測色譜峰面積，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得該待測液濃度，該濃度指即為待測液總黃酮含量，根據(jù)稀釋倍數(shù)換算出鹽地堿蓬黃酮含量。本發(fā)明利用浸泡、微波輔助提取鹽地堿蓬中黃酮，本方法操作簡單，時(shí)間短，溶劑的利用率高，有利于提高黃酮的制取率和降低生產(chǎn)成本，使所開發(fā)工藝易于實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。本發(fā)明針對鹽地堿蓬中的黃酮與對照品蘆丁均在360nm土 Inm波長處對紫外光的有最大吸收(見圖1、2)，確定360nm作為鹽地堿蓬中黃酮的測定波長，鹽地堿蓬中的黃酮與對照品的出峰時(shí)間均為16. 58min(見圖3、4)。根據(jù)待測溶液在此波長處的吸光度值由黃酮含量對比基準(zhǔn)即可查得該溶液的黃酮含量。該方法的繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)系數(shù)Y = 0.9971(見附表1、圖5)，加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明回收率為99. 65%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為
0.58% (見附表2)。因此利用本發(fā)明對鹽地堿蓬中的黃酮含量進(jìn)行測定，測定結(jié)果準(zhǔn)確性高，而且方法簡單，易于操作。本發(fā)明為鹽地堿蓬中黃酮的提取和分離提供了可行性依據(jù)，為進(jìn)一步研究和利用鹽地堿蓬中的黃酮物質(zhì)，提高鹽地堿蓬的利用價(jià)值奠定了基礎(chǔ)。


圖1蘆丁對照品光譜掃描2鹽地堿蓬黃酮提取物光譜掃描3蘆丁對照品高效液相色譜4鹽地堿蓬黃酮提取物高效液相色譜5本發(fā)明方法蘆丁對照品的線性關(guān)系圖
具體實(shí)施例方式I)黃酮的提取采集海濱植物鹽地堿蓬，選取莖、葉，晾干、粉碎；80°C干燥2小時(shí)，加入重量20-30倍的70%乙醇浸泡提取30min，于微波爐中處理lOmin，趁熱抽濾，收集提取液，加入與乙醇提取液體積比為1:1的石油醚，萃取3 4次，脫去脂溶性雜質(zhì)，將乙醇溶液層轉(zhuǎn)入大孔吸附樹脂柱，原液與樹脂量的比為1: 2，依次用水、80%乙醇洗脫至溶液由淺黃色變?yōu)闊o色，收集乙醇溶液洗脫液，將洗脫液于50°C條件下減壓濃縮，得到鹽地堿蓬黃酮類化合物浸膏。2)配制待測溶液取鹽地堿蓬的提取浸膏，用70%的色譜級甲醇溶液溶解稀釋成IOOml搖勻，配制成待測溶液。3)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確稱取蘆丁 10. 5mg在120°C烘至恒重，用70%的色譜級甲醇溶液溶解稀釋至50ml，分別量取Oml、Iml、2ml、3ml、4ml和5ml，置IOml容量瓶中，用70 %的色譜級甲醇溶液稀釋至10ml，搖勻后，得到不同濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，將各種標(biāo)準(zhǔn)溶液在如下檢測條件下測定色譜峰面積采用的檢測儀器高效液相色譜儀、紫外檢測器；
采用的色譜檢測條件色譜柱Diamonsil C18 (4. 6 X 250mm, 5 u m);流動(dòng)相為水與甲醇體積比為30 70 ;流速1. Oml/min進(jìn)樣量20 u L ;檢測波長360nm ;柱溫25°C ;理論塔板數(shù)按蘆丁計(jì)算應(yīng)不低于3000。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度和對應(yīng)測得的峰面積，制作出黃酮含量對比基準(zhǔn)，峰面積值見附表I。4)黃酮含量的測定將2)所得待測溶液在與3)中所述的檢測條件下，測得待測液的峰面積值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得該待測液濃度，該濃度指即為待測液總黃酮含量，根據(jù)稀釋倍數(shù)換算出鹽地堿蓬黃酮含量。附表I本發(fā)明方法蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品與色譜峰面積
權(quán)利要求
1.一種鹽地堿蓬黃酮的提取及含量測定方法，其特征在于，包括以下步驟 1)一種鹽地堿蓬黃酮的提取方法主要以鹽地堿蓬莖、葉為原料，通過溶劑提取、萃取、層析、濃縮，制得黃酮類化合物，提取方法具體如下取海濱植物鹽地堿蓬得莖、葉，晾干、粉碎，裝入錐形瓶中，加入鹽地堿蓬重量20-30倍的70%乙醇浸泡30min，于微波爐中處理lOmin，趁熱抽濾，收集提取液，加入與乙醇提取液體積比為1:1的石油醚，萃取3 4次，脫去脂溶性雜質(zhì)，將乙醇溶液層轉(zhuǎn)入大孔吸附樹脂柱，原液與樹脂量的比為1: 2，依次用水、80%乙醇洗脫至溶液由淺黃色變?yōu)闊o色，收集乙醇溶液洗脫液，將洗脫液于50°C條件下堿壓濃縮，得到鹽地堿蓬黃酮類化合物浸膏。
2)一種鹽地堿蓬中黃酮的含量測定方法，具體操作如下將(I)所得鹽地堿蓬的黃酮提取浸膏用標(biāo)準(zhǔn)溶液溶解，配制成待測溶液；將對照品蘆丁烘干至恒重，加標(biāo)準(zhǔn)溶液溶解，配制成梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在360nm波長下，記錄蘆丁的出峰時(shí)間并測定該標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰面積，根據(jù)峰面積與濃度之間的對應(yīng)關(guān)系建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；將待測液在360nm波長下測色譜峰面積，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得該待測液濃度，該濃度指即為待測液總黃酮含量，根據(jù)稀釋倍數(shù)換算出鹽地堿蓬黃酮含量。
采用的檢測儀器高效液相色譜儀、紫外檢測器； 采用的色譜檢測條件色譜柱DiamonsiIC18(4. 6X 250mm，5 iim);流動(dòng)相為水與甲醇體積比為30 70 ;流速1. Oml/min ;進(jìn)樣量20 u L ;檢測波長360nm ;柱溫25°C;理論塔板數(shù)按蘆丁計(jì)算應(yīng)不低于3000。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鹽地堿蓬黃酮的提取及含量測定方法，其特征在于所述的提取方法為浸泡、微波輔助提取。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種鹽地堿蓬黃酮的提取及含量測定方法，其特征在于所述的標(biāo)準(zhǔn)溶液為體積比30 70的水/甲醇溶液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種鹽地堿蓬黃酮提取及含量測定方法，包括1)采鹽地堿蓬，晾干、粉碎，以乙醇為提取劑，浸泡、微波輔助提取，過濾，石油醚萃取后，乙醇層上大孔吸附樹脂柱，依次用水、乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，加壓濃縮得黃酮類化合物浸膏；2)以蘆丁為對照品，配制不同濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)溶液，用高效液相色譜法在360nm波長處測定色譜峰面積，制作黃酮含量對比基準(zhǔn)，測定待測溶液色譜峰面積，由黃酮含量對比基準(zhǔn)查得該待測溶液黃酮含量，根據(jù)待測溶液稀釋倍數(shù)得鹽地堿蓬中黃酮含量。本方法利用浸泡、微波輔助提取黃酮，色譜法測定其含量，方法簡單，溶劑易得，得到的黃酮含量較高，具有抗病毒、抗氧化、抗衰老等生理和藥理活性。
文檔編號A61K127/00GK103027962SQ20111031100
公開日2013年4月10日 申請日期2011年10月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月8日
發(fā)明者劉德駒, 金紹娣, 張偉 申請人:鹽城紡織職業(yè)技術(shù)學(xué)院