專利名稱：一種5-氟尿嘧啶/plga載藥微球的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種包封抗癌藥物的方法，尤其是涉及一種5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球的制備方法。
背景技術(shù)：
5-氟尿嘧啶(5-Fu)是廣泛應(yīng)用于臨床的廣譜抗癌藥物，它在體內(nèi)經(jīng)代謝轉(zhuǎn)化為氟尿嘧啶核苷和氟尿嘧啶脫氧核苷，后者能夠抑制胸腺嘧啶脫氧核苷酸合成酶發(fā)揮作用， 從而阻斷了尿嘧啶脫氧核苷酸轉(zhuǎn)變?yōu)樾叵汆奏っ撗鹾塑账幔绊懥?DNA的合成過程起到抗癌的作用。5-Fu在治療消化道惡性腫瘤時(shí)為首選藥物，但是由于其對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性差，對(duì)正常細(xì)胞的毒性也較大，尤其在濃度較大的情況下，其對(duì)正常細(xì)胞的毒副作用更加明顯。在臨床時(shí)多采取反復(fù)注射或者持續(xù)滴注的方式，但是經(jīng)常伴隨著骨髓抑制和一系列的毒副反應(yīng)。并且5-氟尿嘧啶又有代謝較快的特點(diǎn)，在體內(nèi)的半衰期為5-10分鐘。不能夠長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)穩(wěn)定的血藥濃度以發(fā)揮其抗癌作用。為了延長(zhǎng)5-氟尿嘧啶的藥效，降低其毒副作用，近年來有學(xué)者不斷尋找其他更安全有效的給藥方式，例如利用各種交聯(lián)劑將殼聚糖和 5-氟尿嘧啶交聯(lián)，如 Akbuga(J. Akbuga, N. Bergisadi, J. Microencapsul. 13， 161，1996)利用戊二酸作為交聯(lián)劑，Aryca(B. Aryca, S. C. alys, H. S. Kas, M. F. Sargon, Journal of Pharmaceutics242, 267, 2002)等通過鈣離子交聯(lián)法制備了海藻酸鈉-殼聚糖載藥顆粒。Ciftci KK(Ciftci KK，Kas HS, Hincal AA, et al. International Journal of Pharmaceutics, 73,82,1996)等利用PLGA作為載體制備5-氟尿嘧啶微球。上述現(xiàn)有技術(shù)存在如下缺陷以殼聚糖為載體材料制備的5-Fu微球的制備過程復(fù)雜，常用到有毒的交聯(lián)劑或表面活性劑，包封率較低。PLGA為載體材料制備的5-Fu緩釋微球，選擇的PLGA種類比較單一，5-Fu的持續(xù)釋藥時(shí)長(zhǎng)單一沒有選擇性，包封率比較低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種微球顆粒粒徑均勻，載藥量高，包封率較好，緩釋性能良好的5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球的制備方法。本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)一種5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球的制備方法，包括以下步驟(1)將聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)溶解在二氯甲烷中，通過渦旋溶解形成 PLGA 二氯甲烷溶液；(2)將5-氟尿嘧啶固體加入到PLGA 二氯甲烷溶液中，攪拌或渦旋形成5_氟尿嘧啶的PLGA 二氯甲烷混懸液；(3)將上述混懸液加入到PVA氯化鈉溶液中，置于磁力攪拌器上攪拌，控制轉(zhuǎn)速為 4000-5000rpm,時(shí)間為 20_30s ；(4)將上述經(jīng)過攪拌后的溶液加入到氯化鈉溶液中，并加以冰浴，繼續(xù)攪拌池；(5)將上述溶液停止攪拌，經(jīng)過沉降，收集沉降的微球，以超純水洗滌數(shù)遍，置于_20°C冰箱中過夜后在低于0. 05mbar的壓力下真空冷凍干燥后得到5-氟尿嘧啶/PLGA 載藥微球。步驟(1)中所述的聚乳酸-羥基乙酸共聚物為L(zhǎng)akershore公司生產(chǎn)的不同分子量的具有不同降解周期的PLGA，包括PLGAQA DLG 50/50)或PLGA(3A DLG50/50)。步驟(1)中所述的PLGA 二氯甲烷溶液的質(zhì)量濃度為12. 5%。步驟O)中所述的5-氟尿嘧啶的PLGA 二氯甲烷混懸液中5_氟尿嘧啶的質(zhì)量濃度為1. 25%。步驟(3)中所述的PVA氯化鈉溶液中的PVA的質(zhì)量濃度為1_2%，氯化鈉濃度為5%。步驟中所述的氯化鈉溶液的質(zhì)量濃度為5%。步驟(5)中所述的5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球的粒徑在50_70歷之間?，F(xiàn)有的技術(shù)中，以殼聚糖為載體材料制備的5-Fu微球的制備過程復(fù)雜，包封率較低，在制備過程中引入的交聯(lián)劑大多具有一定的毒性。而以PLGA為載體材料制備的5-Fu緩釋微球，選擇的PLGA種類比較單一，所以5-Fu的持續(xù)釋藥時(shí)長(zhǎng)沒有選擇性。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明以水包油包固復(fù)乳法將5-氟尿嘧啶裝載于PLGA中形成微球，制備得到的微球顆粒粒徑均勻(如圖1，圖2所示)載藥量高，包封率較好(如實(shí)例一的包封率為91. 4%，實(shí)例二的包封率為94. 8% )，緩釋性能良好(如實(shí)例一和實(shí)例二所得到的釋放曲線可以看出， 實(shí)例一中藥物在24h之內(nèi)的累積釋放率低于20%，實(shí)例二中藥物在Mh內(nèi)的累積釋放率低于10%，并且從2d開始，5-Fu的釋放呈零級(jí)釋放的特性，這表明5-Fu能夠在比較長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)維持一定穩(wěn)定的濃度，這對(duì)于增加5-Fu的治療效果，減少其對(duì)正常細(xì)胞的毒性是非常重要的)。并且本發(fā)明可以通過選擇具有不同降解速度的不同分子量的PLGA，制備出釋放時(shí)長(zhǎng)有選擇性的微球載藥體系，在應(yīng)用時(shí)，可根據(jù)實(shí)際情況的的需要，選擇不同的出發(fā)，達(dá)到不同時(shí)長(zhǎng)的釋藥目的。


圖1為實(shí)施例1制備得到產(chǎn)品的SEM照片；圖2為實(shí)施例2制備得到產(chǎn)品的SEM照片；圖3為實(shí)施例1制備得到產(chǎn)品的釋放曲線；圖4為實(shí)施例2制備得到產(chǎn)品的釋放曲線；
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。實(shí)施例1一種5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球的制備方法，包括以下步驟(1)稱取IOOmg PLGA(DLG 50/50 2A)加入700mg的二氯甲烷里，渦旋溶解，待用；(2)再準(zhǔn)確稱取IOmg 5_氟尿嘧啶加入其中，渦旋后形成混懸液；(3)然后將混懸液轉(zhuǎn)到PVA氯化鈉溶液中，以5000rpm的轉(zhuǎn)速置于磁力攪拌器上攪拌25S ；(4)將攪拌后的溶液加入IL氯化鈉溶液中，并加以冰浴，攪拌，池后停止攪拌，沉降后收集微球；(5)用干凈的西林瓶收集完成步驟的微球，并用蒸餾水洗5次，置于_20°C冰箱過夜，然后取出在低于0. 05mbar的壓力下真空冷凍干燥M小時(shí)。實(shí)施例2一種5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球的制備方法，包括以下步驟(1)稱取IOOmg PLGA(DLG 50/50 3A)加入700mg的二氯甲烷里，渦旋溶解，待用；(2)再準(zhǔn)確稱取IOmg 5_氟尿嘧啶加入其中，渦旋后形成混懸液；(3)然后將混懸液轉(zhuǎn)到PVA氯化鈉溶液中，以4500rpm的轉(zhuǎn)速置于磁力攪拌器上攪拌30S ；(4)將攪拌后的溶液加入IL氯化鈉溶液中，并加以冰浴，攪拌，池后停止攪拌，沉降后收集微球；(5)用干凈的西林瓶收集完成步驟④的微球，并用蒸餾水洗5次，置于_20°C冰箱過夜，然后取出在低于0. 05mbar的壓力下真空冷凍干燥M小時(shí)。實(shí)施例1和實(shí)施例2制備出的5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球的粒度在50_70um之間，粒度分布較為均勻，載藥顆粒呈規(guī)則的圓形，表面光滑，SEM照片如圖1和圖2所示。實(shí)施例1制備的微球的包封率為91. 4%，載藥量為8. 31%。實(shí)例二制備的微球的包封率為 94. 8%，載藥量為8. 62%。載藥微球在pH值為7. 4的PBS緩沖溶液中具有良好的緩釋性能，實(shí)例一的微球在開始的24h之內(nèi)5-氟尿嘧啶釋放了 15. 78%，在之后的時(shí)間內(nèi)緩慢釋放，在長(zhǎng)達(dá)8天的時(shí)間內(nèi)，5-Fu的累積釋放量為86. 63%。釋放曲線如圖3所示。實(shí)施例2 的微球在開始的24h之內(nèi)5-氟尿嘧啶釋放了 12. 08%，在之后的時(shí)間內(nèi)緩慢釋放，在長(zhǎng)達(dá) 23天的時(shí)間內(nèi)，5-Fu的累積釋放量為93. 07%。釋放曲線如圖4所示。實(shí)施例1和實(shí)施例 2的微球在釋放的過程沒有明顯的突釋現(xiàn)象，并且都具有較高的包封率，都在一個(gè)較長(zhǎng)的時(shí)間段內(nèi)能夠釋放出大部分的5-氟尿嘧啶。實(shí)施例3一種5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球的制備方法，包括以下步驟(1)將聚乳酸-羥基乙酸共聚物PLGAQA DLG 50/50)溶解在二氯甲烷中，通過渦旋溶解形成質(zhì)量濃度為12. 5%的PLGA 二氯甲烷溶液；(2)將5-氟尿嘧啶固體加入到PLGA 二氯甲烷溶液中，攪拌或渦旋形成質(zhì)量濃度為 1. 25%的5-氟尿嘧啶的PLGA 二氯甲烷混懸液；(3)將上述混懸液加入到質(zhì)量濃度為5%的PVA氯化鈉溶液中，PVA氯化鈉溶液中的PVA的質(zhì)量濃度為1%，置于磁力攪拌器上攪拌，控制轉(zhuǎn)速為4000rpm，時(shí)間為30s ；(4)將上述經(jīng)過攪拌后的溶液加入到質(zhì)量濃度為5%的氯化鈉溶液中，并加以冰浴，繼續(xù)攪拌池；(5)將上述溶液停止攪拌，經(jīng)過沉降，收集沉降的微球，以超純水洗滌數(shù)遍，置于-20°C冰箱中過夜后在低于0. 05mbar的壓力下真空冷凍干燥后得到粒徑在50-70nm之間的5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球。實(shí)施例4一種5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球的制備方法，包括以下步驟(1)將聚乳酸-羥基乙酸共聚物PLGA(3A DLG 50/50)溶解在二氯甲烷中，通過渦旋溶解形成質(zhì)量濃度為12. 5%的PLGA 二氯甲烷溶液；(2)將5-氟尿嘧啶固體加入到PLGA 二氯甲烷溶液中，攪拌或渦旋形成質(zhì)量濃度為 1. 25%的5-氟尿嘧啶的PLGA 二氯甲烷混懸液；(3)將上述混懸液加入到質(zhì)量濃度為5%的PVA氯化鈉溶液中，PVA氯化鈉溶液中的PVA的質(zhì)量濃度為2%，置于磁力攪拌器上攪拌，控制轉(zhuǎn)速為5000rpm，時(shí)間為20s ；(4)將上述經(jīng)過攪拌后的溶液加入到質(zhì)量濃度為5%的氯化鈉溶液中，并加以冰浴，繼續(xù)攪拌池；(5)將上述溶液停止攪拌，經(jīng)過沉降，收集沉降的微球，以超純水洗滌數(shù)遍，置于-20°C冰箱中過夜后在低于0. 05mbar的壓力下真空冷凍干燥后得到粒徑在50-70nm之間的5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球。
權(quán)利要求
1.一種5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球的制備方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)將聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)溶解在二氯甲烷中，通過渦旋溶解形成PLGA二氯甲烷溶液；(2)將5-氟尿嘧啶固體加入到PLGA二氯甲烷溶液中，攪拌或渦旋形成5-氟尿嘧啶的 PLGA 二氯甲烷混懸液；(3)將上述混懸液加入到PVA氯化鈉溶液中，置于磁力攪拌器上攪拌，控制轉(zhuǎn)速為 4000-5000rpm,時(shí)間為 20_30s ；(4)將上述經(jīng)過攪拌后的溶液加入到氯化鈉溶液中，并加以冰浴，繼續(xù)攪拌池；(5)將上述溶液停止攪拌，經(jīng)過沉降，收集沉降的微球，以超純水洗滌數(shù)遍，置于-20°c 冰箱中過夜后在低于0. 05mbar的壓力下真空冷凍干燥后得到5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球的制備方法，其特征在于， 步驟(1)中所述的聚乳酸-羥基乙酸共聚物為L(zhǎng)akershore公司生產(chǎn)的不同分子量的具有不同降解周期的 PLGA，包括 PLGAQA DLG 50/50)或 PLGA(3ADLG 50/50)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球的制備方法，其特征在于， 步驟(1)中所述的PLGA 二氯甲烷溶液的質(zhì)量濃度為12.5%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球的制備方法，其特征在于，步驟O)中所述的5-氟尿嘧啶的PLGA 二氯甲烷混懸液中5-氟尿嘧啶的質(zhì)量濃度為 1. 25%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球的制備方法，其特征在于， 步驟(3)中所述的PVA氯化鈉溶液中的PVA的質(zhì)量濃度為1_2%，氯化鈉濃度為5%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球的制備方法，其特征在于， 步驟中所述的氯化鈉溶液的質(zhì)量濃度為5%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球的制備方法，其特征在于， 步驟(5)中所述的5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球的粒徑在50-70nm之間。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球的制備方法，其制備步驟包括(1)將PLGA溶解于二氯甲烷中形成PLGA二氯甲烷溶液；(2)將5-氟尿嘧啶固體加入到PLGA二氯甲烷溶液中，攪拌或渦旋形成混懸液；(3)將(2)所述混懸液加入到PVA氯化鈉溶液中，攪拌并控制攪拌時(shí)間和速度；(4)將(3)所述攪拌后的液體加入到氯化鈉溶液中并加以冰浴，攪拌；(5)攪拌一段時(shí)間之后，停止攪拌，收集沉降微球并洗滌，冷凍干燥后得到5-氟尿嘧啶/PLGA載藥微球；制備得到的微球顆粒粒徑較均勻，載藥量和包封率高，釋藥性能良好，并根據(jù)PLGA分子量不同可以達(dá)到不同時(shí)長(zhǎng)的釋藥效果。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102342919SQ20111031263
公開日2012年2月8日 申請(qǐng)日期2011年10月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月14日
發(fā)明者吳飛, 林清, 王薪懿, 蘇靖, 袁偉恩, 趙仲, 金拓, 陳思源 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)