專利名稱：中草藥木瓜提取物在制備減肥降脂藥物或制備具有脂肪酶活性抑制作用的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中草藥木瓜提取物在制備減肥降脂藥物或制備具有脂肪酶活性抑制作用的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
代謝綜合征(Metabolic syndrome, MS)主要包括肥胖、糖耐量異常、血脂代謝紊亂、高血壓等危險(xiǎn)因素。MS患者糖尿病(Diabetes mellitus, DM)、心血管疾病的發(fā)病率常是正常人群的數(shù)倍。MS已嚴(yán)重危害人類的身心健康，成為世界性的公共衛(wèi)生問題，但迄今我們對(duì)MS的認(rèn)識(shí)卻很有限。目前初步的研究證實(shí)，在眾多病因中，肥胖與MS的關(guān)系尤為密切，是MS發(fā)病、發(fā)展的關(guān)鍵因素和核心環(huán)節(jié)。隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、人們生活水平的提高以及生活方式的改變，肥胖已成為全球成年人最大的慢性疾病。目前，美國(guó)FDA只批準(zhǔn)了 2種藥物可以長(zhǎng)期用于肥胖癥治療西布曲明 (Sibutramine)和奧利司他(Orlistat)。西布曲明是一種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)再攝取抑制劑， 它作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)以減少攝食而降低體重，但該藥可能引起患者血壓升高、心率加快， 且不能用于冠心病、心率失常和卒中等病史的患者中，使該藥應(yīng)用受到限制。奧利司他是一種胰脂肪酶抑制劑，可抑制胃腸道中胰脂肪酶的活性，并使脂肪吸收減少約30%，其全身性副作用明顯低于其他現(xiàn)有減肥藥，是脂酶抑制劑的一個(gè)成功例子。中草藥是我國(guó)獨(dú)具優(yōu)勢(shì)的天然藥物資源，古今中醫(yī)典籍記載和臨床應(yīng)用都有大量的中草藥減肥降脂的實(shí)例。但由于中草藥活性成分不明確，藥理機(jī)制不清楚等限制，使傳統(tǒng)中草藥無法走向世界，迄今我國(guó)還沒有具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的減肥藥物。因此從中草藥中篩選具有脂肪酶活性抑制作用的有效成分，并進(jìn)行減肥降脂藥物的研制，是本發(fā)明的主要目的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于公開中草藥木瓜提取物在制備減肥降脂藥物或制備具有脂肪酶活性抑制作用的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的下述中草藥的水提取物或醇提取物均具有脂肪酶活性抑制作用黃芩、普洱茶、烏龍茶、鐵觀音茶、苦丁茶、紅茶、綠茶、代代花、紅花、花椒、蘆薈、虎杖、番瀉葉、葛根、丹參、白術(shù)、桃花、羅布麻、菊花、凌霄花、茉莉花、木蝴蝶、葡萄籽、金蓮花、 丁香、金銀花、白薇、苦參、水皂角、艾葉、人參、槐米、金蕎麥、澤瀉、枳殼、枳實(shí)、牛膝、訶子、 首烏藤、木香、銀杏葉、貫眾、杜仲、生蒲黃、瓜蔞、桑葉、桑白皮；上述中草藥水提取物的制備方法如下取上述各單味中草藥飲片，預(yù)制，粉碎；加 5-10體積倍的去離子水，煮沸30-60分鐘，過濾或離心，取濾液或上清液即得提取物；上述中草藥醇提取物的制備方法如下取上述各單味中草藥飲片，預(yù)制，粉碎；加5-10體積倍的50% -95%乙醇，超聲提取30-90分鐘，過濾或離心，取濾液或上清液即得提取物，取上清液即得提取物；上述中草藥水提取物的優(yōu)選制備方法如下取上述各單味中草藥飲片，預(yù)制，粉碎；加7體積倍的去離子水，煮沸45分鐘，過濾或離心，取濾液或上清液即得提取物；上述中草藥醇提取物的優(yōu)選制備方法如下取上述各單味中草藥飲片，預(yù)制，粉碎；加7體積倍的85%乙醇，超聲提取60分鐘，過濾或離心，取濾液或上清液即得提取物。下述中草藥的醇提取物具有脂肪酶活性抑制作用大黃、甘草、川芎、木瓜、雞血藤、厚樸、丹皮、絞股藍(lán)、姜黃、羌活、何首烏、檳榔、桂枝；上述中草藥醇提取物的制備方法如下取上述各單味中草藥飲片，預(yù)制，粉碎；加 5-10體積倍的50% -95%乙醇，超聲提取30-90分鐘，過濾或離心，取濾液或上清液即得提取物；上述中草藥醇提取物的優(yōu)選制備方法如下取上述各單味中草藥飲片，預(yù)制，粉碎；加7體積倍的85%乙醇，超聲提取60分鐘，過濾或離心，取濾液或上清液即得提取物。下述中草藥的水提取物具有脂肪酶活性抑制作用枸杞子、荷葉、桔梗；上述中草藥水提取物的優(yōu)選制備方法如下取上述各單味中草藥飲片，預(yù)制，粉碎；加5-10體積倍的去離子水，煮沸30-60分鐘，過濾或離心，取濾液或上清液即得提取物；上述中草藥水提取物的優(yōu)選制備方法如下取上述各單味中草藥飲片，預(yù)制，粉碎；加7體積倍的去離子水，煮沸45分鐘，過濾或離心，取濾液或上清液即得提取物。本發(fā)明上述中草藥提取物在制備減肥降脂藥物的應(yīng)用中均可單味使用，也可組合使用，減肥降脂藥物可以由上述中草藥的水、醇及有機(jī)溶劑提取物或其它方法純化的有效成分制成；減肥降脂藥物還可以包含如下一種或多種其它作用機(jī)理的減肥降脂活性成分糖苷酶抑制劑、脂肪酸合成酶抑制劑、膽固醇合成酶抑制劑、淀粉酶抑制劑；為了增加藥效或減少副作用，減肥降脂藥物還可以包含如下一種或多種其它藥理作用的中草藥山茱萸、麻黃、大青葉、蒲公英、熟地；減肥降脂藥物還可以包含如下一種或多種賦形劑阿拉伯樹膠、脫脂牛奶、甘露聚糖、葡甘露聚糖、魔芋粉、淀粉、親脂性硬化劑；減肥降脂藥物還可以包括如下一種或多種藥用輔料或減少藥物副作用的現(xiàn)有產(chǎn)品阿拉伯樹膠、脫脂牛奶、甘露聚糖、葡甘露聚糖、魔芋粉、淀粉、親脂性硬化劑、硬脂酸。上述脂肪酶尤其是指胰脂肪酶。本發(fā)明以胰脂肪酶活性為靶點(diǎn)，以胰脂肪酶活性被抑制的程度為指標(biāo)，從大量的中草藥中，篩選到上述中草藥，其提取物均具有明顯的抑制脂肪酶活性的作用，本發(fā)明解決了現(xiàn)有臨床減肥藥物(尤其是中藥)有效率低，副作用大的缺點(diǎn)，提供一種機(jī)理明確、靶點(diǎn)科學(xué)，副作用小、臨床有效率高的減肥降脂藥物。下面實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明。實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明中草藥的水提取物和醇提取物對(duì)脂肪酶抑制作用實(shí)驗(yàn)
1、制備本發(fā)明中草藥的水提取物或醇提取物水提取物制備取各單味中草藥飲片，預(yù)制，粉碎；加5體積倍的去離子水，煮沸30 分鐘，過濾或離心，取濾液或上清液即得提取物；乙醇提取物制備取各單味中草藥飲片，預(yù)制，粉碎；加5體積倍的75%乙醇，超聲提取60分鐘，過濾或離心，取濾液或上清液即得提取物。2、脂肪酶活力抑制率的測(cè)定A.準(zhǔn)備試劑、橄欖油乳液及測(cè)定酶液橄欖油乳化液的制備取橄欖油12ml與阿拉伯樹膠22. 5g，研磨均勻，加水研磨至 300ml，用18000r/min的勻質(zhì)機(jī)乳化2次，每次3分鐘；取乳劑在顯微鏡下檢查，90%乳粒的直徑在3 μ m以下，并不得有10 μ m的乳粒，即可；牛膽鹽溶液的制備精密稱取牛膽鹽8. 0g，置于50ml燒杯中，以水溶解，轉(zhuǎn)移至 IOOml容量瓶中定容；0. lmol/L氫氧化鈉溶液的制備精密稱取氫氧化鈉2. 0g，加水溶解定容至 500ml ；三羥甲基氨基甲烷緩沖液制備取三羥甲基氨基甲烷3.030g，用0. lmol/L鹽酸溶液調(diào)PH值至8. 0，加水至500ml，搖勻，再調(diào)節(jié)pH值至8. 0 ；脂肪酶溶液的制備精密稱取胰脂肪酶(SIGMA :L3126)于容量瓶中，用冷卻至5°C 以下的三羥甲基氨基甲烷緩沖液溶解，制成每Iml中含胰脂肪酶100活力單位的溶液，作為酶原液備用；繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，將酶原液用三羥甲基氨基甲烷緩沖液稀釋至不同梯度90u/ ml、80u/ml、70u/ml、60u/ml、50u/ml、40u/ml、30u/ml、20u/ml、10u/ml 的測(cè)定酶液；Ou/ml 的測(cè)定酶液，即酶空白，是在水浴中煮沸15-30分鐘的酶原液；B.建立脂肪酶測(cè)活體系1).水為樣品空白溶液脂肪酶測(cè)活體系取橄欖油乳液25ml、8%牛膽鹽溶液2ml 與水10ml，置100ml三角瓶中，加水^il，用0. lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至9. 0 ；2). 75%乙醇為樣品空白溶液脂肪酶測(cè)活體系取橄欖油乳液25ml、8%牛膽鹽溶液2ml與水10ml，置100ml三角瓶中，加75%乙醇溶液^il，用0. lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) pH值至9. 0 ；3).樣品溶液脂肪酶測(cè)活體系取橄欖油乳液25ml、8%牛膽鹽溶液2ml與水 10ml，置100ml三角瓶中，分別加樣品溶液^il，用0. lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至9. 0 ； 樣品溶液可以是六十三種中草藥的水提取物或醇提取物的一種。C.繪制脂肪酶抑制率“Y%”與pH變化幅度“ ΔρΗ”關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，先將不同梯度的測(cè)定酶液換算成對(duì)應(yīng)的抑制率，抑制率換算公式Y(jié)(%) = (X0-Xn)A0Y(% )-表示脂肪酶抑制率X0-表示酶原液濃度(u/ml)fti-表示不同稀釋度的酶液濃度(u/ml)；設(shè)定酶濃度為零時(shí)，抑制率為100%;設(shè)定酶原液濃度的抑制率為0，將酶原液按一定梯度稀釋成 90u/ml、80u/ml、70u/ml、60u/ml、50u/ml、40u/ml、30u/ml、20u/ml、lOu/ml 的測(cè)定酶液，則對(duì)應(yīng)的抑制率分別為10%,20%,30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%； 按照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，本發(fā)明的標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制法如下將上述水或75%乙醇空白溶液脂肪酶測(cè)活體系在37°C水浴中保溫10分鐘，用 0. lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至9. 0 ；精密量取上述不同梯度濃度的測(cè)定酶液1體積份，分別加至空白溶液測(cè)活體系中，在37°C水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)5分鐘，同時(shí)記錄反應(yīng)前后pH 值，并計(jì)算反應(yīng)前后PH差值；用酶濃度為lOOu/ml時(shí)反應(yīng)前后的pH差值，分別減去酶濃度為 90u/ml、80u/ml、70u/ml、60u/ml、50u/ml、40u/ml、30u/ml、20u/ml、lOu/ml、Ou/ml 時(shí)反應(yīng)前后的PH差值，即得到對(duì)應(yīng)不同抑制率的pH變化幅度“ Δ pH”值；以抑制率為縱坐標(biāo)， “ Δ pH”值為橫坐標(biāo)，繪制脂肪酶抑制率“Y% ”與pH變化幅度“ Δ pH”關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到水或75%為空白樣品溶液的脂肪酶抑制率計(jì)算公式；D.測(cè)定方法及樣品溶液脂肪酶抑制率的測(cè)定空白溶液測(cè)定將上述水或75%乙醇空白溶液脂肪酶測(cè)活體系在37°C水浴中保溫10分鐘，用0. lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至9. O ；精密量取酶原液Iml加至空白溶液測(cè)活體系中，在37°C水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)5分鐘，同時(shí)記錄反應(yīng)前后pH值，并計(jì)算空白溶液反應(yīng)前后的PH差值，記為Al ；另取在水浴中煮沸15-30分鐘的上述酶原液lml，照上述方法測(cè)定，作為酶空白對(duì)照，PH差值記為AO ；則空白溶液酶反應(yīng)的pH變化值為ΔΑ = Al-AO ；樣品溶液測(cè)定將樣品溶液脂肪酶測(cè)活體系在37°C水浴中保溫10分鐘，用 0. lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至9. 0 ；精密量取酶原液Iml加至樣品溶液測(cè)活體系中， 在37°C水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)5分鐘，同時(shí)記錄反應(yīng)前后pH值，并計(jì)算樣品溶液反應(yīng)前后的pH差值，記為Bl ；另取在水浴中煮沸20分鐘的上述酶原液1ml，照上述方法測(cè)定，作為酶空白對(duì)照，PH差值記為BO ；則樣品溶液酶反應(yīng)的pH變化值為ΔΒ = B1-B0 ；樣品溶液的脂肪酶抑制率用空白溶液酶反應(yīng)的PH變化值(ΔΑ)減去樣品溶液酶反應(yīng)的PH變化值(ΔΒ)，即得到空白溶液與樣品溶液酶反應(yīng)的“ ΔρΗ”值，BP ΔρΗ = Δ A-Δ B，將此“ Δ pH”值代入上述相應(yīng)的空白溶液的脂肪酶抑制率計(jì)算公式，即求得測(cè)定樣品的脂肪酶抑制率，樣品溶液的脂肪酶抑制率結(jié)果見表1 表1中草藥提取物對(duì)脂肪酶活力抑制率
權(quán)利要求
1.一種中草藥木瓜的醇提取物在制備減肥降脂藥物或制備具有脂肪酶活性抑制作用的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述中草藥木瓜的醇提取物由如下方法制備取木瓜中草藥飲片，預(yù)制，粉碎；加5-10體積倍的50%-95%乙醇，超聲提取30-90分鐘，過濾，或4000r/min離心10-20分鐘，取過濾液或離心上清液即得所述醇提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述中草藥木瓜的醇提取物由如下方法制備取所述木瓜中草藥飲片，預(yù)制，粉碎；加7體積倍的85%乙醇，超聲提取60分鐘，過濾，或4000r/min離心15分鐘，取過濾液或離心上清液即得所述醇提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述中草藥木瓜的醇提取物由如下方法制備取所述木瓜中草藥飲片，預(yù)制，粉碎；加5體積倍的75%乙醇，超聲提取60分鐘，過濾，取過濾液即得所述醇提取物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述脂肪酶為胰脂肪酶。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述減肥降脂藥物中包含糖苷酶抑制劑、脂肪酸合成酶抑制劑、膽固醇合成酶抑制劑或淀粉酶抑制劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述減肥降脂藥物中包含山茱萸、麻黃、大青葉、蒲公英或熟地。
全文摘要
本發(fā)明公開了中草藥木瓜的醇提取物在制備減肥降脂藥物或制備具有脂肪酶活性抑制作用的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明解決了現(xiàn)有臨床減肥藥物，尤其是中藥效率低，副作用大的缺點(diǎn)，提供了一種機(jī)理明確、靶點(diǎn)科學(xué)，副作用小、臨床有效率高的減肥降脂藥物。
文檔編號(hào)A61K36/804GK102357136SQ20111031742
公開日2012年2月22日 申請(qǐng)日期2007年8月7日 優(yōu)先權(quán)日2007年8月7日
發(fā)明者段震文, 郭樹仁, 閆雪秋 申請(qǐng)人:北京北大維信生物科技有限公司