專利名稱：一種用于?？谔阋叩闹兴巹游锉＝∑返闹谱鞣椒?br> 技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于動物保健藥物的制備技術(shù)，特別涉及一種桅子總皂苷和黃芪總皂苷在制備中藥動物保健品的佐劑方法上的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大，環(huán)境污染的加重，各養(yǎng)殖場經(jīng)常出現(xiàn)嚴(yán)重的疾病，例如，口蹄疫，這給養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。有效預(yù)防和治療口蹄疫，是該技術(shù)領(lǐng)域科研人員急需開發(fā)的新課題之一。動物疫苗是由免疫原性較好的病原微生物，經(jīng)過繁殖和處理后制成的劑品，用于動物機(jī)體后，刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體，當(dāng)體內(nèi)的抗體程度達(dá)到一定數(shù)值時，就可抵抗這種病原微生物的侵襲、感染，可以預(yù)防動物疫病的發(fā)生。佐劑是指與抗原同時或預(yù)先使用，能增強(qiáng)機(jī)體針對抗原的免疫應(yīng)答能力或改變免疫反應(yīng)類型的一類物質(zhì)。傳統(tǒng)獸用疫苗中常用的佐劑有鋁鹽佐劑和油佐劑。目前，還出現(xiàn)了細(xì)胞因子、脂質(zhì)體、CpG單磷?；|(zhì)A、皂苷等多種新型佐劑
鋁鹽佐劑應(yīng)用已有七十多年歷史，安全性較其他佐劑高而且生產(chǎn)工藝也較為成熟，因此其成為全世界應(yīng)用最廣泛的一類佐劑。但鋁鹽佐劑也有一些缺陷，例如其在誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞及Thl型反應(yīng)中作用很有限，在同高純度的小分子蛋白抗原共同使用時不能引起足夠的抗體應(yīng)答，因此鋁鹽在新型疫苗中的佐劑效果較差。油佐劑疫苗在抗體效價和免疫持久性方面都優(yōu)于鋁鹽佐劑疫苗，但油佐劑不良反應(yīng)嚴(yán)重，皮下注射會引起炎癥、潰瘍和肉芽腫，油類物質(zhì)長期潴留于組織中不易代謝。雖然用中藥皂苷做佐劑是一種剛剛發(fā)展的技術(shù)，但是，本發(fā)明在此領(lǐng)域一直進(jìn)行研究開發(fā). 技術(shù)方案
本發(fā)明涉及一種用于牛口蹄疫的中藥動物保健品. 本發(fā)明涉及一種用桅子總皂苷和黃芪總皂苷在制備抗?？谔阋叩膭游锉＝∑返淖魟┥系膽?yīng)用。本發(fā)明涉及一種用桅子總皂苷和黃芪總皂苷在制備抗?？谔阋叩囊呙绲淖魟┥系膽?yīng)用。本發(fā)明的制備方法包括如下步驟
桅子總皂苷和黃芪總皂苷與?？谔阋咭呙纾芙庠诰彌_溶液中，混合。本發(fā)明的制備方法包括如下步驟
A將一定量的桅子總皂苷和黃芪總皂苷、?？谔阋咭呙?、乙二胺四乙酸鈉、阿拉伯糖、甘露醇、溶解在磷酸鹽緩沖溶液，制成內(nèi)水相溶液，
桅子總皂苷的含量為0. 1-0. 5毫克/毫升，黃芪總皂苷0. 1-0. 5毫克/毫升，牛口蹄疫疫苗0. 1—0. 5毫克/毫升，乙二胺四乙酸鈉0. 1—2毫克/毫升、阿拉伯糖1一8毫克 /毫升、甘露醇0. 5-5毫克/毫升；B將聚乙交酯-丙交酯的聚合物用花生油溶解制成油相溶液，聚乙交酯-丙交酯的聚合物的含量為0. 1—0. 5克/毫升；
C將上述含桅子總皂苷和黃芪總皂苷、?？谔阋咭呙绲膬?nèi)水相溶液加入到油相溶液中， 油相溶液與內(nèi)水相溶液的比例為20 1至2 1，加入聚氧乙烯氫化蓖麻油0. 1—1毫克/ 毫升，使這兩種溶液在溫度5— 30°C下攪拌混合均勻，制成初乳，在4一10°C下保存；
D將海藻酸鈉和蛋氨酸鋅充分溶解于水制成外水相溶液，海藻酸鈉的重量濃度為 0. 5-50毫克/毫升，蛋氨酸鋅的重量濃度為0. 1-2毫克/毫升；
E將上述初乳加入到外水相溶液攪拌均勻，初乳與外水相溶液的比例為1 50至 1 200，制成復(fù)乳W內(nèi)/0/W外，在4一 10°C下保存;
F將復(fù)乳W內(nèi)/0/W外，轉(zhuǎn)移到1-2毫克/毫升KCl和1-2毫克/毫升MgCl2的水溶液中，攪拌均勻，
G使有機(jī)溶劑在低壓中揮發(fā)，過濾，濾掉大顆粒，抽濾、洗滌、真空凍干，得微球。本發(fā)明的制備方法
所述步驟C中的攪拌溫度為5 — 30°C，攪拌速度為500— 8000轉(zhuǎn)/分，攪拌時間為0. 2—0. 5小時；
所述步驟E中的攪拌溫度為5 — 30°C，攪拌速度為100— 3000轉(zhuǎn)/分，攪拌時間為 0. 2—0. 5 小時；
所述步驟F中的攪拌溫度為5 — 30°C，攪拌速度為500— 3000轉(zhuǎn)/分，攪拌時間為 0. 2—0. 5 小時。本發(fā)明的動物保健品用于治療口蹄疫 本發(fā)明的有益效果
本發(fā)明的以桅子總皂苷和黃芪總皂苷為佐劑的口蹄疫疫苗，能夠減少動物疫苗用藥次數(shù)，是一種理想的動物保健品藥物，具有制備工藝簡單，應(yīng)用方便，成本低等特點。本發(fā)明使桅子總皂苷和黃芪總皂苷和口蹄疫疫苗均勻的分散，得到長效劑型。體外實驗表明，以桅子總皂苷和黃芪總皂苷和動物疫苗為包裹對象，電鏡掃描結(jié)果顯示，所制得的微球形態(tài)圓整，粒度分布均勻，粒徑分布在40微米以下，包封率在78. 0% 以上，體外緩釋可以達(dá)4周釋藥，符合長效制劑特征。一次注射后能夠在較長時間內(nèi)發(fā)揮藥效。將口蹄疫疫苗做成微球制劑，可以延長藥物作用時間，大大提高藥物療效和經(jīng)濟(jì)效益。穩(wěn)定性試驗結(jié)論影響因素試驗結(jié)果表明，本發(fā)明的制劑在光照、在高溫35°C — 45°C條件下放置12個月后、含量不下降、有關(guān)物質(zhì)沒有增加；在加速試驗條件(25°C 士2°C， RH 60士 10% )放置18個月后，PH值下降、含量下降、有關(guān)物質(zhì)增加；在長期試驗條件 (20C -IO0C )放置12個月，各項指標(biāo)均無明顯改變。本發(fā)明實施例1-2制備的藥物組合物在水中擴(kuò)散良好，在4°C冰箱中保存6個月、 25°C室溫中保存6個月、37°C中保存30天均不分層，疫苗經(jīng)過5000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘不分層。疫苗在Iml吸管中垂直自然流出。光鏡下可見疫苗乳化粒子呈1-6 μ m的均勻顆粒。本發(fā)明的保護(hù)范圍包括而不限于本文本所描述的范圍。
具體實施例方式
實施例1A將一定量的桅子總皂苷和黃芪總皂苷、?？谔阋?型滅活疫苗、乙二胺四乙酸鈉、阿拉伯糖、甘露醇、溶解在磷酸鹽緩沖溶液，制成內(nèi)水相溶液，
桅子總皂苷的含量為0. 1毫克/毫升，黃芪總皂苷0. 1毫克/毫升，?？谔阋咭呙?. 1毫克/毫升，乙二胺四乙酸鈉0. 1毫克/毫升、阿拉伯糖1毫克/毫升、甘露醇0. 5
毫克/毫升；
B將聚乙交酯-丙交酯的聚合物用花生油溶解制成油相溶液，聚乙交酯-丙交酯的聚合物的含量為0.1克/毫升；
C將上述含桅子總皂苷和黃芪總皂苷、?？谔阋咭呙绲膬?nèi)水相溶液加入到油相溶液中， 油相溶液與內(nèi)水相溶液的比例為20 1，加入聚氧乙烯氫化蓖麻油0. 1毫克/毫升，使這兩種溶液在溫度15°C下攪拌混合均勻，攪拌速度為500轉(zhuǎn)/分，攪拌時間為0. 2-0. 5小時； 制成初乳，在4°C下保存；
D將海藻酸鈉和蛋氨酸鋅充分溶解于水制成外水相溶液，海藻酸鈉的重量濃度為0. 5 毫克/毫升，蛋氨酸鋅的重量濃度為0.1毫克/毫升；
E將上述初乳加入到外水相溶液攪拌均勻，攪拌溫度為15°C，攪拌速度為1000轉(zhuǎn)/分， 攪拌時間為0.2小時，初乳與外水相溶液的比例為1 50，制成復(fù)乳W內(nèi)/0/W外，在4°C 下保存；
F將復(fù)乳W內(nèi)/0/W外，轉(zhuǎn)移到1毫克/毫升KCl和1毫克/毫升MgCl2的水溶液中， 攪拌均勻，攪拌溫度為10°C，攪拌速度為500轉(zhuǎn)/分，攪拌時間為0. 5小時
G使有機(jī)溶劑在低壓中揮發(fā)，過濾，濾掉大顆粒，抽濾、洗滌、真空凍干，得微球。牛口蹄疫0型滅活疫苗來自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。實施例2
A將一定量的桅子總皂苷和黃芪總皂苷、牛口蹄疫疫苗、乙二胺四乙酸鈉、阿拉伯糖、甘露醇、溶解在磷酸鹽緩沖溶液，制成內(nèi)水相溶液，
桅子總皂苷的含量為0. 5毫克/毫升，黃芪總皂苷0. 5毫克/毫升，?？谔阋咭呙?. 5毫克/毫升，乙二胺四乙酸鈉2毫克/毫升、阿拉伯糖8毫克/毫升、甘露醇5毫克
/毫升；
B將聚乙交酯-丙交酯的聚合物用花生油溶解制成油相溶液，聚乙交酯-丙交酯的聚合物的含量為0.5克/毫升；
C將上述含桅子總皂苷和黃芪總皂苷、?？谔阋咭呙绲膬?nèi)水相溶液加入到油相溶液中， 油相溶液與內(nèi)水相溶液的比例為20 1，加入聚氧乙烯氫化蓖麻油1毫克/毫升，使這兩種溶液在溫度20°C下攪拌混合均勻，攪拌速度為3000轉(zhuǎn)/分，攪拌時間為0.2小時；制成初乳，在10°C下保存；
D將海藻酸鈉和蛋氨酸鋅充分溶解于水制成外水相溶液，海藻酸鈉的重量濃度為50毫克/毫升，蛋氨酸鋅的重量濃度為2毫克/毫升；
E將上述初乳加入到外水相溶液攪拌均勻，攪拌溫度為20°C，攪拌速度為3000轉(zhuǎn)/分， 攪拌時間為0.2小時；初乳與外水相溶液的比例為1 200，制成復(fù)乳W內(nèi)/0/W外，在10°C 下保存；
F將復(fù)乳W內(nèi)/0/W外，轉(zhuǎn)移到2毫克/毫升KCl和2毫克/毫升MgCl2的水溶液中， 攪拌均勻，攪拌溫度為20°C，攪拌速度為3000轉(zhuǎn)/分，攪拌時間為0. 2小時；G使有機(jī)溶劑在低壓中揮發(fā)，過濾，濾掉大顆粒，抽濾、洗滌、真空凍干，得微球。 實施例3
本發(fā)明實施例1-2制備的藥物組合物的安全性檢驗 用本發(fā)明實施例1-2的藥物接種4頭6個月-2歲健康無口蹄疫抗體的黃牛。每頭牛頸部肌肉注射疫苗10ml，隔離觀察10天，同時設(shè)空白對照4頭，頸部肌肉生理鹽水，每天測溫3次，注意臨床癥狀，牙齦、口腔、四蹄、乳頭是否有病變。小白鼠用本發(fā)明實施例1-2的藥物皮下接種10只健康成年小白鼠，每只注射 lml，同時設(shè)10只空白對照。連續(xù)隔離觀察7天，密切注意是否出現(xiàn)臨床癥狀及其它異常變化。結(jié)果大劑量接種的牛、成年小白鼠后，未有異常情況。
實施例4
本實施例1制備的藥物組合物對?？谔阋叩拿庖弑Ｗo(hù)作用實驗動物
同品種、來源的6-18月健康牛，血清中亞洲I型、0型口蹄疫病毒抗體均為陰性。實驗分組
實施例1產(chǎn)品按照2mg/ml的比例，1 ml /只/次，臀部肌肉注射，0. 2mg/kg體重，2日 1次，連用5天。牛口蹄疫滅活苗陽性對照組商品化牛亞洲0型口蹄疫病毒滅活苗，600 μ g/ml， 2毫升/只/次，臀部肌肉注射。PBS陰性對照組PBS，1 ml /只/次，臀部肌肉注射。于各組給藥后的第30天，在牛耳皮下注射0型口蹄疫病毒佳木斯毒株，10000ID 50/0. lml。于注射病毒后第5天判斷發(fā)病情況。除注射病毒的舌面外，牙齦、口腔、四蹄、乳頭任何部位出現(xiàn)水泡，即可判斷為發(fā)病。陰性對照組的牛至兩個蹄子出現(xiàn)水泡，方可判定攻毒實驗成立。結(jié)果見表。實驗結(jié)果表明，本實施例產(chǎn)品具有預(yù)防牛0型口蹄疫病毒感染的作用。
權(quán)利要求
1.一種用桅子總皂苷和黃芪總皂苷在制備抗?？谔阋叩闹兴巹游锉＝∑返淖魟┥系膽?yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的一種應(yīng)用，其特征在于包括如下步驟桅子總皂苷和黃芪總皂苷與?？谔阋咭呙?，溶解在緩沖溶液中，混合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的一種應(yīng)用，其特征在于包括如下步驟A將一定量的桅子總皂苷和黃芪總皂苷、牛口蹄疫疫苗、乙二胺四乙酸鈉、阿拉伯糖、甘露醇、溶解在磷酸鹽緩沖溶液，制成內(nèi)水相溶液，桅子總皂苷的含量為0. 01-5毫克/毫升，黃芪總皂苷0. 01-5毫克/毫升，?？谔阋咭呙?. 01-50毫克/毫升，乙二胺四乙酸鈉0. 1-2毫克/毫升、阿拉伯糖1一8毫克/ 毫升、甘露醇0. 5—5毫克/毫升；B將聚乙交酯-丙交酯的聚合物用花生油溶解制成油相溶液，聚乙交酯-丙交酯的聚合物的含量為0. 1—0. 5克/毫升；C將上述含桅子總皂苷和黃芪總皂苷、?？谔阋咭呙绲膬?nèi)水相溶液加入到油相溶液中， 油相溶液與內(nèi)水相溶液的比例為20 1至2 1，加入聚氧乙烯氫化蓖麻油0. 1—1毫克/ 毫升，使這兩種溶液在溫度5— 30°C下攪拌混合均勻，制成初乳，在4一10°C下保存；D將海藻酸鈉和蛋氨酸鋅充分溶解于水制成外水相溶液，海藻酸鈉的重量濃度為 0. 5-50毫克/毫升，蛋氨酸鋅的重量濃度為0. 1-2毫克/毫升；E將上述初乳加入到外水相溶液攪拌均勻，初乳與外水相溶液的比例為1 50至 1 200，制成復(fù)乳W內(nèi)/0/W外，在4一 10°C下保存;F將復(fù)乳W內(nèi)/0/W外，轉(zhuǎn)移到1-2毫克/毫升KCl和1-2毫克/毫升MgCl2的水溶液中，攪拌均勻，G使有機(jī)溶劑在低壓中揮發(fā)，過濾，濾掉大顆粒，抽濾、洗滌、真空凍干，得微球。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3所述的一種的制備方法，其特征在于所述步驟C中的攪拌溫度為5 — 30°C，攪拌速度為500— 8000轉(zhuǎn)/分，攪拌時間為0. 2—0. 5小時；所述步驟E中的攪拌溫度為5 — 30°C，攪拌速度為100— 3000轉(zhuǎn)/分，攪拌時間為 0. 2—0. 5 小時；所述步驟F中的攪拌溫度為5 — 30°C，攪拌速度為500— 3000轉(zhuǎn)/分，攪拌時間為 0. 2—0. 5 小時。
全文摘要
本發(fā)明屬于動物保健藥物的制備技術(shù)，特別涉及梔子總皂苷和黃芪總皂苷在制備抗?？谔阋叩闹兴巹游锉＝∑返淖魟┥系膽?yīng)用。
文檔編號A61P31/14GK102335426SQ201110334559
公開日2012年2月1日 申請日期2011年10月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月30日
發(fā)明者張大宇 申請人:張大宇