專利名稱：用于診斷和治療過敏性疾病的蛋白及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種通過ELISA法篩查貓毛過敏性疾病和脫敏療法治療貓毛過敏性疾病的蛋白及其制備方法。
背景技術(shù)：
過敏性疾病是當今世界上最常見、最頑固的疾患之一，涉及臨床各科。目前有高達 20%的世界人口患有不同類型的過敏性疾病，從新生兒到中老年人各年齡段都有發(fā)生，沒有明顯的性別傾向，但有明顯的遺傳性傾向。過敏型變態(tài)反應(yīng)也就是常說的I型變態(tài)反應(yīng)，也是目前最常見的一個類型。其發(fā)生機理是外源性或內(nèi)源性抗原(反應(yīng)原)刺激機體的淋巴結(jié)，肝、脾等器官的單核吞噬系統(tǒng)，引起漿細胞反應(yīng)，產(chǎn)生特異性反應(yīng)素，即免疫球蛋白E(IgE)。IgE分子以其Fc端附著于肥大細胞或嗜堿粒細胞的IgE受體上。此時機體即處于致敏狀態(tài)，被致敏的肥大細胞再次與特異性致敏反應(yīng)原接觸時，就引進觸發(fā)反應(yīng)，導致毛細血管擴張、水腫、滲出、平滑肌痙攣、外分泌活動亢進等一系列臨床表現(xiàn)，最常見的過敏癥臨床表現(xiàn)是花粉癥、反應(yīng)性鼻炎、 過敏休克、支氣管哮喘、蕁麻疹、濕疹等等。引起過敏的主要的變應(yīng)原有塵螨、花粉、屋塵、霉菌、動物毛發(fā)、羽毛等，其中動物毛發(fā)是一種強烈的變應(yīng)原。隨著生活水平的提高，越來越多的家庭擁有寵物，貓是比較常見的一種寵物。在日常生活中貓脫落的毛發(fā)、皮屑漂浮在空氣中，通過鼻、口呼吸進入人體內(nèi)， 極易誘發(fā)過敏性哮喘、鼻炎、結(jié)膜炎、皮炎。貓的唾液則通過體表接觸或經(jīng)鼻、口進入人體內(nèi)引發(fā)過敏反應(yīng)。貓毛皮屑或唾液引起過敏的同為一個分子量為40KD的糖蛋白，其等電點為4. 5。 其病理機制為由特異性免疫球蛋白E介導的I型速發(fā)性過敏反應(yīng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供用于診斷和治療過敏性疾病的蛋白及其制備方法，它利用脫敏治療的原理，通過依次吸收由小至大劑量的藥物，使病人逐步提高對外來變應(yīng)原的耐受性，從而達到減輕發(fā)作或控制發(fā)作的目的，可用于過敏性哮喘、鼻炎、慢性蕁麻疹等癥的治療。為了解決背景技術(shù)所存在的問題，本發(fā)明是采用以下技術(shù)方案它的制備方法為1)取寵物貓毛前三天內(nèi)不用洗發(fā)液洗寵物，部位不限，取貓毛后剪碎備用。2)在約50克貓毛，加入2倍體積的丙酮，清洗脫脂2-5小時；傾倒出丙酮，加入新的丙酮，重復清洗脫脂2次；3)三次脫脂后，傾倒出上層丙酮，保留下層固體，于室溫自然吹干，待殘留貓毛末中毫無丙酮刺激氣味即為丙酮揮干標準；4)取晾干后的貓毛按照1 25W/V浸于含0.4%笨酚的碳酸氫鈉鹽水液中(5gNaCl/L ；2. 75g NaHC03/L ；pH = 8. 2，Coca，s Solution)，即每 25 毫升碳酸氫鈉鹽水液中有1克脫脂后的貓毛，4°C磁力攪拌10小時；間隔冷浸過夜，再磁力攪拌，至少72小時后取上層清夜；離心，除去沉淀，將上清調(diào)節(jié)PH到5. 0，加入(NH4) 2S04至80%飽和度，4°C攪拌 30-60分鐘，離心，收集沉淀；將沉淀用少量碳酸氫鈉鹽水液重新溶解，并用同樣緩沖液對樣品進行透析，除去(NH4)2SO4,得到貓毛鹽溶蛋白的粗提物；將粗提物先用陰離子交換柱分離純化，再用凝膠柱分離純化；收集活性峰，蒸餾水透析后，得到分子量為40kD的貓毛過敏原，加50%甘油保存。所述的陰離子交換柱可以是Resource Q陰離子交換柱，凝膠柱可以是kphacryl S-200凝膠柱。本發(fā)明具有以下有益效果利用脫敏治療的原理，通過依次吸收由小至大劑量的藥物，使病人逐步提高對外來變應(yīng)原的耐受性，從而達到減輕發(fā)作或控制發(fā)作的目的，可用于過敏性哮喘、鼻炎、慢性蕁麻疹等癥的治療。
具體實施例方式本具體實施方式
采用以下技術(shù)方案它的制備方法為1)取寵物貓毛前三天內(nèi)不用洗發(fā)液洗寵物，部位不限，取貓毛后剪碎備用；2)在約50克貓毛，加入2倍體積的丙酮，清洗脫脂2-5小時；傾倒出丙酮，加入新的丙酮，重復清洗脫脂2次；3)三次脫脂后，傾倒出上層丙酮，保留下層固體，于室溫自然吹干，待殘留貓毛末中毫無丙酮刺激氣味即為丙酮揮干標準；4)取晾干后的貓毛按照1 25W/V浸于含0.4%笨酚的碳酸氫鈉鹽水液中 (5gNaCl/L ；2. 75g NaHC03/L ；pH = 8. 2，Coca，s Solution)，即每 25 毫升碳酸氫鈉鹽水液中有1克脫脂后的貓毛，4°C磁力攪拌10小時；間隔冷浸過夜，再磁力攪拌，至少72小時后取上層清夜；離心，除去沉淀，將上清調(diào)節(jié)PH到5. 0，加入(NH4) 2S04至80%飽和度，4°C攪拌 30-60分鐘，離心，收集沉淀；將沉淀用少量碳酸氫鈉鹽水液重新溶解，并用同樣緩沖液對樣品進行透析，除去(NH4)2SO4,得到貓毛鹽溶蛋白的粗提物；將粗提物先用陰離子交換柱分離純化，再用凝膠柱分離純化；收集活性峰，蒸餾水透析后，得到分子量為40kD的貓毛過敏原，加50%甘油保存。所述的陰離子交換柱可以是Resource Q陰離子交換柱，凝膠柱可以是kphacryl S-200凝膠柱。本具體實施方式
利用脫敏治療的原理，通過依次吸收由小至大劑量的藥物，使病人逐步提高對外來變應(yīng)原的耐受性，從而達到減輕發(fā)作或控制發(fā)作的目的，可用于過敏性哮喘、鼻炎、慢性蕁麻疹等癥的治療。
權(quán)利要求
1.用于診斷和治療過敏性疾病的蛋白及其制備方法，其特征在于它的制備方法為1)取寵物貓毛前三天內(nèi)不用洗發(fā)液洗寵物，部位不限，取貓毛后剪碎備用。2)在約50克貓毛，加入2倍體積的丙酮，清洗脫脂2-5小時；傾倒出丙酮，加入新的丙酮，重復清洗脫脂2次。3)三次脫脂后，傾倒出上層丙酮，保留下層固體，于室溫自然吹干，待殘留貓毛末中毫無丙酮刺激氣味即為丙酮揮干標準。4)取晾干后的貓毛按照1 25W/V浸于含0.4%笨酚的碳酸氫鈉鹽水液中(5gNaCl/L; 2. 75g NaHC03/L ；pH = 8. 2，Coca，s Solution)，即每25毫升碳酸氫鈉鹽水液中有1克脫脂后的貓毛，4°C磁力攪拌10小時；間隔冷浸過夜，再磁力攪拌，至少72小時后取上層清夜； 離心，除去沉淀，將上清調(diào)節(jié)pH到5. 0，加入(NH4)2SO4至80%飽和度，4°C攪拌30-60分鐘， 離心，收集沉淀；將沉淀用少量碳酸氫鈉鹽水液重新溶解，并用同樣緩沖液對樣品進行透析，除去(NH4)2SO4,得到貓毛鹽溶蛋白的粗提物；將粗提物先用陰離子交換柱分離純化，再用凝膠柱分離純化；收集活性峰，蒸餾水透析后，得到分子量為40kD的貓毛過敏原，加50% 甘油保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于診斷和治療過敏性疾病的蛋白及其制備方法，其特征在于所述的陰離子交換柱為Resource Q陰離子交換柱。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于診斷和治療過敏性疾病的蛋白及其制備方法，其特征在于所述的凝膠柱為kphacryl S-200凝膠柱。
全文摘要
用于診斷和治療過敏性疾病的蛋白及其制備方法，它涉及生物技術(shù)領(lǐng)域。它的制備方法為取貓毛后剪碎，在約50克貓毛，加入2倍體積的丙酮，清洗脫脂2-5小時；反復脫脂共3次。脫脂后的貓毛浸于含0.4％笨酚的碳酸氫鈉鹽水液中，4℃磁力攪拌10小時；離心，除去沉淀，將上清調(diào)節(jié)pH到5.0，加入(NH4)2SO4至80％飽和度，4℃攪拌30-60分鐘，離心，收集沉淀；將沉淀用少量碳酸氫鈉鹽水液重新溶解，除去(NH4)2SO4，得到貓毛鹽溶蛋白的粗提物；將粗提物先用陰離子交換柱分離純化，再用凝膠柱分離純化；收集活性峰，蒸餾水透析后，得到分子量為40kD的貓毛過敏原，加50％甘油保存；本發(fā)明可用于過敏性哮喘、鼻炎、慢性蕁麻疹等癥的治療。
文檔編號A61P37/08GK102391371SQ20111034184
公開日2012年3月28日 申請日期2011年11月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月2日
發(fā)明者王永昌 申請人:上虞常春生物技術(shù)有限公司