專利名稱：連翹苷在制備抗慢性粒細(xì)胞白血病的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及連翹苷的應(yīng)用，具體地說，涉及連翹苷在制備抗慢性粒細(xì)胞白血病的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
慢性粒細(xì)胞白血病(chronic myelogenous leukemia，CML)是伴有獲得性染色體異常的多能干細(xì)胞水平上的惡性變而引起的一種細(xì)胞株病。Wi染色體t (9:22) (q34； qll)是其特征性的細(xì)胞遺傳學(xué)標(biāo)志，P210BCR-ABL是其分子學(xué)發(fā)病基礎(chǔ)。該病起病緩慢，早期多無癥狀，主要表現(xiàn)為周身乏力、消瘦、多汗、食欲不振、腹脹、低熱，部分病例有不同程度出血。該病屬于造血干細(xì)胞惡性增殖性疾病，以粒系增生為主，無病態(tài)造血。骨髓增生呈極度活躍或明顯活躍狀態(tài)，粒紅比例可增至1(Γ50 :1，分類中常以中性中幼粒細(xì)胞、中性晚幼粒細(xì)胞及桿狀核細(xì)胞為主。外周血象中白細(xì)胞增高，一般在(10(Γ250) X 109/L,甚至可高達(dá) 1000X 109/L，分類中可見各階段粒細(xì)胞，以中性中幼粒細(xì)胞、中性晚幼粒細(xì)胞及桿狀、分葉核粒細(xì)胞為主。目前，臨床上CML的藥物治療方法主要包括①單種藥物治療，如馬利蘭壙8mg或羥基脲1.5 3.0g，靜注，1次/日；②聯(lián)合化療，如COAP方案(環(huán)磷酰胺400mg，靜注，1次/ 日，第1、4天使用；長春新堿廣ang，靜注，1次/日，第1天使用；阿糖胞苷50mg，靜注，每12 小時一次，連續(xù)使用5、天；強(qiáng)的松20mg，靜注，1次/日，連續(xù)使用5天；停藥7 10天后， 根據(jù)病情可重復(fù)應(yīng)用直到癥狀完全緩解)或HA方案(三尖杉酯堿^ig/日，靜注，1次/日， 連續(xù)使用3天；阿糖胞苷10(T200mg，靜注，1次/日，連續(xù)使用7天；休息5 7天后，重復(fù)應(yīng)用，共2 3療程；以后三尖杉酯堿lmg，靜注，1次/日，連續(xù)使用20天);③干擾素(IFN)治療，如 IFN-a-2b，2X106U/m2 5X106U/m2 或用 2X 107U/m2，靜注，1 次 / 日。傳統(tǒng)的慢性粒細(xì)胞白血病的治療目標(biāo)著眼于殺傷細(xì)胞進(jìn)而抑制增殖。這種療法通常在殺傷白血病細(xì)胞的同時對正常的造血細(xì)胞也可以產(chǎn)生抑制。自上世紀(jì)80年代中期，我國學(xué)者開展的全反式維甲酸有效治療急性早幼粒細(xì)胞白血病的研究，使腫瘤的誘導(dǎo)分化治療成為現(xiàn)實(shí)。迄今為止，已發(fā)現(xiàn)許多藥理活性物質(zhì)如佛波酯、丁酸鈉、5-氮雜脫氧胞苷等均能誘導(dǎo)癌細(xì)胞分化，其中包括白血病細(xì)胞和某些實(shí)體瘤細(xì)胞。連翹苷，提取于木犀科植物連翹[Forsythia suspensa (Thunb. ) Vahl]的干燥果實(shí)，分子式為C27H34O11,分子量為534. 55。我們研究發(fā)現(xiàn)，連翹苷能夠抑制K562白血病細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)K562白血病細(xì)胞向紅系分化。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供連翹苷在制備抗慢性粒細(xì)胞白血病的藥物方面的新用途。具體地說，本發(fā)明涉及連翹苷在制備抗慢性粒細(xì)胞白血病的藥物中的應(yīng)用。其中，所述的應(yīng)用，其特征在于抑制K562白血病細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)K562白血病細(xì)胞向紅系分化。
本發(fā)明所述的連翹苷提取于木犀科植物連翹[Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl]的干燥果實(shí)。本發(fā)明所述藥物是指以連翹苷為主要活性成分，與可藥用載體制成的醫(yī)療上可接受的制劑，如注射液、片劑、丸劑或膠囊劑等。本發(fā)明所述藥物，其用量以連翹苷計(jì)成人，4(T50mg/次，2次/日；兒童， l(Tl5mg/kg·次，2次/日，即可達(dá)到抑制白血病細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)分化的作用。特別地，孕婦等特殊人群應(yīng)用時需遵醫(yī)囑。本發(fā)明所述連翹苷可以直接通過市售得到，也可以通過植物提取得到。本發(fā)明通過2，3-雙(2-甲氧基-4-硝基-5磺基苯)_5_ [(苯胺基)羰基)]-二氫-四氮唑氫(XTT)試驗(yàn)證明了連翹苷可以抑制K562白血病細(xì)胞增殖。本發(fā)明通過集落形成試驗(yàn)證明了連翹苷可以抑制K562白血病細(xì)胞增殖。本發(fā)明通過形態(tài)學(xué)試驗(yàn)證明了連翹苷可以抑制K562白血病細(xì)胞增殖，并有誘導(dǎo)分化的趨勢。本發(fā)明通過流式細(xì)胞儀檢測K562白血病細(xì)胞周期，發(fā)現(xiàn)連翹苷對K562白血病細(xì)胞的增殖抑制作用可能是由于將K562白血病細(xì)胞周期阻滯在S期所致。本發(fā)明通過血紅蛋白聯(lián)苯胺染色證明了連翹苷具有誘導(dǎo)K562白血病細(xì)胞向產(chǎn)生血紅蛋白的終末細(xì)胞分化的能力。本發(fā)明通過流式細(xì)胞儀檢測K562白血病細(xì)胞胞膜上⑶71表面標(biāo)記，證明了連翹苷可以誘導(dǎo)K562白血病細(xì)胞向紅系分化。本發(fā)明的有益效果在于
1、本發(fā)明提供了連翹苷的新用途，其對K562白血病細(xì)胞有很好的抑制增殖作用，并可以誘導(dǎo)K562白血病細(xì)胞向紅系分化。
2、本發(fā)明采用的連翹苷提取于純天然植物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)和含量明確，質(zhì)量可控，符合國際市場第三代中藥產(chǎn)品的要求，有廣闊的市場前景。如果研究成功，將提高我國傳統(tǒng)中藥的國際地位，對保障人類健康做出貢獻(xiàn)。


圖1連翹苷對K562白血病細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響(X400)。試驗(yàn)結(jié)果顯示，K562白血病細(xì)胞經(jīng)連翹苷處理后細(xì)胞體積變大，核漿比例減少，有核切跡，核染色質(zhì)濃集、變粗，部分細(xì)胞核仁比較明顯，胞質(zhì)增多、淺染，核周胞質(zhì)出現(xiàn)淡染區(qū)，表現(xiàn)一定程度的分化。圖2連翹苷對K562白血病細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白聯(lián)苯胺染色的影響。試驗(yàn)結(jié)果顯示， 連翹苷具有誘導(dǎo)K562白血病細(xì)胞向產(chǎn)生血紅蛋白的終末細(xì)胞分化的能力，并具有劑量依賴性。圖3連翹苷對K562白血病細(xì)胞膜⑶71表面標(biāo)記的影響。試驗(yàn)結(jié)果顯示，連翹苷可以誘導(dǎo)K562白血病細(xì)胞向紅系分化，并具有劑量依賴性。
具體實(shí)施例方式以下通過實(shí)施例及試驗(yàn)例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明的連翹苷的新用途及其有益效果， 但不用來限制本發(fā)明的范圍。
試驗(yàn)例1 連翹苷對K562白血病細(xì)胞的增殖抑制作用。1、藥物連翹苷(上?？婆d商貿(mào)有限公司)，XTT (美國Sigma公司)。2、儀器ELX_800酶標(biāo)儀(美國Bio-Tek公司)。3、細(xì)胞K562白血病細(xì)胞(中國科學(xué)院上海生科院細(xì)胞資源中心)。4、實(shí)驗(yàn)分組(1)空白對照組；(2)10_5mol/L羥基脲對照組；(3)10_7mol/L連翹苷組；(4) KTmol/L連翹苷組；(5) lO—W/L連翹苷組；(6) lO—W/L連翹苷組。5、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容XTT試驗(yàn)。6、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0軟件，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以( χ 士S)表示，細(xì)胞計(jì)數(shù)多組間比較采用重復(fù)測量方差分析，多均數(shù)間比較采用單因素方差分析，以Ρ<0. 05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。7、結(jié)果10_4mol /L連翹苷可以顯著抑制K562白血病細(xì)胞增殖，與空白對照組相比，具有顯著性差異(P<0. 05 )；與10_5mo 1/L羥基脲對照組相比，無顯著性差異(P > 0. 05 )； 連翹苷抑制K562白血病細(xì)胞增殖作用具有明顯的劑量依賴性。(表1)
表1連翹苷對K562白血病細(xì)胞XTT的影響
權(quán)利要求
1.連翹苷在制備抗慢性粒細(xì)胞白血病的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的連翹苷，其特征在于，提取于木犀科植物連翹[Forsythia suspensa (Thunb. ) Vahl]的干燥果實(shí)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的連翹苷，其特征在于，分子式=C27H34O11,分子量534.55， CAS 登錄號487-41-2，化學(xué)名稱b-D-Glucopyranoside，4-[4-(3，4-dimethoxyphenyl) tetrahydro-ΙΗ, 3H-furo[3, 4-c]furan-l-yl]-2-methoxyphenyl, [IS- (la,3aa,4b,6a a)]_，結(jié)構(gòu)式:
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，抑制K562白血病細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)K562白血病細(xì)胞向紅系分化。
全文摘要
本發(fā)明提供了連翹苷在制備抗慢性粒細(xì)胞白血病的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明經(jīng)細(xì)胞試驗(yàn)驗(yàn)證，連翹苷能夠抑制K562白血病細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)K562白血病細(xì)胞向紅系分化。
文檔編號A61K31/7048GK102406652SQ20111036633
公開日2012年4月11日 申請日期2011年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月18日
發(fā)明者侯麗娟, 劉雨晴, 尚校軍, 尹雅玲, 律海峽, 朱利紅, 李嘉, 李福林, 李鵬, 段樹鵬, 潘國聘, 王倩倩, 王蘇, 賈建偉, 趙繁榮, 高建輝 申請人:新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院