專(zhuān)利名稱(chēng)：一種單克隆抗體用于治療食管癌的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗表皮生長(zhǎng)因子受體的單克隆抗體在治療食管癌的用途。
背景技術(shù)：
根據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)告，目前全球每年新發(fā)腫瘤患者約有1000萬(wàn)，死亡近600萬(wàn)。 自20世紀(jì)70年代以來(lái)，我國(guó)惡性腫瘤的發(fā)病率和死亡率一直呈上升趨勢(shì)，2010年癌癥發(fā)病總?cè)藬?shù)約為200萬(wàn)人，死亡150萬(wàn)。目前腫瘤死亡率以超過(guò)心腦血管病而躍居首位。惡性腫瘤已成為人類(lèi)的“第一殺手”。全球食管癌年新發(fā)病例約46. 2萬(wàn)，發(fā)病率居惡性腫瘤的第8位，死亡率居第6位。 該疾病呈明顯的地域性分布，我國(guó)是食管癌高發(fā)國(guó)家，每年新發(fā)病例數(shù)占全球總病例數(shù)的一半左右，且95%以上為鱗狀細(xì)胞癌。盡管手術(shù)、放療和化療等治療技術(shù)都有顯著發(fā)展，但食管癌的療效仍然很差。美國(guó)食管癌的5年生存率為16%，歐洲也僅為10%。同期放化療 (放療50. 4Gy+同期4個(gè)療程的DDP+5FU化療)是局部區(qū)域性食管癌非手術(shù)治療的標(biāo)準(zhǔn)方案，5年生存率為27%，但3級(jí)以上的嚴(yán)重毒性高達(dá)63%。前期的研究表明，食管鱗癌患者存在較高的EGFR異常表達(dá)，約為50%。晚期食管癌中高達(dá)71 88%。EGFR異常表達(dá)的食管癌患者病期更晚、惡性程度更高、預(yù)后更差。在一項(xiàng)II期臨床研究中，TKI藥物吉非替尼作為食管癌的二線方案治療時(shí)療效并不令人滿(mǎn)意有效率(CR+PR)僅為2. 8%，控制率(CR+PR+SD)為30. 6%，中位生存時(shí)間只有5. 5月。 一項(xiàng)I期臨床試驗(yàn)中，厄洛替尼聯(lián)合同期放化療治療食管癌耐受性很好，進(jìn)一步的研究還在進(jìn)行當(dāng)中。最近，百泰生物藥業(yè)有限公司與古巴共同研發(fā)了一種新的抗EGFR的單克隆抗體——尼妥珠單抗注射液(Nimotuzumab，商品名泰欣生)，該產(chǎn)品是抗EGFR的重組人源化單克隆抗體，其人源化程度達(dá)95%，為中度親和力(親和常數(shù)為I(T9M)，半衰期長(zhǎng)達(dá)302小時(shí)。尼妥珠單抗是人IgGl類(lèi)型的抗體，它表達(dá)在鼠源骨髓瘤NSO細(xì)胞系中。該人源化單抗顯示出與其鼠源單抗相同的活性，表現(xiàn)出對(duì)EGFR良好的結(jié)合性。從以上臨床研究的初步結(jié)果來(lái)看，尼妥珠單抗具有良好的有效性和安全性。與同類(lèi)產(chǎn)品比較，因其人源化程度高和中度親和力，不良反應(yīng)發(fā)生率和嚴(yán)重程度明顯降低。該產(chǎn)品在國(guó)外多個(gè)國(guó)家已上市，國(guó)內(nèi)也通過(guò)了 SFDA的審核批準(zhǔn)，獲得了新藥證書(shū) (國(guó)藥證字S20080001)，已于2008年上市銷(xiāo)售。是中國(guó)第一個(gè)在腫瘤靶向治療領(lǐng)域抗EGFR 的重組人源化單克隆抗體。以獲得臨床批件，批件號(hào)2008L04846，目前處于臨床研究階段。本藥物的治療機(jī)制尼妥珠單抗是抗EGFR的重組人源化單克隆抗體，其人源化達(dá)95%，中度親和力 (10_9)，有較長(zhǎng)半衰期003小時(shí))。由于它是單克隆抗體，所以特異性強(qiáng)；而且加之它是一個(gè)人源化抗體，所以不會(huì)發(fā)生其他抗體所容易產(chǎn)生的致命免疫應(yīng)答反應(yīng)。研究已經(jīng)證實(shí)尼妥珠單抗參與了抗體依賴(lài)的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒(ADCC)和補(bǔ)體依賴(lài)的細(xì)胞毒(CDC)這兩種重要的免疫學(xué)系統(tǒng)的效應(yīng)機(jī)制。在51Cr釋放實(shí)驗(yàn)中使用人肺癌細(xì)胞系作為靶目標(biāo)證明了尼
3妥珠單抗的ADCC活性。當(dāng)使用人的補(bǔ)體源時(shí)，人源化單抗尼妥珠單抗可以固定、激活和誘導(dǎo)標(biāo)記細(xì)胞的溶解。這個(gè)結(jié)果揭示尼妥珠單抗可以通過(guò)這些免疫學(xué)效應(yīng)機(jī)制(ADCC和CDC) 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的溶胞效應(yīng)。在老鼠細(xì)胞上通過(guò)阻斷EGFR受體進(jìn)行了一些體內(nèi)和體外的實(shí)驗(yàn)，以用來(lái)演示尼妥珠單抗在腫瘤細(xì)胞系和移植的腫瘤細(xì)胞上的抗增殖活性。尼妥珠單抗在三維培養(yǎng)基(該培養(yǎng)基對(duì)于腫瘤抑制有理想的品質(zhì))上有格外的活力。單抗尼妥珠單抗通過(guò)抑制促血管生成生長(zhǎng)因子比如VEGF的產(chǎn)生而證明了其抗血管生成的屬性，還通過(guò)伴隨細(xì)胞周期S期減少的Gl停止證明了其致細(xì)胞凋亡的屬性。在測(cè)定尼妥珠單抗的抗腫瘤活性的體內(nèi)試驗(yàn)中，免疫組化分析揭示被治療患者腫瘤的血管供應(yīng)顯著降低。這些結(jié)果暗示尼妥珠單抗可以有效作為針對(duì)EGFR依賴(lài)的腫瘤的治療。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種有效治療食管癌的藥物，經(jīng)本發(fā)明人深入而廣泛的研究發(fā)現(xiàn)，尼妥珠單抗可以非常有效的治療食管癌，在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。尼妥珠單抗的分子結(jié)構(gòu)是已知的，如中國(guó)專(zhuān)利CN10M609C所述，該單克隆抗體是一人源化單克隆抗體，是針對(duì)特異抗原產(chǎn)生的特異純化抗體，它具有高度專(zhuān)一性，能夠特異性針對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行靶向治療，從分子水平逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為，因而有“生物導(dǎo)彈”之稱(chēng)。尼妥珠單抗的分子量大約為150000道爾頓，輕鏈分子量大約為23000道爾頓， 重鏈分子量大約為52000道爾頓。該人源化抗體是這樣構(gòu)建的使用人免疫球蛋白R(shí)El和 EU的輕鏈和重鏈將其親代鼠源單抗(ior egf/r3，簡(jiǎn)稱(chēng)r3)互補(bǔ)決定區(qū)CDR移植到人免疫球蛋白的骨架上，同時(shí)突變回3個(gè)鼠源氨基酸殘基(分別是Ser75，Thr76和Thr9;3)，以完全恢復(fù)其對(duì)抗原的親和力。尼妥珠單抗是人IgGl類(lèi)型的抗體，它表達(dá)在鼠源骨髓瘤NSO細(xì)胞系中。該人源化單抗顯示出與其鼠源單抗相同的活性，可以抑制EGF結(jié)合到其受體上。尼妥珠單抗表現(xiàn)出對(duì)EGFR良好的結(jié)合性，并且有10_9M的解離常數(shù)。該類(lèi)藥物具有靶向性強(qiáng)、特異性高和毒副作用低等特點(diǎn)，并能增強(qiáng)放、化療的治療效果，代表著腫瘤治療領(lǐng)域的最新發(fā)展方向。本發(fā)明的技術(shù)方案如下本發(fā)明的目的在于提供一種有效治療食管癌的藥物，所述的藥物的活性成分為抗 EGFR單克隆抗體，該單克隆抗體指尼妥珠單抗(Nimotuzunab，簡(jiǎn)稱(chēng)h_R3)。本發(fā)明的第一方面，提供了一種抗EGFR的單克隆抗體的用途，用于制備治療食管癌的藥物。所述藥物的給藥途徑是靜脈注射或靜脈滴注。所述藥物的起始劑量是根據(jù)國(guó)外治療食管癌臨床研究中劑量為200mg/w，結(jié)果顯示其良好的有效性和安全性。所述的疾病是指食管癌。所述的疾病是指包括食管癌的鱗狀上皮細(xì)胞癌，腺癌以及未分化癌。所述的腺癌又可分為單純腺癌、腺鱗癌、粘液表皮樣癌和腺樣囊性癌。
所述藥物的給藥途徑是靜脈注射或靜脈滴注。 所述藥物的給藥劑量是每周給藥一次，每次100-200mg/l. 5m2體表面積，優(yōu)選為200mg/l. 5m2體表面積。在使用該藥物時(shí)，是將安全有效量的尼妥珠單抗施用于哺乳動(dòng)物，其中，該安全有效量通常至少為50mg/l. 5m2體表面積，持續(xù)應(yīng)用6_8周。具體劑量還應(yīng)根據(jù)給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍內(nèi)的。本發(fā)明藥物可以通過(guò)常規(guī)途徑進(jìn)行給藥，其中包括但不限于靜脈滴注、靜脈注射等方式。


圖1為抗體依賴(lài)性細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞毒特異減退的結(jié)果100/1效應(yīng)器/靶位率圖2為抗體依賴(lài)性細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞毒特異減退的結(jié)果50/1效應(yīng)器/靶位率圖3為抗EGFR單抗對(duì)荷載H-125人腺癌細(xì)胞裸鼠的抗腫瘤作用圖4為抗EGFR單抗對(duì)荷載A431腫瘤細(xì)胞裸鼠的抗腫瘤作用圖5為長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)中三種抗體在兩個(gè)計(jì)量條件下對(duì)荷載A431SCID小鼠的作用圖6為尼妥珠單抗聯(lián)合放化療治療食管癌的生存期曲線7為尼妥珠單抗聯(lián)合放化療治療食管癌的病理表現(xiàn)
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的實(shí)施方案通過(guò)下列實(shí)施例舉例說(shuō)明。然而本發(fā)明的實(shí)施方案不限于這些實(shí)施例的特定細(xì)節(jié)，因?yàn)閷?duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，其它的變化是已知的，或根據(jù)直接公開(kāi)的內(nèi)容和附屬的權(quán)利要求是顯而易見(jiàn)的。因此，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。本文引用的參考文獻(xiàn)以其全文通過(guò)引用并入本文。下述實(shí)施例中所述實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法；所述試劑和生物材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑獲得。實(shí)施例1、臨床前藥效學(xué)試驗(yàn)一、體外活性通過(guò)99mTc標(biāo)記的尼妥珠單抗和H-125人肺腺癌腫瘤細(xì)胞系、A431人陰道上皮癌腫瘤細(xì)胞系以及MDA-MB-468人乳腺癌腫瘤細(xì)胞系的平衡結(jié)合試驗(yàn)來(lái)測(cè)定尼妥珠單抗結(jié)合腫瘤細(xì)胞的能力。在室溫下使用冰凍干燥試劑盒(購(gòu)自西格瑪奧德里奇(上海)貿(mào)易有限公司)標(biāo)記，15分鐘后，平均有(97. 38士0. 23) %的99mTc標(biāo)記到了 IgG抗體上。在丙酮中單抗的快速紙層析顯示大約3%或更少的自由高锝酸跑到試劑前沿(Rf = 10)。這揭示幾乎所有的高锝酸都被還原。由1. 0%白蛋白浸滲的ITLC方法測(cè)定的尼妥珠單抗的膠體形態(tài)是(1.68士0.81)%。99111 標(biāo)記的尼妥珠單抗的最大結(jié)合(Bmax)可達(dá)74. 02%，表1中顯示了每個(gè)細(xì)胞的EGFR的數(shù)目及抗體和所有細(xì)胞系的親和常數(shù)。表1、在人癌癥腫瘤細(xì)胞系上的尼妥珠單抗的結(jié)合特性
權(quán)利要求
1.一種抗表皮生長(zhǎng)因子受體的單克隆抗體在制備治療食管癌的藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述食管癌是指食管癌的鱗狀上皮細(xì)胞癌、腺癌及未分化癌中的任意一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述的腺癌是指單純腺癌、腺鱗癌、粘液表皮樣癌和腺樣囊性癌中的任意一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗表皮生長(zhǎng)因子受體的單克隆抗體為尼妥珠單抗。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗表皮生長(zhǎng)因子受體的單克隆抗體的給藥途徑是靜脈注射或靜脈滴注。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗表皮生長(zhǎng)因子受體的單克隆抗體的給藥劑量是每周給藥一次，每次100-200mg/l. 5m2體表面積。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于，所述藥物的給藥劑量是每周給藥一次，每次200mg/l. 5m2體表面積。
全文摘要
本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，更具體地涉及一種抗表皮生長(zhǎng)因子受體的單克隆抗體在治療食管癌方面的用途，尤其是人源化單克隆抗體——尼妥珠單抗。該單克隆抗體是針對(duì)特異抗原產(chǎn)生的特異純化抗體，它具有高度專(zhuān)一性，能夠特異性針對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行靶向治療，從分子水平逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為，具有靶向性強(qiáng)、特異性高和毒副作用低等特點(diǎn)，并能顯著增強(qiáng)放、化療的治療效果。
文檔編號(hào)A61K39/395GK102441165SQ20111038018
公開(kāi)日2012年5月9日 申請(qǐng)日期2011年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月25日
發(fā)明者呂慧, 李桂珠, 梁軍, 王海龍, 王綠化, 白先宏, 羅蘭多, 趙快樂(lè), 鄭雋奇, 馬博晨, 馬國(guó)勝 申請(qǐng)人:百泰生物藥業(yè)有限公司