專利名稱：中藥瑞香及其提取物在制藥中的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及中藥瑞香及其提取物在制藥中的新用途。
技術(shù)背景
人體感染丙型肝炎病毒所致的丙型肝炎，已成為全球最棘手的健康問題，目前全世界已有1. 7億人感染。若無藥物的治療，長(zhǎng)期感染丙型肝炎病毒將發(fā)展成為慢性肝炎、 肝壞死、肝癌等疾病。當(dāng)前最有效的治療方法是聚乙二醇干擾素聯(lián)合利津巴韋，該方法對(duì)于廣大發(fā)展中國(guó)家普遍存在的I型丙型肝炎治療有效率低于50%，長(zhǎng)期使用干擾素存在許多副作用，如白細(xì)胞、血小板、嗜中性白血球的減少和抑郁癥等；長(zhǎng)期使用利津巴韋，也將產(chǎn)生溶血性貧血等副作用，使得患者不能持續(xù)治療，因此發(fā)展獨(dú)特、有效、更安全的丙型肝炎治療藥物尤為緊迫。
丙型肝炎病毒蛋白酶NS3/4A在病毒圓熟過程中起著重要的作用，已被證實(shí)是發(fā)現(xiàn)丙型肝炎藥物的有效靶點(diǎn)之一。目前三種丙型肝炎NS3/4A蛋白酶抑制劑，BILN 2061，VX-950和SCH 503034，已被臨床證實(shí)療效顯著，但多為肽類抑制劑，合成困難，并有一定的毒副作用。
中藥瑞香papyracea Wall, ex Steud. var. crassiuscula Rehd.)系瑞香科瑞香屬常綠灌木，又名麝囊，蓬萊花，雪花、奪香花，野夢(mèng)花、山夢(mèng)花，雪地開花、紅總管、 雪凍花。主要分布于四川、貴州、云南等地海拔1000-3100米的山坡灌叢或草坡中，具有治咽喉腫痛，齒痛，風(fēng)濕痛等功效。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有治療丙型肝炎的藥物合成困難、副作用多的缺陷，提供中藥瑞香及其提取物在制備丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶抑制劑和治療丙型肝炎藥物中的應(yīng)用。
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案本發(fā)明提供中藥瑞香及其提取物在制備丙型肝炎病毒NS4/4A蛋白酶抑制劑和治療丙型肝炎藥物中的應(yīng)用。
上述的應(yīng)用中，所述提取物為中藥瑞香的有機(jī)溶劑提取物。
上面所說的有機(jī)溶劑提取物是指采用甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、氯仿或二氯甲烷中一種或兩種以上溶劑混合提取中藥瑞香所得的提取物。優(yōu)選使用乙酸乙酯和正丁醇提取。
乙酸乙酯和正丁醇提取 物的提取方法取瑞香植物全株，粉碎，用乙醇加熱回流提取3次，合并提取液，濃縮成浸膏，用水分散，先用乙酸乙酯萃取，然后用正丁醇萃取，分別濃縮，得乙酸乙酯浸膏和正丁醇浸膏，即得。
上述提取方法中所用乙醇的濃度為80 95%。
前述應(yīng)用中所述的中藥瑞香是瑞香科瑞香屬植物papyracea Wall, exSteud. var. crassiuscula Rehd.的全株。
申請(qǐng)人對(duì)瑞香提取物的體外抗丙型肝炎活性進(jìn)行了測(cè)試，具體如下；測(cè)試原理熒光法檢測(cè)儀器=TECAN GENios受試藥物實(shí)施例1中的乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物，分別、濃縮干燥成干浸膏。
試劑盒=SensoLyte 520 HCV蛋白酶試劑盒(批號(hào)AK71145_1011，美國(guó)圣何塞 AnaSpec。)蛋白酶HCV NS3/4A蛋白酶(批號(hào)046-079，美國(guó)圣何塞AnaSpec)測(cè)試溶液的配制(按試劑盒說明手冊(cè)操作)緩沖溶液將2X實(shí)驗(yàn)緩沖液(Component D)、1M DDT (Component F)和去離子水按I O. 06 1進(jìn)行混合，冰浴備用。
HCV NS3/4A 蛋白酶底物溶解:加 O. 12 ml 的 DMSO (Component C)到 HCV NS3/4A 蛋白酶底物[Ac-Asp-Glu-Dap (QXL 520) -Glu-Glu-Abu-COO-Ala-Ser-Cys(5-FAMsp)-NH2] (Component A),作為儲(chǔ)備液_20°C凍存。每次實(shí)驗(yàn)前取儲(chǔ)備液，用緩沖溶液按1:100比例稀釋，現(xiàn)配現(xiàn)用。
HCV NS3/4A蛋白酶溶液用緩沖溶液將蛋白酶溶液稀釋20或60倍。
測(cè)定方法(按試劑盒說明手冊(cè)操作)在384孔黑色平板(美國(guó)BD Falcon公司) 中，先分別加入底物空白溶液(Substrate ControI,SC),溶劑空白溶液(VehicIe Control, VC)、陽性對(duì)照(Positive Control, PC)、抑制劑對(duì)照(Inhibitor Con trol, IC)、測(cè)試化合物對(duì)照(Test Compound Control, TCC),再加入HCV NS3/4A蛋白酶和底物。每個(gè)濃度均為3個(gè)復(fù)孔，震蕩混勻后，室溫下暖孵30分鐘，經(jīng)TECAN GENios在激發(fā)波長(zhǎng)485nm和發(fā)射波長(zhǎng)535nm下測(cè)試熒光強(qiáng)度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表I。
抑制率計(jì)算公式擁J帝[J在* h 100 X ^ ^Average VC—Average SC ^Average sample—Average SC) I ^Average VC-Average SC式中的F為對(duì)照組和樣品組熒光值，抑制率及IC5tl的計(jì)算通過微軟Windows Excel軟件完成。
表I瑞香提取物對(duì)HCV NS3/4A蛋白酶的抑制作用(n=3)
權(quán)利要求
1.中藥瑞香及其提取物在制備丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶抑制劑和治療丙型肝炎藥物中的應(yīng)用。
2.按照權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述提取物為中藥瑞香的有機(jī)溶劑提取物。
3.按照權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述提取物為中藥瑞香的甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、氯仿或二氯甲烷中一種或兩種以上溶劑混合的提取物。
4.按照權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述提取物為中藥瑞香的乙酸乙酯和正丁醇提取物。
5.按照權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述乙酸乙酯和正丁醇提取物的提取方法為取中藥瑞香植物全株，粉碎，用乙醇加熱回流提取3次，合并提取液，濃縮成浸膏，用水分散，先用乙酸乙酯萃取，然后用正丁醇萃取，分別濃縮，得乙酸乙酯浸膏和正丁醇浸膏，即得。
6.按照權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述乙醇的濃度為80 95%。
7.按照權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述中藥瑞香是瑞香科瑞香屬植物papyracea Wall, ex Steud. var. crassiuscula Rehd.的全株。
全文摘要
本發(fā)明公開了中藥瑞香及其提取物在制備丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶抑制劑和治療丙型肝炎藥物中的應(yīng)用，瑞香及瑞香提取物對(duì)丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶具有較強(qiáng)的抑制作用，乙酸乙酯和正丁醇提取物浸膏濃度在100mg/ml時(shí)，對(duì)丙型肝炎蛋白酶的抑制率分別為70.5%和65.4%，可用于制備丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶抑制劑和治療丙型肝炎的藥物。
文檔編號(hào)A61P31/14GK103027999SQ201110384498
公開日2013年4月10日 申請(qǐng)日期2011年11月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月28日
發(fā)明者危英, 馬超美, 服部征雄, 梁光義, 汪冶, 危莉 申請(qǐng)人:貴陽中醫(yī)學(xué)院