專利名稱：一種組織工程化瓣膜的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于組織工程學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種組織工程化瓣膜及其制備方法。
背景技術(shù)：
組織工程學(xué)應(yīng)用生命科學(xué)和工程學(xué)的原理和方法，研究、開發(fā)用于修復(fù)、增進(jìn)或改善人體各種組織或器官損傷后功能和形態(tài)的生物替代品。所述生物替代品的基本制備方法是將細(xì)胞經(jīng)體外擴(kuò)增后與可降解生物材料相結(jié)合形成細(xì)胞-可降解生物材料復(fù)合體，用以替代受損組織器官。它具有形成具有生命力的活體組織，少量細(xì)胞修復(fù)大塊缺損，并可按組織、器官缺損情況任意塑型等特點(diǎn)。就組織工程化心瓣膜而言，目前尚存在血管內(nèi)皮細(xì)胞來源及尋找合適的可降解支架材料兩大技術(shù)難點(diǎn)。組織工程化瓣膜包含血管內(nèi)皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞兩類種子細(xì)胞，目前重建瓣膜實(shí)驗(yàn)需取患者大段血管，再通過復(fù)雜的技術(shù)分離成纖維細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞，故無法擺脫以創(chuàng)傷修復(fù)創(chuàng)傷的模式。此外眾所周知體細(xì)胞體外培養(yǎng)難度極大，一般傳幾代即發(fā)生變性，而構(gòu)建瓣膜需要大量血管內(nèi)皮細(xì)胞。對(duì)此，既往研究重點(diǎn)大多放在胚胎干細(xì)胞與端粒酶上，但前者面臨倫理學(xué)的異議，后者因其可能誘發(fā)腫瘤而鮮有問津。目前認(rèn)為，組織工程支架材料有如下作用:1)維持組織結(jié)構(gòu)的完整性并防止變形，2)作為屏障抑制周圍組織的過度再生，3)作為細(xì)胞遷移和增殖的支架，4)通過與細(xì)胞表面細(xì)胞受體的相互作用促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化。理想的支架材料應(yīng)具備良好的細(xì)胞相容性、組織相容性、與 細(xì)胞生長(zhǎng)速率相匹配的降解速率及一定的強(qiáng)度和可塑性。既往多利用聚羥基乙酸等合成高分子降解材料，但其生物相容性和細(xì)胞親和性不甚理想。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種組織工程化瓣膜的制備方法。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
一種組織工程化瓣膜，其特征在于按下述方法制備:通過多種途徑提取種子細(xì)胞，進(jìn)行體外培養(yǎng)、傳代和增殖后，分步種植于可降解支架材料，構(gòu)建成組織工程化瓣膜。所述的可降解支架材料是脫細(xì)胞基質(zhì)。所述的種子細(xì)胞是血管內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。所述的脫細(xì)胞基質(zhì)是同種異體和異種瓣膜組織脫細(xì)胞基質(zhì)，心包組織脫細(xì)胞基質(zhì)和血管組織脫細(xì)胞基質(zhì)。所述的血管內(nèi)皮細(xì)胞來源于骨髓，靜脈血管、動(dòng)脈血管和脂肪組織。所述的成纖維細(xì)胞來源于骨髓和皮下結(jié)締組織。所述瓣膜制備方法是先接種成纖維細(xì)胞于支架材料上，制成成纖維細(xì)胞-支架材料復(fù)合物，再于復(fù)合物表面接種血管內(nèi)皮細(xì)胞。種子細(xì)胞接種密度為IO5 — 108/cm。本發(fā)明組織工程化瓣膜，具有以下特點(diǎn):I)具有正常瓣膜組織的組織結(jié)構(gòu)，表面為血管內(nèi)皮細(xì)胞覆蓋，中間是以成纖維細(xì)胞為主要成分的結(jié)締組織，是具有新陳代謝功能的活組織。2)具備良好的細(xì)胞相容性、組織相容性、與細(xì)胞生長(zhǎng)速率相匹配的降解速率及較好的強(qiáng)度和可塑性。
具體實(shí)施方式
:
下面通過實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，但本發(fā)明并不僅限于此。實(shí)施例1
收集成纖維細(xì)胞，將其接種于支架材料上，接種密度為105-108/cm。DMEM培養(yǎng)液3天換一次，培養(yǎng)7-10天，構(gòu)建得成纖維細(xì)胞一支架材料復(fù)合物。收集血管內(nèi)皮細(xì)胞，將其接種在成纖維細(xì)胞一支架材料復(fù)合物表面，制備血管內(nèi)皮細(xì)胞一成纖維細(xì)胞一支架材料復(fù)合物，再將其按瓣膜形狀縫合塑型，制成組織工程化瓣膜。

本發(fā)明構(gòu)建的組織工程化瓣膜組織具有正常瓣膜組織組織結(jié)構(gòu)，是可自我更新，自我修復(fù)的活組織，并且無抗原性，不會(huì)引起免疫排斥反應(yīng)。
權(quán)利要求
1.一種組織工程化瓣膜，其特征在于按下述方法制備:通過多種途徑提取種子細(xì)胞，進(jìn)行體外培養(yǎng)、傳代和增殖后，分步種植于可降解支架材料，構(gòu)建成組織工程化瓣膜。
2.如權(quán)利要求1所述的組織工程化瓣膜，其特征在于:所述的可降解支架材料是脫細(xì)胞基質(zhì)。
3.如權(quán)利要求1所述的組織工程化瓣膜，其特征在于:所述的種子細(xì)胞是血管內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。
4.如權(quán)利要求1和2所述的組織工程化瓣膜，其特征在于:所述的脫細(xì)胞基質(zhì)是同種異體和異種瓣膜組織脫細(xì)胞基質(zhì)，心包組織脫細(xì)胞基質(zhì)和血管組織脫細(xì)胞基質(zhì)。
5.如權(quán)利要求1和3所述的組織工程化瓣膜，其特征在于:所述的血管內(nèi)皮細(xì)胞來源于骨髓，靜脈血管、動(dòng)脈血管和脂肪組織。
6.如權(quán)利要求1和3所述的組織工程化瓣膜，其特征在于:所述的成纖維細(xì)胞來源于骨髓和皮下結(jié)締組織。
7.如權(quán)利要求1所述的組織工程化瓣膜，其特征在于:所述瓣膜制備方法是先接種成纖維細(xì)胞于支架材料上，制成成纖維細(xì)胞-支架材料復(fù)合物，再于復(fù)合物表面接種血管內(nèi)皮細(xì)胞。
8.如權(quán)利要求1所述的組織工程瓣膜，其特征在于:種子細(xì)胞接種密度為IO5— IO8/ cm。
全文摘要
本發(fā)明公布了一種組織工程化瓣膜及其制備方法。釆用脫細(xì)胞基質(zhì)作為可降解支架材料，提取血管內(nèi)皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞作為種子細(xì)胞，由經(jīng)培養(yǎng)和傳代，種植于可降解支架材料，制成組織工程化瓣膜。本發(fā)明的可降解支架材料其生物相容性好、易于種植細(xì)胞，并能保存正常組織的天然結(jié)構(gòu)和組織強(qiáng)度。本組織工程化瓣膜組織是一種具有正常瓣膜組織組織結(jié)構(gòu)，并可自我更新，自我修復(fù)的活組織。無抗原性，不會(huì)引起免疫排斥反應(yīng)。
文檔編號(hào)A61L27/38GK103157136SQ201110414700
公開日2013年6月19日 申請(qǐng)日期2011年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月13日
發(fā)明者陳富林 申請(qǐng)人:西安瑞捷生物科技有限公司