專利名稱：豬瘟疫苗的硫代硫酸鈉稀釋液的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種豬瘟疫苗的疫苗稀釋液，特別是指一種豬瘟疫苗硫代硫酸鈉稀釋液，屬于獸用疫苗領域。
背景技術(shù)：
豬痕是由豬痕病毒(Classical swine fever virus, CSFV)引起的一種高度接觸性傳染病，不同年齡、性別和品種的豬均能感染，死亡率高達80-90 %。豬瘟被世界世界動物衛(wèi)生組織劃分為A類疾病，我國將其劃分為一類疾病。中國學者培育成功的豬瘟兔化弱毒苗是目前世界上公認的安全和有效的疫苗，借助于C株疫苗密集接種和綜合防制措施，有關(guān)國家已經(jīng)有效地控制了豬瘟。
然而，豬瘟疫苗在使用時需要用疫苗稀釋劑稀釋，通常選用注射用水或生理鹽水，但這樣稀釋出的疫苗，免疫效價整齊度不高，接種發(fā)病豬后有應激反應和過敏反應，影響了豬瘟疫苗的免疫效果。發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明的主要目的在于提供一種豬瘟疫苗的硫代硫酸鈉稀釋液，以解決豬瘟疫苗免疫后，抗體效價降低以及疫苗效價整齊度不高問題。
技術(shù)方案
一種用于豬瘟疫苗的疫苗稀釋液:硫代硫酸鈉稀釋液，其中，所述硫代硫酸鈉稀釋液為硫代硫酸鈉水溶液。
優(yōu)選地，本發(fā)明的疫苗稀釋液為硫代硫酸鈉水溶液,其中,水包括純化水或注射用水。
優(yōu)選地，本發(fā)明的硫代硫酸鈉水溶液中硫代硫酸鈉濃度為10 50mg/ml ;更優(yōu)選地，硫代硫酸鈉濃度為20 40mg/ml ;最優(yōu)地,所述硫代硫酸鈉濃度為35mg/ml。
通過本發(fā)明后續(xù)實施例，本發(fā)明的硫代硫酸鈉水溶液可以提高稀釋后的豬瘟疫苗的效價，并提高疫苗的效價的整齊度或批次間的穩(wěn)定性。為了進一步提高稀釋后豬瘟疫苗的效價，本發(fā)明的疫苗稀釋劑還可以包括以下免疫增強劑，與本發(fā)明的硫代硫酸鈉稀釋劑配合，可以進一步增強疫苗的免疫力。即，優(yōu)選地，本發(fā)明的硫代硫酸鈉水溶液還包括免疫增強劑。
優(yōu)選地，本發(fā)明的免疫增強劑包括黃芪多糖、白介素-2、聚肌胞或SL-環(huán)糊精。
優(yōu)選地，本發(fā)明的作為免疫增強劑的黃芪多糖的含量為I 10mg/ml，更優(yōu)選，所述黃芪多糖的含量為5mg/ml。
優(yōu)選地，本發(fā)明的作為免疫增強劑的SL-環(huán)糊精含量為0.1 10mg/ml ;更優(yōu)選地，SL-環(huán)糊精含量為0.1 5mg/ml ;最優(yōu)選地，SL-環(huán)糊精含量為2mg/ml。
由上可以看出，豬瘟疫苗利用本發(fā)明的硫代硫酸鈉水溶液稀釋后，可以解決疫苗免疫后，疫苗抗體效價以及整齊度不高問題；通過與免疫增強劑的相互配合，可以進一步提高稀釋后的豬瘟疫苗的效價。
具體實施方式
下面通過具體的實施例對本發(fā)明進行詳述:
實施例1、用于豬瘟疫苗稀釋劑的硫代硫酸鈉水溶液的制備
試驗例I
硫代硫酸鈉(天津金匯太亞化學試劑有限公司公司分析純)3.5g溶解與50ml純化水中，用IOOml量筒定容至100ml。0.22微米濾膜過濾，100°C滅菌30分鐘。
試驗例2
硫代硫酸鈉Ig配制方法同試驗例1，區(qū)別僅在于稱量硫代硫酸鈉lg。
試驗例3
硫代硫酸鈉5g配制方法同試驗例1，區(qū)別僅在于稱量硫代硫酸鈉5g。
試驗例4
硫代硫酸鈉2g配制方法同試驗例1，區(qū)別僅在于稱量硫代硫酸鈉2g。
試驗例5
硫代硫酸鈉4g配制方法同試驗例1，區(qū)別僅在于稱量硫代硫酸鈉4g。
試驗例5
硫代硫酸鈉(天津金匯太亞化學試劑有限公司公司分析純)3.5g溶解與50ml純化水中加入注射用黃芪多糖(天津賽諾制藥有限公司)0.5g溶解于50ml純化水中，用IOOml量筒定容至100ml。0.22微米濾膜過濾，100°C滅菌30分鐘。
試驗例6硫代硫酸鈉水溶液(含黃芪多糖)
硫代硫酸鈉(天津金匯太亞化學試劑有限公司公司分析純)3.5g溶解與50ml純化水中加入注射用黃芪多糖(天津賽諾制藥有限公司)1.0g解與50ml純化水中，用IOOml量筒定容至100ml。0.22微米濾膜過濾，100°C滅菌30分鐘。
試驗例7: SL-CD的制備
將4.5克β -環(huán)糊精(上海波以爾化工有限公司)樣品溶于100毫升1:1 (ν/ν)的無水二甲基甲酰胺和無水吡啶 的混合物中，然后通過將混合物加入分子篩(2A，MERCK，德國)并在室溫下使混合物在封閉的容器中培養(yǎng)至少48小時中除去水。然后通過將無水混合物傾析入干燥容器而從分子篩中分離出無水混合物。
將6.6克月桂酰氯(MERCK，德國)加到溶解的環(huán)糊精樣品，使反應混合物在60°C下培養(yǎng)6小時，然后在15-22°C溫度下培養(yǎng)18小時。
用上述方法得到了 L-環(huán)糊精溶液。
然后將0.6克氯磺酸(MERCK，德國)加到10毫升，無水二甲基甲酰胺/吡啶中。將該混合物加入L-環(huán)糊精溶液。這樣得到的反應混合物然后在15-22°C溫度下反應24小時。反應液后通過在60°C下低壓(200毫pa)蒸發(fā)1_2小時從反應混合物中部培養(yǎng)后通過在60°C下低壓(200毫pa)蒸發(fā)1_2小時從反應混合物中部分除去溶劑。用等滲磷酸鹽緩沖液鹽水(每升水溶液由Sg氯化鈉、0.2g氯化鉀和1.15g磷酸氫二鈉組成，其PH為7.3)能截下10，000道爾頓分子的再生纖維素的膜(SPECTRA/P0R)深度透析進一步除去溶劑，接著再用超純水透祈，直至在濾液中監(jiān)測不到溶劑。滲透液(PBS或超純水)的體積與用于透析的殘留物的體積比保持在> 10: 1(V/V)。透析過程至少進行10天，透析液一天換至少一次。在室溫下內(nèi)壓低于0.1毫巴，冷凍器低于-25°c凍干殘留物得到了干燥產(chǎn)品2.9gSL-環(huán)糊精(SL-CD)。
試驗例7硫代硫酸鈉水溶液(含SL-CD)
硫代硫酸鈉(天津金匯太亞化學試劑有限公司公司分析純)3.5g溶解與50ml純化水中加入的SL-⑶(由試驗例6方法制備獲得)0.2g溶解于50ml純化水中，用IOOml量筒定容至100ml。0.22微米濾膜過濾，100°C滅菌30分鐘。
實施例2硫代硫酸鈉水溶液稀釋的豬瘟疫苗免疫試驗
1.材料
(I)疫苗:豬瘟活疫苗(細胞源)批號0803042中牧實業(yè)股份有限公司江西生物藥廠；豬瘟病毒IgG抗體檢測試劑盒(批號:08615)購自深圳綠詩源生物技術(shù)有限公司；.
(2)實驗用豬:選用符合國家實驗動物標準的飼養(yǎng)場或定點豬場供應，8周齡斷奶易感仔豬，體重為18 25kg。
(3)疫苗稀釋劑實施例1中試驗例I制備的稀釋劑，試驗例6制備的稀釋劑、試驗例7制備的稀釋劑
2.豬瘟疫苗免疫試驗
將50頭仔豬隨機分為5組，每組10頭，做好編號。免疫前Id每頭仔豬前腔靜脈采血2ml，分離血清測定豬瘟母源抗體水平。試驗組于第2d每頭注射混合的按照表I注射豬瘟疫苗，14d后采血測定豬瘟抗體水平，測定方法參照試劑盒說明書。結(jié)果判定標準為:OD值< 0.2為抗體陰性，0.2 0.4之間為可疑，OD值> 0.4時為抗體陽性，試驗數(shù)據(jù)采用SPSS軟件作T檢驗，進行顯著性分析。
表1.試驗組豬瘟疫苗所用稀釋劑及注射方法
試驗組__稀釋劑__稀釋方法_ 試驗例I制備的稀釋用稀釋劑將豬瘟疫苗稀釋成I頭份/ml,肌肉 試驗組I一__M__注射，每頭Iml_ 試驗例4制備的稀釋用稀釋劑將豬瘟疫苗稀釋成I頭份/ml,肌肉 試驗組2一__M__注射，每頭Iml_ 試驗例6制備的稀釋用稀釋劑將豬瘟疫苗稀釋成I頭份/ml,肌肉 試驗組3一__M__注射，每頭Iml_ 試驗例7制備的稀釋用稀釋劑將豬瘟疫苗稀釋成I頭份/ml,肌肉 試驗組4一__M__注射，每頭Iml_.生理鹽水(洛陽市秦用生理鹽水劑將豬瘟疫苗稀釋成I頭份/ml 試驗組5二 +_嶺制藥有限責任公司)_肌肉注射，每頭Iml_
3.試驗結(jié)果見表2
表2.各試驗組免疫前后豬瘟抗體水平
權(quán)利要求
1.一種豬瘟疫苗的硫代硫酸鈉稀釋液，其特征在于，所述硫代硫酸鈉稀釋液為硫代硫酸鈉水溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硫代硫酸鈉稀釋液，其特征在于，所述硫代硫酸鈉水溶液中硫代硫酸鈉濃度為10 50mg/ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硫代硫酸鈉稀釋液，其特征在于，所述硫代硫酸鈉水溶液中硫代硫酸鈉濃度為20 40mg/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硫代硫酸鈉稀釋液，其特征在于，所述硫代硫酸鈉水溶液中硫代硫酸鈉濃度為35mg/ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硫代硫酸鈉稀釋液，其特征在于，所述硫代硫酸鈉水溶液包括純化水或注射用水。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硫代硫酸鈉稀釋液，其特征在于，所述硫代硫酸鈉水溶液還包括免疫增強劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的硫代硫酸鈉稀釋液，其特征在于，所述免疫增強劑包括黃芪多糖、白介素_2、聚肌胞或SL-環(huán)糊精。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的硫代硫酸鈉稀釋液，其特征在于，所述黃芪多糖的含量為I 10mg/mlο
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的硫代硫酸鈉稀釋液，其特征在于，所述的SL-環(huán)糊精含量為0.1 10mg/ml。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的硫代硫酸鈉稀釋液，其特征在于，所述的SL-環(huán)糊精含量為,0.1 5mg/m l。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種豬瘟疫苗的硫代硫酸鈉稀釋液，其中，所述硫代硫酸鈉稀釋液為硫代硫酸鈉水溶液，硫代硫酸鈉濃度為10～50mg/ml。本發(fā)明的硫代硫酸鈉水溶液還包括免疫增強劑，包括黃芪多糖、白介素-2、聚肌胞或SL-環(huán)糊精。豬瘟疫苗利用本發(fā)明的硫代硫酸鈉水溶液稀釋后，可以解決疫苗免疫后，疫苗抗體效價以及整齊度不高問題；通過與免疫增強劑的相互配合，可以進一步提高稀釋后的豬瘟疫苗的效價。
文檔編號A61K39/187GK103157104SQ20111042180
公開日2013年6月19日 申請日期2011年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月14日
發(fā)明者張許科, 孫進忠 申請人:普萊柯生物工程股份有限公司