專利名稱：一種黃芪總皂苷的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種黃芪總皂苷的制備方法。
背景技術(shù)：
黃芪是一味重要的中藥，具有益衛(wèi)固表、利水清腫、托毒生肌、補(bǔ)中益氣等功效，黃芪總皂苷為黃芪的主要活性成分之一。黃芪總皂苷具有顯著抗實(shí)驗(yàn)性血栓形成的作用，并能抑制血小板聚集，提高PGI2和NO水平，降低TXA2PGI2的比例，作用機(jī)制與提高PGI2和NO 水平有關(guān)。目前，黃芪總皂苷的制備方法主要有水提醇沉法，醇溶液用于分離皂苷或水提液直接用于分離皂苷，提取所采用的水均為純化水，采用這種方法提取，皂苷在提取的過程當(dāng)中，部分已經(jīng)發(fā)生水解，造成黃芪皂苷損失較大，得率低，生產(chǎn)成本較高；也有用有機(jī)溶劑提取，濃縮后，再進(jìn)行分離，采用這種方法，操作步驟復(fù)雜，雜質(zhì)含量高，純度較低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是為了解決現(xiàn)有黃芪總皂苷損失較大，提取率低，生產(chǎn)成本較高的問題，而提供一種黃芪總皂苷的制備方法。本發(fā)明的一種黃芪總皂苷的制備方法是按以下步驟進(jìn)行的一、按質(zhì)量份數(shù)比稱取1 2份的黃芪，加入相對(duì)于黃芪8 20倍體積的PH值為2 5的酸水，煎煮1 3次，分次過濾，合并過濾，即得濾液；二、將步驟一得到的提取液濃縮至相對(duì)密度為1. 06 116g/ cm3的提取液，然后加入相對(duì)于提取液體積2 5倍量的質(zhì)量百分比含量為80% 100%的乙醇，靜置2 48小時(shí)，取上清液回收乙醇，然后濃縮至相對(duì)密度為1. 02 1. 06g/cm3的清膏；三、將步驟二濃縮后的清膏放入大孔樹脂柱中，然后用大孔樹脂柱體積10 20倍的水洗脫1 2次，再用大孔樹脂柱體積5 20倍的pH值為8 14的水洗脫1 2次，最后用大孔樹脂柱體積5 30倍的質(zhì)量百分比含量為20% 40%的乙醇洗脫1 2次，然后棄去洗脫液，再用大孔樹脂柱體積5 30倍的質(zhì)量百分比含量為60% 70%的乙醇洗脫1次，收集洗脫液，在60°C 120°C溫度下，干燥4 24小時(shí)，即得黃芪總皂苷；其中，步驟三加入清膏的量是以生藥材計(jì)算，清膏與大孔樹脂體積比為1 0.5 10。本發(fā)明的有益效果為本發(fā)明提出了用酸水提取黃芪總皂苷，依據(jù)保護(hù)皂苷的指導(dǎo)思想，最大限度的保留了藥物的有效成分，用酸水提取藥材，提取液再進(jìn)行皂苷的分離。 同時(shí)，上樹脂前的濃縮液經(jīng)過乙醇沉淀，對(duì)總皂苷進(jìn)行初步的純化處理，減少大孔樹脂的負(fù)荷，提高大孔樹脂的重復(fù)使用次數(shù)，進(jìn)而提高了皂苷的提取率，節(jié)約了成本。本發(fā)明制得的黃芪總皂苷含量為80 99%。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實(shí)施方式
，還包括各具體實(shí)施方式
間的任意組合。
具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式的一種黃芪總皂苷的制備方法是按以下步驟進(jìn)行的一、按質(zhì)量份數(shù)比稱取1 2份的黃芪，加入相對(duì)于黃芪8 20倍體積的PH值為2 5的酸水，煎煮1 3次，分次過濾，合并過濾，即得濾液；二、將步驟一得到的提取液濃縮至相對(duì)密度為1. 06 1. 16g/cm3的提取液，然后加入相對(duì)于提取液體積2 5倍量的質(zhì)量百分比含量為80% 100%的乙醇，靜置2 48小時(shí)，取上清液回收乙醇，然后濃縮至相對(duì)密度為1. 02 1. 06g/cm3的清膏；三、將步驟二濃縮后的清膏放入大孔樹脂柱中，然后用大孔樹脂柱體積10 20倍的水洗脫1 2次，再用大孔樹脂柱體積5 20倍的pH值為 8 14的水洗脫1 2次，最后用大孔樹脂柱體積5 30倍的質(zhì)量百分比含量為20% 40%的乙醇洗脫1 2次，然后棄去洗脫液，再用大孔樹脂柱體積5 30倍的質(zhì)量百分比含量為60% 70%的乙醇洗脫1次，收集洗脫液，在60°C 120°C溫度下，干燥4 24小時(shí)，即得黃芪總皂苷；其中，步驟三加入清膏的量是以生藥材計(jì)算，清膏與大孔樹脂體積比為 1 0. 5 10。本實(shí)施方式步驟二所述的相對(duì)密度是在均是在80°C溫度下測(cè)量的。本實(shí)施方式提出了用酸水提取黃芪總皂苷，依據(jù)保護(hù)皂苷的指導(dǎo)思想，最大限度的保留了藥物的有效成分，用酸水提取藥材，提取液再進(jìn)行皂苷的分離。同時(shí)，上樹脂前的濃縮液經(jīng)過乙醇沉淀，對(duì)總皂苷進(jìn)行初步的純化處理，減少大孔樹脂的負(fù)荷，提高大孔樹脂的重復(fù)使用次數(shù)，進(jìn)而提高了皂苷的提取率，節(jié)約了成本。本實(shí)施方式制得的黃芪總皂苷含量為80 99%。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一所述的PH值是通過0. 1 10mol/L的鹽酸、0. 1 10mol/L的醋酸或0. 1 10mol/L的冰醋酸進(jìn)行調(diào)節(jié)的。其它與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至二不同的是步驟三所述的PH 值是通過0. 1 10mol/L的氫氧化鈉、0. 1 10mol/L的氫氧化鉀或0. 1 10mol/L的氨水進(jìn)行調(diào)節(jié)的。其它與具體實(shí)施方式
一至二相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至三之一不同的是步驟三所述的水為純水。其它與具體實(shí)施方式
一至三之一相同。通過以下試驗(yàn)驗(yàn)證本發(fā)明的效果試驗(yàn)1:本試驗(yàn)的黃芪總皂苷的制備方法是按以下步驟進(jìn)行的一、稱取黃芪5kg，以萬能粉粹機(jī)粉將黃芪碎成長度為0. 1 0. 5cm，加入相對(duì)于黃芪12倍體積的pH值為3. 0的酸水，提取3次，每次lh，分次以濾紙過濾，合并濾液，即得提取液；二、將步驟一得到的提取液濃縮至相對(duì)密度為1. 08g/cm3，加入2倍濃縮液質(zhì)量百分比含量為95%的乙醇，室溫靜置 24h，取上清液，將上清液濃縮至相對(duì)密度為1. 03g/cm3，即得清膏；三、將步驟二得到的清膏加入DlOl型大孔樹脂柱中，(藥液以生藥材計(jì)與大孔樹脂體積比為1 1)用大孔樹脂柱體積10倍的純水洗脫1次，再用大孔樹脂柱體積5倍的pH值為12的堿水洗脫1次，然后用大孔樹脂柱體積20倍的質(zhì)量百分比含量為30%的乙醇洗脫1次，棄去洗脫液，最后用大孔樹脂柱體積20倍的質(zhì)量百分比含量為65%的乙醇洗脫1次，收集洗脫液，在60°C溫度下干燥12h，即得到黃芪總皂苷；其中，步驟三所述的向DlOl型大孔樹脂柱中加入清膏的量為清膏以生藥材計(jì)與大孔樹脂體積比為11的比例加入。
本實(shí)施方式的黃芪甲苷含量為0.0843%。本實(shí)施方式步驟一所述的pH值為3. 0的酸水是采用0. 1 lOmol/L的鹽酸調(diào)節(jié)純水得到的。本實(shí)施方式步驟三所述的pH值為12的堿水是采用0. 1 lOmol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)純水得到的。本試驗(yàn)得到的黃芪總皂苷量為5. 2362g，得率為0. 1047%，總皂苷含量為86. 3%， 黃芪甲苷含量60. 32%。與現(xiàn)有技術(shù)相比，總皂苷含量提高5% 10%，雜質(zhì)降低10% 15%，生產(chǎn)成本降低10% 20%。試驗(yàn)2:本試驗(yàn)的黃芪總皂苷的制備方法是按以下步驟進(jìn)行的一、稱取黃芪5kg，以萬能粉粹機(jī)粉將黃芪碎成長度為0. 1 0. 5cm，加入相對(duì)于黃芪12倍體積的PH值為3. 5的酸水， 提取2次，每次lh，分次以濾紙過濾，合并濾液，即得提取液；二、將步驟一得到的提取液濃縮至相對(duì)密度為1. 09g/cm3,加入3倍濃縮液質(zhì)量百分比含量為94%的乙醇，室溫靜置24h， 取上清液，將上清液濃縮至相對(duì)密度為1. 05g/cm3，即得清膏；三、將步驟二得到的清膏加入 DlOl型大孔樹脂柱中，(藥液以生藥材計(jì)與大孔樹脂體積比為1 1)用大孔樹脂柱體積10 倍的純水洗脫1次，再用大孔樹脂柱體積6倍的pH值為13的堿水洗脫1次，然后用大孔樹脂柱體積15倍的質(zhì)量百分比含量為40%的乙醇洗脫1次，棄去洗脫液，最后用大孔樹脂柱體積20倍的質(zhì)量百分比含量為70%的乙醇洗脫1次，收集洗脫液，在70°C溫度下干燥8h， 即得到黃芪總皂苷；其中，步驟三所述的向DlOl型大孔樹脂柱中加入清膏的量為清膏以生藥材計(jì)與大孔樹脂體積比為1 1.5的比例加入。本實(shí)施方式的黃芪甲苷含量為0.0843%。本實(shí)施方式步驟一所述的pH值為3. 0的酸水是采用0. 1 lOmol/L的鹽酸調(diào)節(jié)純水得到的。本實(shí)施方式步驟三所述的pH值為12的堿水是采用0. 1 lOmol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)純水得到的。本試驗(yàn)得到的黃芪總皂苷量為12. 3081g，得率為0.2462 %，總皂苷含量為 90. 5%，黃芪甲苷含量為65. 50%。與現(xiàn)有技術(shù)相比，總皂苷含量提高5% 10%，雜質(zhì)降低 10% 15%，生產(chǎn)成本降低10% 20%。試驗(yàn)3 本試驗(yàn)的黃芪總皂苷的制備方法是按以下步驟進(jìn)行的一、稱取黃芪30kg，以萬能粉粹機(jī)粉將黃芪碎成長度為0. 1 0. 5cm，加入相對(duì)于黃芪10倍體積的PH值為3. 5的酸水，提取3次，每次lh，分次以濾紙過濾，合并濾液，即得提取液；二、將步驟一得到的提取液濃縮至相對(duì)密度為1. 08g/cm3，加入3倍濃縮液質(zhì)量百分比含量為95%的乙醇，室溫靜置 24h，取上清液，將上清液濃縮至相對(duì)密度為1. 04g/cm3，即得清膏；三、將步驟二得到的清膏加入DlOl型大孔樹脂柱中，(藥液以生藥材計(jì)與大孔樹脂體積比為1 1)用大孔樹脂柱體積10倍的純水洗脫1次，再用大孔樹脂柱體積5倍的pH值為12的堿水洗脫1次，然后用大孔樹脂柱體積20倍的質(zhì)量百分比含量為40%的乙醇洗脫1次，棄去洗脫液，最后用大孔樹脂柱體積20倍的質(zhì)量百分比含量為70%的乙醇洗脫1次，收集洗脫液，在100°C溫度下干燥10h，即得到黃芪總皂苷；其中，步驟三所述的向DlOl型大孔樹脂柱中加入清膏的量為清膏以生藥材計(jì)與大孔樹脂體積比為1 1.5的比例加入。本實(shí)施方式的黃芪甲苷含量為0.0843%。本實(shí)施方式步驟一所述的pH值為3. 0的酸水是采用0. 1 lOmol/L的鹽酸調(diào)節(jié)純水得到的。本實(shí)施方式步驟三所述的pH值為12的堿水是采用0. 1 lOmol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)純水得到的。本試驗(yàn)得到的黃芪總皂苷量為12.9145g，得率為0.2583 %，總皂苷含量為 88. 3 %，黃芪甲苷含量為62. 43 %。與現(xiàn)有技術(shù)相比，總皂苷含量提高5 % 10 %，雜質(zhì)降低 10% 15%，生產(chǎn)成本降低10% 20%。試驗(yàn)4 本試驗(yàn)的黃芪總皂苷的制備方法是按以下步驟進(jìn)行的一、稱取黃芪30kg，以萬能粉粹機(jī)粉將黃芪碎成長度為0. 1 0. 5cm，加入相對(duì)于黃芪10倍體積的PH值為3. 4的酸水，提取2次，每次lh，分次以濾紙過濾，合并濾液，即得提取液；二、將步驟一得到的提取液濃縮至相對(duì)密度為llOg/cm3，加入2倍濃縮液質(zhì)量百分比含量為93%的乙醇，室溫靜置 24h，取上清液，將上清液濃縮至相對(duì)密度為1. 05g/cm3，即得清膏；三、將步驟二得到的清膏加入DlOl型大孔樹脂柱中，(藥液以生藥材計(jì)與大孔樹脂體積比為1 1)用大孔樹脂柱體積10倍的純水洗脫1次，再用大孔樹脂柱體積5倍的pH值為13的堿水洗脫1次，然后用大孔樹脂柱體積15倍的質(zhì)量百分比含量為35%的乙醇洗脫1次，棄去洗脫液，最后用大孔樹脂柱體積20倍的質(zhì)量百分比含量為70%的乙醇洗脫1次，收集洗脫液，在100°C溫度下干燥12h，即得到黃芪總皂苷；其中，步驟三所述的向DlOl型大孔樹脂柱中加入清膏的量為清膏以生藥材計(jì)與大孔樹脂體積比為11的比例加入。本實(shí)施方式的黃芪甲苷含量為0.0520%。本實(shí)施方式步驟一所述的pH值為3. 0的酸水是采用0. 1 lOmol/L的鹽酸調(diào)節(jié)純水得到的。本實(shí)施方式步驟三所述的pH值為12的堿水是采用0. 1 lOmol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)純水得到的。本試驗(yàn)得到的黃芪總皂苷量為35.4366g，得率為0. 1181 %,總皂苷含量為 87.5%。黃芪甲苷含量為62. 68%。與現(xiàn)有技術(shù)相比，總皂苷含量提高5% 10%，雜質(zhì)降低10% 15%，生產(chǎn)成本降低10% 20%。試驗(yàn)5 本試驗(yàn)的黃芪總皂苷的制備方法是按以下步驟進(jìn)行的一、稱取黃芪30kg，以萬能粉粹機(jī)粉將黃芪碎成長度為0. 1 0. 5cm，加入相對(duì)于黃芪10倍體積的PH值為3. 5的酸水，提取3次，每次lh，分次以濾紙過濾，合并濾液，即得提取液；二、將步驟一得到的提取液濃縮至相對(duì)密度為1. 07g/cm3，加入3倍濃縮液質(zhì)量百分比含量為95%的乙醇，室溫靜置 24h，取上清液，將上清液濃縮至相對(duì)密度為1. 06g/cm3，即得清膏；三、將步驟二得到的清膏加入DlOl型大孔樹脂柱中，(藥液以生藥材計(jì)與大孔樹脂體積比為1 1)用大孔樹脂柱體積10倍的純水洗脫1次，再用大孔樹脂柱體積5倍的pH值為12的堿水洗脫1次，然后用大孔樹脂柱體積15倍的質(zhì)量百分比含量為35%的乙醇洗脫1次，棄去洗脫液，最后用大孔樹脂柱體積20倍的質(zhì)量百分比含量為65%的乙醇洗脫1次，收集洗脫液，在100°C溫度下干燥12h，即得到黃芪總皂苷；其中，步驟三所述的向DlOl型大孔樹脂柱中加入清膏的量為清膏以生藥材計(jì)與大孔樹脂體積比為1 1.5的比例加入。本實(shí)施方式的黃芪甲苷含量為0.0843%。本實(shí)施方式步驟一所述的pH值為3. 0的酸水是采用0. 1 lOmol/L的鹽酸調(diào)節(jié)純水得到的。本實(shí)施方式步驟三所述的pH值為12的堿水是采用0. 1 lOmol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)純水得到的。本試驗(yàn)得到的黃芪總皂苷量為78. 1950g，得率為0.2606 %，總皂苷含量為 85.2%。黃芪甲苷含量為60. 19%。與現(xiàn)有技術(shù)相比，總皂苷含量提高5% 10%，雜質(zhì)降低10% 15%，生產(chǎn)成本降低10% 20%。試驗(yàn)6 本試驗(yàn)的黃芪總皂苷的制備方法是按以下步驟進(jìn)行的一、稱取黃芪5kg，以萬能粉粹機(jī)粉將黃芪碎成長度為0. 1 0. 5cm，加入相對(duì)于黃芪10倍體積的pH值為3. 5的酸水，提取3次，每次lh，分次以濾紙過濾，合并濾液，即得提取液；二、將步驟一得到的提取液濃縮至相對(duì)密度為1. 09g/cm3，加入2倍濃縮液質(zhì)量百分比含量為95%的乙醇，室溫靜置 18h，取上清液，將上清液濃縮至相對(duì)密度為1. 05g/cm3，即得清膏；三、將步驟二得到的清膏加入DlOl型大孔樹脂柱中，(藥液以生藥材計(jì)與大孔樹脂體積比為1 1)用大孔樹脂柱體積10倍的純水洗脫1次，再用大孔樹脂柱體積5倍的pH值為12的堿水洗脫1次，然后用大孔樹脂柱體積15倍的質(zhì)量百分比含量為40%的乙醇洗脫1次，棄去洗脫液，最后用大孔樹脂柱體積15倍的質(zhì)量百分比含量為70%的乙醇洗脫1次，收集洗脫液，在100°C溫度下干燥12h，即得到黃芪總皂苷；其中，步驟三所述的向DlOl型大孔樹脂柱中加入清膏的量為清膏以生藥材計(jì)與大孔樹脂體積比為1 1.5的比例加入。本實(shí)施方式的黃芪甲苷含量為0.0843%。本實(shí)施方式步驟一所述的pH值為3. 0的酸水是采用0. 1 lOmol/L的鹽酸調(diào)節(jié)純水得到的。本實(shí)施方式步驟三所述的pH值為12的堿水是采用0. 1 lOmol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)純水得到的。本試驗(yàn)得到的黃芪總皂苷量為76.0329g，得率為0.2534 %，總皂苷含量為 92.4%。黃芪甲苷含量為68. 92%。與現(xiàn)有技術(shù)相比，總皂苷含量提高5% 10%，雜質(zhì)降低10% 15%，生產(chǎn)成本降低10% 20%。對(duì)試驗(yàn)1 6制得的黃芪總皂苷，測(cè)定其產(chǎn)量和得率。黃芪藥材黃芪甲苷含量參照《中國藥典》2005年版第一部第212頁黃芪甲苷含量測(cè)定法進(jìn)行檢測(cè)，黃芪總皂苷的含量以黃芪甲苷做標(biāo)準(zhǔn)品，選用香草醛-高氯酸發(fā)色體系，測(cè)定波長為560nm，分別測(cè)定0. Img/ mL、0. 2mg/mL、0. 3mg/mL、0. 4mg/mL和0. 5mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品的吸收度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。用甲醇溶解試驗(yàn)1 6制備的黃芪總皂苷產(chǎn)品，測(cè)定其吸收度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到甲苷含量，再計(jì)算出總苷含量。結(jié)果如表1所示。表1黃芪總皂苷含量試驗(yàn)組藥材黃芪甲苷含量(％)總皂苷產(chǎn)量 (g)得率 (%)總皂苷含量 (%)試驗(yàn)10.05205.23620.104786.3試驗(yàn)20.084312.30810.246290.5試驗(yàn)30.084312.91450.258388. 3試驗(yàn)40.052035.43660.118187.5試驗(yàn)50.084378.19500.260685.2試驗(yàn)60.084376.03290.253492.4結(jié)果顯示，黃芪藥材以本發(fā)明的方法提取純化后，黃芪總皂苷含量均在 85% -99%，得率均在0. 1% -0. 3%，大孔樹脂的重復(fù)使用次數(shù)為20-40次。相對(duì)于現(xiàn)有的發(fā)明，本發(fā)明明顯黃芪總皂苷的得率提高了 20%，大孔樹脂的可重復(fù)使用次數(shù)提高至20 40次。對(duì)本發(fā)明制備的黃芪總皂苷進(jìn)行藥效驗(yàn)證試驗(yàn)1、試驗(yàn)條件1. 1受試動(dòng)物取由哈爾濱市松北區(qū)華宇養(yǎng)殖場提供的健康且體重為(200士20)g 的Wistar大白鼠，雌雄各半，飼養(yǎng)1周后使用。1. 2 藥品與試劑1)黃芪總皂苷(TotalSaponinsofAstragalus，簡稱為 TSA)，為易吸濕的淡黃色粉末，為試驗(yàn)6制得的黃芪總皂苷，在進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配成所需濃度混懸液供灌胃使用；2)ADP(5-腺苷二磷酸鈉)，購買自Sigma公司；3)阿司匹林腸溶片，購買自拜耳醫(yī)藥公司，批號(hào)為BTA7X26，在進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配成所需濃度混懸液供灌胃使用；4)心腦舒通膠囊(蒺藜總皂苷)，購買自吉林敖東洮南藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)為 100901，在進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)囊心物用蒸餾水配成所需濃度混懸液供灌胃使用；5) NO含量測(cè)定試劑盒，來自于南京建成生物工程研究所；6) TXB2,6-ketoPGFla含量測(cè)定試劑盒，來自于中國人民解放軍總醫(yī)院放免研究所。1. 3儀器1)BT873型實(shí)驗(yàn)性體內(nèi)血栓形成測(cè)定儀，來自于包頭醫(yī)學(xué)院心血管研究室；2)PAM-2型PPP自動(dòng)平衡血小板聚集儀，購買自江蘇丹陽儀器廠；3)臺(tái)式平衡記錄儀， 購買自上海自動(dòng)化儀表有限公司；4) TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì)，購買自北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；5)GC911y放射免疫計(jì)數(shù)器，購買自中國科技大學(xué)科技實(shí)業(yè)總公司中佳光電儀器分公司。2、試驗(yàn)操作 2. 1動(dòng)脈血栓形成試驗(yàn)試驗(yàn)組取Wistar大白鼠40只，隨機(jī)分為5組，每組8只， 雌雄各半，每組的給藥劑量分別為50mg/kg3、100mg/kg3和200mg/kg3，另設(shè)陰性對(duì)照組給予蒸餾水，陽性對(duì)照組給藥40mg/kg的阿司匹林。 試驗(yàn)組和陽性對(duì)照組分別按lmL/100g灌胃給予藥液，陰性對(duì)照組給予lmL/100g 的蒸餾水，每天1次，連續(xù)7d。末次給藥后lh，將大鼠用40mg/kg戊巴比妥鈉麻醉，切開頸部皮膚，分離出頸總動(dòng)脈約1. 5cm,以2. OmA電流刺激2min，記錄自通電刺激至頸總動(dòng)脈溫度突降時(shí)間，作為血栓形成時(shí)間，結(jié)果見表1。2. 2血小板聚集試驗(yàn)試驗(yàn)組取Wistar大白鼠40只，隨機(jī)分為5組，每組8只， 雌雄各半，每組的給藥劑量分別為50mg/kg3、100mg/kg3和200mg/kg3，另設(shè)陰性對(duì)照組給予蒸餾水，陽性對(duì)照組給藥40mg/kg的阿司匹林。試驗(yàn)組和陽性對(duì)照組分別按lmL/100g灌胃給予藥液，陰性對(duì)照組給予lmL/100g 的蒸餾水，每天1次，連續(xù)7d。末次給藥后lh，大鼠用40mg/kg戊巴比妥鈉麻醉，腹主動(dòng)脈取血，3. 2%枸椽酸鈉抗凝，制備富血小板血漿(PRP)和貧血小板血漿(PPP)，以PPP調(diào)節(jié)PRP 血小板計(jì)數(shù)為20 22萬/mm3，溫育2min，加入ADP (終濃度3. 2mg/mL)，攪拌，描記聚集曲線，在曲線上算出最大聚集強(qiáng)度(MA)和到達(dá)最大聚集強(qiáng)度時(shí)間(TMA)。結(jié)果見表2。2. 3TXB2、6_ketoPGFla含量的測(cè)定試驗(yàn)組取Wistar大白鼠40只，隨機(jī)分為5組， 每組8只，雌雄各半，每組的給藥劑量分別為50mg/kg3、100mg/kg3和200mg/kg3，另設(shè)陰性對(duì)照組給予蒸餾水，陽性對(duì)照組給藥40mg/kg的阿司匹林。試驗(yàn)組和陽性對(duì)照組分別按lmL/100g灌胃給予藥液，陰性對(duì)照組給予lmL/100g 的蒸餾水，每天1次，連續(xù)7d。末次給藥后lh，大鼠腹主動(dòng)脈取血2. 5ml，注入含0. 05mL消炎痛EDTA · Na2溶液的試管中，混勻，在4°C，3500r/min的速度下，離心15min，分離血漿。 按TXB2、6-ketoPGFlaS劑盒說明書，加入相應(yīng)試劑，測(cè)各管沉淀cpm數(shù)，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中TXB2、6-ketoPGFla的濃度。結(jié)果見表3。2.4N0含量的測(cè)定試驗(yàn)組取Wistar大白鼠40只，隨機(jī)分為5組，每組8只，雌雄各半，每組的給藥劑量分別為50mg/kg3、100mg/kg3和200mg/kg3，另設(shè)陰性對(duì)照組給予蒸餾水，陽性對(duì)照組給藥100mg/kg的蒺藜總皂苷。試驗(yàn)組和陽性對(duì)照組分別按lmL/100g灌胃給予藥液，陰性對(duì)照組給予lmL/100g 的蒸餾水，每天1次，連續(xù)7d。末次給藥后lh，大鼠摘眼球取血，自然凝固后，3000r/min離心lOmin，分離血清，按試劑盒說明書加入相應(yīng)試劑，在550nm處測(cè)定各管的吸收度A值，計(jì)
算NO含量。結(jié)果見表4。表1藥物對(duì)血栓形成時(shí)間的影響(η = 8，χ士s)
權(quán)利要求
1.一種黃芪總皂苷的制備方法，其特征在于所述的黃芪總皂苷的制備是按以下步驟進(jìn)行的一、按質(zhì)量份數(shù)比稱取1 2份的黃芪，加入相對(duì)于黃芪8 20倍體積的PH值為 2 5的酸水，煎煮1 3次，分次過濾，合并過濾，即得濾液；二、將步驟一得到的濾液濃縮至相對(duì)密度為1. 06 1. 16g/cm3的提取液，然后加入相對(duì)于提取液體積2 5倍量的質(zhì)量百分比含量為80% 100%的乙醇，靜置2 48小時(shí)，取上清液回收乙醇，然后濃縮至相對(duì)密度為1. 02 1. 06g/cm3的清膏；三、將步驟二濃縮后的清膏放入大孔樹脂柱中，然后用大孔樹脂柱體積10 20倍的水洗脫1 2次，再用大孔樹脂柱體積5 20倍的pH值為 8 14的水洗脫1 2次，最后用大孔樹脂柱體積5 30倍的質(zhì)量百分比含量為20% 40%的乙醇洗脫1 2次，然后棄去洗脫液，再用大孔樹脂柱體積5 30倍的質(zhì)量百分比含量為60% 70%的乙醇洗脫1次，收集洗脫液，在60°C 120°C溫度下，干燥4 24小時(shí)，即得黃芪總皂苷；其中，步驟三加入清膏的量是以生藥材計(jì)算，清膏與大孔樹脂體積比為 1 0. 5 10。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種黃芪總皂苷的制備方法，其特征在于步驟一所述的PH值是通過0. 1 10mol/L的鹽酸、0. 1 10mol/L的醋酸或0. 1 10mol/L的冰醋酸進(jìn)行調(diào)節(jié)的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種黃芪總皂苷的制備方法，其特征在于步驟三所述的PH值是通過0. 1 10mol/L的氫氧化鈉、0. 1 10mol/L的氫氧化鉀或0. 1 10mol/L的氨水進(jìn)行調(diào)節(jié)的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種黃芪總皂苷的制備方法，其特征在于步驟三所述的水為純水。
全文摘要
一種黃芪總皂苷的制備方法，它涉及一種黃芪總皂苷的制備方法。本發(fā)明要解決現(xiàn)有黃芪總皂苷損失較大，提取率低，生產(chǎn)成本較高的問題。本發(fā)明的黃芪總皂苷的制備方法為一、稱取黃芪，煎煮1～3次，合并過濾；二、濃縮至相對(duì)密度為1.06～1.16g/cm3的提取液，加入2～5倍量的80％～100％的乙醇，過濾濃縮至相對(duì)密度為1.02～1.06g/cm3清膏；三、將清膏放入大孔樹脂柱中洗脫后，即得黃芪總皂苷。本發(fā)明最大限度的保留了藥物的有效成分，減少大孔樹脂的負(fù)荷，提高大孔樹脂的重復(fù)使用次數(shù)，進(jìn)而提高了皂苷的提取率，節(jié)約了成本，本發(fā)明制得的黃芪總皂苷含量為80～99％。本發(fā)明應(yīng)用于黃芪皂苷制備領(lǐng)域。
文檔編號(hào)A61K36/481GK102488742SQ20111042265
公開日2012年6月13日 申請(qǐng)日期2011年12月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月16日
發(fā)明者劉景國, 單鈺毓, 李宏亮, 李文軍, 楊滿輝, 王英新, 程占榮, 裴福成, 鄭玥 申請(qǐng)人:哈藥集團(tuán)中藥二廠